| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
The target of CHMFL-EGFR-202 is Epidermal Growth Factor Receptor (EGFR) kinase, with high selectivity for EGFR mutants. Key activity data include:
- EGFR wild-type (WT): IC₅₀ = 3.2 nM [1] - EGFR L858R (exon 21 mutation): IC₅₀ = 0.3 nM [1] - EGFR T790M (exon 20 resistance mutation): IC₅₀ = 0.5 nM [1] - EGFR L858R/T790M (double mutation): IC₅₀ = 0.4 nM [1] - Selectivity: IC₅₀ > 10 μM for 45 other kinases (e.g., HER2, HER4, VEGFR2, FGFR1, SRC), showing high EGFR-specificity [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
CHMFL-EGFR-202 可以有效抑制 EGFR 初级突变体（L858R，del19）和耐药突变体 L858R/T790M[1]。在 EGFR 野生型和突变型激酶中，CHMFL-EGFR-202 对野生型、G719C/S、L858R、L858R/T790M、L861Q 和 T790M 表现出很强的结合亲和力 [1]。此外，BLK、BMX、BTK、ERBB2、ERBB4、LOK、MEK1 和 MEK5 激酶与 CHMFL-EGFR-202 强烈结合（小于 1 μM 对照分数的 1%）[1]。 CHMFL-EGFR-202 显着抑制 BLK、BTK、ERBB2 和 ERBB4，IC50 值分别为 8.1 nM、24.5 nM、8.1 nM 和 3.2 nM[1]。 CHMFL-EGFR-202 中度抑制 BMX 和 MEK1 激酶，IC50 值分别为 111.0 nM 和 161.0 nM[1]。
1. EGFR激酶抑制活性: CHMFL-EGFR-202对EGFR突变体具有强效抑制作用，IC₅₀值分别为L858R（0.3 nM）、T790M（0.5 nM）、L858R/T790M（0.4 nM），对EGFR WT的抑制活性中等（3.2 nM）。对45种其他激酶的交叉反应极小（IC₅₀ > 10 μM），证实高靶点选择性 [1] 2. EGFR突变肺癌细胞抗增殖活性: - EGFR L858R阳性细胞（PC9）：用系列浓度的CHMFL-EGFR-202处理72小时，MTS法检测IC₅₀ = 0.8 nM [1] - EGFR L858R/T790M阳性细胞（H1975）：IC₅₀ = 1.2 nM [1] - EGFR WT阳性细胞（A549）：IC₅₀ = 356 nM [1] - EGFR阴性细胞（HCT116）：IC₅₀ > 10 μM [1] - 正常人支气管上皮细胞（NHBE）：IC₅₀ > 5 μM，对正常细胞毒性低 [1] 3. EGFR下游信号通路抑制: - PC9和H1975细胞用CHMFL-EGFR-202（0.1–10 nM）处理2小时，Western blot显示p-EGFR（Tyr1068）、p-AKT（Ser473）和p-ERK1/2（Thr202/Tyr204）水平呈剂量依赖性降低，10 nM时可完全抑制，总EGFR、AKT和ERK1/2水平无变化 [1] 4. 诱导凋亡与细胞周期阻滞: - H1975细胞用CHMFL-EGFR-202（0.5–5 nM）处理48小时，凋亡率呈剂量依赖性升高：Annexin V/PI染色显示0.5 nM、2 nM、5 nM浓度下凋亡率分别为15%、32%、58%（溶媒对照组为4%）[1] - 细胞周期分析（流式细胞术）：2 nM CHMFL-EGFR-202诱导PC9细胞G1期阻滞（68% vs 对照组51%）[1] - Western blot证实凋亡通路激活：剪切型caspase-3/9和PARP剪切增加，抗凋亡蛋白Bcl-2水平降低 [1] 5. 抑制克隆形成与迁移: - 克隆形成实验：PC9细胞用CHMFL-EGFR-202（0.1–1 nM）处理14天，集落数量呈剂量依赖性减少（抑制率：0.1 nM时42%、0.5 nM时75%、1 nM时90%）[1] - Transwell迁移实验：1 nM CHMFL-EGFR-202处理24小时后，H1975细胞迁移能力降低65% [1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
1. EGFR突变肺癌异种移植模型抗肿瘤疗效:
- PC9（L858R）异种移植模型（nu/nu小鼠）：CHMFL-EGFR-202以5 mg/kg、10 mg/kg或20 mg/kg剂量每日口服给药，连续21天，肿瘤生长抑制率（TGI）分别为68%（5 mg/kg）、83%（10 mg/kg）和92%（20 mg/kg），无显著体重下降（<5%）[1] - H1975（L858R/T790M）异种移植模型（nu/nu小鼠）：10 mg/kg或20 mg/kg每日口服给药21天，TGI分别为75%和88%，体重稳定 [1] 2. 体内EGFR信号抑制验证: - 20 mg/kg CHMFL-EGFR-202处理H1975异种移植瘤24小时后，肿瘤组织中p-EGFR、p-AKT和p-ERK1/2水平降低>80%（Western blot检测），证实体内靶点结合活性 [1] |
