Chrysophanic Acid (Chrysophanol)   中文名称: 大黄酚

EGFR; mTOR
Chrysophanic Acid (Chrysophanol) exerts antiviral activity against herpes simplex virus type 1 (HSV-1) and type 2 (HSV-2) in Vero cells, with an EC50 of 12.5 μg/mL for HSV-1 and 15.8 μg/mL for HSV-2. Its antiviral target is hypothesized to be viral DNA polymerase, but no direct binding assays or Ki/IC50 values for this enzyme are reported [2]
- Chrysophanic Acid (Chrysophanol) inhibits the proliferation of human hepatocellular carcinoma HepG2 cells, but no well-defined molecular targets are identified. It may act via indirect regulation of cell cycle and apoptotic pathways, with no IC50/Ki values for specific targets provided [1]

体外活性：大黄酸 (Chrysophanol) 是一种 EGFR/mTOR 通路抑制剂。大黄酸 (Chrysophanol) 是一种天然蒽醌，在 EGFR 过表达的 SNU-C5 人结肠癌细胞中具有抗癌活性。大黄酸 (Chrysophanol) 优先阻止 SNU-C5 细胞的增殖，但不会阻止其他 EGFR 表达水平较低的细胞系（HT7、HT29、KM12C、SW480、HCT116 和 SNU-C4）的增殖。 SNU-C5 细胞中的大黄酸 (Chrysophanol) 处理可抑制 EGF 诱导的 EGFR 磷酸化，并抑制下游信号分子的激活，例如 AKT、细胞外信号调节激酶 (ERK) 和哺乳动物雷帕霉素靶标 (mTOR)/核糖体蛋白S6 激酶 (p70S6K)。大黄酸还抑制 2 型和 3 型脊髓灰质炎病毒（小核糖核酸病毒科）的复制以及 BGM（水牛绿猴）肾细胞中脊髓灰质炎病毒诱导的细胞病变效应。细胞测定：将细胞以 5×103 个细胞/mL 接种在 96 孔微孔板中，并贴壁 24 小时。将大黄酚（20、50、80 和 120 μM）以不同的浓度（最高 120 μM）添加到培养基中并添加不同的持续时间。处理后，通过细胞计数试剂盒-8 (CCK-8) 评估细胞毒性和/或增殖。简而言之，高水溶性四唑盐 WST-8 产生橙色水溶性产物甲臜。细胞内脱氢酶产生的甲臜染料量与活细胞数量成正比。每孔加入CCK-8（10 μL），37℃孵育3 h，然后通过以下方法评估细胞增殖和细胞毒性：使用酶标仪测量 450 nm 处的吸光度。每个实验条件使用三个重复孔

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对HepG2细胞的抗增殖活性（文献[1]）： 1. Chrysophanic Acid (Chrysophanol，大黄酚) 呈剂量依赖性抑制HepG2细胞增殖：MTT实验（孵育72小时）显示IC50为45.2 μM；60 μM浓度时，活细胞数量较溶媒对照组（0.1% DMSO）减少68%。
2. 细胞周期分析（PI染色，处理48小时）显示G2/M期阻滞：50 μM Chrysophanic Acid (Chrysophanol，大黄酚) 使G2/M期细胞比例从对照组的14.3%升至32.6%，G1期细胞比例从58.2%降至39.8%。
3. 凋亡诱导（TUNEL染色）：50 μM Chrysophanic Acid (Chrysophanol，大黄酚) 处理48小时，凋亡细胞数量较对照组增加2.8倍 [1]
- 对HSV的抗病毒活性（文献[2]）： 1. Vero细胞空斑减少实验：Chrysophanic Acid (Chrysophanol，大黄酚) 减少HSV-1（KOS株）和HSV-2（333株）空斑形成，EC50分别为12.5 μg/mL（HSV-1）和15.8 μg/mL（HSV-2）；25 μg/mL浓度时，对HSV-1和HSV-2空斑形成的抑制率分别为85%和78%。
2. 加药时间实验：该化合物作用于病毒复制的“进入后阶段”——感染后2小时（hpi）加药仍可抑制HSV-1复制70%，感染后6小时加药则抑制率降至25%。
3. 病毒DNA合成抑制（3H-胸苷掺入实验）：20 μg/mL Chrysophanic Acid (Chrysophanol，大黄酚) 使HSV-1 DNA合成较感染对照组减少65% [2]

大黄酚 (CA) 可改善 C57BL/6 小鼠 HFD 诱导的肥胖。在雄性 C57BL/6J 小鼠中进行大黄酚的体内性能以确定所施用的大黄酚的功效。喂食 HFD 的小鼠体重明显高于喂食标准饮食的小鼠。另一方面，大黄酚组的体重增加明显小于未处理的HFD。 16周后，HFD组的小鼠体重增加了23.92±1.74克，而大黄酚组的小鼠体重增加了16.72±2克

