Cercosporin

别名: CERCOSPORIN; Cercosporin from Cercospora hayii; 35082-49-6; 40501-77-7; NSC234486; 7,19-dihydroxy-5,21-bis(2-hydroxypropyl)-6,20-dimethoxy-12,14-dioxahexacyclo[13.8.0.02,11.03,8.04,22.018,23]tricosa-1,3(8),4,6,10,15,18(23),19,21-nonaene-9,17-dione; Isocercosporin; iso-Cercosporin; 6-O-乙酰基-2,3,4-三-O-苯甲酰基-D-吡喃甘露糖;尾孢菌素
目录号: V30793 纯度: ≥98%
尾孢菌素由植物病原体荠菜假尾孢菌产生。
Cercosporin CAS号: 35082-49-6
产品类别: New2
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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产品描述
尾孢菌素由植物病原体荠菜假尾孢菌产生。尾孢菌素是一种有效的光敏剂,激活波长短,主要适用于表面PDT光动力研究(特别适用于避免穿孔的研究)。 Cercosporin 是 PKC 的抑制剂(阻滞剂/拮抗剂),含有 PKC 活性所需的醌结构特征。其IC50=0.6-1.3μM。
生物活性&实验参考方法
靶点
PKC (IC50 = 0.6-1.3 μM)
体外研究 (In Vitro)
与 U87 或 MCF7 细胞相比,T98G 细胞对尾孢菌素(0.8-8.0 μM;30 s、60 s、90 s、120 s)光动力疗法(PDT)表现出更强的反应。此外,T98G细胞的LD50值(0.14 J cm2)显着低于MCF-7和U87细胞系(分别为0.26和0.24 J cm2)[1]。当铜和牛孢菌素相互作用时(0–3 μM;24 小时),MCF7 和 T98G 细胞在 U87 细胞中经历协同细胞毒性 (S(CuSO4 + Cerco) ≥ S(CuSO4) x S(Cerco))[1]。
酶活实验
PKC测定的一般程序。[2]
按照Lown报道的文献方案测量蛋白激酶C活性。12将组蛋白(2mg/mL)和OOPS-Na(1mg/mL)的水储备溶液涡旋20秒,以产生均匀的溶液。将DiC8(1 mg/250 mL)的水储备溶液超声处理30分钟。抑制剂(例如,尾孢菌素(CGP049090)/Cercosporin (CGP049090))储备溶液在50%DMSO/水中制备。在分析之前,所有储备溶液都要涡旋约20秒,以确保完全均匀。每个反应瓶的最终体积为100µL,含有5%的DMSO。测定溶液含有20 mM Tris-HCl,pH 7.4,350µM CaCl2,10 mM Mg(NO3)2,100µg/mL OOPS Na,10µL 4µg/mL DiC8,10µM ATP,309µM NaCl,3 mM DTT,1.55 mM EGTA,0.03%甘油和0.0065单位PKC酶。在添加S40酶之前,将反应混合物涡旋10秒。然后,加入PKC并轻轻混合溶液(酶的涡旋大大降低了活性)。加入抑制剂(10µL)并混合后,通过加入Mg(NO3)2和ATP/ATP*引发反应,然后轻轻混合。反应在室温下在头顶荧光灯下进行。在40分钟和80分钟时分析结果,为每个反应瓶生成重复点。为了分析,在P81 Whatmann色谱纸上点取20µL反应混合物。将纸风干,用0.75%磷酸(4X)和丙酮(1X)洗涤。将纸风干,通过闪烁计数(4mL闪烁鸡尾酒)测量32P掺入组蛋白H1的量。对于每种测定,由无酶(背景辐射)和无抑制剂(100%活性)的酶组成的空白平行进行。
PKC催化结构域测定。[2]
与我们的PKC常规程序相比,不使用DiC8和OOPS-Na。除了这一例外情况,所有其他材料都以相同的浓度使用。在50%DMSO/水中制备16(500µM)的储备溶液。在分析之前,所有储备溶液都要涡旋约20秒,以确保完全均匀。每个反应瓶的最终体积为100µL,含有5%的DMSO。测定溶液含有20 mM Tris-HCl,pH 7.4,350µM CaCl2,10 mM Mg(NO3)2,10µM ATP,0.5 mM NaCl,0.8 mM DTT,5µM EDTA,5µM EGTA,0.05%甘油和0.0037单位PKC催化亚基。在加入酶之前,将反应混合物涡旋10秒。然后,加入PKC催化亚基,轻轻混合溶液。接下来,加入抑制剂(例如,尾孢菌素(CGP049090)/Cercosporin (CGP049090))(10µL;抑制剂的最终浓度为50µM)。在添加抑制剂并混合后,通过添加Mg(NO3)2和ATP/ATP*然后缓慢混合来引发S41反应。三个反应:(1)PKC催化亚基和无抑制剂(100%活性);(2) PKC催化亚基和16(50µM);(3) 无PKC催化亚基和无抑制剂(背景)并行和重复运行。反应在室温下在顶置荧光灯下进行5小时。为了分析,在P81 Whatmann色谱纸上点取20µL反应混合物。将纸风干,用0.75%磷酸(4x)和丙酮(1x)洗涤。将纸风干,通过闪烁计数(4mL闪烁鸡尾酒)测量32P掺入组蛋白H1的量。
细胞实验
细胞活力测定 [1]
细胞类型: 人 GBM 细胞系,T98G 和 U87;乳腺癌细胞系,MCF-7
测试浓度: 0 μM、1 μM、2 μM、3 μM
孵育时间: 24 小时 (hrs (小时))
实验结果:仅在大多数情况下证明铜在呼吸细胞系(MCF-7 和 T98G)中具有协同细胞毒性。
参考文献

[1]. Cytotoxic and Photocytotoxic Effects of Cercosporin on Human Tumor Cell Lines. Photochem Photobiol. 2019 Jan;95(1):387-396.

