FM-1-43

别名: FM1-43; 149838-22-2; Fm1 43; NerveGreen C1; N-(3-(triethylammonium)propyl)-4-(4-(dibutylamino)styryl)pyridinium; UNII-83IGZ86I9D; FM 1-43; 83IGZ86I9D; N-(3-三乙基铵丙基)-4-(4-(二丁基氨基)苯乙烯基)吡啶二溴盐;膜电位荧光探针MM 1-43
目录号: V49456 纯度: ≥98%
FM1-43是一种高亲脂性水溶性(H2O-可溶)苯乙烯染料,可以特异性结合细胞膜和内膜细胞器产生荧光。
FM-1-43 CAS号: 149838-22-2
产品类别: New3
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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产品描述
FM1-43是一种高亲脂性水溶性(H2O-可溶)苯乙烯染料,可以特异性结合细胞膜和内膜细胞器产生荧光。 FM1-43 广泛用于标记内吞和外泌体膜结构。
生物活性&实验参考方法
靶点
Fluorescent dye for binding to and staining of cell membranes
体外研究 (In Vitro)
1. FM工作溶液的制备
1.1 储备液的制备
用DMSO制备5mM储备液
1.2 工作溶液的制备
使用预热的HBSS溶液制备5-20μM FM1-43工作溶液
注意:请根据您的具体需要调整FM1-43工作溶液的浓度,并现配现用(使用新制备的溶液)
2. 细胞染色(悬浮细胞)
2.1 离心收集细胞,用PBS洗涤两次,每次5分钟。细胞密度为1×10~6/mL
2.2 加入1 mL FM工作溶液,在室温下孵育5-30分钟
2.3 在400g下离心3-4分钟,丢弃上清液
2.4 用PBS洗涤细胞两次,每次5分钟
将细胞重新悬浮在1 mL无血清培养基或PBS中后,使用荧光显微镜或流式细胞仪进行观察
3. 细胞染色(贴壁细胞)
3.1 在无菌盖玻片上培养贴壁细胞
3.2 从培养基上取下盖玻片,吸出多余的培养基
3.3 加入100μL染料工作液,轻轻摇晃至完全覆盖细胞,孵育5-30分钟
3.4 吸出染料工作液,用培养基洗涤2-3次,每次5分钟,用荧光显微镜或流式细胞仪观察。
细胞实验
小鼠耳蜗培养物中的毛细胞通过短暂接触FM1-43进行选择性标记,FM1-43是一种用于研究内吞作用和外排作用的苯乙烯染料。实时共聚焦显微镜显示,染料通过根尖表面快速进入。冷却到4摄氏度和高细胞外钙都会减少染料负载。用EGTA进行预处理,这种情况会破坏尖端连接并防止机械传感器通道门控,从而消除了钙存在下的后续染料负载。钙螯合后,染料负载恢复,其时间过程与尖端连接再生相似。Myo7a突变毛细胞可以转导,但在静止时所有机械转导通道通常都是关闭的,除非受到大的兴奋性刺激,否则它们不会标记FM1-43。FM1-43的细胞外灌注以低微摩尔范围内的半阻断浓度可逆地阻断机械传导。该阻断被高细胞外钙减少,并且是电压依赖性的,在极端的正负电位下减少,表明FM1-43表现为机械转导通道的渗透性阻断剂。电压阶跃到极端电位后块释放的时间过程进一步表明,FM1-43与其他阳离子竞争通道孔内的结合位点。当FM1-43在细胞外应用时,其浓度不会从细胞内侧阻断换能器通道,从而导致完全阻断。钙螯合和FM1-43都能降低氨基糖苷类抗生素硫酸新霉素的耳毒性作用,表明FM1-43和氨基糖苷类药物通过相同的途径进入毛细胞[1]。
参考文献

[1]. FM1-43 dye behaves as a permeant blocker of the hair-cell mechanotransducer channel. J Neurosci. 2001 Sep 15;21(18):7013-25.