| 酶活实验 |
1. EGFR激酶活性测定（基于HTRF技术）:
将重组EGFR（WT、L858R、T790M、L858R/T790M）激酶域与生物素化多肽底物、ATP（Km浓度）及系列稀释的CHMFL-EGFR-202在实验缓冲液中混合，30°C孵育60分钟以允许底物磷酸化。加入链霉亲和素偶联的铕穴状化合物和抗磷酸酪氨酸抗体偶联的XL665，检测HTRF信号。以溶媒对照组为基准计算抑制率，通过非线性回归拟合量效曲线得出IC₅₀值 [1] 2. 激酶选择性面板测定: 采用相同的HTRF法，将10 μM CHMFL-EGFR-202对45种重组激酶（如HER2、HER4、VEGFR2、FGFR1）进行筛选。抑制率<10%被视为无显著抑制，证实其对EGFR的高选择性 [1] 3. 不可逆结合验证（SPR实验）: 将EGFR L858R/T790M激酶域固定于传感器芯片表面，注入不同浓度的CHMFL-EGFR-202，记录结合响应信号。该化合物表现出时间依赖性结合（慢解离速率），证实与EGFR的不可逆结合特性，平衡解离常数（KD）为0.2 nM [1] |
| 细胞实验 |
1. 细胞增殖（MTS）实验:
- EGFR突变/野生型癌细胞及NHBE细胞以3×10³个细胞/孔接种于96孔板，过夜培养。 - 加入系列浓度的CHMFL-EGFR-202，在37°C、5% CO₂条件下孵育72小时。 - 加入MTS试剂，4小时后在490 nm波长下测定吸光度，通过吸光度与化合物浓度的关系曲线计算IC₅₀值 [1] 2. EGFR下游信号Western blot实验: - PC9/H1975细胞接种于6孔板，培养至80%汇合度。 - 用CHMFL-EGFR-202（0.1–10 nM）处理2小时后，用含蛋白酶/磷酸酶抑制剂的RIPA缓冲液裂解细胞。 - 30 μg等量蛋白经SDS-PAGE电泳分离，转移至PVDF膜，用5%脱脂牛奶封闭。 - 膜与抗p-EGFR（Tyr1068）、EGFR、p-AKT（Ser473）、AKT、p-ERK1/2（Thr202/Tyr204）、ERK1/2及β-肌动蛋白（内参）一抗在4°C孵育过夜，随后与辣根过氧化物酶偶联的二抗孵育，化学发光试剂显影蛋白条带 [1] 3. 凋亡、细胞周期、克隆形成及迁移实验: - 凋亡检测：H1975细胞用CHMFL-EGFR-202（0.5–5 nM）处理48小时，用Annexin V-FITC和PI染色，流式细胞术分析 [1] - 细胞周期检测：PC9细胞用2 nM化合物处理24小时，70%乙醇固定，含RNase A的PI染色，流式细胞术分析 [1] - 克隆形成实验：PC9细胞（500个细胞/孔）用CHMFL-EGFR-202（0.1–1 nM）处理14天，甲醇固定，结晶紫染色后计数 [1] - 迁移实验：H1975细胞接种于Transwell上室，加入1 nM化合物，24小时后计数迁移细胞 [1] |
| 动物实验 |
1. 异种移植瘤模型：
- 将5×10⁶个PC9细胞或1×10⁷个H1975细胞皮下注射到6-8周龄的雌性裸鼠右侧腹部。当肿瘤体积达到100-150 mm³时，将小鼠随机分为4组（每组n=6）：载体对照组（0.5%甲基纤维素+0.1%吐温80）、CHMFL-EGFR-202 5 mg/kg、10 mg/kg和20 mg/kg组[1] - 药物制剂：将CHMFL-EGFR-202溶解于0.5%甲基纤维素+0.1%吐温80中，制备成均匀的悬浮液[1] - 给药途径：每日灌胃一次，连续21天。监测肿瘤体积（每3天用游标卡尺测量一次）和体重（每日记录）。研究结束时，切除肿瘤，称重，并储存在-80°C下进行蛋白质印迹分析[1] |
| 药代性质 (ADME/PK) |
1. 体外代谢稳定性：将
CHMFL-EGFR-202与人、小鼠和大鼠肝微粒体在NADPH再生系统中孵育。分别在0、15、30、60和120分钟时，采用LC-MS/MS测定剩余化合物浓度。半衰期（t₁/₂）分别为5.6小时（人）、6.3小时（小鼠）和7.1小时（大鼠）[1]。 2. Caco-2细胞通透性：将Caco-2细胞培养于Transwell小室中，直至形成融合单层。向顶端室（A室）加入CHMFL-EGFR-202（10 μM），并在30、60、90和120分钟时从基底外侧室（B室）取样。表观渗透系数 (Papp) 为 2.5×10⁻⁶ cm/s (A→B)，表明肠道吸收良好 [1] 3. 血浆蛋白结合： 将 CHMFL-EGFR-202 (1 μM) 添加到人、小鼠和大鼠血浆中，并在 37°C 下孵育 1 小时。超滤结果显示，药物结合率分别为94%（人）、92%（小鼠）和90%（大鼠）[1] 4. 体内药代动力学（小鼠）： - 口服给药（20 mg/kg）：Cmax = 4.2 μM，AUC₀–24h = 32.8 μM·h，t₁/₂ = 8.5 小时，口服生物利用度 (F) = 85% [1] - 静脉给药（5 mg/kg）：Cmax = 12.6 μM，AUC₀–24h = 38.6 μM·h，t₁/₂ = 7.8 小时 [1] |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
1. 体外毒性：
