Kit (IC50 = 200 nM); Lyn B (IC50 = 510 nM); PDGFRα (IC50 = 540 nM); PDGFRβ (IC50 = 800 nM); Abl1 (IC50 = 1.20 μM)

在剂量 ≤500 nM 时，马沙替尼竞争性抑制 ATP。此外，马赛替尼强烈抑制细胞内激酶 Lyn、重组 PDGFR，并在较小程度上抑制成纤维细胞生长因子受体 3。另一方面，马赛替尼仅轻微抑制 c-Fms 和 Abl。与伊马替尼相比，马替替尼更有效地抑制骨髓肥大细胞迁移、细胞因子生成和脱颗粒。在表达人野生型 Kit 的 Ba/F3 细胞中，马赛替尼抑制 SCF（干细胞因子）诱导的细胞增殖的 IC50 为 150 nM，而抑制 IL-3 刺激的增殖的 IC50 大约 >10 μM。马赛替尼的 IC50 为 300 nM，抑制表达 PDGFRα 的 Ba/F3 细胞中的 PDGFRα 酪氨酸磷酸化和 PDGF-BB 刺激的增殖。此外，在 BMMC 和肥大细胞瘤细胞系中，米赛替尼可防止 SCF 刺激的人 Kit 酪氨酸磷酸化。 masatidinib 抑制 Ba/F3 细胞中的 Kit 功能获得突变体，例如 Δ27 鼠突变体和 V559D 突变体，IC50 分别为 3 nM 和 5 nM。 Mastitinib 抑制肥大细胞瘤细胞系（如 HMC-1α155 和 FMA3）的细胞生长，其 IC50 分别为 10 和 30 nM [1]。两种新的 ISS 细胞系显示出生长和 PDGFR 磷酸化，表明马赛替尼对原发性和转移性 ISS 细胞系具有疗效，并有助于 ISS 临床护理 [2]。

在表达 Δ27 的 Ba/F3 肿瘤模型中，甲磺酸马赛替尼 (30 mg/kg) 可减少肿瘤生长并延长中位生存时间，且不会引起遗传毒性或心脏毒性 [1]。与安慰剂相比，甲磺酸马赛替尼（12.5 mg/kg/d，口服）可延长肿瘤生长前的时间[3]。 与安慰剂相比，马赛替尼（12.5 mg/kg/d PO）可增加狗的总体 TTP（肿瘤进展时间）。马赛替尼/吉西他滨组合在体外显示出对吉西他滨难治性细胞系 Mia Paca2 和 Panc1 增殖的协同作用，对 NogCID 小鼠中的 Mia Paca-2 胰腺肿瘤的增殖也有较小程度的协同作用。

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与安慰剂相比，马西替尼的总TTP从75天增加到118天（P=0.038）。当masitinib用作一线治疗时，这种效果更为明显，中位TTP从75天增加到253天（P=0.001），无论肿瘤是表达突变体（83对未达到[P=.009]）还是野生型KIT（66对253[P=.008]）。马西替尼通常耐受良好，轻度（I级）或中度（II级）腹泻或呕吐是最常见的不良事件。 结论和临床重要性：马西替尼在延缓复发性或不可切除的II级或III级非转移性MCT犬的肿瘤进展方面是安全有效的[3]。

将 96 孔微量滴定板用 0.25 mg/mL 聚（Glu，Tyr 4:1）包被一整夜。然后用 250 µL 洗涤缓冲液（10 mM 磷酸盐缓冲盐水 [pH 7.4] 和 0.05% Tween 20）冲洗两次，并在室温下干燥两小时。测定在室温下进行，最终体积为 50 µL 激酶缓冲液（10 mM MgCl₂、1 mM MnCl₂、1 mM 原钒酸钠、20 mM HEPES ，pH 7.8），含有重组酶和 ATP，每种酶的浓度至少是 K_m 的两倍，以保证线性反应速率。添加酶以启动反应，并通过每 5mol/Lurea 混合物添加一反应体积 (50 μL) 的 100 mM EDTA 来停止反应。将板洗涤三次，然后与四甲基联苯胺和 1:30,000 辣根过氧化物酶缀合的抗磷酸酪氨酸单克隆抗体一起孵育。使用分光光度法在 450 nm 处测量最终反应产物。

