Integrin CD11b/CD18
Leukadherin-1 (LA1) acts on integrin CD11b/CD18 (Mac-1/CR3) as an agonist [1]
Leukadherin-1 (LA1) targets integrin CD11b/CD18 (Mac-1) as a small-molecule agonist [2]
Leukadherin-1 (LA1) is a specific agonist of complement receptor 3 (CR3, CD11b/CD18) [3]

白细胞表面整合素 CD11b/CD18（αMβ2；CR3；Mac-1）的一种特殊激动剂是 leukadherin-1。当用 leukadherin-1 预处理时，单核因子刺激的自然杀伤 (NK) 细胞分泌较少的干扰素 (IFN)-γ、肿瘤坏死因子 (TNF) 和巨噬细胞炎症蛋白 (MIP)-1β。用 leukadherin-1 预处理还可减少 TLR-2 和 TLR-7/8 激活的单核细胞释放 TNF、IL-1β 和 IL-6 [3]。

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白细胞粘附素-1是一种特殊的小分子CR3激动剂，在血管损伤和炎症的动物模型中显示出治疗前景。我们发现，白细胞粘附素-1预处理可减少单因子刺激的NK细胞分泌干扰素（IFN）-γ、肿瘤坏死因子（TNF）和巨噬细胞炎性蛋白（MIP）-1β。它与白细胞介素（IL）-12+IL-15刺激后磷酸化信号转导子和转录激活子（pSTAT）-5的减少有关（P<0.02），与IL-12+IL-18刺激后IL-10分泌的增加有关（P<0.001）。白细胞粘附素-1预处理还降低了Toll样受体（TLR）-2和TLR-7/8刺激的单核细胞分泌IL-1β、IL-6和TNF的能力（均P<0.01）。R77H变体不影响NK细胞对使用纯合供体离体细胞的白细胞粘附素-1的反应；与最近的一份报告相反，该变体也没有影响这些细胞类型的CR3表达。这些数据扩展了我们对CR3生物学的理解，表明激活能有效地改变先天免疫炎症信号传导，包括以前未记录的NK细胞功能中的作用。我们讨论了这与SLE发病机制的潜在相关性。白细胞粘附素-1似乎介导其抗炎作用，而与CR3的SLE风险基因型无关，这为其评估白细胞粘附蛋白-1作为自身免疫性疾病的潜在治疗方法提供了进一步的证据[3]。

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Leukadherin-1 (LA1)可剂量依赖性增强转染CD11b/CD18的K562细胞与固定化纤维蛋白原的黏附；同时提升原代人/小鼠中性粒细胞与纤维蛋白原的黏附能力（该效应可被CD11b/CD18阻断抗体IB4、44a消除，且在CD11b基因敲除（CD11b⁻/⁻）中性粒细胞中未观察到）[2]
- Leukadherin-1 (LA1)可降低fMLP刺激的原代小鼠中性粒细胞、MCP-1刺激的THP-1细胞（跨TNF-α激活的HUVEC单层）的趋化能力（平均位移、速度、定向持续性均降低）及跨内皮迁移能力；它可稳定迁移中性粒细胞尾部的CD11b定位，减少其侧向及跨内皮移动[2]
- Leukadherin-1 (LA1)预处理可减少IL-12+IL-15或IL-12+IL-18刺激的人NK细胞分泌IFN-γ、TNF、MIP-1β；降低IL-12+IL-15刺激的NK细胞中磷酸化STAT5（pSTAT5）水平，增加IL-12+IL-18刺激的NK细胞分泌IL-10（对pSTAT4水平无影响）[3]
- Leukadherin-1 (LA1)预处理可减少TLR-2激动剂（Pam3csk4）或TLR-7/8激动剂（R848）刺激的人单核细胞分泌IL-1β、IL-6、TNF；增加R848刺激的单核细胞分泌IL-12，增加Pam3csk4刺激的单核细胞分泌IL-10和IL-12[3]

