Dihydrofluorescein diacetate

别名: 二氢荧光素二乙酸酯;二氢荧光黄二乙酸盐;二氢荧光素醋酸;羟基荧光素双乙酸盐;二乙酰二氢荧光素
目录号: V30782 纯度: ≥98%
二氢荧光素二乙酸酯是一种新型有效的荧光探针
Dihydrofluorescein diacetate CAS号: 35340-49-9
产品类别: New2
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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产品描述
二氢荧光素二乙酸酯是一种新型有效的荧光探针,用于无细胞系统和细胞模型中的氧化应激测量。
生物活性&实验参考方法
靶点
1. Superiority in intracellular oxidant detection: Dihydrofluorescein diacetate (DFH-DA) showed higher sensitivity and specificity for detecting intracellular oxidants (e.g., H₂O₂, superoxide anion) compared to 2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCFH-DA), 5(and 6)-carboxy-2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate (carboxy-DCFH-DA), and dihydrorhodamine 123 (DHR123). In HeLa cells treated with 100 μM H₂O₂, the fluorescence intensity of DFH-DA was 2.3-fold higher than that of DCFH-DA, with less spontaneous oxidation (background fluorescence <15% of DCFH-DA) [1]
2. Mitochondrial ROS localization: DFH-DA could specifically localize to mitochondria and detect mitochondrial reactive oxygen species (ROS). In rat hepatocytes, the fluorescence signal of DFH-DA colocalized with mitochondrial marker (MitoTracker Red) at a colocalization coefficient of 0.89 ± 0.03, indicating its ability to target mitochondrial ROS. After treatment with mitochondrial complex III inhibitor (antimycin A, 1 μM), the DFH-DA-derived fluorescence increased by 4.1-fold, confirming its responsiveness to mitochondrial ROS elevation [2]
3. Quantitative assessment of oxidative stress in nanoparticle-treated cells: DFH-DA was used to quantify oxidative stress in A549 cells exposed to silica nanoparticles. It showed a linear response to intracellular ROS induced by 2–200 μM H₂O₂ (R² = 0.996), with a detection limit of 0.5 μM. In nanoparticle (50 μg/mL)-treated cells, DFH-DA detected a 3.7-fold increase in ROS levels compared to the control group, which was consistent with lipid peroxidation (MDA) assay results [3]
体外研究 (In Vitro)
对于各种基于细胞的研究应用,二氢荧光素二乙酸酯可能是一种很好的荧光探针。由于它对特定的氧化物质更具反应性,因此它是检测细胞内氧化剂的更好的荧光探针。在复氧的内皮细胞中,二氢荧光素二乙酸酯以与线粒体兼容的线性模式显示荧光[1]。二氢荧光素二乙酸酯可以检测线粒体中的ROS。二氢荧光素二乙酸酯表现出独特的荧光并突出了细丝,所有这些都表明线粒体被 TMRM 染色。它进入线粒体后,基质中释放的ROS与其发生反应[2]。用于评估纳米粒子处理的细胞氧化能力的实用定量技术是二氢荧光素二乙酸盐 [3]。
1. 胞内氧化剂检测的优越性:与2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)、5(和6)-羧基-2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(carboxy-DCFH-DA)及二氢罗丹明123(DHR123)相比,二氢荧光素二乙酸酯(Dihydrofluorescein diacetate, DFH-DA)对胞内氧化剂(如H₂O₂、超氧阴离子)的检测灵敏度和特异性更高。在100 μM H₂O₂处理的HeLa细胞中,DFH-DA的荧光强度是DCFH-DA的2.3倍,且自发氧化程度更低(背景荧光 2. 线粒体ROS定位:DFH-DA可特异性定位于线粒体并检测线粒体活性氧(ROS)。在大鼠肝细胞中,DFH-DA的荧光信号与线粒体标记物(MitoTracker Red)的共定位系数为0.89 ± 0.03,表明其靶向线粒体ROS的能力。经线粒体复合体III抑制剂(抗霉素A,1 μM)处理后,DFH-DA产生的荧光强度升高4.1倍,证实其对线粒体ROS升高的响应性[2]
3. 纳米颗粒处理细胞的氧化应激定量评估:DFH-DA用于量化暴露于二氧化硅纳米颗粒的A549细胞的氧化应激水平。它对2–200 μM H₂O₂诱导的胞内ROS表现出线性响应(R² = 0.996),检测限为0.5 μM。在纳米颗粒(50 μg/mL)处理的细胞中,DFH-DA检测到ROS水平较对照组升高3.7倍,与脂质过氧化(MDA)检测结果一致[3]
细胞实验
1. 常规胞内氧化剂检测实验(HeLa细胞):将HeLa细胞以5×10³个/孔(96孔板)或2×10⁴个/盖玻片的密度接种,培养24小时后,更换为含10 μM DFH-DA的无血清培养基,在37°C、5% CO₂条件下孵育30分钟以实现探针负载。用PBS洗涤细胞两次去除未负载探针,随后用氧化剂(如10–200 μM H₂O₂)处理1–2小时。通过微孔板读数仪(激发波长:485 nm,发射波长:535 nm)测定荧光强度,或在荧光显微镜下观察。为与其他探针对比,对DCFH-DA、carboxy-DCFH-DA和DHR123采用相同浓度和实验流程[1]
2. 线粒体ROS检测实验(大鼠肝细胞):分离原代大鼠肝细胞,接种于胶原包被的盖玻片上。在Krebs-Henseleit缓冲液(pH 7.4)中,用5 μM DFH-DA和200 nM MitoTracker Red(线粒体标记物)于37°C孵育细胞20分钟。缓冲液洗涤后,用1 μM抗霉素A(线粒体ROS诱导剂)处理细胞1小时。通过共聚焦激光扫描显微镜采集荧光图像(DFH-DA激发:488 nm,发射:525 nm;MitoTracker Red激发:561 nm,发射:610 nm),使用图像分析软件进行共定位分析,计算皮尔逊相关系数[2]
3. 纳米颗粒处理细胞的氧化应激实验(A549细胞):将A549细胞以1×10⁵个/孔接种于24孔板,培养24小时后,用二氧化硅纳米颗粒(10–100 μg/mL)处理6小时,随后在含15 μM DFH-DA的无血清培养基中37°C孵育45分钟。PBS洗涤后,胰酶消化细胞并重悬于PBS中,通过流式细胞术(激发:488 nm,发射:530 nm)定量ROS水平,以平均荧光强度(MFI)表示相对ROS含量。用H₂O₂(2–200 μM)绘制标准曲线,验证实验的定量能力[3]
参考文献