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重组蛋白激酶的体外检测[1]
补充方法中提供了重组人KIT细胞内结构域和其他蛋白激酶（包括Lyn、血小板衍生生长因子受体β、表皮生长因子受体、成纤维细胞生长因子受体1、Src、HCK、PYK、FES、Btk、Bmx、c-Ret、c-Fms、Syk和c-Met）产生的全部细节（见支持信息；方法S1）。用Proqinase对ABL1、Akt1、蛋白激酶C-α、胰岛素样生长因子受体1和Pim1进行了实验。所有其他重组蛋白激酶都是在内部使用酶联免疫测定法进行的；补充方法中提供了实验细节（见支持信息；方法S1）。

将微量滴定板在 37°C 下以 10⁴ 细胞/孔接种到 100 μL 含有 10% 胎牛血清的 RPMI 1640 培养基中，以进行 Ba/F3 细胞增殖测定。向其中添加或不添加 250 ng/mL 的鼠 SCF 或来自 X63-IL-3 细胞的 0.1% 条件培养基。从产生 SCF 的 CHO 细胞的条件培养基中纯化得到的鼠 SCF 可以激活 Kit。将马赛替尼生长的细胞与 WST-1 试剂（10 μL/孔）一起在 37°C 下孵育 48 小时，持续三小时。使用扫描多孔分光光度计，甲臜染料在 450 nm 处的吸光度表明其形成量。分光光度计的背景对照是不含细胞的空白孔。

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如Royer等人之前所述（见支持信息；方法S1），对通过长期培养从正常脐带血纯化的CD34+祖细胞产生的CBMC进行了评估，评估了masitinibb和伊马替尼对人类肥大细胞脱颗粒反应和细胞因子产生（TNF-α释放）的影响。收获培养的细胞，在完全IMDM培养基中洗涤，并在不同浓度的masitinib或伊马替尼中孵育1小时。通过用1µg/ml的山羊抗人IgE刺激CBMC 30分钟或4小时，分别进行β-己糖胺酶释放和TNF-α释放的测定。在上清液和超声处理的细胞颗粒中测量β-己糖胺酶，并计算其净释放量。对于TNF-α测定，通过离心收集无细胞上清液，并在-80°C下冷冻，直至根据制造商的说明使用特定的ELISA试剂盒测定介质含量。所有测定均重复进行，每个孔重复计数两次。结果以β-己糖胺酶释放和TNF-α释放的抑制百分比表示，相对于受刺激的未经治疗的CBMC（即100%的刺激）。

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血小板源性生长因子受体（PDGFR）的失调可能在猫注射部位肉瘤（ISS）细胞的生长和存活中发挥作用Masitinib是一种酪氨酸激酶抑制剂，被批准用于治疗犬肥大细胞肿瘤，对PDGFR信号通路具有高度选择性，可能为这种疾病提供一种新的治疗方法。研究了masitinib对两种新型ISS细胞系的生长、凋亡和PDGFR信号传导的体外影响。在来源于原发性ISS肿瘤（JB）和相应的经组织学证实的ISS肺转移（JBLM）的细胞系中，通过蛋白质印迹证实了PDGFR的表达。马西替尼抑制了两种细胞系的细胞生长和PDGFR磷酸化。与调节配体诱导的PDGFR自磷酸化相比，抑制生长需要更高的药物浓度。这些体外数据表明，masitinib对原发性和转移性ISS细胞系都显示出活性，可能有助于ISS的临床管理[2]。

