| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1mg |
|
||
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 25mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| 100mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
JH-RE-06 targets the REV7-binding surface on the C-terminal domain (CTD) of the REV1 protein, thereby disrupting the REV1-REV7 protein-protein interaction which is critical for the recruitment of mutagenic polymerase Pol ζ during transfusion synthesis (TLS). The compound binds to and induces dimerization of the REV1 CTD, effectively blocking its interaction with REV7 [1].
|
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
出乎意料的是，JH-RE-06 在其 REV7 结合的表面上使 REV1 CTD 二聚化，从而阻止 REV1 与 REV7 相互作用 [1]。
- 在AlphaScreen检测中，JH-RE-06抑制REV1 CTD-REV7相互作用的IC50为0.78 ± 0.16 µM。等温滴定量热法（ITC）证实了其结合，解离常数（Kd）为0.42 µM，蛋白质与抑制剂化学计量比约为2:1，这与诱导二聚化的机制一致[1]。 - 在细胞活力实验中，JH-RE-06（1.5 µM）显著增强了顺铂（0.5 µM）在多种人和小鼠癌细胞系（HT1080纤维肉瘤、A375黑色素瘤、KP肺腺癌、LNCaP前列腺腺癌）中的细胞毒性，表现为克隆形成能力降低。在非癌性人原代成纤维细胞（AG01522）中未观察到这种增敏效应[1]。 - JH-RE-06（1.5 µM）还能使KP细胞对其他DNA损伤剂（包括苯并[a]芘二醇环氧化物（BPDE）、4-硝基喹啉-1-氧化物（4-NQO）和甲磺酸甲酯（MMS））敏感[1]。 - JH-RE-06（1.5 µM）显著抑制了自发的和顺铂诱导的突变，表现为HT1080细胞中HPRT突变频率的降低[1]。 - 使用含有位点特异性顺铂-1,2-GG加合物的定量缺口质粒实验，证明JH-RE-06（1.5、3.0和15.0 µM）能显著抑制HT1080细胞中跨过该损伤的跨损伤合成（TLS）[1]。 - 遗传依赖性得到证实：JH-RE-06介导的对顺铂的增敏作用和HPRT突变的减少在野生型（Rev1+/+）小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）中观察到，但在Rev1敲除（Rev1−/−）的MEF中则没有。用质粒编码的REV1互补Rev1−/−细胞可恢复增敏作用。类似地，在HT1080和A375细胞中用siRNA敲低REV1则消除了JH-RE-06的增敏效应[1]。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在培养的人和小鼠细胞系中，JH-RE-06 增加顺铂诱导的毒性并抑制诱变 TLS [1]。当 JH-RE-06 和顺铂同时给药时，小鼠体内的人黑色素瘤异种移植物的生长受到抑制 [1]。
- 在人黑色素瘤（A375细胞）小鼠异种移植模型中，通过瘤内注射方式，每周两次、连续5周共同给予JH-RE-06（1.6 mg/kg）和顺铂（1 mg/kg），几乎完全抑制了肿瘤生长，效果显著优于生理盐水、单用JH-RE-06或单用顺铂的治疗组[1]。 - 接受JH-RE-06和顺铂联合治疗的小鼠生存期长于所有其他治疗组的小鼠[1]。 |
| 酶活实验 |
- 建立了ELISA法来筛选REV1-REV7相互作用的抑制剂。纯化的His8标记的REV7（与REV3L肽段共表达，称为His8-REV7/3）被固定在Ni2+-NTA包被的板上。将FLAG标记的嵌合REV1 CTD蛋白（为增加稳定性与POL κ肽段融合）与测试化合物预孵育，然后加入孔中。使用HRP标记的抗FLAG抗体检测结合。该检测用于筛选约10,000种化合物，从而鉴定出JH-RE-06为在10 µM浓度下能有效抑制相互作用的先导化合物[1]。
- 使用AlphaScreen检测法定量评估JH-RE-06对REV1 CTD-REV7相互作用的剂量依赖性抑制。将FLAG标记的REV1 CTD（1 nM）与连续稀释的JH-RE-06孵育，然后加入抗FLAG供体珠子。随后加入His8-REV7/3（10 nM），再加入抗His受体珠子。测量化学发光信号并计算IC50[1]。 - 通过等温滴定量热法（ITC）测定结合亲和力和化学计量比。将嵌合REV1 CTD蛋白溶液（300 µM）滴定到含有JH-RE-06（15 µM）的样品池中，缓冲液包含HEPES、KCl、TCEP、DMSO和MPD，温度25°C。分析数据以获得Kd和结合化学计量比[1]。 |
| 细胞实验 |
- 克隆形成存活实验： 接种细胞（例如，每孔300个HT1080细胞）并贴壁24小时。加入顺铂处理24小时。然后更换培养基，并在相应孔中加入JH-RE-06（1.5 µM）再处理24小时。处理后，洗涤细胞，在新鲜培养基中生长7天以形成克隆，然后固定，用考马斯亮蓝染色并计数。计数至少含有40个细胞的克隆，存活率相对于对照进行归一化[1]。