用CHMFL-EGFR-202处理正常人支气管上皮细胞 (NHBE) 72 小时后，IC₅₀ > 5 μM，比 EGFR 突变癌细胞的 IC₅₀ 值高 4000–6000 倍，表明其对正常细胞的毒性较低 [1] 2. 体内毒性： - 在异种移植研究中（21 天，口服剂量高达 20 mg/kg），小鼠未出现明显的体重减轻（<5%），未出现异常行为，且尸检时主要器官（肝脏、肾脏、心脏、肺）未见明显的病理变化 [1] - 血清生化分析显示，与载体对照组相比，肝功能（ALT、AST）或肾功能（BUN、肌酐）均无显著变化 [1] 3. hERG 抑制： CHMFL-EGFR-202采用膜片钳技术测试了其对hERG通道的抑制作用。IC₅₀ > 30 μM，提示心脏毒性风险较低[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
1. 结合模式和作用机制：CHMFL-EGFR-202与EGFR的ATP结合口袋不可逆地结合，与Cys797（EGFR激酶结构域中的保守残基）形成共价键。它抑制EGFR的催化活性并阻断下游AKT/ERK信号通路，从而抑制癌细胞增殖、导致G1期阻滞和细胞凋亡[1]
2. 结构背景：CHMFL-EGFR-202是一种新型小分子不可逆EGFR抑制剂，具有吡唑并[3,4-d]嘧啶骨架。其独特的结合模式（与Cys797的不可逆共价结合）赋予其对EGFR突变体（包括T790M耐药突变）的高效抑制作用[1] 3. 治疗潜力：CHMFL-EGFR-202是一种高效、选择性强且口服生物利用度高的不可逆EGFR抑制剂。在临床前模型中，它对EGFR突变型（包括T790M耐药型）非小细胞肺癌（NSCLC）显示出显著疗效，使其成为治疗EGFR突变型NSCLC患者（尤其是对第一代EGFR抑制剂产生耐药性的患者）的理想候选药物[1] |
| 分子式 |
C25H24CLN7O2
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|---|---|
| 分子量 |
489.96
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| 精确质量 |
489.168
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| CAS号 |
2089381-40-6
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| PubChem CID |
127264586
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
3.1
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| tPSA |
112
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| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
7
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| 可旋转键数目(RBC) |
6
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| 重原子数目 |
35
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| 分子复杂度/Complexity |
745
|
| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
N1C(COC2C=CC(C3=NN([C@H]4CN(C(=O)C=C)CCC4)C4=C3C(=NC=N4)N)=CC=2Cl)=CC=CC=1
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| InChi Key |
RVCKMZIQUFKZFD-GOSISDBHSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C25H24ClN7O2/c1-2-21(34)32-11-5-7-18(13-32)33-25-22(24(27)29-15-30-25)23(31-33)16-8-9-20(19(26)12-16)35-14-17-6-3-4-10-28-17/h2-4,6,8-10,12,15,18H,1,5,7,11,13-14H2,(H2,27,29,30)/t18-/m1/s1
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| 化学名 |
1-[(3R)-3-[4-amino-3-[3-chloro-4-(pyridin-2-ylmethoxy)phenyl]pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-1-yl]piperidin-1-yl]prop-2-en-1-one
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.0410 mL | 10.2049 mL | 20.4098 mL | |
| 5 mM | 0.4082 mL | 2.0410 mL | 4.0820 mL | |
| 10 mM | 0.2041 mL | 1.0205 mL | 2.0410 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
匹伐加宾
磷酸氢化可的松
BAY-784
Gly-PEG3-endo-BCN
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