溶于DMSO；
30 mg/kg（腹腔注射）或10、30或45 mg/kg（口服）；腹腔注射或灌胃
雌性MBRI Nu/Nu小鼠携带a/F3 Δ27肿瘤模型

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7周龄雄性Nog-SCID小鼠饲养于无病原体环境中，随时提供过滤水和食物。它们经历12小时光照/12小时黑暗循环。根据上述描述培养Mia Paca-2细胞。在第0天（D0），将含有10⁷个Mia Paca-2细胞的200 µL PBS注射到小鼠右侧腹部。当肿瘤达到约200 mm³的目标大小后，允许其生长1.5至4周。为了确保各治疗组的平均体重和肿瘤体积匹配良好，在第28天将动物分为四组（n = 7–8）。动物接受最多四周的治疗后处死。治疗方案如下：a) 每日灌胃给予100 mg/kg马西替尼；b) 每周两次腹腔注射50 mg/kg吉西他滨；c) 每日灌胃给予100 mg/kg马西替尼；或d) 每日灌胃给予100 mg/kg马西替尼联合每周两次腹腔注射50 mg/kg吉西他滨。使用游标卡尺测量肿瘤大小，并使用公式体积 = (长度 × 宽度²)/2 估算肿瘤体积。 （100）×（治疗组肿瘤体积中位数）/（对照组肿瘤体积中位数）是肿瘤生长抑制率的计算公式。

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使用 Ba/F3 Δ27 肿瘤模型进行体内试验[1]
雌性 MBRI Nu/Nu 小鼠（7 周龄）饲养于特定病原体清除（SPF）条件下，温度为 20±1°C，光照/黑暗周期为 12 小时/12 小时，并可自由摄取食物和过滤水。实验前，小鼠在实验条件下适应 10 至 20 天。表达 Δ27 的 Ba/F3 细胞在添加了谷氨酰胺-1 和 10% 胎牛血清的 RPMI 1640 培养基中，于 37°C、5% CO2 的湿润环境中培养。将细胞离心后，用磷酸盐缓冲液重悬，浓度为 5×10⁶ 或 7.5×10⁶ 个细胞/ml。小鼠接受 5 Gy γ 射线照射，24 小时后，在其右侧腹部注射 1.5×10⁶ 个 Δ27 Ba/F3 细胞。当肿瘤生长至预期大小后，将小鼠随机分组，确保各组小鼠的平均体重和肿瘤体积无统计学差异。所有动物均在注射当天及之后每 5 天测量体重，并在治疗期间每 5 天使用游标卡尺测量肿瘤大小，以估算肿瘤体积。在给药前和给药后 2 周内，每天检查动物的死亡或疾病症状一次，治疗期间增加至每天检查两次。

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背景：KIT受体酪氨酸激酶的激活与犬肥大细胞瘤（MCT）的发生发展相关。[3]
假设/目的：评估强效且选择性KIT抑制剂masitinib治疗犬MCT的疗效。[3]
动物：202只患有非转移性复发性或不可切除的II级或III级MCT的犬只（均为宠物犬）。[3]
方法：双盲、随机、安慰剂对照的III期临床试验。犬只分别接受masitinib（12.5 mg/kg/d，口服）或安慰剂治疗。评估肿瘤进展时间（TTP）、总生存期、6个月时的客观缓解率和毒性。[3]

此外，在腹腔内模型中，马西替尼显著提高了生存率，且未显示任何全身毒性，如给药剂量下未出现体重减轻所示。[1]

[1]. Masitinib (AB1010), a Potent and Selective Tyrosine Kinase Inhibitor Targeting KIT. PLoS One, 2009, 4(9), e7258.

[2]. Masitinib demonstrates anti-proliferative and pro-apoptotic activity in primary and metastatic feline injection-site sarcoma cells. Vet Comp Oncol, 2011, doi: 10.1111/j.1476-5829.2011.00291.x.

[3]. Masitinib is safe and effective for the treatment of canine mast cell tumors. J Vet Intern Med, 2008, 22(6), 1301-1309.