在支气管肺发育不良 (BPD) 实验模型中，leukadherin-1（1 mg/kg；腹腔注射；每天两次，持续 14 天）有助于预防高氧诱导的新生儿肺损伤[1]。
给予白细胞粘附素-1（LA1）有利于预防高氧诱导的新生儿肺损伤，这是BPD的实验模型。新生大鼠暴露于常氧（21%O2）或高氧（85%O2）环境中，每天两次腹腔注射LA1或安慰剂，持续14天。在安慰剂存在的情况下，高氧暴露导致中性粒细胞和巨噬细胞流入肺泡气室的数量急剧增加。白细胞内流的增加伴随着肺泡化和血管生成的减少，以及肺血管重塑和肺动脉高压（PH）的增加，这是BPD的病理特征。然而，LA1的给药减少了高氧期间肺部巨噬细胞的浸润。此外，LA1治疗改善了肺泡化和血管生成，减少了肺血管重塑和肺动脉高压。这些数据表明，白细胞募集在高氧诱导的BPD实验模型中起着重要作用。使用整合素激动剂LA1靶向白细胞运输有利于预防肺部炎症，并在高氧期间保护肺泡和血管结构。因此，靶向整合素介导的白细胞募集和炎症可能为预防和治疗早产儿BPD提供一种新策略。[1]

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在这里，研究人员使用了一种替代策略，通过用小分子激动剂激活CD11b/CD18来抑制白细胞募集，我们称之为白细胞粘附素（如白细胞粘附蛋白-1（LA1））。这些化合物增加了转染细胞和原代人和小鼠中性粒细胞CD11b/CD18依赖性细胞粘附的程度，导致趋化性和跨内皮迁移减少。白细胞粘附素还减少了大鼠损伤后的白细胞募集和动脉狭窄。此外，与已知的整合素拮抗剂相比，白细胞粘附素在实验性肾炎的小鼠模型中更好地保护了肾功能。白细胞粘附素通过增加白细胞与炎症内皮的粘附来抑制白细胞募集，而阻断抗体可以逆转这一过程。因此，我们提出CD11b/CD18的药理学激活为炎症性疾病提供了一种替代治疗方法。[2]
与用赋形剂预处理的小鼠相比，在注射巯基乙酸前30分钟服用LA1可显著减少40%的中性粒细胞积聚量（P<0.05），而LA2可减少65%（P<0.0001），LA3可减少55%[2]。

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新生大鼠暴露于85%氧浓度（高氧）并接受Leukadherin-1 (LA1)（每日两次腹腔注射，持续14天）处理后，肺部巨噬细胞浸润减少（BAL液及肺组织切片中Mac3⁺细胞数降低），肺匀浆中MCP-1水平下降，肺泡发育改善（放射状肺泡计数增加、平均线性截距降低），血管生成增强（血管密度及VEGF表达升高），肺血管重构减轻（外周血管肌化程度、中膜厚度、WISP-1表达降低），肺动脉高压缓解（右心室肥厚减轻；右心室收缩压（RVSP）呈非显著性下降）[1]
- Leukadherin-1 (LA1)可减少硫代乙醇酸盐诱导的小鼠腹膜炎模型中（4小时）腹腔中性粒细胞募集（在CD11b⁻/⁻小鼠中无此效应）；降低大鼠颈动脉球囊损伤后21天动脉内膜增厚程度（内膜/中膜比降低），减少损伤后3天动脉中CD68⁺巨噬细胞浸润[2]
- 在小鼠实验性肾炎模型中，Leukadherin-1 (LA1)相较于CD11b/CD18拮抗剂M1/70，能更好地保护肾功能（降低蛋白尿及肾小球中性粒细胞浸润）[2]
- Leukadherin-1 (LA1)可减少斑马鱼尾鳍损伤模型中损伤部位的中性粒细胞聚集；小鼠提睾肌静脉活体显微镜显示，LA1可增加白细胞黏附、降低滚动速度、减少跨内皮迁移效率（TEM）[2]

