| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Anti-fibrotic
Ezurpimtrostat HCl targets palmitoyl protein thioesterase 1 (PPT-1), a lysosomal enzyme involved in the depalmitoylation of proteins. By inhibiting PPT-1, it disrupts late autophagy and promotes lysosomal accumulation. This mechanism is thought to underlie its anti-fibrotic, antiviral, and anticancer effects. It also affects cathepsins B (CTSB), L (CTSL), and D (CTSD). |
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| 体外研究 (In Vitro) |
本研究探讨了GNS561/Ezurpimtrostat（一种小分子溶酶体趋向性自噬抑制剂）的抗病毒活性及其相关机制。有趣的是，GNS561的抗病毒活性浓度为6-40 nM，具体数值取决于病毒株，使其成为目前针对SARS-CoV-2感染研究中最有效的分子。研究发现，GNS561与SARS-CoV-2共同定位于溶酶体相关膜蛋白2（LAMP2）阳性溶酶体中。此外，GNS561增大了LC3-II斑点的大小，导致自噬小泡的积累和多层体（MLB）的出现，表明GNS561破坏了自噬机制。 [2]
GNS561 对 SARS-CoV-2 复制表现出强大的抗病毒活性[2] 为了评估 GNS561 的抗病毒活性，我们使用 Vero E6 细胞研究了 SARS-CoV-2 的复制情况。首先，为了研究 GNS561 对 Vero E6 细胞模型中自噬的特异性影响，我们进行了蛋白质表达分析，重点关注 LC3-II 和 p62 蛋白水平，这两种蛋白是众所周知的自噬标志物。我们评估了在不同药物浓度下处理 24 小时后，以及在有或无巴弗洛霉素 A1 (Baf A1)（一种已知的自噬晚期抑制剂，在实验的最后 4 小时加入）的情况下，自噬抑制情况。结果显示，LC3-II 蛋白表达呈剂量依赖性增加，但在最高剂量 Baf A1 处理后并未进一步增加（图 1A），这反映了细胞内自噬体的积累。对 p62 蛋白水平也观察到了相同的现象，表明 GNS561 在 Vero E6 细胞系模型中阻断了自噬的后期阶段。 体外研究表明，盐酸依祖匹莫司他 (Ezurpimtrostat HCl) 可抑制癌细胞增殖。其机制涉及抑制 PPT-1，导致晚期自噬紊乱和溶酶体积累增加。现有文献中未提供其活性的具体 IC50 值。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
研究表明，在肝细胞癌小鼠模型中，使用ezurpimtrostat抑制PPT1可降低肝脏肿瘤负荷，其机制是通过诱导淋巴细胞浸润肿瘤，并与抗程序性死亡受体1 (PD-1) 抗体联合使用。PPT1抑制剂可通过增加肝癌细胞表面主要组织相容性复合体 (MHC)-I 的表达来增强抗PD-1免疫疗法的效果，并通过细胞毒性CD8+淋巴细胞的再定植和激活来调节免疫。Ezurpimtrostat可将“冷肿瘤”转化为“热肿瘤”，从而可能改善肝癌中T细胞介导的免疫疗法。[1]
研究人员使用K18-hACE2小鼠模型，发现GNS561治疗可导致肺部SARS-CoV-2病毒颗粒减少，这与自噬途径的破坏有关。总体而言，这项研究强调了GNS561作为治疗SARS-CoV-2感染的有效药物，并支持了自噬抑制剂可能是COVID-19替代治疗策略的假设。[2] 在DEN肝脏肿块模型中，盐酸依祖匹莫司他（化合物2-3）（15 mg/kg/天，口服）治疗6周可降低胶原纤维沉积水平（降低41.0%）和肝纤维化面积[3]。 在体内，盐酸依祖匹莫司他可显著降低二乙基亚硝胺（DEN）诱导的肝硬化大鼠模型中的肝纤维化。它是一种口服活性化合物，表明其具有治疗纤维化疾病的潜力。这些发现证实了其作为抗纤维化药物的体内疗效。 |
