| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Anti-fibrotic
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| 体外研究 (In Vitro) |
本研究研究了GNS561/Ezurpimtrostat的抗病毒活性及其相关机制,这是一种晚期自噬的小溶酶体性分子抑制剂。有趣的是,根据考虑的病毒株,GNS561表现出6-40 nM的抗病毒活性,目前将其定位为SARS-CoV-2感染中研究的最强大的分子。结果表明,GNS561与SARS-CoV-2一起位于溶酶体相关膜蛋白2阳性(lamp2阳性)溶酶体中。此外,GNS561增加了LC3-II斑点的大小,引起自噬液泡的积累和多层小体的存在,提示GNS561破坏了自噬机制。[2]
GNS561对SARS-CoV-2复制具有较强的抗病毒活性[2] 为了评估GNS561的抗病毒活性,我们使用Vero E6细胞研究了SARS-CoV-2拷贝。首先,针对gns561对Vero E6细胞自噬的特异性影响,我们对LC3-II和p62蛋白水平进行了蛋白表达分析,LC3-II和p62蛋白是两种众所周知的自噬标志物。在不同浓度的药物作用24小时,以及在实验最后4小时添加巴菲霉素A1 (Baf A1)或不添加巴菲霉素A1(一种表征良好的晚期自噬抑制剂)时,评估自噬抑制作用。正常化的LC3-II蛋白表达呈剂量依赖性增加,当Baf A1以最高剂量添加时,LC3-II蛋白表达没有进一步增加(图1A),反映了细胞中自噬体的积累。在p62蛋白水平上进行了同样的观察,表明GNS561在Vero E6细胞系模型中阻滞了晚期的自噬通量。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
研究发现,ezurpimtrostat联合抗程序性死亡-1 (anti-programmed death-1, PD-1)抑制PPT1可诱导淋巴细胞穿透肿瘤,从而降低小鼠肝癌模型的肝脏肿瘤负荷。抑制PPT1通过增加肝癌细胞表面主要组织相容性复合体(MHC)- 1的表达,增强抗pd -1免疫治疗的效果,并通过细胞毒性CD8+淋巴细胞的再定植和激活来调节免疫。
Ezurpimtrostat可以将冷肿瘤转化为热肿瘤,从而可以改善肝癌中T细胞介导的免疫疗法。[1]
研究人员使用了K18-hACE2小鼠模型,并强调GNS561治疗导致肺部SARS-CoV-2病毒粒子的下降,这与自噬途径的破坏有关。总体而言,本研究强调GNS561是治疗SARS-CoV-2感染的有效药物,并支持自噬阻滞剂可能是COVID-19替代策略的假设。[2] 在 DEN 肝脏肿块模型中,ezurpimtrostat 盐酸盐(化合物 2-3)(15 mg/kg/天,PO)持续 6 周可降低胶原纤维沉积水平(减少 41.0%)和肝纤维化面积 [3]。 |
| 酶活实验 |
体外抗病毒活性测定[2]
将Vero E6(25,000个细胞/孔)和Calu-3(12,000个细胞/孔)细胞系用175µL合适的培养基涂于96孔的组织培养板中,并让其粘附至少24小时,直到培养达到90%的融合。Vero E6和Calu-3细胞分别用25µL药物或对照物处理2 h,然后在0.1 MOI下感染SARS-CoV-2,分别孵育24 h或48 h。使用machery - nagel™NucleoSpin™ARN病毒试剂盒对细胞培养上清进行病毒提取。使用先前提取的病毒RNA操作的特定qRT-PCR来评估子代病毒的产量。简单地说,一步qRT-PCR的终体积为25 μL,其中含有10 μL提取的病毒RNA和15 μL的混合物,其中含有针对E基因的探针/引物混合物(表S1)和SuperScriptTM III PlatinumTM一步qRT-PCR试剂盒中的SuperScript主混合物。使用Cobas z 480 PCR系统进行定量PCR检测,并根据制造商的说明使用LightCycler 480 SW 1.5软件分析数据。放大后进行熔化曲线分析,以验证扩增子的准确性。子代病毒产量计算为考虑条件的E基因相对表达量归一化到感染和未处理条件。每个实验均为技术重复,并进行3个独立实验。 Vero E6和Vero E6- tmprss2细胞在含完整培养基的24孔板中镀24 h。在MOI为0.025的条件下,增加GNS561浓度或用载体感染细胞,并与SARS-CoV-2 (hCoV-19_IPL_France株)共孵育16 h。用磷酸盐缓冲盐水(PBS)冲洗细胞,并在非还原性Laemmli加载缓冲液中裂解。然后将蛋白质分离到10% sds -聚丙烯酰胺凝胶上,并转移到硝化纤维素膜上。用兔多克隆抗体(1:1000)和辣根过氧化物酶偶联二抗(1:10 000)检测SARS-CoV-2核衣壳(N)蛋白。采用化学发光法检测,ImageJ软件进行图像定量。实验一式两份进行。 |
