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Fura-2 AM

别名: 108964-32-5; FURA 2-AM; Fura-2 AM; Bis(acetoxymethyl) 2,2'-((2-(5-((acetoxymethoxy)carbonyl)oxazol-2-yl)-5-(2-(2-(bis(2-(acetoxymethoxy)-2-oxoethyl)amino)-5-methylphenoxy)ethoxy)benzofuran-6-yl)azanediyl)diacetate; Fura-2, AM; MFCD00036976; acetyloxymethyl 2-[6-[bis[2-(acetyloxymethoxy)-2-oxoethyl]amino]-5-[2-[2-[bis[2-(acetyloxymethoxy)-2-oxoethyl]amino]-5-methylphenoxy]ethoxy]-1-benzofuran-2-yl]-1,3-oxazole-5-carboxylate; (acetyloxy)methyl 2-({2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl}[2-(5-{[(acetyloxy)methoxy]carbonyl}-1,3-oxazol-2-yl)-5-(2-{2-[bis({2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl})amino]-5-methylphenoxy}ethoxy)-1-benzofuran-6-yl]amino)acetate; 荧光钙探针 Fura 2-AM;钙离子荧光探针 Fura 2-AM;AM荧光探针;钙离子荧光探针;钙荧光探针FURA-2, AM;FURA-2/AM荧光探针
目录号: V33943 纯度: ≥98%
COA 产品数据 产品说明书 SDS
Fura-2 AM 是一种高亲和力、细胞内、紫外线可激发、紫外线比率荧光 Ca2+ 指示剂。
Fura-2 AM CAS号: 108964-32-5
产品类别: New2
产品仅用于科学研究，不针对患者销售
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  • 产品被大量CNS顶刊文章引用
InvivoChem产品被CNS等顶刊论文引用
产品描述
Fura-2 AM 是一种高亲和力、细胞内、紫外线可激发、紫外线比率荧光 Ca2+ 指示剂。
生物活性&实验参考方法
靶点
Fluorescent calcium ion (Ca2+ ) indicator
体外研究 (In Vitro)
推荐使用方案(以下是我们推荐的方案。本方案只是一个建议使用指南，应根据您的具体需求进行修改)。[1]
Fura-2 AM扩散穿过细胞膜，被细胞酯酶去酯化，生成游离Fura-2酸。
1. 首先，在含有50 μg样品的小瓶中加入50 μL的DMSO制备1 mM Fura-2 AM储备液。建议使用干燥/无水的DMSO/二甲基亚砜（在氮气下保护）。准备好fura - 2am溶液后，将其保存在避光/干燥的地方。DMSO中的fura - 2am在室温下稳定24小时，在-20度的干燥容器中稳定数月。
2. 取2ml培养基放入15ml锥形管中，加热至37℃，加入2 μL fura - 2am储备液，生成1μM fura - 2am工作液。将溶液涡旋1分钟。
3. 将上样液转移到35mm的组织培养皿中，将带细胞的盖子转移到培养皿中。
4. 将神经元在37度的黑暗培养箱中培养30分钟。孵化时间要精确。
5. 准备一个35毫米的培养皿，含有2ml不含fura - 2am的组织培养基。从加载液上取下盖子，并将其放入新的培养皿中。
6. 将盖子安装在成像室上。
酶活实验
Imaging Protocol [1]
1. 校正显微镜。
2. 将Tyrodes溶液装入输入线路，注意防止气泡的形成。
3. 将腔室与灌注管线连接，再次通过腔室灌注Tyrodes溶液，注意防止腔室内形成气泡。
4. 在物镜上滴一滴油，将腔室放在显微镜台上，用透射光聚焦细胞。
5. 使用目镜在340 nm和380 nm的光照下检查细胞的荧光。静息细胞的亮度应该在340度时变暗，在380度时变亮。一般来说，细胞不应用紫外线照射超过10或15秒，并且应使用中性密度滤光片降低激发光的强度，以防止光毒性。
6. 使用相机检查细胞，并设置相机的增益和曝光，以生成在380 nm照射时接近饱和(但不饱和)的图像，而在340 nm照射时远低于饱和。如果可能，将曝光量保持在200ms以下。一旦设置，不要改变相机的增益或曝光，除非你也打算改变背景，RMin和RMax(见下文)。