| 酶活实验 |
体外抗病毒活性测定[2]
将 Vero E6（25,000 个细胞/孔）和 Calu-3（12,000 个细胞/孔）细胞系接种于 96 孔组织培养板中，每孔加入 175 µL 适宜培养基，培养至少 24 小时，直至细胞汇合度达到 90%。用 25 µL 待测药物或溶剂对照处理 Vero E6 和 Calu-3 细胞 2 小时，然后以 0.1 MOI 感染 SARS-CoV-2，并分别继续培养 24 小时或 48 小时。使用 Macherey-Nagel™ NucleoSpin™ ARN 病毒提取试剂盒从细胞培养上清液中提取病毒。使用特异性 qRT-PCR 检测先前提取的病毒 RNA，以评估子代病毒的产量。简而言之，一步法 qRT-PCR 在 25 μL 的反应体系中进行，该体系包含 10 μL 提取的病毒 RNA 和 15 μL 含有靶向 E 基因的探针/引物混合物（表 S1）以及 SuperScript™ III Platinum™ 一步法 qRT-PCR 试剂盒中的 SuperScript Master Mix。使用 Cobas z 480 PCR 系统进行定量 PCR 检测，并根据制造商的说明使用 LightCycler 480 SW 1.5 软件分析数据。扩增后进行熔解曲线分析以验证扩增子的准确性。子代病毒产量计算为所研究条件下 E 基因的相对表达量，并以感染组和未处理组的表达量进行标准化。每个实验均进行三次技术重复，并进行了三次独立实验。 将 Vero E6 和 Vero E6-TMPRSS2 细胞接种于含有完全培养基的 24 孔板中培养 24 小时。将细胞以 0.025 的 MOI 感染不同浓度的 GNS561 或载体，然后与 SARS-CoV-2（hCoV-19_IPL_France 株）孵育 16 小时。用磷酸盐缓冲液 (PBS) 洗涤细胞，并在非还原性 Laemmli 上样缓冲液中裂解细胞。然后将蛋白质在 10% SDS-聚丙烯酰胺凝胶上进行分离，并转移至硝酸纤维素膜。使用兔多克隆抗体 (1:1000) 检测 SARS-CoV-2 核衣壳 (N) 蛋白，随后使用辣根过氧化物酶标记的二抗 (1:10,000)。采用化学发光法进行检测，并使用 ImageJ 软件进行图像定量分析。所有实验均重复两次。 Ezurpimtrostat HCl 的无细胞检测方法将涉及测量其对 PPT-1 酶活性的抑制作用。在这些检测中，将重组PPT-1与荧光底物在不同浓度的化合物存在下孵育。测量底物裂解速率，并计算IC50值。具体的检测条件未详细说明。 |
| 细胞实验 |
体外细胞毒性试验[2]
使用 CellTiter-Glo® 发光细胞活力检测试剂盒或 CellTiter 96® 非放射性细胞增殖试剂盒，按照制造商的说明评估细胞活力。简而言之，将 Vero E6（25,000 个细胞/孔）和 Calu-3（12,000 个细胞/孔）细胞系接种于 96 孔组织培养板中，每孔加入 175 µL 适宜的培养基。用 25 µL 不同浓度的待测药物或相应的溶剂对照处理 Vero E6 和 Calu-3 细胞 2 小时，然后以 0.1 的感染复数 (MOI) 感染 50 µL SARS-CoV-2 毒株（IHUMI-6 或 USA-WA1/2020），并分别继续培养 24 小时和 48 小时。处理结束后，向每个孔中加入 CellTiter-Glo 溶液 (IHUMI-6) 或 CellTiter 96® 非放射性溶液 (USA-WA1/2020)。短暂摇晃细胞后，在室温下 (RT) 孵育 10 分钟，以使发光信号稳定，并使用 Infinite F200 Pro 酶标仪记录信号。细胞毒性以抑制细胞增殖 50% 的测试化合物浓度 (CC50) 表示，并使用 Chou 和 Talalay 方法计算。