Indolicidin

别名: 抗菌肽Indolicidin
目录号: V32963 纯度: ≥98%
Indolicidin 是一种从牛中性粒细胞胞质颗粒中纯化出来的有效抗菌肽。
Indolicidin CAS号: 140896-21-5
产品类别: New2
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
1mg
5mg
100mg
Other Sizes

Other Forms of Indolicidin:

  • Indolicidin acetate
  • Indolicidin TFA
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InvivoChem产品被CNS等顶刊论文引用
产品描述
Indolicidin 是一种从牛中性粒细胞胞质颗粒中纯化出来的有效抗菌肽。
生物活性&实验参考方法
靶点
Indolicidin acts primarily on bacterial cell membranes. Its mechanism involves high-affinity binding to lipopolysaccharide (LPS) on the outer membrane of Gram-negative bacteria, followed by permeabilization and disruption of the cytoplasmic membrane through the formation of voltage-dependent ion channels [1].
体外研究 (In Vitro)
吲哚西啶有 13 个氨基酸,其中 5 个是色氨酸残基,羧基末端有甲酰胺化精氨酸。在所有已知的蛋白质中,indolicidin 的色氨酸含量最高。这种特殊的抗生素肽可能会根据几个色氨酸残基的存在而发挥不同的作用。十三肽酰胺 indolicidin 具有与最强的细菌素肽或防御素相似的体外杀菌活性[1]。纯化的表面脂多糖以高亲和力与 indolicidin 结合,使其能够穿透 E 的外膜。大肠杆菌将其转化为疏水性小分子 1-N-苯基萘胺 (Mr 200),这与吲哚西丁穿过外膜的自我促进摄取途径一致。当吲哚丁的羧基末端被甲基酯化时,它对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都更有效。这与革兰氏阴性细菌中较高的脂多糖结合和增加的外膜通透性有关。吲哚西丁作用于大肠杆菌的细胞质膜,膜透化暴露细胞质β-半乳糖苷酶以进行测量[2]。
Indolicidin 在体外表现出广谱抗菌活性。针对不同细菌菌株的最低抑菌浓度(MIC)值范围为4至64 μg/ml。例如,对大肠杆菌UB1005的MIC为16 μg/ml,对铜绿假单胞菌H103为64 μg/ml,对鼠伤寒沙门氏菌14028s为64 μg/ml,对金黄色葡萄球菌RN4220为8 μg/ml。其羧基末端甲基酯衍生物(Indolicidin-C)显示出更强的效力,对某些菌株的MIC低至1-4 μg/ml[1]。
通过丹磺酰-多粘菌素B置换实验测定,Indolicidin 以与多粘菌素B相当的高亲和力与纯化的铜绿假单胞菌LPS结合。置换50%结合丹磺酰-多粘菌素B所需的浓度(I50)被用作相对亲和力的衡量指标,但文中未给出indolicidin的具体I50数值[1]。
Indolicidin 能渗透大肠杆菌的外膜,使小的疏水性荧光探针1-N-苯基萘胺(NPN,分子量200)得以进入,在浓度低至3-5 μg/ml时即可观察到活性。然而,即使浓度高达70 μg/ml,它也不能促进更大的蛋白质溶菌酶(分子量14,000)的摄取[1]。
通过使用邻硝基苯-β-D-半乳糖苷(ONPG)作为底物检测胞质β-半乳糖苷酶活性的释放,证明Indolicidin 能渗透大肠杆菌ML-35的细胞质膜(内膜)。渗透发生迅速(滞后时间<1分钟),浓度低至4 μg/ml即可生效。在用解偶联剂羰基氰-间氯苯腙(CCCP, 100 μM)预处理的细胞中,此活性显著降低,表明其依赖于跨膜电位[1]。
在平面脂双层(由磷脂酰胆碱/磷脂酰丝氨酸,5:1组成)中,Indolicidin 引起电压依赖性的跨膜电流增加。激活此电流增加需要约-70至-80 mV(反侧为负)的阈值电位。宏观电流的增加归因于形成了离散的离子通道,其单通道电导范围为0.05至0.15 nS[1]。
圆二色光谱分析表明,Indolicidin 在水溶液中呈现弱的聚-L-脯氨酸II型延伸螺旋结构,当与脂质体相互作用时,该结构显著增强[1]。
细胞实验
外膜渗透实验(NPN摄取实验): 将大肠杆菌UB1005培养至对数生长中期,收集、洗涤并重悬于缓冲液(5 mM HEPES, pH 7.2, 5 mM KCN)中。将荧光探针NPN以10 μM的终浓度加入细胞悬液。测量基线荧光(在水性介质中较弱)。随着加入浓度递增的Indolicidin,监测荧光强度的增加,这对应于NPN进入被渗透外膜的疏水内部[1]。
细胞质膜渗透实验(β-半乳糖苷酶释放实验): 收集对数生长期的大肠杆菌ML-35(该菌株胞质β-半乳糖苷酶组成型表达但缺少乳糖通透酶),重悬于含有100 mM NaCl的10 mM磷酸钠缓冲液(pH 7.4)中。加入底物ONPG。在零时刻,将不同量的Indolicidin 加入细胞悬液。通过分光光度法在420 nm处监测随时间产生的邻硝基苯酚,来跟踪被释放的胞质β-半乳糖苷酶水解ONPG的过程[1]。
参考文献

