ER-Tracker Blue-White DPX

目录号: V49572 纯度: ≥98%
ER-Tracker 染料是 BODIPY 系列染料与格列本脲结合的类似物。
ER-Tracker Blue-White DPX CAS号: 287715-95-1
产品类别: New3
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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产品描述
ER-Tracker染料是BODIPY系列染料与格列本脲偶联的类似物。它能选择性地结合内质网,低浓度下对细胞无毒。这类染料是一种环境敏感型探针。即使经甲醛处理后,它仍能保留部分荧光,具有荧光寿命长、消光系数好的特点。格列本脲是一种ATP依赖性钾离子通道(Kir6、KATP)和CFTR氯离子通道阻滞剂,可结合于内质网。ER-Tracker不适用于固定细胞的染色。
ER-Tracker Blue-White DPX(CAS号:287715-95-1)是一种细胞渗透性活细胞荧光探针,可选择性地对内质网(ER)进行染色。它是一种基于BODIPY的荧光团,与格列本脲(格列本脲)偶联,后者可与位于内质网膜上的ATP敏感性钾通道(KATP)的磺酰脲受体(SUR)结合。结合后,该染料会发出蓝白相间的荧光(激发波长约为374 nm,根据环境不同,发射波长分别为约430 nm(蓝色)和约620 nm(白色)),在极性环境中呈蓝色,而在富含脂质的内质网膜中则呈白色。该探针可用于实时成像内质网的形态、动态变化和应激反应。
生物活性&实验参考方法
靶点
The probe targets the sulfonylurea receptor (SUR), a regulatory subunit of ATP-sensitive potassium channels (KATP). However, in the ER, these channels are involved in maintaining calcium stores and ion homeostasis. The glibenclamide moiety specifically binds to SUR with high affinity (nM range). The BODIPY fluorophore provides bright, photostable fluorescence that is sensitive to membrane polarity. Unlike traditional ER dyes (e.g., DiOC6(3) which non-specifically stains mitochondria), ER-Tracker Blue-White DPX has high ER selectivity with minimal mitochondrial or Golgi staining.
体外研究 (In Vitro)
1. 配制ER-Tracker工作液 1.1 配制储备液:使用128 μL无水DMSO;配制1 mM储备液:加入100 μg ER-Tracker。注意:建议将ER-Tracker储备液分装后储存于-20°C或-1.2℃。配制100 nM至1 μM ER-Tracker工作液:使用预制的无血清细胞培养基或PBS灌注液。注意:请根据实际情况调整ER-Tracker的储存条件,避免光照。 2. 使用细胞染料对悬浮细胞进行染色 2.1 离心细胞,加入PBS,每次5分钟,重复洗涤两次。细胞密度为1×10⁶/mL。 2.2 加入1 mL ER-Tracker工作液,孵育5至30分钟。 2.3 以 400 g 离心 3-4 分钟,然后去除上清液。2.4 用 PBS 洗涤细胞两次,每次 5 分钟。2.5 使用 1 mL PBS 或无血清培养基。3. 贴壁细胞染色 3.1 使用无菌盖玻片培养贴壁细胞。3.2 取下盖玻片,吸除细胞表面残留物。3.3 加入 100 μL 染料工作液,充分摇晃使细胞包被染料,染色 5-30 分钟。3.4 使用荧光显微镜观察,吸除染料工作液,并用培养基洗涤 2-3 次,每次 5 分钟。注意:如果需要进行流式细胞术检测,则必须在染色前用胰岛消化细胞并终止反应。
在活细胞中,ER-Tracker Blue-White DPX(稀释度为1:1000-1:2000,浓度约为0.5-1 uM)能以高特异性和低毒性对内质网进行染色,这已通过与内质网驻留蛋白(例如钙网蛋白、PDI)的共定位得到验证。在连续成像条件下,荧光强度至少可稳定维持30分钟。该染料在固定后保留性较差;然而,经3.7%甲醛固定后(约损失50%)仍保留部分荧光,从而可以与使用针对内质网标记物的抗体进行免疫荧光共定位。在推荐浓度下,该染料不影响内质网的钙离子处理。
体内研究 (In Vivo)
本探针不适用于体内治疗。它仅设计用于体外活细胞成像。然而,它已被用于离体小鼠胰腺腺泡细胞成像,以及斑马鱼胚胎(1-5 uM孵育浓度)中观察发育过程中内质网的动态变化。在这些模型中,该染料标记内质网网络,但并不用于治疗任何疾病。由于它是一种无毒的成像剂而非药物,因此未进行体内疗效或药代动力学研究。
酶活实验
标准体外染色方案:配制 1 mM 的无水 DMSO 储备液。对于活细胞,将 ER-Tracker Blue-White DPX 稀释至终浓度为 0.5-1 uM,使用预热的 HBSS 或不含酚红的培养基。将细胞(生长于玻璃盖玻片或多孔板中)在 37°C 下孵育 15-30 分钟。吸出染色液,用预热的培养基洗涤一次,然后立即成像。最佳激发波长:374 nm(或 350-380 nm);发射光:同时采集蓝色(430-470 nm)和白色(590-650 nm)通道。蓝光/白光发射比值可用于检测内质网应激(极性变化)。
细胞实验
体外细胞内质网形态分析:将 HeLa 或 COS-7 细胞接种于带腔室的盖玻片上。过夜培养后,如上所述用 ER-Tracker Blue-White DPX 染色,并立即使用配备 405 nm 激光的共聚焦显微镜进行成像。对整个细胞进行 Z 轴扫描(步长 0.3 um),可以显示相互连接的内质网网络(小管和池)。为了诱导内质网应激,用 2 uM 毒胡萝卜素或 5 ug/mL 衣霉素处理细胞 4-6 小时,然后进行染色。内质网出现断裂或扩张,荧光强度降低。活细胞延时成像(每 5 秒拍摄一次,持续 5 分钟)可以追踪内质网的重塑过程。
动物实验
斑马鱼胚胎活体成像:受精后24-48小时的斑马鱼胚胎经脱卵处理后,置于含有1-5 μM ER-Tracker Blue-White DPX的E3胚胎培养基中,于28℃孵育30-60分钟。随后清洗胚胎,并用0.02%三卡因麻醉。将胚胎固定在玻璃底培养皿中,并用1%低熔点琼脂糖包埋,使用共聚焦显微镜(405 nm激发)进行成像。在脊索、肌肉和神经管细胞中,内质网清晰可见。这使得研究人员能够探索发育过程中或药物处理(例如,内质网应激诱导剂)后的内质网动态变化。在这些浓度下未观察到全身性影响。
药代性质 (ADME/PK)
不适用;该染料不用于全身治疗。在细胞培养中,该探针可渗透细胞膜,但在推荐浓度下不影响膜电位或钙稳态。染色后,该化合物可迅速洗脱。它本身不具有药代动力学特性。在斑马鱼中,该染料分布于整个胚胎并积聚于所有细胞的内质网中,未观察到毒性。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
ER-Tracker Blue-White DPX 在工作浓度(0.5-5 μM)下被认为无毒。在细胞活力检测(MTT)中,HeLa 细胞暴露于 1 μM 浓度 4 小时后,细胞活力 >95%。浓度为 10 μM 时,24 小时后细胞活力下降至约 80%,但这已超过常用的染色浓度。尚未有遗传毒性或发育毒性的报道。在斑马鱼胚胎中,暴露于 5 μM 浓度 60 分钟不会影响胚胎存活率或形态。实验室安全注意事项:避免摄入、吸入;干燥保存于 -20℃。
参考文献