每个实验均进行三次技术重复，并进行了三次独立实验。 免疫荧光检测和分析[2] 对于细胞研究，在感染前一天，将 Vero E6 细胞（500,000 个细胞/孔）培养在含有玻璃盖玻片和 700 µL 培养基的 24 孔板中。随后，将细胞用 100 µL GNS561G（GNS561 的荧光类似物）或载体处理 2 小时，之后再用 SARS-CoV-2 毒株（IHUMI-6，MOI 0.1）感染 48 小时。 细胞和小鼠器官电子显微镜成像[2] 在感染前一天，将 Vero E6 细胞（2,100,000 个细胞）培养于含有 7 mL 培养基的 T75 培养瓶中，并在第二天达到 90% 的汇合度。将培养的细胞用 4 µM GNS561 或载体对照处理 2 小时，之后再用 SARS-CoV-2 毒株（IHUMI-6，MOI 0.1）感染 24 小时。 蛋白质印迹法[2] 感染前一天，将200万个Vero E6细胞接种于含有7 mL培养基的T75培养瓶中，次日细胞汇合度达到90%。培养的细胞用GNS561或载体对照处理2小时，之后用SARS-CoV-2毒株（IHUMI-6，MOI 0.1）感染24小时，并在37℃、5% CO₂和95%空气的加湿培养箱中培养。 Ezurpimtrostat HCl的细胞检测通常包括评估其对自噬和溶酶体功能的影响。用该化合物处理细胞后，检测自噬标志物（例如LC3）和溶酶体积累。该化合物抑制癌细胞增殖的能力也可以进行评估。具体实验方案未详细说明。 |
| 动物实验 |
本研究旨在确定使用ezurpimtrostat联合抗PD-1抗体靶向PPT1的细胞和分子活性。方法：本研究采用转基因免疫活性小鼠肝细胞癌模型。[1]
雌性K18-hACE C57BL/6J小鼠（品系：2B6.Cg-Tg (K18-ACE2)2Prlmn/J，8-9周龄）在CIPHE动物房的通风笼系统中饲养，并符合SOPF要求，饲喂标准饲料。随机分组的雌性小鼠分别接受 50 mg/kg GNS561/ezurpimtrostat（200 µL 灌胃给药）或载体（对照组）处理 24 小时，随后经鼻内接种 1.1 × 10⁵ PFU 的 BetaCoV/France/IDF0372/2020 SARS-CoV-2 毒株（终体积 30 μL），如图 S2 所示。处理 24 小时后，在氯胺酮和赛拉嗪诱导和维持麻醉下进行病毒接种，并尽一切努力减少动物的痛苦。之后，小鼠每日接受 GNS561 化合物或载体处理。小鼠在感染后7天被实施安乐死，并采集肺组织。[2] 在DEN诱导的肝硬化大鼠模型中进行了Ezurpimtrostat HCl的体内动物实验。本研究中，该化合物经口服给药，并评估了其对肝纤维化的影响。结果显示肝纤维化显著减少。这些研究证实了其体内抗纤维化活性。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
盐酸依祖匹莫司他是一种口服活性化合物。现有资料中未提供具体的药代动力学参数，例如半衰期、生物利用度和代谢情况。该化合物拟用于纤维化、癌症和自噬相关疾病的研究。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
现有资料中未提供盐酸依祖匹莫司他（Ezurpimtrostat HCl）的毒性数据。作为一种研究用化合物，其安全性仍在评估中。该化合物仅供研究使用，不得用于人体。
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| 参考文献 |
[1]. Ezurpimtrostat, A Palmitoyl-Protein Thioesterase-1 Inhibitor, Combined with PD-1 Inhibition Provides CD8+ Lymphocyte Repopulation in Hepatocellular Carcinoma. Target Oncol . 2024 Jan;19(1):95-106.