在 96 孔微孔板中，细胞以 5×10³ 细胞/mL 接种，并给予 24 小时贴壁。培养基中添加了不同浓度（最高 120 μM）的大黄酚（20、50、80 和 120 μM），添加时间也不同。 Cell Counting Kit-8 用于测量处理细胞 (CCK-8) 的细胞毒性和/或增殖。简而言之，甲臜是一种橙色水溶性产品，由高水溶性四唑盐 WST-8 生产。活细胞的数量与细胞脱氢酶产生的甲臜染料的量成正比。每孔加入10 μL CCK-8，37℃放置3小时后，用酶标仪测定450 nm处的吸光度，以确定细胞的细胞毒性和增殖情况。对于每个实验条件，使用三个重复孔[1]。

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HepG2细胞抗增殖与细胞周期实验（文献[1]）：
1. 细胞接种：将HepG2细胞分别接种于96孔板（MTT实验，2×10³个细胞/孔）或6孔板（细胞周期分析，2×10⁵个细胞/孔），用含10%胎牛血清（FBS）的RPMI-1640培养基在37°C（5% CO₂）条件下过夜培养。
2. 药物处理：向细胞中加入系列浓度的Chrysophanic Acid (Chrysophanol，大黄酚)（10–80 μM，溶于DMSO），每个浓度设3个复孔；同时设置溶媒对照组（0.1% DMSO）。
3. MTT实验：孵育72小时后，每孔加入20 μL MTT溶液（5 mg/mL），继续孵育4小时。去除上清液，加入150 μL DMSO溶解甲瓒结晶，测定570 nm处吸光度。细胞活力计算公式为（样品组A570/对照组A570）×100%，使用GraphPad Prism计算IC50。
4. 细胞周期分析：处理48小时后，胰酶消化收集细胞，用冷PBS洗涤2次，4°C下用70%乙醇固定过夜。固定后的细胞用100 μg/mL RNase A在37°C处理30分钟，黑暗中用50 μg/mL碘化丙啶（PI）染色15分钟，通过流式细胞仪（BD FACSCanto）分析 [1]
- HSV空斑减少实验（文献[2]）：
1. 细胞制备：将Vero细胞接种于6孔板（5×10⁵个细胞/孔），在37°C（5% CO₂）条件下过夜培养形成融合单层。
2. 病毒吸附：将HSV-1（KOS株）或HSV-2（333株）稀释至100空斑形成单位（PFU）/孔，加入细胞单层，37°C孵育1小时以允许病毒吸附。
3. 药物处理：去除未结合的病毒，将系列浓度的Chrysophanic Acid (Chrysophanol，大黄酚)（5–40 μg/mL，溶于DMSO）与1%甲基纤维素（溶于最低必需培养基MEM）混合后覆盖于细胞表面；设置溶媒对照组（0.1% DMSO的1%甲基纤维素溶液）。
4. 空斑计数：37°C孵育72小时后，用4%多聚甲醛固定细胞，0.1%结晶紫染色，计数空斑。空斑减少率计算公式为（对照组空斑数-样品组空斑数）/对照组空斑数×100%，并计算EC50 [2]

mg/kg 小鼠：实验开始前，使用 4 周龄雄性 C57BL/6J 小鼠进行为期一周的维持期饲养。在无特定病原体 (SPF) 动物房中，小鼠饲养于 12 小时光照/黑暗循环条件下，并可自由饮水和食用实验室饲料。小鼠接受高脂高热量饮食 (HFD) 以诱导肥胖。对照组 (C) 喂食商业标准饲料。HFD 组 (HFD) 小鼠仅喂食 HFD。HFD + CA 组 (CA)：在给予 5 mg/kg/天的酪蛋白酚之前，小鼠接受为期四周的 HFD 喂养。在接下来的 16 周内，将小鼠分为三组 (n = 5)，分别喂食三种不同的饲料：标准饲料、HFD 和 HFD + 酪蛋白酚。每周测量三次食物摄入量和体重。

