| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Natural diterpenoid/fungal pytotoxin; 14-3-3 PPI/protein-protein interactions
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| 体外研究 (In Vitro) |
Fusicoccin A 可以通过稳定 14-3-3 和应激反应调节剂 GCN1 之间的复合物来诱导 GCN1 更新和神经突发育 (EC50=29 mM) [3]。由于梭菌素 A 稳定质膜 H+-ATP 酶与 14-3-3 蛋白的相互作用，感染梭菌素 A 的植物会出现枯萎和失水。 Fusicoccin A 可在体外抑制人 GBM 细胞系迁移和增殖，包括许多对促凋亡刺激表现出不同程度抵抗力的细胞系。 Fusicoccin A 在 Hs683 神经胶质瘤细胞中的 IC50 生长抑制浓度为 83 µM，而在 U373-MG 细胞中为 92 µM [4]。
fusicoccin A是杏仁核镰刀菌的一种真菌代谢产物，在体外降低了人GBM细胞系的增殖和迁移，包括几种对促凋亡刺激表现出不同程度抗性的细胞系。数据表明，梭形球蛋白A通过降低生长速率和增加细胞分裂持续时间来抑制GBM细胞增殖，并减少二维（通过定量视频显微镜测量）和三维（通过Boyden室测定）迁移。梭球蛋白A治疗的这些影响转化为肌动蛋白细胞骨架组织的结构变化和GBM细胞粘附的丧失。因此，梭形球蛋白A具有细胞生长抑制作用，但细胞毒性作用较低（如流式细胞术所示）。这些细胞生长抑制作用可以部分解释为梭形球菌素抑制了十几种激酶的活性，包括与细胞增殖和迁移有关的粘着斑激酶（FAK）。FAK是一种非受体蛋白酪氨酸激酶，其过表达与侵袭性人脑胶质瘤的侵袭表型直接相关，因为FAK促进细胞增殖和迁移。Fusicoccin A导致FAK酪氨酸磷酸化下调，这在常氧和缺氧的GBM细胞培养条件下都发生了。总之，目前的研究确定了一种新的化合物，可以用作产生旨在对抗GBM的细胞生长抑制化合物的化学模板[4]。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
单次应用Fusicoccin-A（FC-A）可减少背半横断脊髓损伤后皮质脊髓轴突的回缩[3]
受损的中枢神经系统的特征是存在生长抑制剂，包括由反应性胶质细胞产生的硫酸软骨素蛋白多糖（CSPG）fusicoccin-A（FC-A）显著改善了聚集蛋白聚糖底物上的神经突起生长，表明它可能有效改善体内损伤后的生长（图S6）。因此，我们试图确定fusicoccin-A (FC-A)是否可以改善脊髓背侧半横断损伤后的轴突生长，脊髓损伤横穿整个皮质脊髓束（CST）。小鼠立即在损伤部位局部应用快速聚合的纤维蛋白凝胶中的FC-A。然后通过将生物素化葡聚糖胺（BDA）注射到运动皮层中顺行追踪CST轴突，并在第21天对小鼠进行分析（图7A）。在两个独立的队列中，对实验条件进行了盲法手术和分析。与用含纤维蛋白凝胶的载体治疗的对照组小鼠相比，接受FC-a单一治疗的小鼠远离损伤部位的轴突死亡显著减少。虽然对照组小鼠的切割轴突平均收缩了约72μm的距离，但FC-A治疗的小鼠的端球位于病变内或靠近病变（图7B和7C）。这些结果表明，短暂暴露于FC-A足以减少体内切断轴突的塌陷和收缩。[3] Fusicoccin-A (FC-A)刺激视神经再生[3] 接下来，我们使用视神经挤压（ONC）模型和玻璃体内注射，确定Fusicoccin-A（FC-A）是否可以刺激CNS轴突再生，使其在较长的治疗暴露下通过病变。为了可视化玻璃体内注射后fusicoccin-A (FC-A)的分布，我们生成了Alexa 488 FC-A缀合物。注射后1天，488-FC-A在视网膜神经节细胞层中富集，表明它很容易被视网膜神经节细胞（RGCs）吸收（图S7A）。我们还通过蛋白质印迹检测了视网膜GCN1的表达，作为活性的读数。GCN1在注射后1天没有变化，但在注射后3天显著下调。有趣的是，注射后7天，GCN1水平仍然受到抑制，表明其具有持续作用（图S7B和S7C）。接下来，我们确定了FC-A是否可以诱导ONC后的轴突再生。小鼠接受1次或2次FC-A玻璃体内注射（图8A）。霍乱毒素β（CTβ）用于追踪RGC轴突，GAP43染色用于观察和定量活跃生长的纤维。手术和分析是在不知情的情况下进行的。单次注射FC-a的治疗不足以刺激轴突再生；然而，与对照组动物相比，第7天的第二次注射在距离病变100、200和500μm处产生了显著的再生（图8B和8C）。几乎所有CTβ+轴突也是GAP43+，表明轴突处于生长状态（图8D）。我们还使用Brn3a作为标记评估了视网膜中的RGC密度。正如预期的那样，ONC导致了RGCs的大量损失（约70%的RGCs损失）。有趣的是，FC-A并没有提高RGC的存活率，这表明FC-A刺激轴突再生独立于细胞存活（图8E和8F）。这些发现表明，FC-A的治疗性给药可以刺激中枢神经系统损伤后的轴突再生，并为一类新的小分子打开大门，这些小分子可以进一步优化以修复中枢神经系统的损伤。 |