[1]. Indolicidin, a novel bactericidal tridecapeptide amide from neutrophils. J Biol Chem. 1992 Mar 5;267(7):4292-5.

[2]. Mode of action of the antimicrobial peptide indolicidin. J Biol Chem. 1996 Aug 9;271(32):19298-303.

其他信息
吲哚杀菌素是一种由13个氨基酸组成的阳离子抗菌肽(ILPWKWPWWPWRR-NH2),分离自牛中性粒细胞。它具有独特的组成,含有39%的色氨酸和23%的脯氨酸,使其成为已知最小的线性天然抗菌肽,也是已知蛋白质中色氨酸含量最高的[1]。
其作用机制包括:1)与革兰氏阴性菌外膜上的脂多糖(LPS)高亲和力结合,促进自身摄取;2)穿过外膜; 3) 与细胞质膜相互作用,导致电压依赖性离子通道的形成,从而耗散跨膜电位并引起细胞死亡[1]。
羧基末端的甲基酯化(生成吲哚杀菌素-C)增加了肽的净正电荷,从而增强了对大多数受试细菌的抗菌活性,提高了LPS结合亲和力,并增强了外膜通透性[1]。
在平面脂双层中形成通道需要一定的膜电位阈值,形成的通道大小不一,但一旦形成就相对稳定。鉴于其分子量较小,该肽可能采取伸展结构并聚集形成这些通道[1]。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C100H132N26O13
分子量
1906.28448
精确质量
1905.05
CAS号
140896-21-5
相关CAS号
Indolicidin acetate;Indolicidin TFA
PubChem CID
16129733
外观&性状
White to off-white solid powder
LogP
11.317
tPSA
620.71
氢键供体(HBD)数目
23
氢键受体(HBA)数目
17
可旋转键数目(RBC)
50
重原子数目
139
分子复杂度/Complexity
4190
定义原子立体中心数目
14
InChi Key
USSYUMHVHQSYNA-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C100H132N26O13/c1-5-57(4)85(102)95(136)123-79(45-56(2)3)96(137)124-42-20-36-82(124)92(133)118-76(46-58-51-110-68-28-11-6-23-63(58)68)89(130)116-74(33-16-17-39-101)88(129)121-80(49-61-54-113-71-31-14-9-26-66(61)71)97(138)125-43-21-38-84(125)94(135)120-78(48-60-53-112-70-30-13-8-25-65(60)70)91(132)122-81(50-62-55-114-72-32-15-10-27-67(62)72)98(139)126-44-22-37-83(126)93(134)119-77(47-59-52-111-69-29-12-7-24-64(59)69)90(131)117-75(35-19-41-109-100(106)107)87(128)115-73(86(103)127)34-18-40-108-99(104)105/h6-15,23-32,51-57,73-85,110-114H,5,16-22,33-50,101-102H2,1-4H3,(H2,103,127)(H,115,128)(H,116,130)(H,117,131)(H,118,133)(H,119,134)(H,120,135)(H,121,129)(H,122,132)(H,123,136)(H4,104,105,108)(H4,106,107,109)
化学名
1-[2-[[6-amino-2-[[2-[[1-[2-[(2-amino-3-methylpentanoyl)amino]-4-methylpentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]hexanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]-N-[1-[[1-[2-[[1-[[1-[(1-amino-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl)amino]-5-carbamimidamido-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)-1-oxopropan-2-yl]carbamoyl]pyrrolidin-1-yl]-3-(1H-indol-3-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)-1-oxopropan-2-yl]pyrrolidine-2-carboxamide
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气保护),避免吸湿/受潮和光照。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 0.5246 mL 2.6229 mL 5.2458 mL
5 mM 0.1049 mL 0.5246 mL 1.0492 mL
10 mM 0.0525 mL 0.2623 mL 0.5246 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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