其他信息
FM 1-43 染料是一种有机溴化物盐、季铵盐、叔胺和吡啶盐。它是一种荧光染料,含有 FM 1-43(2+) 离子。
荧光染料:指在光激发后能发光的化学物质。发射光的波长通常比入射光的波长长。荧光染料是指能使其他物质产生荧光的物质,例如,用于标记其他化合物的荧光染料。
FM1-43 染料的加载特性与氨基糖苷类抗生素在小鼠耳蜗培养物中的积累或毒性机制之间存在许多显著的相似之处。在低温 (4°C) 下,[3H]-庆大霉素在耳蜗毛细胞中的积累以及新霉素的形态学效应显著降低,并且在 Myo7a 突变体中消失(Richardson 等,1997)。新霉素的形态学效应也迅速显现。细胞外钙离子浓度升高可阻断这些效应(Richardson和Russell,1991),并且如本研究所示,钙螯合剂预处理可以预防这些效应。此外,在耳蜗培养物中也观察到了从耳蜗底部到顶部对新霉素敏感性的梯度变化,类似于FM1-43染料加载所观察到的梯度变化(Richardson和Russell,1991)。最后,FM1-43能够降低新霉素的耳毒性作用,表明这两种化合物竞争相同的进入机制。这些观察结果,结合上述证据,提示FM1-43和氨基糖苷类抗生素可能都通过转导通道进入毛细胞。后一种可能性此前已有研究提出(Kroese等,1989)。研究发现,FM1-43在细胞内浓度下不会阻断细胞外通道,而从细胞内浓度下却能强烈阻断细胞外通道,这表明FM1-43优先单向通过。如果氨基糖苷类抗生素也具有同样的特性,就能解释为什么FM1-43和氨基糖苷类抗生素都会在毛细胞中积累,并且在暴露后无法释放。已知不同类型毛细胞对氨基糖苷类抗生素的敏感性差异,也可能与静息状态下通道开放概率的差异有关。哺乳动物耳蜗的基底螺旋外毛细胞对氨基糖苷类抗生素的损伤最为敏感(Hawkins,1976),并且有证据表明,在体内,这些细胞的毛束在静息状态下保持着50%的通道开放,而不是通常的5-10%(Russell和Kössl,1992)。总之,本研究结果提供了强有力的证据,表明 FM1-43 通过机械转导通道进入哺乳动物耳蜗感觉毛细胞的顶端,并提示耳毒性氨基糖苷类抗生素可能具有相同的进入途径。[1]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C30H49N3+2.2[BR-]
分子量
611.53816
精确质量
609.229
元素分析
C, 58.92; H, 8.08; Br, 26.13; N, 6.87
CAS号
149838-22-2
PubChem CID
6508724
外观&性状
Orange to red solid powder
LogP
0.825
tPSA
7.12
氢键供体(HBD)数目
0
氢键受体(HBA)数目
3
可旋转键数目(RBC)
16
重原子数目
35
分子复杂度/Complexity
480
定义原子立体中心数目
0
SMILES
CCCCN(CCCC)C1=CC=C(C=C1)/C=C/C2=CC=[N+](C=C2)CCC[N+](CC)(CC)CC.[Br-].[Br-]
InChi Key
VZUVCAGXYLMFEC-UHFFFAOYSA-L
InChi Code
InChI=1S/C30H49N3.2BrH/c1-6-11-23-32(24-12-7-2)30-18-16-28(17-19-30)14-15-29-20-25-31(26-21-29)22-13-27-33(8-3,9-4)10-5;;/h14-21,25-26H,6-13,22-24,27H2,1-5H3;2*1H/q+2;;/p-2
化学名
3-[4-[(E)-2-[4-(dibutylamino)phenyl]ethenyl]pyridin-1-ium-1-yl]propyl-triethylazanium;dibromide
别名
FM1-43; 149838-22-2; Fm1 43; NerveGreen C1; N-(3-(triethylammonium)propyl)-4-(4-(dibutylamino)styryl)pyridinium; UNII-83IGZ86I9D; FM 1-43; 83IGZ86I9D;
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气保护),避免吸湿/受潮和光照。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~50 mg/mL (~81.76 mM)
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.6352 mL 8.1761 mL 16.3522 mL
5 mM 0.3270 mL 1.6352 mL 3.2704 mL
10 mM 0.1635 mL 0.8176 mL 1.6352 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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