Leukadherin-1，也称为 LA1，是补体受体 3 (CR3) 和白细胞表面整合素 CD11b/CD18 的新型特异性激动剂，可增强白细胞对配体和血管内皮的粘附，从而减少白细胞跨内皮迁移和流入损伤网站。补体受体 3（CR3、CD11b/CD18）是一种多功能受体，主要表达于骨髓细胞和自然杀伤 (NK) 细胞。 Leukadherin-1 (LA1) 不调节信号转导子和转录激活子 (STAT)-4 磷酸化。 Leukadherin-1 调节 TLR-2 和 TLR-7/8 诱导的单核细胞细胞因子分泌。使用整合素激动剂 LA1 靶向白细胞运输，有助于预防肺部炎症并在高氧状态下保护肺泡和血管结构。因此，针对整合素介导的白细胞募集和炎症可能为预防和治疗早产儿 BPD 提供新策略。

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αA结构域配体结合分析[2]
MaxiSorp 96孔板在10 mM磷酸盐缓冲盐水（PBS，pH 7.4）中用纤维蛋白原（每孔1μg）涂覆过夜，并用PBS中的1%BSA封闭。纯化的GST标记的αA结构域（5μg/ml溶液的每孔50μl）与固定的纤维蛋白原的结合在基于TBS的测定缓冲液（TBS含有0.1%BSA、1 mM MgCl2、1 mM CaCl2和0.05%吐温20）（TBS Ca/Mg缓冲液）中在室温下进行1小时。αA结构域也被添加到板上的未涂覆孔中，以估计每个孔中可以捕获和检测的最大蛋白质量，从而进行数据归一化。通过用TBS Ca/Mg缓冲液洗涤孔两次来去除未结合的αA结构域。随后，通过与辣根过氧化物酶偶联的抗GST抗体（GE，1:2000稀释）孵育1小时来测定结合蛋白的量。通过用TBS Ca/Mg缓冲液洗涤孔两次来去除未结合的抗体。根据制造商的方案，用3,3′，5,5′-四甲基联苯胺（TMB）底物试剂盒检测结合蛋白。用SpectraMax M5分光光度计读取吸光度）。吸光度值被归一化，使得输入αA结构域孔的平均吸光度设置为100%，结果以野生型αA结构区总输入量的百分比表示。在三个重复的井中进行了分析，显示的数据来自至少三个独立实验中的一个。

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CD11b/CD18介导的细胞黏附实验：将转染CD11b/CD18的K562细胞或原代中性粒细胞与系列浓度的Leukadherin-1 (LA1)（或赋形剂DMSO）在Ca²⁺/Mg²⁺存在下孵育（以Mn²⁺为阳性对照），随后加入包被纤维蛋白原的培养板；洗去未黏附细胞后定量黏附细胞数；采用CD11b/CD18阻断抗体（IB4/44a）或CD11b⁻/⁻中性粒细胞作为对照，验证CD11b/CD18的特异性[2]

刺激并培养 18 小时（单核细胞）或 24 小时（NK 细胞）后对上清液细胞因子进行定量。除了基于珠子的刺激外，所有实验均在 96 孔板格式中使用 100 µL 细胞进行。 NK 细胞刺激物添加如下：(1) Syk 抑制剂 (1 μM)，(2) Leukadherin-1 或二甲基亚砜 (DMSO)（载体对照）（7.5 μM）。显示可诱导约 82% 的最大反应，且脱靶效应可忽略不计，(3) 抗 CD210 或同种型对照 (5 µg/mL)，(4) 用以下组合刺激 Leukadherin-1 NK 细胞后 30-45 分钟IL-12 (10 ng/mL)、IL-15 (30 ng/mL) 或 IL-18 (10 ng/mL)：IL-12 + IL-15 或 IL-12 + IL-18。使用 pam3csk4（TLR-2 激动剂，300 ng/mL）或 R848（TLR-7/8 激动剂，2 µg/mL）刺激单核细胞。上清液在-80°C 下保存。