- 细胞活力实验（CellTiter-Glo）： 用JH-RE-06单独或与DNA损伤剂联合处理细胞（例如，96孔板中每孔10,000个细胞）24小时。加入CellTiter-Glo试剂测量ATP水平作为代谢活性细胞的指标。测量化学发光值并相对于对照处理的细胞进行归一化[1]。 - HPRT致突变实验： 细胞首先在HAT选择培养基中生长14天以消除预先存在的HPRT突变体。然后用顺铂（0.5 µM）处理24小时，随后用JH-RE-06（1.5 µM）处理24小时。在普通培养基中进行8天的表型表达期后，将细胞接种在含有毒性鸟嘌呤类似物6-硫鸟嘌呤（6-TG）的培养基中。14-20天后计数在6-TG中存活的HPRT缺陷型突变克隆。突变频率计算为6-TG培养基中的突变体数量与在非选择性培养基中平行接种测定的克隆形成效率的比值[1]。 - 缺口质粒TLS实验： 构建了一个在单链缺口对面含有位点特异性顺铂-1,2-GG加合物的质粒。用JH-RE-06或DMSO预处理的HT1080细胞用该含损伤质粒以及一个更长的竞争性质粒（作为内参）进行转染。4小时后，从细胞中回收质粒DNA，转化到recA-大肠杆菌中，并重新分离。通过PCR扩增跨越损伤的区域，用限制性内切酶消化，产生损伤质粒和竞争性质粒的独特片段，并使用高效液相色谱-质谱联用进行定量，以确定TLS介导的缺口填充效率[1]。 - siRNA敲低和互补实验： 为了敲低REV1，使用核转染装置和缓冲液系统将靶向REV1的siRNA转染进细胞。为了互补，用编码全长小鼠REV1的质粒核转染Rev1−/− MEFs。然后进行细胞存活或致突变实验，以评估JH-RE-06活性对REV1的依赖性[1]。 |
| 动物实验 |
小鼠异种移植瘤模型：将人A375黑色素瘤细胞与基质胶混合，皮下注射到免疫缺陷裸鼠两侧。当肿瘤体积达到约100 mm³时，将小鼠随机分为治疗组（生理盐水组、JH-RE-06单药组、顺铂单药组、联合用药组）。药物制剂由JH-RE-06和/或顺铂溶于10%乙醇、40% PEG400和50%生理盐水的混合溶剂中制成。JH-RE-06的给药剂量为1.6 mg/kg，顺铂的给药剂量为1.0 mg/kg。每周两次，连续5周，通过瘤内直接注射给药（每次100 µL）。用游标卡尺测量肿瘤尺寸，体积计算公式为（宽度² × 长度）/2。同时监测小鼠的存活情况[1]。
|
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
背景与机制：JH-RE-06是一种1,4-二氢喹啉-4-酮衍生物，被发现是一种特异性的诱变性输注合成（TLS）抑制剂。它靶向REV1 CTD上一个浅而动态的表面，该表面通常与Pol ζ的REV7亚基相互作用。JH-RE-06的结合诱导REV1 CTD发生不对称二聚化，形成一个深腔，该深腔包裹化合物并同时阻断REV7结合界面。这种独特的机制阻止了诱变性Pol ζ复合物募集到DNA损伤位点[1]。
- 治疗潜力：通过抑制REV1/Pol ζ依赖的诱变性TLS，JH-RE-06可增强癌细胞对顺铂等DNA损伤化疗药物的敏感性，并抑制治疗诱导的突变。它代表了一类新型的潜在化疗辅助剂，旨在克服内在/获得性化疗耐药性并降低继发性恶性肿瘤的风险[1]。 - 特异性：一种类似物 JH-RE-25，其中关键的二氯苯胺基团被亲水性吗啉取代，在结合和细胞试验中没有活性，这突显了 JH-RE-06 活性所需的相互作用的特异性[1]。 |
| 分子式 |
C20H16CL3N3O4
|
|---|---|
| 分子量 |
468.7177
|
| 精确质量 |
467.02
|
| CAS号 |
1361227-90-8
|
| PubChem CID |
70691604
|
| 外观&性状 |
White to yellow solid powder
|
| LogP |
6.7
|
| tPSA |
104
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
5
|
| 重原子数目 |
30
|
| 分子复杂度/Complexity |
739
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
ClC1C=CC(=C2C(C(=C(NC3C=CC(=CC=3Cl)Cl)NC2=1)C(CC(C)C)=O)=O)[N+](=O)[O-]
|
| InChi Key |
LRTXIQCBQIKIOH-UHFFFAOYSA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C20H16Cl3N3O4/c1-9(2)7-15(27)17-19(28)16-14(26(29)30)6-4-11(22)18(16)25-20(17)24-13-5-3-10(21)8-12(13)23/h3-6,8-9H,7H2,1-2H3,(H2,24,25,28)
|
| 化学名 |
8-chloro-2-(2,4-dichloroanilino)-3-(3-methylbutanoyl)-5-nitro-1H-quinolin-4-one
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~5 mg/mL (~10.67 mM)
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.1335 mL | 10.6673 mL | 21.3347 mL | |
| 5 mM | 0.4267 mL | 2.1335 mL | 4.2669 mL | |
| 10 mM | 0.2133 mL | 1.0667 mL | 2.1335 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
匹伐加宾
磷酸氢化可的松
BAY-784
Gly-PEG3-endo-BCN
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