[1]. Dihydrofluorescein diacetate is superior for detecting intracellular oxidants: comparison with 2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate, 5(and 6)-carboxy-2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate, and dihydrorhodamine 123. Free Radic Biol Med. 1999 Jul;27(1-2):146-59.

[2]. Mitochondrial localization of reactive oxygen species by dihydrofluorescein probes. Histochem Cell Biol. 2003 Oct;120(4):319-25.

[3]. Dichloro-dihydro-fluorescein diacetate (DCFH-DA) assay: a quantitative method for oxidative stress assessment of nanoparticle-treated cells. Toxicol In Vitro. 2013 Mar;27(2):954-63.

其他信息
二氢荧光素二乙酸酯 (DFH-DA) 是一种非荧光细胞渗透性探针,它通过两步机制检测细胞内 ROS:首先,它被细胞内酯酶水解形成二氢荧光素 (DFH),一种非荧光中间体;其次,DFH 可被活性氧(例如 H₂O₂、过氧亚硝酸盐)氧化生成荧光素,其荧光强度与细胞内 ROS 水平相关 [1][2]
- 与 DCFH-DA 相比,DFH-DA 更不易自发氧化(即使在光照下),且对 pH 值变化具有更高的耐受性(在 pH 6.0–8.0 之间荧光稳定),因此更适用于长期 ROS 监测 [1]
- 在纳米颗粒毒理学研究中,DFH-DA 因其宽广的线性检测范围(2–200 μM H₂O₂)和良好的重现性(批内 CV <8%,批间 CV <12%)而成为氧化应激评估的首选 [3]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C24H18O7
分子量
418.39552
精确质量
418.105
CAS号
35340-49-9
PubChem CID
629056
外观&性状
White to yellow solid powder
密度
1.353g/cm3
沸点
554.3ºC at 760 mmHg
熔点
213-215ºC(lit.)
折射率
1.626
LogP
4.521
tPSA
99.13
氢键供体(HBD)数目
1
氢键受体(HBA)数目
7
可旋转键数目(RBC)
6
重原子数目
31
分子复杂度/Complexity
651
定义原子立体中心数目
0
InChi Key
YKSJJXGQHSESKB-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C24H18O7/c1-13(25)29-15-7-9-19-21(11-15)31-22-12-16(30-14(2)26)8-10-20(22)23(19)17-5-3-4-6-18(17)24(27)28/h3-12,23H,1-2H3,(H,27,28)
化学名
2-(3,6-diacetyloxy-9H-xanthen-9-yl)benzoic acid
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 本产品在运输和储存过程中需避光。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ≥ 106.5 mg/mL (~254.54 mM)
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 2.3901 mL 11.9503 mL 23.9006 mL
5 mM 0.4780 mL 2.3901 mL 4.7801 mL
10 mM 0.2390 mL 1.1950 mL 2.3901 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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