| 细胞实验 |
体外细胞毒性试验[2]
根据制造商的说明,使用CellTiter- glo®发光细胞活力测定法或使用CellTiter 96®非放射性细胞增殖试剂盒评估细胞活力。简单地说,将Vero E6(25,000个细胞/孔)和Calu-3(12,000个细胞/孔)细胞系用175µL合适的培养基接种到96孔的组织培养板中。Vero E6和Calu-3细胞分别用25µL增加浓度的受试药物或适当的对照物处理2小时,然后以0.1感染倍数(MOI)感染50µL SARS-CoV-2菌株(IHUMI-6或USA-WA1/2020),分别孵育24和48小时。处理结束时,每孔加入CellTiter- glo溶液(IHUMI-6)或CellTiter 96®非放射性溶液(USA-WA1/2020)。细胞短暂振荡,然后在室温(RT)下孵育10分钟,使发光信号稳定,使用Infinite F200 Pro板读取器记录。细胞毒性以抑制细胞增殖50% (CC50)的化合物浓度表示,并使用Chou和Talalay方法计算。每项实验均为技术重复,并进行3次独立实验。 免疫荧光测定和分析[2] 为了进行细胞研究,在感染前一天,将Vero E6细胞(500,000个细胞/孔)培养在24孔板上,其中包含一个玻璃盖和700µL培养基。然后将细胞用100µL GNS561的荧光类似物GNS561G或载体处理2小时,然后用SARS-CoV-2菌株(IHUMI-6, MOI 0.1)感染48小时。 细胞和小鼠器官电镜成像[2] 感染前一天,在含有7 mL培养基的T75烧瓶中培养Vero E6细胞(210万个细胞),第二天达到90%的融合度。将培养的细胞用4µM GNS561或对照处理2小时,然后用SARS-CoV-2菌株(IHUMI-6, MOI 0.1)再感染24小时。 Western Blot Assay[2] 感染前一天,在含有7 mL培养基的T75烧瓶中培养Vero E6细胞(200万个细胞),第二天达到90%的融合度。培养的细胞用GNS561或载体对照处理2小时,然后用SARS-CoV-2菌株(IHUMI-6, MOI 0.1)感染24小时,在37℃、5% CO2和95%空气存在的加湿培养箱中孵育。 |
| 动物实验 |
本研究旨在确定使用ezurpimtrostat联合抗PD-1抗体靶向PPT1的细胞和分子活性。方法:本研究采用转基因免疫活性小鼠肝细胞癌模型。[1]
雌性K18-hACE C57BL/6J小鼠(品系:2B6.Cg-Tg (K18-ACE2)2Prlmn/J,8-9周龄)在CIPHE动物房的通风笼系统中饲养,并符合SOPF要求,饲喂标准饲料。随机分组的雌性小鼠分别接受 50 mg/kg GNS561/ezurpimtrostat(200 µL 灌胃给药)或载体(对照组)治疗 24 小时,随后经鼻内接种 1.1 × 10⁵ PFU 的 BetaCoV/France/IDF0372/2020 SARS-CoV-2 毒株(最终体积 30 μL),如图 S2 所示。治疗 24 小时后,在氯胺酮和赛拉嗪诱导和维持麻醉下进行病毒接种,并尽一切努力减少动物的痛苦。之后,小鼠每日接受 GNS561 化合物或载体治疗。感染后 7 天,对小鼠实施安乐死,并采集肺组织。[2] |
| 参考文献 |
[1]. Ezurpimtrostat, A Palmitoyl-Protein Thioesterase-1 Inhibitor, Combined with PD-1 Inhibition Provides CD8+ Lymphocyte Repopulation in Hepatocellular Carcinoma. Target Oncol . 2024 Jan;19(1):95-106.
