Antithrombin III
Heparin sulfate (HS) chains (on exosomes and target cells) / Fibronectin (specifically its Hep-II heparin-binding domain) (competitive inhibitor)

由于肝素能加速抗凝血酶抑制凝血级联反应中丝氨酸蛋白酶的速度，因此它是一种非常有效的抗凝血药物。肝素及其结构相关的硫酸乙酰肝素是复杂的线性聚合物，由不同长度和序列的链组成。具有互补结合位点且带高正电荷密度的肽与肝素的相互作用最为紧密。肝素和硫酸乙酰肝素的二级结构主要为线性螺旋结构，羧基和磺酸基沿多糖主链以特定的间隔和方向排列。肝素和DNA都是具有聚电解质性质的高电荷线性聚合物。肝素的主要抗凝血作用机制被认为是通过与抗凝血酶III（AT-III）相互作用，从而增强AT-III对凝血因子（如Xa因子和凝血酶）的抑制作用。当肝素、抗凝血酶III和凝血酶形成三元复合物时，凝血酶抑制的双分子速率常数会增加2000倍。组织肥大细胞颗粒与免疫反应密切相关，是肝素的主要定位部位。肝素通过与FGFR-1和FGF-2形成广泛的相互作用来稳定FGF-FGFR的结合。肝素似乎能促进FGFR二聚化，因为它还能与邻近FGF-FGFR复合物中的FGFR-1相互作用[1]。肝素是一种强效的抗凝血药物，因为它能加快抗凝血酶抑制血液凝固级联反应中丝氨酸蛋白酶的速度。肝素和硫酸乙酰肝素具有相似的结构，它们都是由不同长度和序列的链混合而成的复杂线性聚合物。具有高正电荷密度的相应结合位点的肽与肝素的相互作用最强。在多糖骨架上，肝素和硫酸乙酰肝素主要呈现线性螺旋二级结构，羧基和磺酸基以特定的方向和间隔排列。肝素和DNA都是高电荷线性聚合物，表现出聚电解质特性。肝素被认为主要通过与抗凝血酶III（AT III）相互作用发挥抗凝作用，从而增强AT III对凝血因子（如因子Xa和凝血酶）的抑制作用。肝素与AT III和凝血酶结合形成的三元复合物可使凝血酶抑制的双分子速率常数提高2000倍。肝素主要存在于组织肥大细胞颗粒中，而肥大细胞颗粒与免疫反应密切相关。肝素与成纤维细胞生长因子受体1（FGFR-1）和成纤维细胞生长因子2（FGF-2）广泛相互作用，从而稳定这两种蛋白质的结合。此外，肝素与邻近的FGF-FGFR复合物中的FGFR-1相互作用，这似乎会促进FGFR二聚化[1]。

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当肝素（浓度为10 μg/mL）与骨髓瘤细胞来源的外泌体同时添加时，通过流式细胞术定量分析发现，肝素显著抑制了CD63-RFP标记的外泌体与RPMI-8226骨髓瘤靶细胞之间的相互作用。

肝素是一种属于糖胺聚糖家族的硫酸化多糖，具有多种重要的生物活性，这与其与多种蛋白质的相互作用密切相关。肝素因其能够加速抗凝血酶抑制血液凝固级联反应中丝氨酸蛋白酶的速率，而被广泛用作抗凝血药物。肝素及其结构相关的硫酸乙酰肝素是复杂的线性聚合物，由不同长度、序列各异的链混合而成。硫酸乙酰肝素广泛分布于动物细胞表面和细胞外基质中，并参与多种生理和病理生理过程。由于对这些多糖的详细结构和序列了解不足，因此难以评估肝素和硫酸乙酰肝素在体内的作用。此外，人们对碳水化合物-蛋白质相互作用的理解也落后于研究更为深入的蛋白质-蛋白质和蛋白质-核酸相互作用。近期对肝素和硫酸乙酰肝素蛋白结合的结构、动力学和热力学方面的广泛研究，加深了我们对肝素-蛋白质相互作用的理解。许多此类相互作用都表现出高度特异性。从分子水平理解这些相互作用对于设计新型高特异性治疗药物至关重要。本综述重点关注肝素的结构和构象，这些因素对其与蛋白质的相互作用至关重要。此外，本文还描述了肝素和硫酸乙酰肝素与特定肝素结合蛋白家族的相互作用[1]。