[1]. A functional equivalent of endoplasmic reticulum and Golgi in axons for secretion of locally synthesized proteins. Mol Cell Neurosci. 2009 Feb;40(2):128-42.

[2]. Observation of endoplasmic reticulum tubules via TOF-SIMS tandem mass spectrometry imaging of transfected cells. Biointerphases. 2018 Feb 26;13(3):03B409.

[3]. CDy6, a photostable probe for long-term real-time visualization of mitosis and proliferating cells. Chem Biol. 2015 Feb 19;22(2):299-307.

[4]. A functional equivalent of endoplasmic reticulum and Golgi in axons for secretion of locally synthesized proteins. Mol Cell Neurosci. 2009 Feb;40(2):128-42.

其他信息
ER-Tracker Blue-White DPX 是一种荧光染料,其功能与达泊西汀(2-氨基乙基)磺酰胺类似。
ER-Tracker Blue-White DPX 是一种仅供研究使用的荧光探针,并非药物。它广泛应用于细胞生物学领域,用于研究活细胞中的内质网形态、内质网自噬和内质网应激。“DPX”后缀表示其为二吡咯亚甲基二氟化硼 (BODIPY) 衍生物,具有独特的双发射特性,可用于膜极性检测。与绿色或红色内质网示踪剂(例如 ER-Tracker Green)不同,这种蓝白色变体的光毒性较低,适用于与绿色和红色荧光蛋白进行多色成像。目前尚未进行临床试验或获得药物批准。它通常从化学品供应商处购买,用于显微镜研究。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
精确质量
580.12
CAS号
287715-95-1
PubChem CID
22024758
外观&性状
Light yellow to yellow solid powder
tPSA
113
氢键供体(HBD)数目
2
氢键受体(HBA)数目
12
可旋转键数目(RBC)
9
重原子数目
40
分子复杂度/Complexity
928
定义原子立体中心数目
0
SMILES
CN(C)C1=CC=C(C=C1)C2=CN=C(O2)C3=CC=C(C=C3)S(=O)(=O)NCCNC(=O)C4=C(C(=C(C(=C4F)F)F)F)F
InChi Key
JMJKKMLLEHNELP-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C26H21F5N4O4S/c1-35(2)16-7-3-14(4-8-16)18-13-33-26(39-18)15-5-9-17(10-6-15)40(37,38)34-12-11-32-25(36)19-20(27)22(29)24(31)23(30)21(19)28/h3-10,13,34H,11-12H2,1-2H3,(H,32,36)
化学名
N-[2-[[4-[5-[4-(dimethylamino)phenyl]-1,3-oxazol-2-yl]phenyl]sulfonylamino]ethyl]-2,3,4,5,6-pentafluorobenzamide
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气保护),避免吸湿/受潮和光照。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~5 mg/mL (~8.61 mM)
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
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配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

联系我们