HISPOLON(P)

- NF-κB (nuclear factor-κB) [1]
- PI3K/Akt signaling pathway [1]
- MAPK signaling pathway (including ERK1/2, JNK1/2, p38 MAPK) [1,2,3]
- IKK/IκBα [3]
- TLR4 [3]
- Nrf2/Keap1/HO-1 axis [3]
- ER stress-related proteins (PERK, IRE1, ATF6, GRP78, CHOP) [3]
- Cyclin B1, cdc2, cdc25c [4]
- Caspase-3, caspase-8, caspase-9, PARP [1,2,4]

Hispolon（25 和 50 μM，作用 24 至 72 小时）会降低 U87MG 细胞活力 [2]。在 U87MG 细胞中，hispolon（25 和 50 μM，24 和 48 小时）可引起细胞凋亡和 G2/M 细胞周期停滞 [2]。 Hispolon（25 和 50 μM，2-8 小时）可增强 CDK 抑制剂 p21 的表达，但降低 G1-S 转换相关蛋白细胞周期蛋白 D4 的表达 [2]。 U87MG 细胞的迁移受到 hispolon 的抑制（25 和 50 μM，持续 24 小时）[2]。

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- Hispolon 对多种癌细胞系具有抗增殖活性，包括U87MG（胶质母细胞瘤）、HeLa、SiHa（宫颈癌）、MCF-7、MDA-MB-231（乳腺癌）、NPC-39、HONE-1、NPC-BM、NPC-039（鼻咽癌）、A549、H661（肺癌）、DU145、LNCaP、PC3（前列腺癌）、MV4-11、HL-60、U937、THP-1（白血病）、SGC-7901、MKN-45、MGC-803（胃癌）、T24、J82（膀胱癌）、Hep3B、SK-Hep1（肝细胞癌）、TCMK-1（肾癌）和KB（人表皮样癌）细胞。[1]
- 在U87MG胶质母细胞瘤细胞中，hispolon（25和50 μM）通过MTT法检测呈剂量和时间依赖性地降低细胞活力。24小时时仅50 μM hispolon降低活力；48和72小时时两种浓度均显著抑制活力（p<0.001）。[2]
- 在U87MG细胞中，hispolon（25和50 μM）诱导G2/M期细胞周期阻滞。处理48小时后，对照组G2/M期细胞百分比为11.7±1.7%，25 μM hispolon组为25.9±1.1%，50 μM hispolon组为37.9±1.1%。[2]
- 在U87MG细胞中，hispolon剂量依赖性地降低cyclin D4表达，增加p21和p53表达。50 μM hispolon在15和30分钟时降低pERK1/2，在2和4小时时降低pAkt。[2]
- 在U87MG细胞中，hispolon（50 μM处理72小时）诱导凋亡，坏死和凋亡细胞百分比增加，caspase-3表达增加，cleaved PARP（89 kD）增加，全长PARP（116 kD）减少。[2]
- 在U87MG细胞中，hispolon（50 μM处理24小时）通过Boyden小室法检测显著抑制细胞迁移。[2]
- 在DBTRG和C6 GBM细胞中，hispolon呈剂量和时间依赖性地降低细胞活力。IC50值：C6细胞为68.1 μM（24小时）和51.7 μM（48小时）；DBTRG细胞为55.7 μM（24小时）和46.6 μM（48小时）。[4]
- 在DBTRG和C6细胞中，hispolon（75 μM处理24小时）通过Annexin V-FITC染色检测，凋亡率增加至C6细胞的27%和DBTRG细胞的11.3%，对照组分别为3.6%和0.9%。[4]
- 在DBTRG和C6细胞中，hispolon（0-75 μM）通过Western blot检测呈剂量依赖性地诱导caspase-9、caspase-3和PARP的剪切。[4]
- 在DBTRG和C6细胞中，hispolon诱导G2/M期阻滞。75 μM hispolon处理24小时后，G2/M期细胞增加至C6细胞的37.9%和DBTRG细胞的23.2%，对照组分别为23.3%和21.8%。Hispolon呈剂量和时间依赖性地降低cyclin B1、cdc2和cdc25c表达。[4]
- 在DBTRG和C6细胞中，hispolon（75 μM）通过划痕愈合实验减少细胞迁移（C6减少56%；DBTRG减少57%），通过transwell实验抑制迁移（C6：71.9%；DBTRG：66%）和侵袭（C6：50%；DBTRG：67.6%）。Hispolon通过qRT-PCR上调E-cadherin mRNA，下调N-cadherin、vimentin、Snail1、Snail2和Twist mRNA。[4]
- 在BV-2小胶质细胞中，hispolon（0-20 μM）在LPS或LTA刺激下诱导HO-1蛋白表达，抑制iNOS/NO产生，且无细胞毒性。[3]
- 在LPS攻击的小鼠肺组织中，hispolon降低iNOS和COX-2蛋白表达，抑制IKK/IκBα/NF-κB信号通路，抑制MAPK磷酸化（ERK、JNK、p38）。[3]
- 在LPS攻击的小鼠中，hispolon增加抗氧化酶表达（过氧化氢酶、SOD、GPx），增加Nrf2和HO-1表达，降低Keap1表达，增加PPARγ表达。Hispolon还抑制TLR4/PI3K/Akt/mTOR信号通路。[3]
- 在LPS攻击的小鼠中，hispolon降低内质网应激标志物（CHOP、PERK、IRE1、ATF6、GRP78），降低自噬标志物（LC3-II/I、Beclin-1），降低LKB1/CaMKK-AMPK信号，并减少凋亡（增加Bcl-2，降低Bax和caspase-3）。[3]