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人磷酸化激酶芯片[2]
根据制造商的说明，我们使用了一种基于膜的抗体芯片，该芯片可测定43种不同的人磷酸化蛋白激酶的相对水平。简而言之，将等量的RPMI-8226细胞裂解液（分别用100 μg外泌体处理或不处理）与磷酸化激酶芯片膜在4℃下孵育过夜。将芯片洗涤以去除未结合的蛋白质，然后与生物素标记的检测抗体混合物孵育。应用链霉亲和素-HRP和化学发光检测试剂，以可视化每个捕获点产生的信号，该信号对应于结合的磷酸化蛋白的量。

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该研究利用卵内绒毛尿囊膜（CAM）模型评估血管生成功效。15 kDa浓度为100 µM的肝素在72小时内显著促进了新血管的形成，表现为血管化程度、血管长度和CAM厚度的增加。血管生成反应呈剂量依赖性，100 µM浓度的效果最为显著。

肝素是一种抗凝血剂，已知其对血管生成具有多种影响，一些研究表明它可以诱导血管生成，而另一些研究则表明其具有抑制作用。接受低分子肝素治疗的静脉血栓栓塞症癌症患者的生存率高于接受普通肝素（UFH）治疗的患者。已知肝素可通过其糖胺聚糖链中的硫酸化修饰与多种血管生成生长因子相互作用。因此，研究不同分子量肝素的作用机制以了解其血管生成特性至关重要。为此，我们采用晚期绒毛尿囊膜（CAM）试验，检测了不同浓度的高分子量肝素（15 kDa）的血管生成反应。我们测量了血管的长度和大小，并采用形态计量学方法计算了CAM的厚度。观察到的CAM厚度增加提示在治疗区域形成了毛细血管样结构。扩散模式分析表明，肝素的内化作用可能影响基因表达，进而导致内皮细胞增殖。血管生成是指从现有血管形成新的血管，治疗区域新血管的出现有力地证实了分子量为15 kDa的肝素能够以剂量依赖的方式诱导CAM血管床的血管生成。结果表明肝素具有诱导血管生成的亲和力，并提供了一种新的机制，肝素可通过该机制应用于伤口愈合等治疗领域[3]。

外泌体与磁珠结合的流式细胞术分析[2]
\n将外泌体与抗CD63磁珠或肝素琼脂糖磁珠结合后，进行流式细胞术分析以鉴定外泌体表面的分子。将100 μg纯化的外泌体与抗CD63磁珠或肝素琼脂糖磁珠混合，并在4℃旋转架上孵育过夜。将结合在磁珠上的外泌体悬浮于200 μl 1% BSA/PBS溶液中，并用抗纤连蛋白或聚糖蛋白-1抗体进行染色，然后使用位于UAB综合流式细胞术核心实验室的Becton Dickinson FACSCalibur流式细胞仪进行分析。纤连蛋白使用小鼠单克隆抗人纤连蛋白-PE偶联抗体进行染色。小鼠同型对照（IgG1）PE用作对照。为了检测聚糖蛋白-1 (syndecan-1)，将与抗CD63磁珠结合的外泌体用细菌肝素酶在37℃下处理2小时，然后进行充分洗涤。这种酶处理通过释放硫酸乙酰肝素和任何结合的配体（例如纤连蛋白），使核心蛋白表位暴露于抗体。使用亲和纯化的多克隆山羊抗聚糖蛋白-1 IgG和PE标记的二抗检测聚糖蛋白-1。使用正常山羊IgG作为对照。\n

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\n\n通过MS/MS进行外泌体蛋白分析[2]
\n用碘克沙醇垫排除的外泌体在1×LDS样品缓冲液中溶解，然后在超声波浴中破碎膜10分钟，并按照LDS缓冲液制造商的说明进行热变性。然后使用BCA蛋白测定试剂盒对蛋白提取物进行定量。取含20 μg蛋白质的样品进行还原、变性处理，然后上样至10% Bis-Tris凝胶，进行短程电泳分离（约1 cm）。凝胶用胶体蓝染色试剂盒染色，脱色后进行显影。切取各样品上层含蛋白质的凝胶部分，用Trypsin Gold消化，然后按照制造商说明书进行肽提取，最后使用Savant SpinVac浓缩仪浓缩。取1 μg肽提取物（用0.1%甲酸稀释至约1 μg/10 μl）上样至100 μm × 13 cm毛细管柱（该毛细管柱由本实验室自行填充C18 Monitor 100 A球形硅胶珠），并用90分钟梯度洗脱（0.1% TFA中0–30%乙腈）。 \n

