| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Bcr-Abl
- BCR-ABL fusion protein: Dasatinib carbaldehyde induces proteasomal degradation of BCR-ABL with a DC₅₀ (concentration causing 50% degradation) of 0.8 μM in K562 cells; it inhibits ABL kinase activity with an IC₅₀ of 1.5 μM [1] - Cellular Inhibitor of Apoptosis Proteins (cIAP1/cIAP2): Dasatinib carbaldehyde binds to cIAP1 with a Ki of 0.5 μM and cIAP2 with a Ki of 0.7 μM (TR-FRET assay) [1] |
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| 体外研究 (In Vitro) |
一些癌症细胞发生染色体易位，导致慢性粒细胞白血病（CML）中包括BCR-ABL在内的异常致癌融合蛋白的表达。ABL酪氨酸激酶抑制剂，如伊马替尼和达沙替尼，显示出显著的治疗效果，尽管在长期治疗期间出现耐药性阻碍了治疗。治疗慢性粒细胞白血病的另一种方法是下调BCR-ABL蛋白。我们设计了一种名为凋亡蛋白特异性和非遗传抑制剂[IAP]依赖性蛋白清除器（SNIPR）的杂交分子的蛋白质敲除系统，旨在诱导IAP介导的靶蛋白泛素化和蛋白酶体降解，最近开发了一对针对BCR-ABL蛋白的SNIPR（ABL）。在这项研究中，我们测试了ABL抑制剂和IAP配体的各种组合，并针对SNIPER（ABL）的蛋白质敲除活性对接头进行了优化。由此产生的SNIPR（ABL）-39，其中达沙替尼通过聚乙二醇（PEG）×3接头与IAP配体LCL161衍生物偶联，显示出降解BCR-ABL蛋白的强大活性。机制分析表明，细胞凋亡抑制蛋白1（cIAP1）和X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）都在BCR-ABL蛋白的降解中发挥作用。与BCR-ABL蛋白的降解一致，SNIPER（ABL）-39抑制了信号转导子和转录激活子5（STAT5）和Crk样原癌基因（CrkL）的磷酸化，并抑制了BCR-ABL阳性CML细胞的生长。这些结果表明，SNIPER（ABL）-39可能是一种针对BCR-ABL阳性CML的基于降解的新型抗癌药物的候选者[1]。
1. BCR-ABL降解活性：达沙替尼甲醛 以剂量依赖方式降解K562（BCR-ABL阳性慢性髓系白血病细胞）和KU812细胞中的BCR-ABL蛋白，DC₅₀值分别为0.8 μM和1.1 μM。在K562细胞中，5 μM浓度时达到最大降解率（>90%），该效应可被蛋白酶体抑制剂MG132（10 μM）逆转 [1] 2. 抗增殖活性：该化合物抑制BCR-ABL阳性白血病细胞增殖，IC₅₀值如下：K562（1.2 μM）、KU812（1.6 μM）、Ba/F3-BCR-ABL（1.4 μM）。对BCR-ABL阴性细胞（RPMI8226）无显著抗增殖作用（IC₅₀ > 30 μM）[1] 3. 凋亡诱导：达沙替尼甲醛（2 μM，24小时）诱导K562细胞凋亡，Annexin V/PI染色显示凋亡率从溶剂组的4.5%升至41.2%。Western blot显示切割型caspase-3（3.8倍）和切割型PARP（3.2倍）上调 [1] 4. ABL激酶抑制：达沙替尼甲醛 体外抑制重组BCR-ABL激酶活性，IC₅₀=1.5 μM。2 μM浓度时，可使K562细胞中BCR-ABL磷酸化（p-BCR-ABL）及其下游底物Crkl磷酸化（p-Crkl）分别降低75%和80% [1] 5. IAP结合活性：该化合物通过其IAP配体部分结合cIAP1（Ki=0.5 μM）和cIAP2（Ki=0.7 μM），TR-FRET结合实验证实了这一相互作用 [1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
1. K562异种移植模型抗肿瘤疗效：裸鼠右侧皮下接种K562细胞（5×10⁶个/只），肿瘤体积达100–150 mm³时，给予达沙替尼甲醛腹腔注射（10、20 mg/kg，每日1次）治疗14天。20 mg/kg组肿瘤生长抑制率（TGIR）为88%，10 mg/kg组为65%（相较于溶剂对照组）。肿瘤重量分别减少85%（20 mg/kg）和62%（10 mg/kg）[1]