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用补体iC3b包被的绵羊红细胞（EiC3bs）进行吞噬试验[2]
如前所述，制备了涂有补体iC3b的绵羊红细胞，并将其用于吞噬试验。将包被的红细胞（EiC3bs）稀释至1.5×107至6×107个细胞/ml的浓度。将K562 CD11b/CD18细胞在TBS中洗涤两次，并重新悬浮至1×106/ml，其中40μl（4×104个细胞）与总体积为100μl的EiC3bs（1.2×106）在37°C下悬浮培养25分钟，CaCl2和MgCl2各有1 mM（在没有或存在50至100μM白细胞粘附素-1（LA1）、LA2或LA3的情况下），在1 mM MnCl2或10 mM EDTA中。如前所述，通过相差显微镜目视分析玫瑰花结的形成[多个红细胞（EiC3bs）与单个K562细胞的结合]来检测结合。对于评分，只有与≥3个EiC3bs结合的K562细胞被评为阳性，在每种情况下，在多个领域检查了>200个细胞。结合结果显示了田间所有显示玫瑰花结的细胞的百分比，以直方图的形式报告，表示三次实验的平均值±SEM；所示数据来自至少三个独立实验中的一个。

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细胞活力测定[2]
使用市售试剂和试剂盒进行细胞活力测定。简而言之，将1×104 K562 CD11b/CD18细胞或野生型B6中性粒细胞在96孔板的每个孔中与越来越多的指定化合物一起孵育，根据制造商的说明，在孵育4小时（中性粒细胞）或24小时（K562细胞）后，用MTS试剂测定活细胞的数量。使用SpectraMaxM5分光光度计读取测定板。数据代表至少两个独立的实验。

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蛋白质印迹分析[2]
将K562 CD11b/CD18细胞与白细胞粘附素-1（LA1）、LA2或LA3（15μM）或纤维蛋白原（200μg）在37°C的无血清培养基中孵育1小时。细胞裂解物在10%SDS-PAGE凝胶上分离，并通过既定的方案转移到聚偏二氟乙烯膜上。将膜与1:1000稀释的抗磷酸化细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）抗体（Thr202/Tyr204）一起孵育，用Reblot温和剥离溶液剥离，然后孵育，首先用抗总ERK1/2抗体，然后用抗甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）抗体，并根据制造商的说明进行开发。所提供的数据代表了至少三个独立的实验。

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中性粒细胞趋化实验：原代野生型小鼠中性粒细胞经Leukadherin-1 (LA1)（或DMSO）处理后，置于含fMLP梯度的Zigmond小室中；通过延时视频显微镜追踪细胞迁移，量化迁移参数（平均位移、速度、定向持续性）；采用免疫荧光（CD11b/F-actin染色）分析CD11b定位[2]
- 跨内皮迁移实验：THP-1细胞经Leukadherin-1 (LA1)（或DMSO）预处理后，加入含TNF-α激活的HUVEC单层的transwell小室（下室含MCP-1梯度）；通过共聚焦显微镜计数黏附及迁移的THP-1细胞数[2]
- NK细胞细胞因子分泌实验：原代人NK细胞经Leukadherin-1 (LA1)（或DMSO）预处理30分钟后，用IL-12+IL-15或IL-12+IL-18刺激24小时；采用流式细胞微球阵列技术（CBA）检测上清中细胞因子（IFN-γ、TNF、MIP-1β、IL-10）水平；通过磷酸流式细胞术（Phosflow）在多个时间点（10分钟至2小时）检测pSTAT4/pSTAT5水平[3]
- 单核细胞细胞因子分泌实验：原代人单核细胞经Leukadherin-1 (LA1)（或DMSO）预处理30分钟后，用TLR-2激动剂（Pam3csk4）或TLR-7/8激动剂（R848）刺激18小时；采用CBA定量上清中细胞因子（IL-1β、IL-6、TNF、IL-10、IL-12）水平[3]