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\n\n外泌体-细胞相互作用分析[2]
\n将亚融合状态的RPMI-8226骨髓瘤细胞或HS-5骨髓基质细胞与CD63-RFP或PKH标记的骨髓瘤来源外泌体（100 μg/ml）孵育2小时。用PBS洗涤细胞，并在冰上用3%多聚甲醛固定15分钟。骨髓瘤细胞在悬浮状态下生长，因此采用细胞离心涂片法进行分析。所有样本均使用尼康A1共聚焦显微镜进行分析。使用FACSCalibur流式细胞仪定量分析与细胞结合的荧光标记外泌体。在旨在阻断外泌体上纤连蛋白Hep-II结构域的实验中，外泌体预先与单克隆抗体（A32）（25 μg抗体/100 μg外泌体）孵育，该抗体特异性结合纤连蛋白的Hep-II肝素结合结构域。在旨在阻断靶细胞表面硫酸乙酰肝素的实验中，细胞与含有Hep-II结合结构域的40 kDa人纤连蛋白片段（从人血浆纤连蛋白的胰凝乳蛋白酶消化物中纯化得到）（50 μg/ml）孵育。洗涤去除未结合的纤连蛋白片段后，通过共聚焦显微镜或流式细胞术分析外泌体与靶细胞的相互作用。在去除细胞表面硫酸乙酰肝素的实验中，细胞在37 °C下用5 mU/ml的细菌肝素酶处理2小时，然后进行充分洗涤。为了去除外泌体中的硫酸乙酰肝素，将100 μg外泌体与1.5 mU/ml肝素酶在37 °C下处理3小时；加入新的酶，并将外泌体孵育过夜。然后通过超速离心沉淀外泌体以去除酶。在一些阻断实验中，将外源性肝素（10 μg/ml）、Roneparstat（10 μg/ml）或合成肝素十二糖（100 μg/ml）与100 μg/ml外泌体同时加入。Roneparstat（曾用名SST0001）是瑞士Sigma-Tau Research公司的专有药物，可在动物模型中抑制骨髓瘤肿瘤的生长，目前正在进行针对晚期多发性骨髓瘤患者的I期临床试验（ClinicalTrials.gov注册号：NCT01764880）。肝素十二糖是一种完全硫酸化的分子，通过化学酶法合成制备。\n

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\n\n纤连蛋白 ELISA [2]
\n根据制造商的方案，使用市售的人纤连蛋白 ELISA 试剂盒定量纤连蛋白水平。该检测采用竞争性抑制 ELISA 法。在某些实验中，将外泌体在 37 °C 下用 1.5 mU/ml 肝素酶处理 3 小时（有或无肝素酶），然后加入新鲜酶并过夜孵育。之后，通过超速离心或 ExoQuick 外泌体沉淀液洗涤并沉淀外泌体。采用 BCA 蛋白测定法测定各样品的外泌体蛋白含量，并取等量的外泌体蛋白（8 μg）进行 ELISA 检测。\n

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\n\nWestern Blot [2]
\n根据 BCA 蛋白测定结果，取 100 μg 外泌体，在冰上用含蛋白酶抑制剂的 RIPA 缓冲液裂解 10 分钟，然后进行 4–12% SDS-PAGE 电泳分离。将蛋白电转印至硝酸纤维素膜上，并用识别纤连蛋白、网格蛋白或 flotillin 的一抗进行检测。在某些实验中，用细菌肝素酶处理外泌体，并用 syndecan-1 进行检测。使用 HRP 标记的二抗检测一抗，并通过化学发光法显色。在一些实验中，RPMI-8226 细胞在 37 °C 下用或不用肝素酶处理 2 小时，然后暴露于 100 μg/ml 的对照外泌体或侵袭性外泌体 20 分钟。裂解细胞并检测磷酸化 p38 或总 p38。\n\n

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\n\n内皮细胞侵袭 [2]
\n如前所述，使用 Biocoat Matrigel 侵袭室评估外泌体对人脐静脉内皮细胞侵袭的影响。为了研究纤连蛋白-硫酸乙酰肝素相互作用对胞外体功能活性的相关性，在将胞外体加入内皮细胞之前，先用抗纤连蛋白抗体A32（25 μg抗体/100 μg胞外体蛋白）预孵育胞外体，或不进行预孵育。\n\n