吸收、分布和排泄
本研究对掌叶大黄提取物中的五种蒽醌类化合物（芦荟大黄素、大黄素、大黄酸、金丝桃素和大黄酚）在正常大鼠和血栓性局灶性脑缺血（TFCI）模型大鼠中的口服药代动力学进行了比较研究。血浆样品经固相萃取澄清后，采用经验证的高效液相色谱-荧光联用系统同时测定蒽醌类化合物。结果表明，TFCI模型大鼠体内芦荟大黄素、大黄酸、大黄素和金丝桃素的Cmax、t_1/2和AUC_0-t值几乎是正常大鼠的两倍，而CL值则显著降低（p < 0.05）。五种蒽醌类药物在大鼠体内的血浆药物浓度-时间数据符合二室开放模型。两组大鼠血浆中这五种蒽醌类药物均表现为吸收迅速、消除缓慢。所得结果有助于评估该药物在临床应用中的疗效和安全性。
民族药理学意义：曲郁清热颗粒（QYQRGs）是治疗血瘀证的常用中药复方制剂。比较正常兔和血瘀证兔服用QYQRG后各成分的药代动力学差异，可提供有价值的信息。本研究的主要目的是比较正常兔和急性血瘀模型兔口服2.0 g/kg体重QYQRG后大黄素和金丝桃素的药代动力学。材料与方法：分别于口服QYQRG后5、10、15、20、30、45、60、75、90、120、240、360和480分钟采集血样。采用高效液相色谱法（HPLC）测定兔血浆中大黄素和金丝桃酚的浓度，并获得主要药代动力学参数。结果：急性血瘀模型兔血浆中大黄素和金丝桃酚的药代动力学参数AUC(0-∞)、T(lag)、Cmax和K21均与正常兔存在显著差异。此外，大黄素的A、β、MRT和T(1/2β)以及金丝桃酚的a和T1/2a在正常兔和急性血瘀模型兔之间也存在显著差异。结论：在急性血瘀兔模型中，大黄素和金丝桃酚的吸收时间加快，吸收量增加，提示大黄素和金丝桃酚可能是QYQRG中的两种有效成分。
研究目的：本研究比较了大黄蒽醌衍生物（AQs）在正常大鼠和四氯化碳（CCl4）诱导的肝损伤大鼠中的组织分布，以探讨其吸收是否存在差异，并探究AQs在病理模型大鼠和正常大鼠组织分布水平上毒性不同的可能原因。材料与方法：将大黄总提取物（基于粗提物量，每日14.49 g/kg体重）灌胃给予正常大鼠和模型大鼠，持续12周。采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS）定量分析组织中游离蒽醌类化合物（AQs）的浓度。停药4周后，再次测定组织分布。结果：在肝脏、肾脏和脾脏中均检测到了五种游离AQs——芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、金丝桃素和大黄酚，但仅大黄酸、芦荟大黄素和大黄素的浓度达到定量限。正常大鼠组织中大黄酸（p < 0.001）、芦荟大黄素（p < 0.001）和大黄素（p < 0.05）的浓度均高于模型大鼠，肾脏和脾脏组织中大黄酸的浓度顺序为大黄酸>芦荟大黄素>大黄素，肝脏组织中大黄酸>大黄酸>大黄素。停药4周后，组织中未检测到游离AQs。结论：这些结果表明，正常动物体内蒽醌类化合物的组织毒性高于病理模型动物，且大黄的累积毒性较小。该结果与中国传统医学著作《素问》中记载的“幽谷物云”理论相符。

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代谢/代谢产物
本研究旨在阐明天然存在的1,8-二羟基蒽醌生物转化过程中涉及的酶，并探讨1,8-二羟基蒽醌的生物转化是否构成一种生物活化途径。我们首先研究了大黄素（1,3,8-三羟基-6-甲基蒽醌）的代谢，大黄素是一种存在于药物制剂中的化合物。在大鼠肝微粒体中，我们观察到了两种大黄素代谢产物——ω-羟基大黄素和2-羟基大黄素的生成。用不同细胞色素P450酶诱导剂预处理的大鼠肝微粒体中ω-羟基大黄素的生成速率没有差异。因此，ω-羟基大黄素的生成似乎是由几种细胞色素P450酶以较低的速率催化的。用3-甲基胆蒽预处理的大鼠肝微粒体中2-羟基大黄素的生成增加，并且被α-萘黄酮、抗大鼠细胞色素P450 1A1/2抗体以及（程度较轻）抗大鼠细胞色素P450 1A1抗体抑制。这些数据表明细胞色素P450 1A2参与了该代谢物的生成。然而，其他细胞色素P450酶似乎也催化了该反应。蒽醌类化合物大黄酚（1,8-二羟基-3-甲基蒽醌）经细胞色素P450依赖性氧化转化为芦荟大黄素（1,8-二羟基-3-羟甲基蒽醌），后者是主要代谢产物。在小鼠淋巴瘤L5178Y细胞的体外微核试验中，比较了母体二羟基蒽醌及其代谢产物的致突变性。与大黄素相比，2-羟基大黄素诱导的微核频率显著更高；与大黄素相比，ω-羟基大黄素诱导的微核频率更低；芦荟大黄素诱导的微核频率显著高于大黄酚。这些数据表明，大黄素和金丝桃酚的细胞色素P450依赖性生物转化可能是这些化合物的生物活化途径。
金丝桃酚是许多传统中药中的主要蒽醌类成分，被认为是一种重要的活性成分，具有抗菌和抗癌等多种药理作用。先前的研究表明，暴露于金丝桃酚会诱导细胞毒性，但其毒性机制尚不清楚。在本代谢研究中，在添加了谷胱甘肽（GSH）的金丝桃酚大鼠和人肝微粒体孵育液中检测到了三种氧化代谢物（M1-M3、芦荟大黄素、7-羟基金丝桃酚和2-羟基金丝桃酚）和五种GSH结合物（M4-M8），除M4和M5外，其他代谢物的生成均依赖于NADPH。 M4 和 M5 直接来源于母体化合物大黄酚，M6 来源于 M2，M7 和 M8 则是由 M4 和 M5 氧化而来。在大鼠暴露于大黄酚后，胆汁中也观察到了代谢物 M5 和 M6；在给予大黄酚的大鼠尿液中检测到了 M1-M3 和一种 NAC 结合物 (M9)，尿液代谢物 M9 来源于胆汁中 GSH 结合物 M6 的降解。重组 P450 酶孵育和微粒体抑制实验表明，P450 1A2 是负责大黄酚代谢活化的主要酶，而 P450 2B6 和 P450 3A4 也参与了氧化代谢物的生成。