动物/疾病模型：新生 Sprague Dawley 大鼠幼崽[1]
\n剂量：1 mg/kg
\n给药途径：腹腔注射;每日两次，持续 14 天
\n实验结果： 在高氧诱导的 BPD 实验模型中，有利于预防肺部炎症反应，改善肺泡化和血管发育，并减少肺血管重塑和肺动脉高压。\n

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\n动物模型和实验方案 [1]
\n\n新生 Sprague Dawley 大鼠幼崽（每组 n = 12）在出生后第 2 天随机分为四组：常氧（21% O2）加安慰剂组、常氧加白细胞黏附素-1 (LA1)组、高氧（85% O2）加安慰剂组和高氧加白细胞黏附素-1 (LA1)组。大鼠幼崽每天两次腹腔注射白细胞黏附素-1 (LA1)（1 mg/kg，溶于 2% DMSO）或安慰剂（2% DMSO）（等体积），持续 14 天。幼崽在出生后第 15 天处死，用于分析。\n

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\n体内腹膜炎模型 [2]
\n\n按照先前描述的方法，在 8 至 10 周龄的野生型 B6 和 CD11b−/− B6 小鼠中建立硫代乙醇酸盐诱导的腹膜炎模型。在腹腔注射 3% 硫代乙醇酸盐前 30 分钟给予白细胞黏附素。将白细胞黏附素-1 (LA1) 和 LA2（200 μl 50 μM 生理盐水溶液）静脉注射，而将 LA3（500 μl 50 μM 生理盐水溶液）腹腔注射。为了评估腹膜中性粒细胞募集，我们在硫代乙醇酸盐注射后 4、12 或 24 小时处死小鼠；收集腹腔灌洗液，并采用流式细胞术分析表达GR-1和Mac-1表面细胞的迁移中性粒细胞数量，如前所述。\n

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\n抗GBM肾炎[2]
\n\n如前所述，通过腹腔注射绵羊抗兔GBM抗体（0.5 ml/20 g体重/天，连续2天），在野生型B6小鼠（每组n = 4只小鼠）中诱导实验性抗GBM肾炎。一组动物接受白细胞黏附素治疗，方法是从诱导肾炎前2小时开始，每天腹腔注射白细胞黏附素-1 (LA1)（500 μl 50 μM生理盐水溶液），直至实验结束。一组动物接受了已知拮抗剂——阻断抗体M1/70的治疗，具体方法如前所述(76)。简而言之，将M1/70（每次注射100 μg）溶于生理盐水中，每隔一天腹腔注射一次，从诱导肾炎前2小时开始，直至实验结束。每24小时收集尿液，并按照先前描述的方法，使用BSA标准品在SDS-PAGE凝胶上分析尿蛋白。肌酐含量使用肌酐检测试剂盒，并按照制造商的说明进行测定。分别于第0、3和7天处死小鼠，并对每只小鼠进行肾脏活检。组织切片用4%多聚甲醛固定，用于组织化学分析和白细胞计数。\n

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\n中性粒细胞滞留的评估[2]
\n\n为了评估白细胞黏附蛋白是否诱导中性粒细胞的组织滞留，我们用福尔马林固定野生型B6小鼠（每组3只小鼠）的各种器官，并用苏木精-伊红（H&E）染色。在40倍或1000倍放大倍率下，对每个样本随机选取四个视野，以盲法对未处理组和白细胞黏附蛋白-1 (LA1)处理组小鼠的中性粒细胞数量进行定量。骨髓的分离方法如前所述。简而言之，将小鼠安乐死，取出双侧后肢的股骨和胫骨，并去除软组织。将骨骼两端切除，用27号注射器针头将含有10% FBS的RPMI 1640溶液注入骨骼。细胞团块分散后，通过80 μm滤器过滤，并离心收集。用低渗裂解缓冲液去除红细胞（RBC），然后用含有0.1% BSA的HBSS缓冲液洗涤两次。中性粒细胞计数采用流式细胞术测定，方法如前所述。\n