[2]. GNS561 Exhibits Potent Antiviral Activity against SARS-CoV-2 through Autophagy Inhibition. Viruses . 2022 Jan 12;14(1):132. [3]. Substituted 2,4 diamino-quinoline as new medicament for fibrosis, autophagy and cathepsins b (ctsb), l (ctsl) and d (ctsd) related diseases. EP3620164A1. |
| 其他信息 |
自2019年12月以来，SARS-CoV-2病毒在全球迅速蔓延，导致超过2.8亿例确诊病例，其中包括超过500万例死亡病例。值得注意的是，冠状病毒已被发现能够劫持自噬过程进行病毒复制。因此，自噬调节化合物，包括众所周知的氯喹（CQ），已迅速成为对抗SARS-CoV-2感染的一种极具吸引力的策略。本研究探讨了GNS561/Ezurpimtrostat（一种溶酶体自噬晚期小分子抑制剂）的抗病毒活性及其相关机制。有趣的是，GNS561表现出6至40 nM的抗病毒活性，具体数值取决于所研究的病毒株，使其成为目前研究中最有效的抗SARS-CoV-2感染分子之一。我们随后发现，GNS561 与 SARS-CoV-2 共同定位于溶酶体相关膜蛋白 2 (LAMP2 阳性) 溶酶体。此外，GNS561 增大了 LC3-II 斑点的大小，导致自噬空泡的积累和多层体 (MLB) 的出现，表明 GNS561 破坏了自噬机制。为了验证我们的发现，我们使用了 K18-hACE2 小鼠模型，并证实 GNS561 治疗可减少肺部 SARS-CoV-2 病毒颗粒，这与自噬途径的破坏有关。总之，我们的研究表明 GNS561 可有效治疗 SARS-CoV-2 感染，并支持自噬抑制剂可能成为 COVID-19 治疗新策略的假设。 [2]
盐酸依祖匹莫司他（CAS：1914148-73-4）是一种强效的口服PPT-1抑制剂，具有抗纤维化、抗病毒和抗癌作用。它也被称为GNS-561盐酸盐。该化合物通过抑制晚期自噬和增加溶酶体积累来阻断癌细胞增殖。在大鼠模型中，它已显示出减轻肝纤维化的疗效。其分子式为C25H32Cl2N4。 |
| 分子式 |
C25H32CL2N4
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|---|---|
| 分子量 |
459.45
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| 精确质量 |
458.2
|
| 元素分析 |
C, 65.35; H, 7.02; Cl, 15.43; N, 12.19
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| CAS号 |
1914148-73-4
|
| 相关CAS号 |
Ezurpimtrostat;1914148-72-3
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| PubChem CID |
121305179
|
| 外观&性状 |
Off-white to light yellow solid powder
|
| tPSA |
40.2
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
6
|
| 重原子数目 |
31
|
| 分子复杂度/Complexity |
520
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| InChi Key |
DLXMKLHCUTYCGO-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C25H31ClN4.ClH/c1-25(2,3)29-20-12-14-30(15-13-20)23-16-24(28-22-7-5-4-6-21(22)23)27-17-18-8-10-19(26)11-9-18;/h4-11,16,20,29H,12-15,17H2,1-3H3,(H,27,28);1H
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| 化学名 |
4-[4-(tert-butylamino)piperidin-1-yl]-N-[(4-chlorophenyl)methyl]quinolin-2-amine;hydrochloride
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| 别名 |
Ezurpimtrostat hydrochloride; 1914148-73-4; Ezurpimtrostat (hydrochloride); 42P6K4PL76; UNII-42P6K4PL76; 2-((4-Chlorobenzyl)amino)-4-(4-tert-butylaminopiperidin-1-yl)quinoline hydrochloride; 2-Quinolinamine, N-((4-chlorophenyl)methyl)-4-(4-((1,1-dimethylethyl)amino)-1-piperidinyl)-, hydrochloride (1:1); GNS561 (hydrochloride); GNS-561
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~8.33 mg/mL (~18.13 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1765 mL | 10.8826 mL | 21.7652 mL | |
| 5 mM | 0.4353 mL | 2.1765 mL | 4.3530 mL | |
| 10 mM | 0.2177 mL | 1.0883 mL | 2.1765 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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