[4]. Masitinib (AB1010), from canine tumor model to human clinical development: where we are? Crit Rev Oncol Hematol. 2014 Jul;91(1):98-111.

甲磺酸马沙替尼是马沙替尼的口服生物利用度高的甲磺酸盐，马沙替尼是一种多靶点蛋白酪氨酸激酶抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。马沙替尼选择性地结合并抑制干细胞因子受体（c-Kit；SCFR）、血小板衍生生长因子受体（PDGFR）、成纤维细胞生长因子受体3（FGFR3）的野生型和突变型，以及在较小程度上抑制黏着斑激酶（FAK）。因此，在过度表达这些受体酪氨酸激酶 (RTK) 的癌细胞类型中，肿瘤细胞增殖可能受到抑制。

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药物适应症
治疗肌萎缩侧索硬化症。
治疗肥大细胞增多症。
治疗无法切除的局部晚期或转移性胰腺癌。
治疗无法切除和/或转移性恶性胃肠道间质瘤 (GIST)。
治疗经确认存在 c-KIT 酪氨酸激酶受体突变的无法切除的犬肥大细胞瘤（2 级或 3 级）。
治疗肌萎缩侧索硬化症。
治疗肥大细胞增多症。
治疗胃肠道间质瘤。

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马西替尼属于苯甲酰胺类药物， 4-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]苯甲酸的羧基与4-甲基-N(3)-[4-(吡啶-3-基)-1,3-噻唑-2-基]苯-1,3-二胺的伯氨基缩合而成的羧酰胺。它是一种高选择性口服酪氨酸激酶抑制剂。它具有酪氨酸激酶抑制剂、抗肿瘤药和抗风湿药的双重作用。它属于N-烷基哌嗪类，是1,3-噻唑类、吡啶类和苯甲酰胺类化合物。
马西替尼是一种酪氨酸激酶抑制剂，用于治疗犬的肥大细胞瘤。自2009年起，它以商品名Masivet在欧洲上市。在美国，该药以 Kinavet 的名称销售，自 2011 年起已获准用于兽医领域。
马西替尼是一种多靶点蛋白酪氨酸激酶抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。给药后，马西替尼可选择性地结合并抑制干细胞因子受体 (c-Kit; SCFR)、血小板衍生生长因子受体 (PDGFR)、成纤维细胞生长因子受体 3 (FGFR3) 的野生型和突变型，以及在较小程度上抑制黏着斑激酶 (FAK)。因此，在过度表达这些受体酪氨酸激酶 (RTK) 的癌细胞类型中，肿瘤细胞增殖可能受到抑制。
另见：甲磺酸马西替尼（注释已移至）。

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药物适应症
治疗肌萎缩侧索硬化症。
治疗肥大细胞增多症。
治疗无法切除的局部晚期或转移性胰腺癌。
治疗无法切除和/或转移性恶性胃肠道间质瘤 (GIST)。

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背景[1]
干细胞因子受体 KIT 是治疗癌症、肥大细胞增多症和炎症性疾病的靶点。本文对马西替尼（AB1010）进行了体外和体内特性分析，马西替尼是一种新型的苯氨基噻唑类酪氨酸激酶抑制剂，靶向KIT。[1]
方法/主要发现[1]
体外实验表明，马西替尼对KIT的活性和选择性均高于伊马替尼，其对重组人野生型KIT的抑制半数抑制浓度（IC50）为200±40 nM，并且在表达人或小鼠野生型KIT的Ba/F3细胞中，其对干细胞因子诱导的增殖和KIT酪氨酸磷酸化的抑制IC50为150±80 nM。马西替尼还能强效抑制重组PDGFR和细胞内激酶Lyn，对成纤维细胞生长因子受体3的抑制作用较弱。相比之下，马西替尼对ABL和c-Fms的抑制作用较弱，且对多种其他酪氨酸激酶和丝氨酸/苏氨酸激酶无活性。马西替尼的这种高度选择性表明，与其他酪氨酸激酶抑制剂相比，它具有更好的安全性；事实上，动物研究中未观察到马西替尼引起的心脏毒性或遗传毒性。分子建模和动力学分析表明，马西替尼的结合模式与伊马替尼不同，并且马西替尼对脱颗粒、细胞因子产生和骨髓肥大细胞迁移的抑制作用强于伊马替尼。此外，马西替尼还能强效抑制具有近膜结构域激活突变的人类和小鼠KIT蛋白。在体内，马西替尼可抑制皮下移植表达近膜KIT突变体的Ba/F3细胞的小鼠的肿瘤生长。[1]
结论[1]
马西替尼是一种强效且选择性的酪氨酸激酶抑制剂，靶向KIT，具有活性，口服生物利用度高，且毒性低。[1]