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\n活体显微镜[2]
\n\n在提睾肌外露前3小时，向小鼠阴囊内注射0.25 ml生理盐水中的TNF-α（500 ng）。部分动物在注射TNF-α前30分钟，接受了静脉注射阻断性单克隆抗体M1/70（每只小鼠30 μg，溶于0.1 ml生理盐水）和腹腔注射白细胞黏附素-1 (LA1)（100 μM）或DMSO（溶于0.5 ml生理盐水）。小鼠经腹腔注射氯胺酮（125 mg/kg）、赛拉嗪（12.5 mg/kg）和硫酸阿托品（0.025 mg/kg）麻醉后，置于38°C加热垫上。气管插管和一侧颈动脉插管后，将提睾肌暴露于体外，固定于实验台上，并用预先用5% CO₂/N₂混合气体平衡的温控碳酸氢盐缓冲液（131.9 mM NaCl、18 mM NaHCO₃、4.7 mM KCl、2.0 mM CaCl₂和1.2 mM MgCl₂）灌注。使用频闪闪光落射照明（DPS-1，Rapp OptoElectronic）和卤素透射照明对提睾肌进行照明。使用配备盐水浸没物镜（SW 40/0.75）的活体显微镜观察直径为20至40 mm的毛细血管后静脉。使用电荷耦合器件（CCD）相机（型号SIT66，DAGE-MTI）进行图像记录。在一项有限的分析中，对邻近小静脉的细胞进行计数，以确定迁移的中性粒细胞的数量。每条血管的表面积 (S) 计算公式为 S = πdIν，其中 d 为血管直径，Iν 为血管长度。黏附的白细胞定义为静止超过 30 秒的细胞。

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\n高氧诱导的新生儿肺损伤模型（大鼠）：将新生 Sprague-Dawley 大鼠随机分为常氧组（21% O₂）或高氧组（85% O₂）；高氧暴露组大鼠连续 14 天每天两次腹腔注射白细胞黏附素-1 (LA1)或安慰剂；在第 14 天，处死大鼠，收集支气管肺泡灌洗液 (BAL) 以计数总细胞/巨噬细胞，制备肺匀浆以测量 MCP-1 水平，对肺组织切片进行组织形态计量学分析（径向肺泡计数、平均线性截距）和免疫荧光染色（vWF/α-SMA 用于血管密度），并进行蛋白质印迹法检测 VEGF/WISP-1 表达；测量右心室肥厚 (RVH) 和右心室收缩压 (RVSP) 以评估肺动脉高压 [1]
\n- 硫代乙醇酸盐诱导的腹膜炎症模型（小鼠）：野生型或 CD11b⁻/⁻ 小鼠在预先用 Leukadherin-1 (LA1)、LA2、LA3 或载体处理后，接受腹腔注射硫代乙醇酸盐（或生理盐水作为对照）；注射后 4/12/24 小时收集腹腔液，计数中性粒细胞；分析 LA1 处理组和 DMSO 处理组小鼠中性粒细胞的器官分布 [2]
\n- 大鼠动脉球囊损伤模型：大鼠颈动脉球囊损伤后，腹腔注射 Leukadherin-1 (LA1) 或 DMSO；分别于第 3 天（用于 CD68⁺ 巨噬细胞定量）或第 21 天（用于新生内膜与中膜比率的形态计量分析）采集动脉 [2]
\n- 小鼠肾炎模型：小鼠分别接受 Leukadherin-1 (LA1)、CD11b/CD18 拮抗剂 M1/70 或生理盐水治疗；在多个时间点测量肾小球中性粒细胞计数和蛋白尿水平[2]
\n- 斑马鱼尾鳍损伤模型：用白细胞黏附素-1 (LA1) 或 DMSO 处理斑马鱼幼鱼；诱导尾鳍损伤，并在损伤后 4 小时通过荧光显微镜定量分析损伤部位的中性粒细胞聚集[2]
\n- 活体显微镜（小鼠提睾肌）：用白细胞黏附素-1 (LA1) 或 DMSO 处理小鼠，然后用 TNF-α 刺激提睾肌静脉；通过活体显微镜定量分析白细胞滚动速度、黏附和跨内皮迁移 (TEM)；使用 M1/70（阻断抗体）逆转 LA1 诱导的黏附[2]

[1]. Efficacy of Leukadherin-1 in the Prevention of Hyperoxia-Induced Lung Injury in Neonatal Rats. Am J Respir Cell Mol Biol. 2015;53(6):793-801.