7. 收集每个波长的图像，并使用感兴趣区域(ROI)工具测量每个波长图像中各种位置的背景强度。
8. 取背景值平均值，并将背景值输入成像程序中的适当位置。背景值将从字段中的每个像素中减去。
9. 收集一个练习比率图像，并调整每个波长的阈值，以生成仅包括细胞而不包括背景的比率图像，并且在靠近细胞边缘的区域中没有噪声。
10. 将最小比率值(RMin)设置为比字段中任何单元格的最低比率低10%左右。
11. 将RMax设置为RMin的12倍左右。不要更改您计划比较的实验之间的RMin或RMax，因为这会使比较变得困难。我们很少改变成像设备上的RMin和Rmax值。
12. 使用自动阶段找到您计划成像的字段，并使用软件记录每个字段的位置。我们通常在一次实验中收集五个视场。自动舞台移动到一个领域，收集比例图像，并移动到下一个领域。
13. 设置延时间隔，根据您希望看到的信号类型，间隔0.1到10秒收集图像。
14. 开始实验。
15. 当测试钙成像系统时，通常使用刺激是有用的，如高钾钾(65 mM KCl)或离子霉素(2µM)，会导致细胞内钙升高和无钙的细胞外溶液(含有钙缓冲液，如EGTA和BAPTA)，会降低钙浓度。
Analysis/分析[1]
一旦实验完成，您将需要将比率图像集转换为单个细胞或细胞内感兴趣区域的延时钙测量值。[1]
1. 使用感兴趣区域工具(ROI)来定义要测量钙的图像区域。通常有至少一个覆盖单元体的ROI是有用的。在定义roi时，播放图像的电影以验证细胞在实验过程中不移动是有用的。
2. 使用该软件收集每个图像中每个ROI的延时比测量值。
3. 将比率测量值导入分析程序。您需要查看特定细胞或roi的钙痕迹，平均多个细胞或roi并将比率测量值转换为细胞内钙值。我们使用Igor Pro编写的一组宏，它允许我们执行所有这些常见的分析任务，但也可以使用其他程序，如Excel，尽管不太方便。
4. 公式[Ca] = (R-Rmin)/(Rmax-R)Sf*Kd可用于将Fura-2比值值转换为细胞内钙浓度。[Ca]为钙浓度，R为Fura-2 340/380比值，RMin和RMax分别为无钙和有饱和钙浓度时的340/380比值;Sf*Kd为Fura-2的Kd (RT下约120 nM)与标度值的乘积。为了测量RMin, RMax和Sf*Kd，需要进行体内或体外校准。体内校准需要结合贴片夹紧和钙成像，这可能很复杂，但也非常精确。体外校准可以使用自制的校准室进行，该校准室由两个由薄盖盖间隔器分隔的盖盖组成，以产生执行校准的薄层溶液。测量Fura-2比率值作为钙浓度函数的最方便方法是使用含有多种缓冲钙溶液和Fura-2游离酸的校准试剂盒。
细胞实验
Loading of Fura-2 calcium dye/Fura-2钙染料的负载[1]
研究人员可在细胞中加入乙酰氧基甲基酯Fura-2 (Fura-2 AM)，这种物质扩散到细胞膜上，并被细胞酯酶去酯化，产生游离Fura-2酸。Fura-2装载的确切参数因细胞类型而异。我们建议通过制备几种含有多种浓度Fura-2(浓度范围为1- 4µM)的加载溶液来测试各种条件，将细胞在加载溶液中孵育15分钟至2小时，并在室温和37度下测试加载。皮层神经元的简化方案如下:
1. 首先，将50µl DMSO加入到含有50µg样品的小瓶中，制备1 mM Fura-2 AM储备液。重要的是要使用干燥的二甲基亚砜在氮气下包装，必须用针通过穿刺隔膜去除二甲基亚砜，以防止二甲基亚砜的吸水。准备好fura - 2am储备液后，将其保存在黑暗干燥的地方。DMSO中的fura - 2am在室温下可稳定24小时，在- 20度的干燥容器中可稳定数月。
2. 将2 ml培养基放入15 ml锥形管中，加热至37度，加入2µl Fura-2 AM原液，生成1µM Fura-2 AM溶液。将溶液强力涡旋1分钟。
3. 将上样液转移到35mm的组织培养皿中，并将带有细胞的盖子转移到培养皿中。
4. 将神经元在37度的黑暗培养箱中培养30分钟。精确的孵育时间。
5. 准备一个35毫米的培养皿，含有2毫升不含Fura-2 AM的组织培养基。从上料液上取下盖子，放入新皿中。
6. 将盖子安装在成像室上。从35mm培养皿上取下盖子，迅速安装到培养室上，确保细胞不会干燥。我们使用华纳仪器制造的成像室，它允许将包含细胞的10mm盖盖安装在底部，并将第二个盖盖安装在顶部形成三明治。两个盖盖用真空油脂固定在腔室上，腔室两端的两个管允许溶液通过腔室灌注。所述输入线连接到注射器，所述输出线连接到井，所述井通过连接到真空疏水阀的抽吸线排空。
参考文献