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甲磺酸马西替尼（AB1010）是一种新型强效且选择性的酪氨酸激酶抑制剂，主要靶向野生型和突变型c-Kit受体（c-KitR）、血小板衍生生长因子受体α/β（PDGFRα/β）、淋巴细胞特异性激酶（Lck）、Lck/Yes相关蛋白（LYn）、成纤维细胞生长因子受体3（FGFR3）和黏着斑激酶（FAK）。马西替尼是首个获批用于治疗携带激活型c-KitR突变的不可切除犬肥大细胞瘤（CMCT）的兽医抗癌疗法，推荐剂量为每日一次，每次12.5mg/kg。马西替尼主要通过抑制肥大细胞c-KitR抗血管生成通路发挥抗增殖作用，从而促进肿瘤进展，同时还具有化疗增敏作用。目前，马西替尼正在针对多种人类恶性肿瘤（包括胃肠道间质瘤、急性髓系白血病、系统性肥大细胞增多症、胰腺癌、多发性骨髓瘤、非小细胞肺癌、黑色素瘤、卵巢癌和前列腺癌）进行临床研究，这些肿瘤均具有与犬类类似的c-KIT原癌基因突变特征。本文分析了马西替尼的结构活性、与伊马替尼相比的药代动力学、c-KitR通路（指最常见的c-KIT突变对这种新型药物的敏感性或耐药性，并与伊马替尼进行比较）以及马西替尼的安全性。此外，我们还探讨了临床前和临床（已完成和正在进行的）试验，旨在强调这种新型抗血管生成疗法（最初获批用于CMCTs，目前正在开发用于治疗多种人类肿瘤）可能代表转化肿瘤学领域的一个里程碑，将小鼠癌症实验模型与犬自发性肿瘤模型相结合。[4]

C29H34N6O4S2

594.74

594.208

C, 58.57; H, 5.76; N, 14.13; O, 10.76; S, 10.78

1048007-93-7

Masitinib;790299-79-5

25024769

White to yellow solid powder

5.212

167.61

3

10

7

41

788

0

TXCWBWKVIZGWEQ-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C28H30N6OS.CH4O3S/c1-20-5-10-24(16-25(20)31-28-32-26(19-36-28)23-4-3-11-29-17-23)30-27(35)22-8-6-21(7-9-22)18-34-14-12-33(2)13-15-34;1-5(2,3)4/h3-11,16-17,19H,12-15,18H2,1-2H3,(H,30,35)(H,31,32);1H3,(H,2,3,4)

methanesulfonic acid;4-[(4-methylpiperazin-1-yl)methyl]-N-[4-methyl-3-[(4-pyridin-3-yl-1,3-thiazol-2-yl)amino]phenyl]benzamide

Masitinib mesilate; Masitinib Mesylate Salt; 1048007-93-7; Masitinib (mesylate); Masivet; Masitinib Mesylate

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

1M HCl : 100 mg/mL (~168.14 mM)
DMSO : ≥ 30 mg/mL (~50.44 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。