Hispolon（2.5-10 mg/kg，腹腔注射）可以减少 LPS 诱导的小鼠急性肺损伤 [3]。 Hispolon（5 和 10 mg/kg，皮下注射）可抑制 DBTRG 异种移植小鼠的肿瘤生长 [4]。

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- 在U87MG胶质母细胞瘤异种移植小鼠中（该论文未详述，引用自其他研究）。[1]
- 在急性髓系白血病（AML）异种移植小鼠中，hispolon（10 mg/kg）在体内抑制肿瘤生长。[1,3]
- 在LPS诱导的急性肺损伤（ALI）小鼠模型中，hispolon（2.5、5和10 mg/kg，腹腔注射）与LPS-only组相比，显著降低肺组织病理学损伤评分、肺水肿（W/D比）、MPO活性、BALF中总细胞计数和总蛋白。[3]
- 在LPS诱导的ALI小鼠中，hispolon（2.5、5、10 mg/kg，腹腔注射）通过ELISA检测降低BALF中NO、TNF-α、IL-1β和IL-6水平。[3]
- 在LPS诱导的ALI小鼠中，hispolon（10 mg/kg，腹腔注射）降低BALF中ROS产生。与NAC（ROS抑制剂）联合治疗进一步增强hispolon对p-AMPK、HO-1和核Nrf2表达的作用。与LY294002（AKT抑制剂）或4-PBA（内质网应激抑制剂）联合治疗进一步降低炎症和内质网应激相关蛋白。[3]
- 在DBTRG异种移植NOD-SCID小鼠中，hispolon（5和10 mg/kg，皮下注射，每两天一次）在第21天显著降低相对肿瘤体积（5 mg/kg：对照组的61%，p=0.011；10 mg/kg：对照组的55%，p=0.015）。取出肿瘤，拍照并分析。[4]
- 在DBTRG异种移植小鼠中，hispolon（10 mg/kg）通过Western blot和免疫组织化学检测增加肿瘤组织中cleaved caspase-3表达。Hispolon还通过IHC染色降低ki-67表达，增加caspase-3阳性细胞。[4]