[2]. Small molecule-mediated activation of the integrin CD11b/CD18 reduces inflammatory disease. Sci Signal. 2011;4(189):ra57.

[3]. The complement receptor 3 (CD11b/CD18) agonist Leukadherin-1 suppresses human innate inflammatory signalling. Clin Exp Immunol. 2016;185(3):361-371.

肺部炎症在支气管肺发育不良（BPD）的发病机制中起着关键作用，BPD是一种早产儿慢性肺部疾病。BPD治疗的挑战在于缺乏有效且安全的抗炎药物。白细胞黏附素-1 (LA1) 是一种新型的白细胞表面整合素 CD11b/CD18 激动剂，它能增强白细胞与配体和血管内皮的黏附，从而减少白细胞跨内皮迁移和向损伤部位的浸润。其在预防高氧诱导的新生儿肺损伤中的功能意义尚不清楚。我们假设给予 LA1 可以预防高氧诱导的新生儿肺损伤，并以此作为 BPD 的实验模型。新生大鼠暴露于常氧（21% O2）或高氧（85% O2）环境中，并接受为期 14 天的每日两次腹腔注射 LA1 或安慰剂。在安慰剂存在的情况下，高氧暴露导致中性粒细胞和巨噬细胞大量涌入肺泡腔。这种白细胞浸润增加伴随着肺泡化和血管生成减少，以及肺血管重塑和肺动脉高压（PH）增加，这些都是支气管肺发育不良（BPD）的病理特征。然而，给予LA1可减少高氧期间肺部的巨噬细胞浸润。此外，LA1治疗改善了肺泡化和血管生成，并减少了肺血管重塑和肺动脉高压。这些数据表明，白细胞募集在高氧诱导的BPD实验模型中起着重要作用。使用整合素激动剂LA1靶向白细胞迁移，有助于预防肺部炎症，并在高氧期间保护肺泡和血管结构。因此，靶向整合素介导的白细胞募集和炎症可能为预防和治疗早产儿支气管肺发育不良（BPD）提供一种新的策略。[1]整合素CD11b/CD18（也称为Mac-1）是由α(M) (CD11b)和β(2) (CD18)亚基组成的异二聚体，对白细胞黏附和迁移以及免疫功能至关重要。尽管在实验模型中阻断整合素介导的白细胞黏附是有益的，但在治疗人类炎症性疾病方面效果有限。在此，我们采用了一种替代策略，即通过使用小分子激动剂（我们称之为白细胞黏附素）激活CD11b/CD18来抑制白细胞募集。这些化合物增加了转染细胞以及原代人中性粒细胞和小鼠中性粒细胞的CD11b/CD18依赖性细胞黏附程度，从而降低了趋化性和跨内皮迁移。白细胞黏附蛋白还能减少大鼠损伤后的白细胞募集和动脉狭窄。此外，与已知的整合素拮抗剂相比，白细胞黏附蛋白在实验性肾炎小鼠模型中能更好地保护肾功能。白细胞黏附蛋白通过增加白细胞与炎症内皮细胞的黏附来抑制白细胞募集，而这种抑制作用可被阻断抗体逆转。因此，我们提出，CD11b/CD18的药理学激活可为炎症性疾病提供一种新的治疗方法。[2]我们的结果表明，CR3是该炎症环路的负调控因子，而白细胞黏附蛋白-1能够显著下调NK细胞的细胞因子表达。此外，即使在CR3基因编码功能低下变体的纯合子细胞中，Leukadherin-1同样能够下调信号传导，这可能是因为与天然配体相比，该小分子化合物与CR3结合后，CR3信号转导的机制有所不同。我们未发现Leukadherin-1对NK细胞上CD16结合后细胞因子产生的调节作用。这是否也适用于其他CD16介导的功能，例如抗体依赖性细胞毒性（ADCC），还需要进一步研究。除了记录Leukadherin-1的体外效应外，我们还通过证明其抑制IL-15诱导的转录因子STAT-5磷酸化，部分解释了其在NK细胞中的作用机制。我们的数据表明，白细胞黏附素-1干扰的是STAT-5磷酸化上游或磷酸化过程中发生的事件，例如Janus激酶（JAK）磷酸化或JAK/STAT结合，而非通过STAT去磷酸化机制发挥作用。已有研究表明，与IL-2Rβ和γc链相关的JAK-1和JAK-3的激活对于IL-15诱导的STAT-5酪氨酸磷酸化至关重要。最近在人单核细胞/巨噬细胞中发现，CR3 介导的 JAK 效应，其中用抗 CD18 或抗 CD11b 抗体激活 CR3 可阻断 IL-13 受体相关 JAK-2 和酪氨酸激酶-2 (TYK-2) 激酶的磷酸化，进而抑制下游 STAT-1、STAT-3 和 STAT-6 的酪氨酸和丝氨酸磷酸化。还需要进一步研究以确定 NK 细胞中 Leukadherin-1 介导的 STAT-5 磷酸化抑制的上游机制。[3]