[1]. Calcium imaging of cortical neurons using Fura-2 AM. J Vis Exp. 2009 Jan 19;(23):1067.
其他信息
钙成像是一种常用的技术，可用于测量培养细胞中的钙信号。钙成像技术利用钙指示剂染料，这些染料是基于BAPTA的有机分子，其光谱特性会随Ca²⁺离子的结合而改变。钙指示剂染料分为两类：比率型染料（如Fura-2和Indo-1）和单波长染料（如Fluo-4）。比率型染料会随钙离子的结合而改变其激发光谱或发射光谱，从而可以通过不同波长下荧光发射或激发的比值来确定细胞内钙离子的浓度。与单波长探针相比，使用比率型染料的主要优势在于，其比值信号与染料浓度、光照强度和光程无关，因此可以避免这些因素的影响，从而独立于这些因素来确定细胞内钙离子的浓度。Fura-2是最常用的钙指示剂之一，其发射峰位于505 nm，并随钙离子的结合而从340 nm变为380 nm。本文描述了利用Fura-2测量神经元和其他可兴奋细胞内钙离子浓度升高的方法。[1]我们首次展示了一种快速波长可切换的340/380 nm发光二极管（LED）照明器，用于Fura-2比率式Ca2+成像活细胞。该LED的激发波长与结合态和游离态Fura-2的激发峰高度匹配，能够精确检测胞质Ca2+浓度，其精度仅受限于Fura-2的Ca2+响应。利用该照明器，我们已证明，浓度低至 250 nM 的 Fura-2 乙酰氧基甲酯 (AM) 可用于检测 tsA-201 细胞中诱导的 Ca2+ 事件。此外，利用 150 μs 的切换速度，我们能够以 24.39 Hz 的速率对海马神经元中的自发性 Ca2+ 瞬变进行成像，而这些瞬变在典型的 0.5 Hz 采集速率下会被抑制或消失。总而言之，与现有系统相比，使用该 LED 照明器所获得的灵敏度和采集速度显著提高了时间分辨率，并支持使用 Fura-2 对快速 Ca2+ 事件进行光学成像。[2]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C44H47N3O24
分子量
1001.85
精确质量
1001.254
CAS号
108964-32-5
PubChem CID
3364574
外观&性状
Light yellow to green yellow liquid
密度
1.4±0.1 g/cm3
沸点
975.9±75.0 °C at 760 mmHg
闪点
544.0±37.1 °C
蒸汽压
0.0±0.3 mmHg at 25°C
折射率
1.567
LogP
2.9
tPSA
327.11
氢键供体(HBD)数目
0
氢键受体(HBA)数目
27
可旋转键数目(RBC)
37
重原子数目
71
分子复杂度/Complexity
1780
定义原子立体中心数目
0
SMILES
O=C(C1=CN=C(C2=CC3=CC(OCCOC4=CC(C)=CC=C4N(CC(OCOC(C)=O)=O)CC(OCOC(C)=O)=O)=C(N(CC(OCOC(C)=O)=O)CC(OCOC(C)=O)=O)C=C3O2)O1)OCOC(C)=O
InChi Key
VPSRLGDRGCKUTK-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C44H47N3O24/c1-25-7-8-32(46(16-39(53)65-20-60-26(2)48)17-40(54)66-21-61-27(3)49)35(11-25)58-9-10-59-36-12-31-13-37(43-45-15-38(71-43)44(57)69-24-64-30(6)52)70-34(31)14-33(36)47(18-41(55)67-22-62-28(4)50)19-42(56)68-23-63-29(5)51/h7-8,11-15H,9-10,16-24H2,1-6H3
化学名
acetyloxymethyl 2-[6-[bis[2-(acetyloxymethoxy)-2-oxoethyl]amino]-5-[2-[2-[bis[2-(acetyloxymethoxy)-2-oxoethyl]amino]-5-methylphenoxy]ethoxy]-1-benzofuran-2-yl]-1,3-oxazole-5-carboxylate
别名
108964-32-5; FURA 2-AM; Fura-2 AM; Bis(acetoxymethyl) 2,2'-((2-(5-((acetoxymethoxy)carbonyl)oxazol-2-yl)-5-(2-(2-(bis(2-(acetoxymethoxy)-2-oxoethyl)amino)-5-methylphenoxy)ethoxy)benzofuran-6-yl)azanediyl)diacetate; Fura-2, AM; MFCD00036976; acetyloxymethyl 2-[6-[bis[2-(acetyloxymethoxy)-2-oxoethyl]amino]-5-[2-[2-[bis[2-(acetyloxymethoxy)-2-oxoethyl]amino]-5-methylphenoxy]ethoxy]-1-benzofuran-2-yl]-1,3-oxazole-5-carboxylate; (acetyloxy)methyl 2-({2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl}[2-(5-{[(acetyloxy)methoxy]carbonyl}-1,3-oxazol-2-yl)-5-(2-{2-[bis({2-[(acetyloxy)methoxy]-2-oxoethyl})amino]-5-methylphenoxy}ethoxy)-1-benzofuran-6-yl]amino)acetate;
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： (1). 本产品在运输和储存过程中需避光。  (2). 该产品在溶液状态不稳定，请现配现用。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。
请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 0.9982 mL 4.9908 mL 9.9815 mL
5 mM 0.1996 mL 0.9982 mL 1.9963 mL
10 mM 0.0998 mL 0.4991 mL 0.9982 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;