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为了检测肝素对外泌体-靶细胞相互作用的影响，将CD63-RFP胞外体（100 μg/mL）与RPMI-8226骨髓瘤细胞在肝素（10 μg/mL）存在下孵育。2小时后，洗涤细胞，固定细胞，并通过流式细胞术定量分析胞外体的结合程度。

卵内绒毛尿囊膜（CAM）模型[3]
受精鸡蛋重量为50±2克，在37℃、湿度高于60%的湿润环境下，按照母鸡卵子绒毛尿囊膜（HET-CAM）方法进行孵化。孵化后第3天，使用21号针头，通过鸡蛋的钝边抽取2-3毫升蛋清，以尽量减少蛋壳膜与CAM的粘连。在蛋壳上开一个1平方厘米的方形窗口，并用石蜡膜密封以防止脱水，然后将鸡蛋放回原处继续孵化。第9天，在无菌条件下，将1立方毫米大小的明胶海绵放置在正在生长的CAM上。将海绵浸入浓度分别为 50、100 和 150 μM 的肝素溶液（10 μl）。对照组绒毛尿囊膜（CAM）用 10 μl 1X PBS 处理。用透明胶带封闭窗口，将卵放回培养箱继续孵育至第 12 天（72 小时），此时 CAM 的血管化能力达到最大值。实验分为 4 组，每组 40 个样本。第 1 组为 1X PBS（对照组），第 2、3 和 4 组分别用浓度分别为 50 μM、100 μM 和 150 μM 的肝素溶液（10 μl）处理。使用佳能数码相机在 0、24、48 和 72 小时拍摄处理后的 CAM 图像，并使用 MATLAB 6.5 软件中的 Angioquant Toolbox 分析图像，以测量处理区域血管的总长度和尺寸（单位：微米）。

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组织学[3]
用肝素处理的绒毛尿囊膜（CAM）浸入布氏固定液中，切除处理区域，脱水后包埋于石蜡中。使用旋转式切片机切取7 μm厚的垂直切片。在40倍光学显微镜下观察组织切片进行定性评估，并使用连接于光学显微镜的尼康相机在10倍放大倍率下拍摄图像。

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受精鸡卵（白来航鸡）在37℃、湿度>60%的条件下孵育。第3天，去除卵清蛋白以防止膜粘连。第9天，在绒毛尿囊膜上开一个1 cm²的窗口，并将浸泡有10 µL肝素（50、100或150 µM）或PBS（对照）的明胶海绵（1 mm³）置于绒毛尿囊膜上。将窗口密封，并将鸡蛋孵化至第12天（处理后72小时）。收集绒毛尿囊膜（CAM）组织进行成像、组织学和免疫组织化学分析。

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受精鸡卵（白来航鸡）在37°C、湿度>60%的条件下孵化。第3天，去除蛋白以防止膜粘连。第9天打开一个1 cm²的窗口，并将浸泡有10 µL肝素（50、100或150 µM）或PBS（对照）的明胶海绵（1 mm³）放置在绒毛尿囊膜上。密封窗口，并将鸡蛋孵化至第12天（处理后72小时）。收集绒毛尿囊膜（CAM）组织进行成像、组织学和免疫组织化学分析。

用肝素浸泡的明胶海绵处理的绒毛尿囊膜（CAM）上未观察到伤口或炎症迹象。与 100 µM 相比，较高浓度（150 µM）的肝素处理组成纤维细胞聚集减少，细胞萌发也减少，这表明极高浓度下可能存在细胞应激，但未提供明确的毒性数据。

[1]. Heparin-protein interactions. Angew Chem Int Ed Engl. 2002 Feb 1;41(3):391-412.

[2]. Fibronectin on the Surface of Myeloma Cell-derived Exosomes Mediates Exosome-Cell Interactions. J Biol Chem. 2016 Jan 22;291(4):1652-63.

[3]. Angiogenic efficacy of Heparin on chick chorioallantoic membrane. Vascular Cell, [S.l.] v. 4, n. 1, p. 8, apr. 2012. ISSN 2045-824X.