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Leukadherin-1 (LA1) 是一种新型的白细胞表面整合素 CD11b/CD18 (Mac-1/CR3) 小分子激动剂；它增强白细胞与血管内皮细胞和配体的黏附，从而减少白细胞跨内皮迁移和向损伤部位的浸润[1]
- 与整合素拮抗剂（阻断白细胞黏附）不同，白细胞黏附素-1 (LA1) 通过增加白细胞与炎症内皮细胞的黏附（稳定黏附，减少迁移）来减轻炎症性疾病，并且在实验性肾炎中，它比拮抗剂更能保护器官功能[2]
- 白细胞黏附素-1 (LA1) 调节人类的先天免疫信号传导：它抑制NK细胞和单核细胞分泌促炎细胞因子，且其作用不受SLE相关CD11b R77H多态性的影响（该变异不影响NK细胞/单核细胞对LA1的反应或CD11b表面表达）[3]
-白细胞黏附素-1 (LA1) 是一种潜在的炎症性疾病治疗药物（例如，早产儿支气管肺发育不良、血管损伤、肾炎、系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病）[1,2,3]

C22H15NO4S2

421.49

421.044

C, 62.69; H, 3.59; N, 3.32; O, 15.18; S, 15.21

344897-95-6

(Z)-Leukadherin-1;2055362-72-4;ADH-503;2055362-74-6

5342077

Light yellow to yellow solid powder

1.5±0.1 g/cm3

634.7±65.0 °C at 760 mmHg

337.6±34.3 °C

0.0±2.0 mmHg at 25°C

1.756

4.88

128

1

6

5

29

680

0

S1C(N(C(/C/1=C(\[H])/C1=C([H])C([H])=C(C2C([H])=C([H])C(C(=O)O[H])=C([H])C=2[H])O1)=O)C([H])([H])C1C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=1[H])=S

AEZGRQSLKVNPCI-UNOMPAQXSA-N

InChI=1S/C22H15NO4S2/c24-20-19(29-22(28)23(20)13-14-4-2-1-3-5-14)12-17-10-11-18(27-17)15-6-8-16(9-7-15)21(25)26/h1-12H,13H2,(H,25,26)/b19-12-

4-[5-[[4-Oxo-3-(phenylmethyl)-2-thioxo-5-thiazolidinylidene]methyl]-2-furanyl]-benzoic acid

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~5 mg/mL ( 11.86 mM）
Water: Insoluble
Ethanol: Insoluble

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。