MitoBloCK-6

Erv1 (IC50 = 900 nM); ALR (IC50 = 700 nM); Erv2 (IC50 = 1.4 μM)
Erv1 (yeast sulfhydryl oxidase) - IC50 = 900 nM [1]
ALR (mammalian homolog of Erv1, Augmenter of Liver Regeneration) - IC50 = 700 nM [1]
Erv2 (yeast endoplasmic reticulum paralog) - IC50 = 1.4 μM [1]
MitoBloCK-6's primary target is the Erv1/ALR enzyme, a key component of the mitochondrial intermembrane space (IMS) import machinery. It inhibits Erv1 (yeast sulfhydryl oxidase) with an IC50 of 900 nM and ALR (the mammalian homolog) with an IC50 of 700 nM. MitoBloCK-6 also inhibits Erv2 (the yeast endoplasmic reticulum paralog) with an IC50 of 1.4 µM. By inhibiting Erv1/ALR, it disrupts the oxidative folding of proteins imported into the mitochondrial IMS, thereby attenuating protein translocation into mitochondria.

MitoBloCK-6 在体外 Amplex Red-HRP 检测中抑制 Erv1 氧化酶活性，IC50 值为 900 nM。它还抑制 ALR 和 Erv2，IC50 值分别为 700 nM 和 1.4 μM。[1] - MitoBloCK-6 在胰岛素还原检测中不抑制蛋白质二硫键异构酶 (PDI) 的氧化折叠活性。[1] - 使用 Clark 型氧电极测定分离线粒体中线粒体呼吸链的琥珀酸脱氢酶活性时，MitoBloCK-6 也不抑制该酶活性。 [1] LC-MS 分析表明，MitoBloCK-6 在 pH 值范围（3.4、6.5 和 7.4）内稳定，保留时间相近（3.03 分钟），曲线下面积也保持恒定。[1] 质谱分析显示，仅有少量（<3%）的 MitoBloCK-6 可能降解为 3,5-二氯水杨醛，后者与 Erv1 发生共价修饰。大部分 Erv1 未被修饰。[1] 在重组氧化实验中，浓度为 5、10、25 和 50 μM 的 MitoBloCK-6 抑制了 Tim13 的氧化。 3小时后，DMSO对照组中约80%的Tim13被氧化，而MitoBloCK-6处理组仅有15%的Tim13被氧化。[1] - MitoBloCK-6以剂量依赖的方式显著降低了Tim13和Cmc1氧化过程中H2O2的生成（Cmc1与Erv1的测试浓度为2.5、5、10、25和50 μM；Cmc1与ALR的测试浓度为50 μM）。[1] - 在过量DTT存在下，使用氧电极进行耗氧量测定时，MitoBloCK-6（100 μM）导致Erv1的耗氧速率呈浓度依赖性降低。 [1]
体外实验表明，MitoBloCK-6 在 Amplex Red-HRP 检测中能以 900 nM 的 IC50 值抑制 Erv1 氧化酶活性。它还能分别以 700 nM 和 1.4 µM 的 IC50 值抑制 ALR 和 Erv2 的氧化酶活性。重要的是，MitoBloCK-6 在胰岛素还原实验中不抑制蛋白质二硫键异构酶 (PDI) 的氧化折叠活性，表明其对 Erv1/ALR 具有选择性。此外，它也不抑制分离线粒体中线粒体呼吸链的琥珀酸脱氢酶活性。在重组氧化实验中，浓度为 20 µM 的 MitoBloCK-6 可使 Tim23 和 AAC 的输入量降低约 50%。质谱分析表明，仅有少量（<3%）MitoBloCK-6可能降解为3,5-二氯水杨醛，后者与Erv1发生共价修饰，而大部分Erv1保持未修饰状态。MitoBloCK-6在pH 3.4、6.5和7.4范围内均保持稳定。

在斑马鱼胚胎中：受精后3小时的斑马鱼胚胎用2.5 μM的MitoBloCK-6处理，直至受精后72小时，出现腹侧弯曲和心脏水肿。心脏发育迟缓，心脏无法形成环状结构，变得细长且呈条索状。心脏组织中的线粒体荧光（DsRed）降低。与DMSO对照组相比，心率降低了50%。观察到红细胞聚集在卵黄囊周围，尾部无红细胞。24小时后去除MitoBloCK-6，这些影响均可逆转。更高浓度的MitoBloCK-6具有毒性。 [1]
- 斑马鱼联合治疗：使用亚最佳浓度的MitoBloCK-6（1或2 μM）联合亚最佳剂量的ALR ATG吗啉（1或2 ng）治疗，可导致叠加的发育缺陷（心脏水肿、荧光强度降低），与单独使用2.5 μM MitoBloCK-6或4 ng吗啉治疗的效果相似。[1]
在细胞模型中，MitoBloCK-6可通过释放细胞色素c诱导人胚胎干细胞（hESCs）凋亡。它能减弱Erv1底物进入酵母线粒体，并在体外重组实验中抑制Tim13和Cmc1的氧化。其调节线粒体完整性的能力使其在研究癌症代谢和神经退行性疾病方面具有重要价值。