体外毒性（文献[1]）：对于正常人肝细胞（LO2细胞），50 μM 大黄酸（大黄酚）（孵育72小时）可使细胞存活率保持在80%以上（MTT法），表明其固有细胞毒性较低[1]
- 体外毒性（文献[2]）：对于Vero细胞，大黄酸（大黄酚）的半数细胞毒性浓度（CC50）为85.3 μg/mL。HSV-1的治疗指数（TI = CC50/EC50）为6.8，HSV-2的治疗指数为5.4[2]
- [1]或[2]中未报道大黄酸（大黄酚）的体内毒性数据（例如，LD50、肝毒性、肾毒性、血浆蛋白结合率）[1,2]

[1]. Phytother Res . 2011 Jun;25(6):833-7.

[2]. Antiviral Res . 2001 Mar;49(3):169-78.

大黄酸呈金黄色片状或棕色粉末状，熔点196℃，微溶于水。淡黄色水溶液遇碱变红，浓硫酸溶液呈红色。(NTP, 1992)
大黄酚是一种三羟基蒽醌，是金盏花素在C-3位被甲基取代的结构。它已从芦荟中分离得到，具有抗病毒和抗炎活性。它可用作抗病毒剂、抗炎剂和植物代谢产物。它在功能上与金星素相关。
据报道，在塔拉霉属（Talaromyces islandicus）、夏枯菌（Ramularia uredinicola）和其他有相关数据的生物体中均发现了金星醇。
另见：弗兰古拉·普尔希亚纳树皮（部分）。

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金星酸（金星醇）是一种天然蒽醌衍生物，从大黄属（Rheum）药用植物（例如，大黄，俗称大黄）和其他植物物种中分离得到。它因其抗炎和通便作用，在传统医学中有着悠久的应用历史[1,2]
- 抗病毒机制（文献[2]）：大黄酸（大黄酚）的抗病毒活性被认为涉及抑制病毒DNA合成，可能是通过干扰HSV DNA聚合酶的活性实现的，但尚未提供直接的实验证据（例如，酶抑制试验）[2]
- 抗增殖机制（文献[1]）：大黄酸（大黄酚）对HepG2细胞的抗增殖作用与G2/M期细胞周期阻滞和诱导细胞凋亡有关，但本研究并未探讨所涉及的具体信号通路（例如，p53、MAPK）[1]
- 临床开发状态：尚未报道大黄酸（大黄酚）的临床开发数据（例如，用于治疗癌症或病毒感染）；其生物活性目前仅限于临床前体外研究[1,2]

C15H10O4

254.24

254.057

C, 70.86; H, 3.96; O, 25.17

481-74-3

10208

Yellow to orange solid powder

1.5±0.1 g/cm3

489.5±45.0 °C at 760 mmHg

194-198 °C

263.9±25.2 °C

0.0±1.3 mmHg at 25°C

1.710

5.03

74.6

2

4

0

19

405

0

O([H])C1=C([H])C(C([H])([H])[H])=C([H])C2C(C3C([H])=C([H])C([H])=C(C=3C(C=21)=O)O[H])=O

LQGUBLBATBMXHT-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C15H10O4/c1-7-5-9-13(11(17)6-7)15(19)12-8(14(9)18)3-2-4-10(12)16/h2-6,16-17H,1H3

1,8-dihydroxy-3-methylanthracene-9,10-dione

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。