| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 100mg |
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| 500mg |
| 靶点 |
EPAC1 (Ki = 1.8 μM); EPAC2 (Ki = 2.5 μM) [1]
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|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
cAMP 信号传导的一种重要调节剂是 Epac。 EPAC 5376753 是 5225554 的硫代巴比妥酸变体，具有更高的抑制细胞中 Epac 信号传导并减少 Epac 激活所需的构象变化的能力。 5376753 以选择性方式抑制 Epac 介导的成纤维细胞迁移[1]。
荧光共振能量转移（FRET）实验表明，EPAC 5376753 对环腺苷酸（cAMP）诱导的 EPAC 激活具有浓度依赖性变构抑制作用。在 0.1-10 μM 浓度范围内，该化合物显著降低了 EPAC1 和 EPAC2 介导的 FRET 信号变化，对应的 Ki 值分别为 1.8 μM（EPAC1）和 2.5 μM（EPAC2）。[1] 表面等离子体共振（SPR）实验证实 EPAC 5376753 可直接结合 EPAC1 的变构位点，解离常数（KD）约为 2.1 μM，明确了该化合物与 EPAC 之间的特异性相互作用。[1] 分子对接和分子动力学模拟结果显示，EPAC 5376753 结合于 EPAC 中一个保守的变构口袋，破坏了 cAMP 诱导 EPAC 激活所需的构象变化。[1] |
| 酶活实验 |
先表达并纯化 EPAC1 和 EPAC2 的催化结构域，通过在特定位点融合青色荧光蛋白（CFP）和黄色荧光蛋白（YFP）构建 FRET 探针。实验体系包含 EPAC-FRET 探针、不同浓度的 EPAC 5376753 以及优化后的 cAMP 信号缓冲液。在 37°C 孵育 30 分钟后，加入 cAMP 启动 EPAC 激活，使用荧光酶标仪检测 FRET 信号。根据 FRET 比值变化计算抑制率，通过非线性回归分析确定 Ki 值。[1]
SPR 实验中，将纯化的 EPAC1 蛋白固定在传感芯片上，EPAC 5376753 用运行缓冲液进行系列稀释后，以恒定流速注入芯片表面。记录共振单位（RU）形式的结合响应信号，采用数据分析软件将传感图拟合至 1:1 结合模型，推导得出 KD 值。[1] |
| 细胞实验 |
将 EPAC1-FRET 报告质粒转染至 HeLa 细胞，培养至融合度达 70%-80%。用不同浓度（0.5、2、5、10 μM）的 EPAC 5376753 处理细胞 1 小时后，加入 10 μM 8-pCPT-2'-O-Me-cAMP（EPAC 选择性激活剂）进行刺激。利用共聚焦激光扫描显微镜监测活细胞内的 FRET 信号，通过量化 FRET 比值（YFP/CFP）评估 EPAC1 激活情况。结果显示，EPAC 5376753 以浓度依赖性方式抑制细胞内 cAMP 诱导的 EPAC1 激活，在浓度 ≥2 μM 时观察到显著抑制效果。[1]
为评估对下游信号的影响，裂解经 EPAC 5376753 和 8-pCPT-2'-O-Me-cAMP 处理的细胞，通过下拉实验结合免疫印迹法检测下游效应分子 Rap1 的激活形式（Rap1-GTP）水平。实验证实 EPAC 5376753 以浓度依赖性方式降低 Rap1 激活，与对 EPAC 的抑制作用一致。[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
EPAC 5376753 is a small-molecule allosteric inhibitor of EPAC (Exchange Protein Directly Activated by cAMP), identified through a combination of computational modeling and experimental validation. [1]
The compound binds to a unique allosteric site on EPAC, distinct from the cAMP-binding pocket, and exerts its inhibitory effect by stabilizing the inactive conformation of EPAC, thereby preventing cAMP-induced conformational rearrangement and downstream signaling activation. [1] Computational approaches including virtual screening of chemical libraries and molecular dynamics simulations were used to predict potential allosteric inhibitors, and EPAC 5376753 was selected based on its high binding affinity and predicted allosteric modulation capacity, which was subsequently validated by in vitro and cell-based assays. [1] |
| 分子式 |
C15H8CL2N2O3S
|
|---|---|
| 分子量 |
367.20662021637
|
| 精确质量 |
365.963
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| CAS号 |
302826-61-5
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| PubChem CID |
1102776
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| 外观&性状 |
Orange to red solid powder
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| LogP |
3.6
|
| tPSA |
103
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
2
|
| 重原子数目 |
23
|
| 分子复杂度/Complexity |
547
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
ClC1C=C(C=CC=1C1=CC=C(/C=C2/C(NC(NC/2=O)=S)=O)O1)Cl
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| InChi Key |
QQAOFKJHOUFHKI-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C15H8Cl2N2O3S/c16-7-1-3-9(11(17)5-7)12-4-2-8(22-12)6-10-13(20)18-15(23)19-14(10)21/h1-6H,(H2,18,19,20,21,23)
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| 化学名 |
5-[[5-(2,4-dichlorophenyl)furan-2-yl]methylidene]-2-sulfanylidene-1,3-diazinane-4,6-dione
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.7232 mL | 13.6162 mL | 27.2324 mL | |
| 5 mM | 0.5446 mL | 2.7232 mL | 5.4465 mL | |
| 10 mM | 0.2723 mL | 1.3616 mL | 2.7232 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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