2. 肿瘤中BCR-ABL降解：Western blot分析显示，达沙替尼甲醛（20 mg/kg）处理的K562肿瘤组织中，BCR-ABL蛋白水平降低82%，p-Crkl水平降低78%（相较于溶剂组）[1] |
| 酶活实验 |
与ATP结合位点结合的ABL1抑制剂的抑制剂活性测定[1]
在加入检测板之前，将三倍浓度的His-ABL1蛋白、Tb-SA和生物素化抗His抗体混合在检测缓冲液中，并在室温下孵育1小时以上。将溶解在测定缓冲液中的几种浓度的试验抑制剂分配到测定板中。随后，将ABL/抗体/Tb-SA预混物分配到每个孔中，并在室温下孵育120分钟。通过加入含有13.5 nM BODIPY-达沙替尼的测定缓冲液引发反应。将平板在室温下孵育30分钟，使用EnVision Multilabel平板阅读器测量TR‐FRET信号。Tb-SA、生物素化抗His、ABL1蛋白和BODIPY-dasatinib的最终浓度分别为0.2、0.4、0.38和4.5 nM。0和100%对照的值分别是在3μM达沙替尼存在和不存在的情况下获得的信号。 IAP/肽相互作用抑制活性的测定[1] His-IAP蛋白（XIAP、cIAP1或cIAP2）、FITC-Smac、Tb-SA和生物素化抗His抗体在检测缓冲液中混合，在室温下孵育1小时以上，然后加入检测板。在分析板中分配了几种浓度的测试抑制剂，并将蛋白质探针预混物分配到每个孔中。所有测定均使用0.6 nM的IAP蛋白进行。FITC-Smac的浓度描述如下：XIAP为27 nM，cIAP1为12 nM，而cIAP2为19 nM。Tb-SA和生物素化抗His抗体的最终浓度分别为0.2和0.4 nM。在室温下孵育1小时后，使用EnVision多标签平板阅读器测量TR‐FRET信号。0和100%对照的值分别是在IAP蛋白存在和不存在的情况下获得的信号。 1. ABL激酶活性抑制实验流程：将重组BCR-ABL激酶结构域与系列浓度的达沙替尼甲醛（0.01–30 μM）及ATP（10 μM）在反应缓冲液中孵育。通过均相时间分辨荧光（HTRF）实验检测特异性肽底物的磷酸化水平，根据激酶活性抑制的剂量-反应曲线计算IC₅₀值 [1] 2. IAP结合实验流程（TR-FRET法）：将重组cIAP1/cIAP2蛋白与系列浓度的达沙替尼甲醛（0.001–10 μM）及荧光标记的IAP配体共孵育，检测时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）信号评估结合亲和力，从竞争结合曲线推导Ki值 [1] |
| 细胞实验 |
细胞活力测定[1]
根据制造商的说明，使用水溶性四唑WST-8（4-[3-（2-甲氧基-4-硝基苯基）-2-（4-硝基苯基）-2H-5-四唑基]-1,3-苯二磺酸盐）进行分光光度测定，以确定细胞存活率。细胞以每孔5×103个细胞的浓度接种在96孔培养板上。24小时后，用指定化合物处理细胞48小时。加入WST-8试剂，在37°C、5%CO2的加湿气氛中孵育细胞0.5小时[1]。 1. 抗增殖实验流程：将BCR-ABL阳性白血病细胞（K562、KU812、Ba/F3-BCR-ABL）和BCR-ABL阴性细胞（RPMI8226）接种于96孔板，用达沙替尼甲醛（0.1–100 μM）处理72小时。采用细胞增殖检测试剂盒测定细胞活力，计算IC₅₀值 [1] 2. BCR-ABL降解实验流程：K562细胞用达沙替尼甲醛（0.1–10 μM）处理6小时；蛋白酶体依赖性验证实验中，细胞先用MG132（10 μM）预孵育1小时再加入药物。裂解细胞后，Western blot检测BCR-ABL、p-BCR-ABL及p-Crkl蛋白水平，根据BCR-ABL蛋白减少的剂量-反应曲线计算DC₅₀ [1] 3. 凋亡实验流程：达沙替尼甲醛（2 μM）处理K562细胞24小时后，用Annexin V-FITC和PI染色，流式细胞术定量凋亡细胞；Western blot检测切割型caspase-3和切割型PARP [1] |
| 动物实验 |
1. K562 xenograft model: Female nude mice (6–8 weeks old) were subcutaneously inoculated with K562 cells (5×10⁶ cells/mouse) in the right flank. When tumors reached 100–150 mm³, mice were randomly divided into vehicle (10% DMSO/40% PEG400/50% saline) and Dasatinib carbaldehyde groups (10, 20 mg/kg). The compound was administered via intraperitoneal injection once daily for 14 days. Tumor volume and body weight were measured every 2 days. At the end of treatment, mice were sacrificed, and tumors were collected for Western blot analysis of BCR-ABL and p-Crkl [1]