4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。

计算器
计算 重置

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度，具体如下：

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示：
假如化合物的分子量为350.26 g/mol，在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少？
  • 在分子量（MW）框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在“体积”框中输入5，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式，您可以计算体积和浓度。
计算 重置

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如，可以输入C1、C2和V2来计算V1，具体如下：

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液？
使用方程式C1V1=C2V2，其中C1=10mM，C2=25μM，V2=25 ml，V1未知：
  • 在C1框中输入10，然后选择正确的单位（mM）
  • 在C2框中输入25，然后选择正确的单位（μM）
  • 在V2框中输入25，然后选择正确的单位（mL）
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL（0.1 ml）出现在V1框中
g/mol
计算 重置

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成，具体如下：

注：化学分子式大小写敏感：C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量（分子量）的说明：
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量)，请输入化学/分子式，然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义：
  • 分子质量（或分子量）是一种物质的一个分子的质量，用统一的原子质量单位（u）表示。（1u等于碳-12中一个原子质量的1/12）
  • 摩尔质量（摩尔重量）是一摩尔物质的质量，以g/mol表示。
/
计算 重置

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器（澄清溶液）
第一步：请输入基本实验信息（考虑到实验过程中的损耗，建议多配一只动物的药量）
第二步：请输入动物体内配方组成（配方适用于不溶/难溶于水的化合物），不同的产品和批次配方组成不同，如对配方有疑问，可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外，请注意这只是一个配方计算器，而不是特定产品的确切配方。
+
+
+
计算 重置

计算结果:

工作液浓度： mg/mL；

DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。

体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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