| 酶活实验 |
激酶活性测定[4]
研究人员最初为ProQinase提供了梭形球菌素A作为100%DMSO的储备溶液，在使用前，等分试样在96孔微升平板中用水进一步稀释。如前所述，使用放射性蛋白激酶测定法（33PanQinase活性测定法）测量288种重组蛋白激酶的激酶活性。在每个激酶测定中，对Fusicoccin A进行了两次重复测试，测试的最终浓度为50µM。 |
| 细胞实验 |
细胞生长抑制试验[4]
如前所述，使用比色法3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基溴化四唑（MTT）存活率测定来确定每个细胞系的总体生长速率。在fusicoccin-A (FC-A)、3′-O-脱乙酰基fusicoccin-A (FC-A)或19-O-脱乙酸基fusicoccin-A (FC-A)存在下培养72小时后，测定活细胞的数量。还对小鼠星形胶质细胞进行了fusicoccin-A (FC-A)的测试。每种实验条件都进行了三次。[4] 为了研究fusicoccin A诱导的胶质瘤细胞生长抑制作用是否不可逆，U373-MG和Hs683细胞用100µM fusicoccin-A (FC-A)处理，并在处理后3、24和48小时进行洗涤。在从培养基中去除fusicoccin-A (FC-A)72小时后测定活细胞的数量。每种实验条件都进行了六次重复。[4] 体外细胞死亡的测定[4] 为了评估用fusicoccin-A (FC-A)处理的U373-MG细胞的存活率，使用了一种测量DNA断裂的方法。根据之前描述的程序，使用APO Direct试剂盒进行末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记（TUNEL）测定。该方案按照制造商的说明进行，包括使用阳性和阴性对照。简而言之，U373-MG GBM细胞在培养基中用100µMfusicoccin-A (FC-A)处理24或72小时，或不进行处理。收集粘附和非粘附细胞，在4°C下用1%多聚甲醛固定（1小时），渗透，并在-20°C下储存在70%乙醇中。在37°C下进行1小时的TUNEL标记，并在CellLab Quanta SC流式细胞仪上分析染色细胞。[4] 肌动蛋白细胞骨架组织分析[4] 如前所述，在玻璃盖玻片上不存在（对照组）或存在100µMfusicoccin-A (FC-A)的情况下，将U373-MG细胞培养30小时。与Alexa Fluor 488荧光染料结合的荧光鬼笔环肽用于标记原纤维肌动蛋白，Alexa Fluor 594结合的DNA酶I用于染色球状肌动蛋白。盖玻片安装在含有10µl Moviol试剂的显微镜载玻片上。分析每种实验条件下的三张盖玻片，并使用AxioCamHRm荧光显微镜为每张盖玻片拍摄三张照片（曝光时间相同）。[4] 波登室试验[4] 使用Boyden transwell侵袭系统评估了用50和100µM fusicoccin A体外处理24小时的U373-MG细胞的侵袭特征，详见其他地方。同时，将相同数量的U373-MG细胞接种在涂有Matrigel的24孔板中，我们用0（对照）、50或100µM fusicoccin-A (FC-A)处理细胞24小时。校正侵袭细胞的数量，确定每种情况下活细胞的数量。每个实验进行三次。[4] 体外粘附试验[4] 粘附试验如前所述[31]进行，但有修改。简而言之，24孔板中的玻璃盖玻片在37°C下用Matrigel（在含有10%FCS的RPMI培养基中稀释1:3）预涂1小时。洗涤孔，然后用磷酸缓冲盐水中的0.1%BSA阻断非特异性结合30分钟。U373-MG细胞（每孔20000个细胞）在37°C下，在0（对照）、50或100µM fusicoccin-A (FC-A)的存在下粘附24小时，之后用温热的磷酸盐缓冲盐水轻轻冲洗掉不粘附的细胞。将粘附细胞用甲醇固定，苏木精染色，并使用奥林巴斯显微镜在G x 10放大倍数下以每孔10个视野进行计数。每种实验条件都进行了三次。 |
| 动物实验 |
脊髓背侧半切损伤[3]
成年雌性C57BL/6小鼠（8-10周龄）经氯胺酮：赛拉嗪：醋丙嗪（50:5:1 mg/kg）深度麻醉后，行椎板切除术暴露T9胸段脊髓。使用弹簧显微剪切断中央管，进行脊髓背侧半切。将200 μg溶于1:3乙醇：PBS混合液中的fusicoccin-A (FC-A)用凝血酶溶液稀释至25 μL，快速与25 μL纤维蛋白原溶液混合，立即直接涂抹于损伤部位，形成粘稠凝胶。凝血酶和纤维蛋白原溶液购自试剂盒（Evicel纤维蛋白密封剂）。小鼠双侧感觉运动皮层注射0.2 μL 10%生物素化葡聚糖胺（BDA），注射采用玻璃微量注射器。第21天，小鼠经心脏灌注4%多聚甲醛（PFA），脊髓置于30%蔗糖溶液中进行低温保护。将25 μm厚的纵切片收集于载玻片上，先用0.6%过氧化氢孵育3小时，再与链霉亲和素复合物（Vector Laboratories）孵育过夜。