肝素是一种属于糖胺聚糖家族的硫酸化多糖，具有多种重要的生物活性，这些活性与其与各种蛋白质的相互作用密切相关。肝素被广泛用作抗凝剂，因为它能加速抗凝血酶抑制血液凝固级联反应中丝氨酸蛋白酶的速率。肝素及其结构相关的硫酸乙酰肝素是由不同长度和序列的链组成的复杂线性聚合物。硫酸乙酰肝素广泛分布于动物细胞表面和细胞外基质中，参与多种生理和病理生理过程。由于对这些多糖的详细结构和序列了解不足，难以评估肝素和硫酸乙酰肝素的体内效应。此外，我们对碳水化合物-蛋白质相互作用的理解落后于对蛋白质-蛋白质和蛋白质-核酸相互作用的深入研究。近年来，对肝素和硫酸乙酰肝素与蛋白质结合的结构、动力学和热力学的广泛研究加深了我们对肝素-蛋白质相互作用的理解。许多此类相互作用表现出高度特异性。从分子水平理解这些相互作用对于设计新型高特异性治疗药物至关重要。本综述重点关注肝素的结构和构象，这些方面对其与蛋白质的相互作用至关重要。此外，本综述还描述了肝素和硫酸乙酰肝素与特定肝素结合蛋白家族的相互作用。[1]

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这项研究采用鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM) 实验评估了高分子量肝素 (HMWH) 对毛细血管样管状结构形成的影响。15 kDa 的普通肝素 (UFH) 促进了毛细血管样管状结构的形成，而低分子量肝素 (LMWH) 则已知会抑制管状内皮结构的形成。因此，这项体内研究表明，肝素具有诱导血管生成的亲和力，并且在 100 μM 的浓度下效果显著。这些数据揭示了一种新的机制，即高分子量肝素可以促进毛细血管样管状结构的形成，并可能在伤口愈合过程中诱导血管生成方面具有治疗意义，而低分子量成分则可用于抑制血管生成，例如在肿瘤进展过程中。[3]

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肝素是一种高度硫酸化的糖胺聚糖，可模拟硫酸肝素 (HS)。在本研究中，肝素被用作竞争性抑制剂，以阻断外泌体纤连蛋白与靶细胞上硫酸肝素链之间的相互作用。
该研究表明，肝素及其类似物（如罗尼帕司他）具有治疗性地破坏肿瘤微环境中外泌体介导的细胞间通讯的潜力，这可能对骨髓瘤的生长和进展产生负面影响。

C26H42N2O37S5

1134.89

1134.01

C, 27.52; H, 3.73; N, 2.47; O, 52.16; S, 14.12

9005-49-6

Heparin sodium salt;9041-08-1;Heparin Lithium salt;9045-22-1;Heparin sodium salt (MW 15kDa);9041-08-1; 9005-49-6 (free); 37270-89-6 (Ca)

Typically exists as solid at room temperature

2.18 g/cm3

644.9ºC at 760mmHg

343.8ºC

1.711

652.39

O1C(OC2C(O)C(NC(=O)C)C(O)OC2COS(O)(=O)=O)C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(NS(O)(=O)=O)C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(O)C(C(O)=O)O3)C(CO)O2)C1C(O)=O

HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C26H42N2O37S5/c1-4(30)27-7-9(31)13(6(56-23(7)39)3-55-67(43,44)45)58-26-19(65-70(52,53)54)12(34)16(20(62-26)22(37)38)60-24-8(28-66(40,41)42)15(63-68(46,47)48)14(5(2-29)57-24)59-25-18(64-69(49,50)51)11(33)10(32)17(61-25)21(35)36/h5-20,23-26,28-29,31-34,39H,2-3H2,1H3,(H,27,30)(H,35,36)(H,37,38)(H,40,41,42)(H,43,44,45)(H,46,47,48)(H,49,50,51)(H,52,53,54)

6-((5-acetamido-4,6-dihydroxy-2-((sulfooxy)methyl)tetrahydro-2H-pyran-3-yl)oxy)-3-((5-((6-carboxy-4,5-dihydroxy-3-(sulfooxy)tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)-6-(hydroxymethyl)-3-(sulfoamino)-4-(sulfooxy)tetrahydro-2H-pyran-2-yl)oxy)-4-hydroxy-5-(sulfooxy)tetrahydro-2H-pyran-2-carboxylic acid

FraxiparinHeparin M-118; Certoparin M118; Dalteparin; Thromboliquine; Eparina; Parvoparin; Adomiparin; M 118; Bemiparin; Nadroparine

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。