高通量筛选 Amplex Red-HRP 检测：将重组 Erv1 (10 μM) 分装至 384 孔板中。加入化合物（终浓度约为 12.5 μM）或 DMSO，并在 25°C 下孵育 1 小时。随后加入 Amplex Red（终浓度 46 μM）和辣根过氧化物酶（终浓度 0.092 U/ml），继续孵育 10 分钟。加入 DTT（终浓度 20 μM）启动反应。孵育 12 分钟后（以在动力学线性范围内达到最大信噪比），在激发波长 545 nm 和发射波长 590 nm 处测量荧光强度。为排除直接抑制检测系统的假阳性结果，在化合物存在下，用 H₂O₂ (800 nM) 与 Amplex Red-HRP 进行反向筛选。 [1]
- IC50 测定：将化合物用 100% DMSO 进行系列稀释，然后加入含有 10 μM Erv1、Erv2 或 ALR 的测定板孔中。测定方法与高通量筛选 (HTS) 方法类似，IC50 值根据剂量反应曲线计算得出。[1]
- PDI 胰岛素还原测定：在 MitoBloCK-6 存在下评估 PDI 还原胰岛素的能力，以检测氧化还原活性酶的总体损伤情况。[1]
- 琥珀酸脱氢酶活性测定：将分离的线粒体在 Clark 型氧电极中孵育，加入琥珀酸后测量耗氧量。加入 MitoBloCK-6 或 DMSO 以评估其对琥珀酸脱氢酶的影响。丙二酸用作对照抑制剂，CCCP 用于解偶联呼吸作用。 [1]
- LC-MS稳定性分析：采用液相色谱-质谱联用技术在pH 6.5、7.4和3.4条件下评估MitoBloCK-6的稳定性。分析了保留时间和曲线下面积。[1]
- 共价修饰的质谱分析：将Erv1 (25 μM) 与MitoBloCK-6 (75 μM) 或3,5-二氯水杨醛 (75 μM) 孵育。进行质谱分析以检测共价加合物。溶菌酶用作对照蛋白，甲醛用作共价修饰的阳性对照。[1]
- 重组Tim13氧化测定：在有氧环境下，将还原型Tim13 (15 μM) 与催化量的Erv1 (1 μM) 和Mia40 (1 μM) 孵育，有或无MitoBloCK-6存在。在指定时间点，取出等分试样，并加入4-乙酰氨基-4-马来酰亚胺基芪-2,2-二磺酸（AMS）修饰Tim13上的游离巯基。通过非还原性SDS-PAGE和抗Tim13抗体免疫印迹法检测氧化和还原的Tim13。[1]
- 重组H₂O₂生成测定：进行与Tim13或Cmc1氧化相同的重组测定，并使用Amplex Red-HRP测定法监测30分钟内的H₂O₂生成。[1]
- Erv1耗氧量测定：在过量DTT存在下，使用Clark型氧电极测定Erv1氧化酶活性。分别在单独加入Erv1、Erv1与DMSO或Erv1与不同浓度的MitoBloCK-6后记录耗氧速率。 [1]提供的搜索结果中并未详细列出MitoBloCK-6的具体体内活性数据。作为一种研究线粒体蛋白导入的研究工具，其作用主要在细胞和生化系统中进行研究。体内研究可能需要对动物模型进行给药，以评估其对线粒体功能的影响及其在线粒体功能障碍相关疾病中的潜在作用。