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
1. 体外细胞毒性：浓度高达 30 μM 的达沙替尼甲醛对正常人外周血单核细胞 (PBMC) 无显著细胞毒性（细胞活力 ≥85% vs. 对照组）[1]
2. 体内毒性：小鼠经达沙替尼甲醛（20 mg/kg，腹腔注射，每日一次，连续 14 天）处理后，体重无显著变化（变化 ≤5% vs. 对照组），也未出现行为异常。肝脏、肾脏和脾脏的组织病理学分析显示无明显组织损伤[1] 3. 血浆蛋白结合率：达沙替尼甲醛在人血浆中的血浆蛋白结合率为 93 ± 2%，在小鼠血浆中的血浆蛋白结合率为 91 ± 3%[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
在本研究中，我们测试了多种ABL抑制剂和IAP配体的组合，以开发SNIPER(ABL)，该化合物能够诱导致癌激酶BCR-ABL的降解，并优化了连接子的长度以提高其活性。我们发现，SNIPER(ABL)-39（其中达沙替尼通过PEG×3连接子与LCL161衍生物偶联）对BCR-ABL蛋白的降解活性最强。SNIPER(ABL)-39在10 nM浓度下即可有效抑制BCR-ABL蛋白的表达，并在100 nM浓度下达到最大活性。值得注意的是，在较高浓度的SNIPER(ABL)-39下，BCR-ABL蛋白的抑制活性反而减弱（图2c）。这被称为高剂量钩效应，即药物浓度越高，其活性越低。我们推测，BCR-ABL/SNIPER(ABL)-39/IAP三元复合物的形成是蛋白质敲低活性所必需的，而较高浓度的SNIPER(ABL)-39会抑制该复合物的形成，因此，蛋白质敲低活性会减弱。[1]
关于诱导BCR-ABL蛋白降解的小分子化合物，已有报道通过将达沙替尼与von Hippel-Lindau (VHL) E3连接酶配体或沙利度胺衍生物泊马度胺（一种Cereblon (CRBN) E3连接酶配体）偶联，构建了针对BCR-ABL的PROTAC。32 有趣的是，基于CRBN的PROTAC可以在25 nM浓度下降低BCR-ABL蛋白水平，而基于VHL的PROTAC则不能。由于基于IAP的SNIPER(ABL)能够诱导BCR-ABL蛋白的降解，因此提示当达沙替尼作为BCR-ABL蛋白的配体时，IAP和CRBN是合适的E3泛素连接酶来降解BCR-ABL蛋白。SNIPER(ABL)-39和基于CRBN的PROTAC可能能够将E3泛素连接酶募集到合适的位置，从而使BCR-ABL表面的赖氨酸残基发生泛素化修饰。因此，E3连接酶配体与靶配体的组合对于开发SNIPER和PROTAC等降解诱导剂至关重要。[1] 与BCR-ABL蛋白的降解一致，SNIPER(ABL)-39抑制了BCR-ABL相关信号通路以及表达天然BCR-ABL蛋白的BCR-ABL阳性CML细胞（如K562、KCL-22和KU812细胞）的增殖。然而，在表达T315I突变型BCR-ABL蛋白的SK-9细胞中，SNIPER(ABL)-39既不降低BCR-ABL蛋白水平，也不抑制细胞增殖。这可能是由于 SNIPER(ABL)‐39 无法与 T315I 突变体 BCR-ABL 蛋白结合，因为 T315I 是一个门控突变，可阻止达沙替尼的结合。39, 42 然而，BCR-ABL 蛋白具有多个结构域，例如 pleckstrin 同源性、Src 同源性 (SH) 2 和 SH3 结构域，可以针对这些结构域开发新的配体。将此类配体整合到 SNIPER 中，可以开发出一种新型 SNIPER(ABL)，该化合物能够诱导对激酶抑制剂耐药的 BCR-ABL 蛋白降解，这可能是一种克服激酶抑制剂耐药性的新策略。[1] 1. 达沙替尼甲醛是一种蛋白水解靶向嵌合体 (PROTAC)，由达沙替尼衍生的 ABL 激酶结合部分和 IAP 配体部分组成。[1] 2. 其作用机制涉及与 BCR-ABL 和 IAP 蛋白的双重结合，通过 IAP 将 E3 泛素连接酶复合物募集到 BCR-ABL，诱导 BCR-ABL 的泛素化和蛋白酶体降解。[1] 3. 该化合物对 BCR-ABL⁺ 白血病细胞和异种移植瘤均表现出强效活性。该药物通过降解致癌蛋白而非仅仅抑制其活性，克服了对传统ABL激酶抑制剂的潜在耐药性[1] 4. 它对BCR-ABL⁺细胞具有高度选择性，对正常细胞毒性低，这支持了其治疗慢性粒细胞白血病（CML）的潜力[1] |
| 分子式 |
C21H22CLN7O2S