[2]. Design, synthesis, and investigation of protein kinase C inhibitors: total syntheses of (+)-calphostin D, (+)-phleichrome, cercosporin, and new photoactive perylenequinones. J Am Chem Soc. 2009 Jul 8;131(26):9413-25.

其他信息
尾孢菌素是一种有机杂六环化合物,其结构为苝并[1,12-def][1,3]二氧杂环庚烷-6,11-二酮,在5位和12位被羟基取代,7位和10位被甲氧基取代,8位和9位被2-羟丙基取代(R,R-立体异构体)。它是一种植物毒素,最初从大豆致病真菌菊池尾孢菌(Cercospora kikuchii)中分离得到,后来在尾孢菌属的多种真菌中也发现了该化合物。尾孢菌素具有光敏剂、植物毒素、真菌代谢产物和活性氧生成剂等多种功能。它是一种多酚、聚酮化合物和有机杂六环化合物。它是尾孢菌素(2-)的共轭酸。
(+)-尾孢菌素已在玉米尾孢菌(Cercospora zeina)中被报道,并有相关数据。
尾孢菌素是一种天然存在的苝醌。尽管其他苝醌类化合物已被广泛研究作为光动力疗法(PDT)中的光敏剂,但尾孢菌素在这方面的研究仅限于植物病理学领域。本文研究了尾孢菌素对两种胶质母细胞瘤(T98G和U87)以及一种乳腺癌(MCF7)人细胞系的光细胞毒性。研究发现,尾孢菌素在532 nm激发下能产生大量的单线态氧,其在MCF7和U87细胞中的载量相似,但在T98G细胞中的载量约为后者的三倍。在所有情况下,尾孢菌素的亚细胞定位均位于线粒体和内质网。用波长约为 450 nm 的光照射经尾孢菌素孵育的细胞,结果表明 T98G 细胞对尾孢菌素光动力疗法 (PDT) 更为敏感,这主要是由于其对尾孢菌素的摄取量更高。在尾孢菌素 PDT 治疗前后 1 小时进行的代谢研究表明,尾孢菌素 PDT 可导致所有细胞系的呼吸和糖酵解活性均发生生物能量崩溃。在黑暗条件下,尾孢菌素仅在呼吸作用最强的细胞系(MCF7 和 T98G)中与铜表现出协同细胞毒性。尾孢菌素是一种强效光敏剂,但其激活波长较短,主要适用于浅表光动力疗法(PDT),尤其是在需要避免皮肤穿孔的情况下。[1]
本文详细介绍了蛋白激酶C(PKC)抑制剂(+)-calphostin D、(+)-phleichrome、尾孢菌素以及10种新型苝醌类化合物的全合成。所开发的这种高度汇聚且灵活的合成策略采用了对映选择性氧化联芳基偶联和双铜环氧化物开环反应,从而能够选择性地合成所有可能的纯立体异构体。此外,该策略还能快速合成多种类似物,包括天然产物无法合成的类似物。这些化合物为评估PKC活性所需的苝醌类化合物的结构特征提供了强有力的手段。与结构更复杂的天然产物相比,我们发现了一些结构更简单的类似物,它们具有更优异的PKC抑制活性和在癌细胞系中更优异的光增效作用。[2]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C29H26O10
分子量
534.51074
精确质量
534.153
元素分析
C, 65.17; H, 4.90; O, 29.93
CAS号
35082-49-6
PubChem CID
91617
外观&性状
Brown to reddish brown solid powder
密度
1.59g/cm3
沸点
886.9ºC at 760mmHg
闪点
299ºC
折射率
1.754
LogP
3.564
tPSA
151.98
氢键供体(HBD)数目
4
氢键受体(HBA)数目
10
可旋转键数目(RBC)
6
重原子数目
39
分子复杂度/Complexity
988
定义原子立体中心数目
2
SMILES
C[C@H](CC1=C2C3=C(C(=C(C4=C3C5=C6C2=C(C(=O)C=C6OCOC5=CC4=O)C(=C1OC)O)O)OC)C[C@@H](C)O)O
InChi Key
MXLWQNCWIIZUQT-GHMZBOCLSA-N
InChi Code
InChI=1S/C29H26O10/c1-10(30)5-12-18-19-13(6-11(2)31)29(37-4)27(35)21-15(33)8-17-23(25(19)21)22-16(38-9-39-17)7-14(32)20(24(18)22)26(34)28(12)36-3/h7-8,10-11,30-31,34-35H,5-6,9H2,1-4H3/t10-,11-/m1/s1
化学名
7,19-dihydroxy-5,21-bis[(2R)-2-hydroxypropyl]-6,20-dimethoxy-12,14-dioxahexacyclo[13.8.0.02,11.03,8.04,22.018,23]tricosa-1,3(8),4,6,10,15,18(23),19,21-nonaene-9,17-dione
别名
CERCOSPORIN; Cercosporin from Cercospora hayii; 35082-49-6; 40501-77-7; NSC234486; 7,19-dihydroxy-5,21-bis(2-hydroxypropyl)-6,20-dimethoxy-12,14-dioxahexacyclo[13.8.0.02,11.03,8.04,22.018,23]tricosa-1,3(8),4,6,10,15,18(23),19,21-nonaene-9,17-dione; Isocercosporin; iso-Cercosporin;
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ≥ 10 mg/mL (~18.71 mM)
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.8709 mL 9.3544 mL 18.7087 mL
5 mM 0.3742 mL 1.8709 mL 3.7417 mL
10 mM 0.1871 mL 0.9354 mL 1.8709 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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