- MTT细胞活力测定：U87MG细胞（1×10⁴细胞/孔，96孔板）用hispolon（25和50 μM）或0.1% DMSO处理24、48或72小时。加入MTT（5 mg/mL）孵育2小时，用DMSO裂解细胞，在570 nm处测定吸光度。[2]
- 流式细胞术细胞周期分析：U87MG细胞（25×10⁴细胞）用hispolon（25和50 μM）处理24、48或72小时，用70%乙醇固定，用碘化丙啶（50 μg/mL）染色30分钟，进行流式细胞术分析。[2]
- Annexin V-FITC凋亡检测：U87MG细胞（5×10⁵细胞）用hispolon（25和50 μM）或0.1% DMSO处理24、48或72小时，用Annexin V-FITC和碘化丙啶染色，进行流式细胞术分析。[2]
- Western blot分析：从hispolon处理的U87MG细胞中提取蛋白（40 μg），通过SDS-PAGE（12.5%凝胶）分离，转移到硝酸纤维素膜上，与一抗（cyclin D4、p21、p53、PARP、pAKT、pERK1/2）在4°C孵育过夜，然后与二抗孵育，通过化学发光检测。[2]
- 迁移和侵袭实验：U87MG细胞用hispolon（50 μM处理24小时）处理，收获，在无血清培养基中接种到Boyden小室（15×10⁴细胞/孔），孵育24小时，然后固定、吉姆萨染色并计数。侵袭实验需用Matrigel包被膜。[2]
- GBM细胞MTT实验：DBTRG和C6细胞用hispolon（0-100 μM）处理24或48小时，通过MTT法测定细胞活力。[4]
- Annexin V-FITC凋亡实验：GBM细胞用hispolon（75 μM处理24小时）处理，用Annexin V-FITC和PI染色，进行流式细胞术分析。[4]
- 细胞周期分析：GBM细胞用hispolon（0-75 μM处理24小时）处理，用70%乙醇固定，用含PI（20 μg/mL）、RNase A（0.2 mg/mL）和Triton X-100（0.1%）的溶液染色30分钟，进行流式细胞术分析。[4]
- 细胞周期蛋白Western blot：GBM细胞用递增浓度的hispolon处理48小时，或用75 μM hispolon处理12、24、48小时。使用抗cyclin B1、cdc2和cdc25c抗体分析蛋白。[4]
- 划痕愈合实验：GBM细胞在24孔板中用培养插件培养24小时，然后用hispolon（0-75 μM）处理24小时，在0、4、8和24小时拍摄划痕闭合情况。[4]
- Transwell迁移和侵袭实验：GBM细胞用hispolon（75 μM预处理24小时），重新接种到有或没有Matrigel包被（2 mg/mL）的上室中，以10% FBS作为趋化因子孵育24小时，然后用10%福尔马林固定，用0.2%结晶紫染色，在200倍放大倍数下计数。[4]
- qRT-PCR：使用RNeasy Mini试剂盒提取总RNA，在37°C逆转录60分钟，进行实时PCR检测E-cadherin、N-cadherin、vimentin、Snail1、Snail2和Twist mRNA表达。[4]

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细胞活力测定[2]
细胞类型： U87MG 细胞
测试浓度： 25 和 50 μM
孵育时间： > 24、48、72 小时
实验结果：以剂量和时间依赖性方式抑制细胞活力。

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蛋白质印迹分析 [2]
细胞类型： U87MG 细胞
测试浓度： 25 和 50 μM
孵育时间：2、4、8小时
实验结果：cyclin D4水平降低，p21水平升高。

LPS诱导急性肺损伤（ALI）模型：将6周龄雄性ICR小鼠（25-28 g）随机分为6组（n=6）：对照组、LPS组（5 mg/kg，气管内滴注）、LPS+地塞米松组（10 mg/kg，腹腔注射）和LPS+羟基哌啶醇组（2.5、5、10 mg/kg，溶于0.5%羧甲基纤维素钠溶液，腹腔注射）。羟基哌啶醇和地塞米松在LPS给药前1小时腹腔注射。6小时后处死动物并收集样本。收集肺组织进行组织病理学（HE染色）、湿重/干重比值、髓过氧化物酶（MPO）活性测定和蛋白质印迹分析。收集支气管肺泡灌洗液（BALF）进行细胞总数计数、蛋白浓度测定、亚硝酸盐测定、活性氧（ROS）测定和细胞因子ELISA检测。 [3] - DBTRG异种移植模型：将1×10⁶个DBTRG细胞皮下植入NOD-SCID小鼠背部皮下组织。当肿瘤体积达到80-150 mm³时，将小鼠随机分为对照组和治疗组（每组n=6）。每2天皮下注射Hispolon（5或10 mg/kg）（注射部位与肿瘤对侧），直至实验结束。肿瘤体积计算公式为TV (mm³) = (L × W²)/2。相对肿瘤体积（RTV）计算公式为RTVn = TVn/TV0。第21天，取出异种移植瘤，拍照，用4%福尔马林固定，石蜡包埋，进行组织学分析（HE染色、Ki-67和caspase-3免疫组化），并进行Western blot分析以检测cleaved caspase-3的表达。 [4]

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动物/疾病模型： LPS诱导的小鼠急性肺损伤 [3]
剂量： 2.5、5 和 10 mg/kg
给药途径： 腹腔注射 (ip)
实验结果： 减轻LPS刺激小鼠的病理效应。降低肺部W/D比值和MPO活性。减少促炎细胞因子的产生。

