Dihydrocucurbitacin B

目录号: V33230 纯度: ≥98%
二氢葫芦素 B 是一种存在于 Talena 根中的三萜类化合物,可抑制活化 T 细胞的核因子,诱导细胞周期 G0 期阻滞,并抑制迟发型超敏反应。
Dihydrocucurbitacin B CAS号: 13201-14-4
产品类别: New2
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产品描述
二氢葫芦素 B 是一种存在于 Talena 根中的三萜类化合物,可抑制活化 T 细胞的核因子,诱导细胞周期 G0 期阻滞,并抑制迟发型超敏反应。
生物活性&实验参考方法
靶点
Nuclear factor of activated T cells (NFAT) (Inhibits activation) [1]
体外研究 (In Vitro)
Dihydrocucurbitacin B 抑制植物血凝素(PHA)刺激的人T淋巴细胞增殖,IC₅₀为1.48 µM(测试范围1.0-2.5 µM)。在2.5 µM浓度下,它能完全抑制细胞增殖。该化合物在浓度高达10 µM时无细胞毒性。
Dihydrocucurbitacin B (2.5 µM) 将PHA刺激的T淋巴细胞的细胞周期阻滞在G₀/G₁期,仅有极少数细胞进入S期。此效果与地塞米松(5 µM)相似,而阿非迪霉素(0.75 µM)则将周期阻滞在S期。
Dihydrocucurbitacin B (2.5-1.0 µM) 显著抑制PHA刺激的人T淋巴细胞产生干扰素-γ (IFN-γ)、白细胞介素-2 (IL-2) 和白细胞介素-10 (IL-10)。它也能轻微减少白细胞介素-4 (IL-4) 的产生,但无统计学显著性。
逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析显示,Dihydrocucurbitacin B (2.5 µM) 降低了受刺激T淋巴细胞中IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10的mRNA表达。
蛋白质印迹分析表明,Dihydrocucurbitacin B (2.5 µM) 抑制了PHA刺激的人T淋巴细胞中关键细胞周期蛋白(A₁, B₁, D₂, E₁)的表达。
电泳迁移率变动分析(EMSA)显示,Dihydrocucurbitacin B (2.5 µM) 抑制了PHA刺激的T淋巴细胞中转录因子NFAT的活化,但不影响细胞内的钙离子内流。 [1]
体内研究 (In Vivo)
在恶唑酮诱导的小鼠迟发型超敏反应(DTH)模型中,局部应用Dihydrocucurbitacin B (0.1, 0.3, 0.5 mg/耳) 能剂量依赖性地显著抑制耳肿胀。
在二硝基氟苯(DNFB)诱导的小鼠DTH模型中,局部应用Dihydrocucurbitacin B (0.1, 0.3, 0.5 mg/耳) 也能显著抑制耳肿胀。
在绵羊红细胞(SRBC)诱导的小鼠DTH模型中,腹腔注射Dihydrocucurbitacin B (10 mg/kg) 可抑制爪肿胀。
对恶唑酮和DNFB处理小鼠耳组织的组织学分析显示,与对照组相比,Dihydrocucurbitacin B 减少了水肿、炎性细胞浸润(中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞)以及表皮变化(乳头状瘤病、海绵层水肿)。
对恶唑酮和DNFB处理小鼠炎症耳组织的离体分析显示,Dihydrocucurbitacin B 降低了关键促炎细胞因子的水平,包括白细胞介素-1β (IL-1β)、白细胞介素-4 (IL-4) 和肿瘤坏死因子-α (TNF-α)。 [1]
细胞实验
T淋巴细胞增殖实验: 分离人外周血淋巴细胞并重悬。将细胞接种到96孔板中,并用植物血凝素(PHA)刺激。加入不同浓度(1.0至2.5 µM)的Dihydrocucurbitacin B 或地塞米松(5 µM)。将板孵育4天。然后使用改良的比色MTT法量化细胞增殖。对照包括PHA刺激的细胞(100%活性)和未刺激的细胞(0%活性)。
细胞周期分析: 将T淋巴细胞密度调整为1 × 10⁶ 细胞/mL,接种到24孔板中,并用或不使用PHA刺激。加入Dihydrocucurbitacin B (2.5 µM)、地塞米松(5 µM)或阿非迪霉素(0.75 µM)。孵育指定时间后,收集细胞,用乙醇固定,用碘化丙啶和核糖核酸酶A染色,并通过流式细胞术分析DNA含量和细胞周期分布。
细胞活力和细胞毒性测定: 培养T淋巴细胞并用PHA刺激4天。然后加入碘化丙啶溶液,30分钟后通过流式细胞术测量细胞活力。
细胞因子产生测定: 将T淋巴细胞与PHA单独或联合不同浓度的Dihydrocucurbitacin B 一起培养4天。收集细胞培养上清液,并使用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ水平。
细胞因子mRNA的RNA提取和RT-PCR: 用或不使用PHA处理T细胞,并与Dihydrocucurbitacin B 一起培养18小时。使用离心柱提取总RNA。通过分光光度法测定RNA浓度和纯度。进行逆转录以生成cDNA,然后将其用作PCR扩增的模板,使用针对IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10和β-肌动蛋白(作为内参对照)的特异性引物。通过凝胶电泳和光密度测定法分析PCR产物。 [1]
动物实验
小鼠中恶唑酮和二硝基氟苯 (DNFB) 诱导的迟发型超敏反应 (DTH):雌性瑞士小鼠在第 1 天和第 2 天通过局部涂抹过敏原(恶唑酮或 DNFB)进行致敏。第 6 天,在耳部涂抹激发剂量。在激发后 2、24、48 和 72 小时,将溶于丙酮的二氢葫芦素 B(0.1、0.3 或 0.5 mg/耳)局部涂抹于耳部。在治疗前以及激发后 24、48 和 72 小时,使用千分尺测量耳厚度以计算水肿。
小鼠中绵羊红细胞 (SRBC) 诱导的迟发型超敏反应 (DTH):腹腔注射二氢葫芦素 B,剂量为 10 mg/kg。所提供的文本中并未详细说明相对于绵羊红细胞免疫和攻击的具体给药时间。爪肿胀程度被用作炎症反应的指标。[1]
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
通过碘化丙啶排除法和流式细胞术测定,浓度高达 10 µM 的二氢葫芦素 B 对人 T 淋巴细胞没有细胞毒性。[1]
参考文献