切片用二氨基联苯胺显色以显示链霉亲和素-生物素-葡聚糖胺复合物，并用甲基绿复染。根据甲基绿染色确定瘢痕边界，并通过测量并平均距损伤边缘最近的5个轴突末端球之间的距离，在不知晓实验条件的情况下评估轴突回缩距离。损伤不完全的动物被排除在研究之外。样本量参考了既往脊髓损伤研究（Liu et al., 2010）。所有手术均采用随机分组，并在两个独立的队列中进行，且操作者对实验条件不知情。[3] 视神经挤压术[3] 年龄和性别匹配的C57BL/6小鼠（雄性和雌性，8-14周龄）用异氟烷麻醉，并在左眼眶上方做切口。在手术显微镜下，切除眼外肌以暴露下方的视神经。用精细镊子（Dumont #5）在视神经乳头后方0.5-1 mm处挤压视神经10秒。操作过程中注意避免损伤眼动脉。通过眼底检查评估视网膜血管完整性。对于玻璃体内注射，使用30号针头在巩膜上做一个小穿刺，然后用汉密尔顿注射器将2 μL PBS或fusicoccin-A (FC-A)（1 μg/μL PBS溶液）注入伤口。针头保持约2分钟以防止回流，然后用医用胶水封闭穿刺口。出现明显回流的小鼠被排除在研究之外。PBS或fusicoccin-A (FC-A)注射在损伤后立即进行，并在损伤后7天再次注射。霍乱毒素注射（1 μL）在第12-13天进行。小鼠在第14天经心脏灌注4%多聚甲醛（PFA）。在第14天取出视神经和眼球，并在4% PFA中后固定2小时。制备视网膜平铺标本，并用抗Brn3a抗体（0.3 μg/mL，RRID：AB_2167511）染色。视神经在4℃下用30%蔗糖溶液进行过夜低温保护，然后包埋于OCT包埋剂中。将纵切片（厚度14 μm）收集于载玻片上，室温下用0.3% Triton-X/5% BSA溶液进行透化和封闭1小时，然后用抗GAP43抗体（1:1000，RRID：AB_10005026）在4℃下孵育过夜，用PBS洗涤3次，最后用Alexa 488标记的二抗（1:1000）染色。样本量参考了既往的视神经损伤研究（Chandran等，2016）。所有手术和注射均采用随机分组，且操作者对实验条件不知情。 |
| 参考文献 |
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| 其他信息 |
镰孢菌素是一种乙酸酯。它具有毒素作用。
已有报道称在扁形虫（Diaporthe amygdali）中发现了镰孢菌素，并有相关数据可供参考。 |
| 分子式 |
C36H56O12
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|---|---|
| 分子量 |
680.82264
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| 精确质量 |
680.377
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| 元素分析 |
C, 63.51; H, 8.29; O, 28.20
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| CAS号 |
20108-30-9
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| PubChem CID |
447573
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.2±0.1 g/cm3
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| 沸点 |
760.2±60.0 °C at 760 mmHg
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| 闪点 |
227.0±26.4 °C
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| 蒸汽压 |
0.0±5.8 mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.555
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| 来源 |
Fusicoccum amygdali
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| LogP |
3.28
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| tPSA |
170.44
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| 氢键供体(HBD)数目 |
4
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| 氢键受体(HBA)数目 |
12