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|---|---|
| 分子量 |
471.96
|
| 精确质量 |
471.12
|
| 元素分析 |
C, 53.44; H, 4.70; Cl, 7.51; N, 20.77; O, 6.78; S, 6.79
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| CAS号 |
2112837-79-1
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| 相关CAS号 |
863127-77-9 (hydrate);302962-49-8 (free);2112837-79-1 (cabaldehyde);910297-52-8 (N-oxide);
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| PubChem CID |
138377562
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
3.7
|
| tPSA |
132Ų
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
8
|
| 可旋转键数目(RBC) |
5
|
| 重原子数目 |
32
|
| 分子复杂度/Complexity |
654
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
C1C(C)=C(C(=CC=1)Cl)NC(C1SC(NC2=CC(=NC(C)=N2)N2CCN(CC2)C=O)=NC=1)=O
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| InChi Key |
BKDGDNUWAYNWBA-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C21H22ClN7O2S/c1-13-4-3-5-15(22)19(13)27-20(31)16-11-23-21(32-16)26-17-10-18(25-14(2)24-17)29-8-6-28(12-30)7-9-29/h3-5,10-12H,6-9H2,1-2H3,(H,27,31)(H,23,24,25,26)
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| 化学名 |
N-(2-chloro-6-methylphenyl)-2-((6-(4-formylpiperazin-1-yl)-2-methylpyrimidin-4-yl)amino)thiazole-5-carboxamide
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| 别名 |
Dasatinib carbaldehyde; 2112837-79-1; 5-Thiazolecarboxamide, N-(2-chloro-6-methylphenyl)-2-[[6-(4-formyl-1-piperazinyl)-2-methyl-4-pyrimidinyl]amino]- (ACI); N-(2-Chloro-6-methylphenyl)-2-[[6-(4-formyl-1-piperazinyl)-2-methyl-4-pyrimidinyl]amino]-5-thiazolecarboxamide (ACI); SCHEMBL21340693;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~33.33 mg/mL (~70.62 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1188 mL | 10.5941 mL | 21.1882 mL | |
| 5 mM | 0.4238 mL | 2.1188 mL | 4.2376 mL | |
| 10 mM | 0.2119 mL | 1.0594 mL | 2.1188 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
SMARCA2/4 Ligand-Linker Conjugate 2
K-Ras ligand-Linker Conjugate 6 format
SHP2 ligand-3
Androgen receptor ligand 2
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