[1]. Dihydrocucurbitacin B inhibits delayed type hypersensitivity reactions by suppressing lymphocyte proliferation. J Pharmacol Exp Ther. 2007 Sep;322(3):1261-8.

其他信息
23,24-二氢葫芦素B是一种23,24-二氢葫芦素,其羊毛甾烷骨架被羟基、甲基和氧代取代基多重取代,5位为不饱和键;C-25位的羟基被乙酰化。它是一种23,24-二氢葫芦素、仲α-羟基酮和叔α-羟基酮。其功能与葫芦素B相关。
据报道,二氢葫芦素B存在于南托秋海棠(Begonia nantoensis)、栝楼(Trichosanthes cucumeroides)和其他有相关数据的生物体中。
二氢葫芦素B是一种从卡亚波尼亚(Cayaponia tayuya)根中分离得到的三萜类化合物。它具有抗炎和潜在的免疫调节活性。其抑制T细胞介导的迟发型超敏反应(DTH)的主要作用机制是抑制转录因子NFAT。这种抑制作用导致关键细胞周期蛋白(A₁、B₁、D₂、E₁)和促炎细胞因子(例如IL-2、IFN-γ)的表达降低,从而使细胞周期停滞于G₀/G₁期,并抑制活化T淋巴细胞的增殖。该化合物似乎并非通过糖皮质激素样机制或直接抑制钙离子内流发挥作用。[1]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C32H48O8
分子量
560.7187
精确质量
560.334
CAS号
13201-14-4
PubChem CID
267250
外观&性状
White to off-white solid powder
密度
1.2±0.1 g/cm3
沸点
692.2±55.0 °C at 760 mmHg
闪点
215.4±25.0 °C
蒸汽压
0.0±4.9 mmHg at 25°C
折射率
1.559
LogP
2.56
tPSA
138.2
氢键供体(HBD)数目
3
氢键受体(HBA)数目
8
可旋转键数目(RBC)
7
重原子数目
40
分子复杂度/Complexity
1170
定义原子立体中心数目
9
SMILES
O([H])[C@]1([H])C([H])([H])[C@@]2(C([H])([H])[H])[C@]3([H])C([H])([H])C([H])=C4C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])C([C@]([H])(C([H])([H])[C@@]4([H])[C@]3(C([H])([H])[H])C(C([H])([H])[C@]2(C([H])([H])[H])[C@@]1([H])[C@@](C(C([H])([H])C([H])([H])C(C([H])([H])[H])(C([H])([H])[H])OC(C([H])([H])[H])=O)=O)(C([H])([H])[H])O[H])=O)O[H])=O
InChi Key
QZJJDOYZVRUEDY-NRNCYQGDSA-N
InChi Code
InChI=1S/C32H48O8/c1-17(33)40-27(2,3)13-12-23(36)32(9,39)25-21(35)15-29(6)22-11-10-18-19(14-20(34)26(38)28(18,4)5)31(22,8)24(37)16-30(25,29)7/h10,19-22,25,34-35,39H,11-16H2,1-9H3/t19-,20+,21-,22+,25+,29+,30-,31+,32+/m1/s1
化学名
[(6R)-6-[(2S,8S,9R,10R,13R,14S,16R,17R)-2,16-dihydroxy-4,4,9,13,14-pentamethyl-3,11-dioxo-2,7,8,10,12,15,16,17-octahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl]-6-hydroxy-2-methyl-5-oxoheptan-2-yl] acetate
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 本产品在运输和储存过程中需避光。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.7834 mL 8.9171 mL 17.8342 mL
5 mM 0.3567 mL 1.7834 mL 3.5668 mL
10 mM 0.1783 mL 0.8917 mL 1.7834 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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