[2]. GNS561 Exhibits Potent Antiviral Activity against SARS-CoV-2 through Autophagy Inhibition. Viruses . 2022 Jan 12;14(1):132. [3]. Substituted 2,4 diamino-quinoline as new medicament for fibrosis, autophagy and cathepsins b (ctsb), l (ctsl) and d (ctsd) related diseases. EP3620164A1. |
| 其他信息 |
自2019年12月以来,SARS-CoV-2病毒迅速蔓延全球,导致超过2.8亿例确诊病例,其中包括超过500万例死亡病例。值得注意的是,冠状病毒被发现能够劫持自噬过程以进行病毒复制。因此,自噬调节化合物迅速成为对抗SARS-CoV-2感染的一种极具吸引力的策略,其中包括众所周知的氯喹(CQ)。本研究探讨了GNS561/Ezurpimtrostat(一种小分子溶酶体趋向性自噬后期抑制剂)的抗病毒活性及其相关机制。有趣的是,GNS561表现出6-40 nM的抗病毒活性,具体数值取决于所研究的病毒株,使其成为目前针对SARS-CoV-2感染研究中最有效的分子。我们随后发现,GNS561 与 SARS-CoV-2 一起定位于溶酶体相关膜蛋白 2 阳性(LAMP2 阳性)溶酶体中。此外,GNS561 增大了 LC3-II 斑点的大小,导致自噬空泡的积累和多层体(MLB)的出现,表明 GNS561 破坏了自噬机制。为了验证我们的发现,我们使用了 K18-hACE2 小鼠模型,并证实 GNS561 治疗导致肺部 SARS-CoV-2 病毒颗粒减少,这与自噬通路的破坏有关。总而言之,我们的研究表明 GNS561 是一种治疗 SARS-CoV-2 感染的有效药物,并支持自噬抑制剂可能成为 COVID-19 治疗新策略的假设。[2]
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| 分子式 |
C25H32CL2N4
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|---|---|
| 分子量 |
459.45
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| 精确质量 |
458.2
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| 元素分析 |
C, 65.35; H, 7.02; Cl, 15.43; N, 12.19
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| CAS号 |
1914148-73-4
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| 相关CAS号 |
Ezurpimtrostat;1914148-72-3
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| PubChem CID |
121305179
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| 外观&性状 |
Off-white to light yellow solid powder
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| tPSA |
40.2
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
3
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
4
|
| 可旋转键数目(RBC) |
6
|
| 重原子数目 |
31
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| 分子复杂度/Complexity |
520
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| InChi Key |
DLXMKLHCUTYCGO-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C25H31ClN4.ClH/c1-25(2,3)29-20-12-14-30(15-13-20)23-16-24(28-22-7-5-4-6-21(22)23)27-17-18-8-10-19(26)11-9-18;/h4-11,16,20,29H,12-15,17H2,1-3H3,(H,27,28);1H
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| 化学名 |
4-[4-(tert-butylamino)piperidin-1-yl]-N-[(4-chlorophenyl)methyl]quinolin-2-amine;hydrochloride
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| 别名 |
Ezurpimtrostat hydrochloride; 1914148-73-4; Ezurpimtrostat (hydrochloride); 42P6K4PL76; UNII-42P6K4PL76; 2-((4-Chlorobenzyl)amino)-4-(4-tert-butylaminopiperidin-1-yl)quinoline hydrochloride; 2-Quinolinamine, N-((4-chlorophenyl)methyl)-4-(4-((1,1-dimethylethyl)amino)-1-piperidinyl)-, hydrochloride (1:1); GNS561 (hydrochloride); GNS-561
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~8.33 mg/mL (~18.13 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 :Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案: 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1765 mL | 10.8826 mL | 21.7652 mL | |
| 5 mM | 0.4353 mL | 2.1765 mL | 4.3530 mL | |
| 10 mM | 0.2177 mL | 1.0883 mL | 2.1765 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。