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| 可旋转键数目(RBC) |
14
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| 重原子数目 |
48
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| 分子复杂度/Complexity |
1240
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| 定义原子立体中心数目 |
13
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| SMILES |
C[C@@H]1[C@@H]\2CC[C@@H](/C2=C/[C@]3([C@H](CC(=C3[C@H]([C@@H]1O)O[C@@H]4[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O4)COC(C)(C)C=C)O)OC(=O)C)O)[C@H](C)COC(=O)C)O)C)COC
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| InChi Key |
KXTYBXCEQOANSX-WYKQKOHHSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C36H56O12/c1-10-35(6,7)45-17-26-30(41)33(46-21(5)38)31(42)34(47-26)48-32-28-24(18(2)15-44-20(4)37)13-27(39)36(28,8)14-25-22(16-43-9)11-12-23(25)19(3)29(32)40/h10,14,18-19,22-23,26-27,29-34,39-42H,1,11-13,15-17H2,2-9H3/b25-14-/t18-,19-,22-,23+,26-,27+,29-,30-,31-,32-,33+,34-,36+/m1/s1
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| 化学名 |
[(2S)-2-[(1E,3R,4S,8R,9R,10R,11S,14S)-8-[(2S,3R,4S,5R,6R)-4-acetyloxy-3,5-dihydroxy-6-(2-methylbut-3-en-2-yloxymethyl)oxan-2-yl]oxy-4,9-dihydroxy-14-(methoxymethyl)-3,10-dimethyl-6-tricyclo[9.3.0.03,7]tetradeca-1,6-dienyl]propyl] acetate
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| 别名 |
Fusicoccin; 20108-30-9; Fusicoccin-A; Fusicoccin A; CHEMBL4244843; (2S)-2-[(1S,4R,5R,6R,6aS,9S,9aE,10aR)-4-{[3-O-acetyl-6-O-(1,1-dimethylprop-2-en-1-yl)-alpha-D-glucopyranosyl]oxy}-1,5-dihydroxy-9-(methoxymethyl)-6,10a-dimethyl-1,2,4,5,6,6a,7,8,9,10a-decahydrodicyclopenta[a,d][8]annulen-3-yl]propyl acetate; [(2S)-2-[(1E,3R,4S,8R,9R,10R,11S,14S)-8-[(2S,3R,4S,5R,6R)-4-acetyloxy-3,5-dihydroxy-6-(2-methylbut-3-en-2-yloxymethyl)oxan-2-yl]oxy-4,9-dihydroxy-14-(methoxymethyl)-3,10-dimethyl-6-tricyclo[9.3.0.03,7]tetradeca-1,6-dienyl]propyl] acetate; fuscicoccin A;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.4688 mL | 7.3441 mL | 14.6882 mL | |
| 5 mM | 0.2938 mL | 1.4688 mL | 2.9376 mL | |
| 10 mM | 0.1469 mL | 0.7344 mL | 1.4688 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
AOH-1996
hMAO-B-IN-3
Flupyrimin
阿曲库铵
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