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动物/疾病模型： DBTRG异种移植小鼠 [4]
剂量： 5 和 10 mg/kg
给药途径： 皮下注射
实验结果： 肿瘤体积缩小 (RTV)。 HE 和 ki-67 染色抑制了体内 GBM 细胞的增殖。

- Hispolon在0至40 μM（8.8 μg/mL）范围内处理24小时，对经TPA处理和未经处理的MDA-MB-231细胞无显著毒性。[1,3]
- Hispolon（0-20 μM）在LPS或LTA刺激下诱导BV-2细胞中HO-1蛋白表达，且无细胞毒性。[1,3]
- Hispolon对正常细胞的细胞毒性较低。[1,3]

[1]. Hispolon: A natural polyphenol and emerging cancer killer by multiple cellular signaling pathways. Environ Res. 2020 Nov;190:110017.

[2]. Effects of hispolon on glioblastoma cell growth. Environ Toxicol. 2017 Sep;32(9):2113-2123.

[3]. Attenuation of Lipopolysaccharide-Induced Acute Lung Injury by Hispolon in Mice, Through Regulating the TLR4/PI3K/Akt/mTOR and Keap1/Nrf2/HO-1 Pathways, and Suppressing Oxidative Stress-Mediated ER Stress-Induced Apoptosis and Autophagy. Nutrients. 2020 Jun 10;12(6):1742.

[4]. Hispolon Induces Apoptosis, Suppresses Migration and Invasion of Glioblastoma Cells and Inhibits GBM Xenograft Tumor Growth In Vivo. Molecules. 2021 Jul 26;26(15):4497.

Hispolon 属于儿茶酚类化合物。
据报道，Hispolon 存在于 Tropicoporus linteus、Phellinus igniarius 以及其他有相关数据的生物体中。
- Hispolon是一种天然生物活性多酚，从Phellinus linteus、Inonotus hispidus、Phellinus igniarius、Phellinus merrillii和Phellinus loncerinus中分离得到。它于1996年首次从Inonotus hispidus中分离。其化学结构与肉桂酸衍生物相似（芳香环间位和对位的H被-OH基团取代，链末端的-OH被烷基取代）。与肉桂酸相比，hispolon活性更高的主要因素是-COCH₃基团。[1]
- Hispolon具有抗癌、抗糖尿病、抗氧化、抗病毒、抗炎、保肝、免疫调节和神经保护活性。[1]
- Hispolon通过靶向PI3K/Akt、MAPK和NF-κB信号通路，诱导凋亡、阻滞细胞周期和抑制转移来对抗癌症。[1]
- 构效关系（SAR）研究表明，与羟基（-OH）相比，甲氧基（-OCH₃）取代可增加亲脂性和细胞毒性。[1]
- Hispolon作为抗炎剂，通过抑制TNF-α、通过抑制NF-κB通路降低MMP-9、抑制JNK磷酸化发挥作用。[1]
- Hispolon具有抗糖尿病活性，对α-葡萄糖苷酶的IC₅₀为12.38 μg/mL，对醛糖还原酶的IC₅₀为9.47 μg/mL。[1]
- Hispolon对甲型和乙型流感病毒具有抗病毒活性。[1]

C12H12O4

220.221

220.073

C, 65.45; H, 5.49; O, 29.06

173933-40-9

10082188

Light yellow to yellow solid powder

1.3±0.1 g/cm3

477.2±45.0 °C at 760 mmHg

256.5±25.2 °C

0.0±1.3 mmHg at 25°C

1.666

0.7

77.8

3

4

3

16

306

0

CC(=O)/C=C(/C=C/C1=CC(=C(C=C1)O)O)\O

QDVIEIMMEUCFMW-QXYPORFMSA-N

InChI=1S/C12H12O4/c1-8(13)6-10(14)4-2-9-3-5-11(15)12(16)7-9/h2-7,14-16H,1H3/b4-2+,10-6-

(3Z,5E)-6-(3,4-dihydroxyphenyl)-4-hydroxyhexa-3,5-dien-2-one

Hispolon; 173933-40-9; (3Z,5E)-6-(3,4-dihydroxyphenyl)-4-hydroxyhexa-3,5-dien-2-one; DTXSID701045719; RefChem:146573;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~125 mg/mL (~567.61 mM ()

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。