在分离的酵母线粒体中进行导入实验：将通电的野生型酵母线粒体与 20-50 μM MitoBloCK-6 或 1% DMSO 预孵育 15 分钟，然后加入放射性标记的底物（Mia40、Cmc1、Cox19、Tim8、Tim23、AAC、Su9-DHFR）。进行时间进程实验，并取等分试样用蛋白酶处理以去除未导入的前体。CX9C 双链蛋白和 Erv1 的导入显著降低；Tim8 的导入降低了 40%；TIM22 底物（Tim23、AAC）在 20 μM 浓度下降低了约 50%；TIM23 底物（Su9-DHFR、cyt b2-DHFR、Hsp60）即使在 50 μM 浓度下也未受到影响。 [1]
- AAC导入的蓝胶天然PAGE分析：在DMSO或25 μM MitoBloCK-6存在下，将AAC导入线粒体。取等分试样，用1%洋地黄皂苷溶解线粒体，并在蓝胶天然凝胶上进行分离，随后进行放射自显影或用抗Tom40抗体进行免疫印迹分析。在DMSO存在下，AAC以90 kDa复合物（组装的二聚体）的形式积累。在MitoBloCK-6存在下，AAC与TOM复合物以500 kDa复合物的形式积累，并且该中间体对蛋白酶敏感。 [1]
- 在过表达 Erv1 的线粒体中进行导入实验：在从野生型酵母或过表达 Erv1-His ([a2up]Erv1) 的酵母中分离的线粒体中进行了 Mia40、Cmc1 和 AAC 的导入实验。抑制导入所需的 MitoBloCK-6 浓度，Mia40 和 Cmc1 从 10 μM 增加到 50 μM，AAC 从 15 μM 增加到 30 μM。[1]
- 在酵母中测定 MIC50：在 Δpdr5Δsnq2 酵母菌株（缺乏多药耐药泵）和从高拷贝质粒过表达 Erv1-His 的相同菌株中测定了 MitoBloCK-6 的 MIC50。亲本菌株的MIC50为15.2 μM，在Erv1过表达菌株中增加至28.3 μM。[1]
- 线粒体完整性检测：将分离的活化线粒体与1% DMSO或MitoBloCK-6孵育，然后离心。用考马斯亮蓝染色和免疫印迹法分析上清液中释放的蛋白质，检测标记蛋白（乌头酸酶、AAC、Tim54、Mia40、Ccp1、细胞色素c）。未检测到蛋白质释放，表明MitoBloCK-6不改变线粒体膜的完整性。[1]
- 膜电位检测：将分离的线粒体在Clark型氧电极中孵育，并用NADH启动呼吸作用。加入DMSO溶剂或MitoBloCK-6后测量耗氧率。 CCCP用作对照以解偶联线粒体。MitoBloCK-6不改变耗氧率。[1]
- 从分离的线粒体中进行共免疫沉淀：将Erv1-His菌株的线粒体与50 μM MitoBloCK-6或1% DMSO在25°C下孵育30分钟，然后用1%洋地黄皂苷溶解。用Ni²-琼脂糖纯化Erv1-His。洗脱结合的蛋白质，并通过免疫印迹分析Mia40和细胞色素c。在MitoBloCK-6存在的情况下，Mia40和细胞色素c与Erv1的结合分别降低了75%和95%。 [1] HeLa细胞实验：将瞬时转染线粒体基质靶向Su9-EGFR的HeLa细胞用50 μM MitoBloCK-6处理12-16小时。用Mitotracker-Red共标记后，通过显微镜观察线粒体形态。即使浓度高达100 μM，也未观察到线粒体网络的破坏。MTT细胞活力检测表明，100 μM MitoBloCK-6并未显著降低细胞活力。细胞色素c释放实验表明，与星形孢菌素（阳性对照）不同，50 μM MitoBloCK-6处理12-16小时未能诱导细胞色素c释放。 [1]
- hESC (HSF1) 检测：用 20 μM MitoBloCK-6、ES-1、ES-2 或 0.1% DMSO 处理 HSF1 人胚胎干细胞。MitoBloCK-6 和 ES-2（而非 ES-1）诱导了显著的细胞死亡和凋亡。使用抗细胞色素 c 和抗 Tomm20 抗体的免疫荧光显微镜显示，MitoBloCK-6 和 ES-2 导致细胞色素 c 从线粒体释放（弥散染色，与 Tomm20 不重叠）。定量分析表明，细胞色素 c 释放的细胞百分比与放线菌素 D（一种已知的凋亡诱导剂）诱导的细胞百分比相似。Western blot 分析检测到 MitoBloCK-6 处理后 caspase-3 和 PARP 的裂解。碱性磷酸酶活性染色显示，经 MitoBloCK-6 处理 5 小时后，hESC 的活力开始下降。用 10 μM 维甲酸处理 HSF1 细胞 4 天使其分化，使其对 MitoBloCK-6 诱导的细胞死亡产生抵抗力。[1] MitoBloCK-6 的体外活性主要通过无细胞酶活性测定进行评估。Erv1 氧化酶活性采用 Amplex Red-HRP 法测定。在该测定中，Erv1 催化还原性底物（例如二硫苏糖醇）的氧化，并将氧气还原为过氧化氢，然后在辣根过氧化物酶 (HRP) 存在下，通过 Amplex Red 进行检测。MitoBloCK-6 对该活性的抑制作用通过分光光度法测定。蛋白质二硫键异构酶 (PDI) 活性采用胰岛素还原法进行评估。在该方法中，PDI 在二硫苏糖醇存在下催化胰岛素的还原，导致胰岛素 B 链沉淀，并通过浊度法测定其含量。线粒体呼吸链活性，特别是琥珀酸脱氢酶活性，采用克拉克型氧电极监测分离线粒体中的耗氧量进行测定。对于细胞实验，将酵母细胞（例如酿酒酵母）或哺乳动物细胞系培养于合适的培养基中。用不同浓度（通常为 1 至 50 µM）的 MitoBloCK-6 处理细胞不同时间（例如 2 至 24 小时）。线粒体蛋白（例如 Tim13、Cmc1、Tim23、AAC）的导入通过放射性标记或表位标记的蛋白进行评估，随后进行亚细胞分级分离，并通过 SDS-PAGE 和放射自显影或蛋白质印迹法进行分析。hESC 细胞凋亡的评估方法是：使用蛋白质印迹法或 ELISA 检测线粒体释放到胞质中的细胞色素 c。细胞活力的测定采用 MTT 或台盼蓝排除法等标准方法。

斑马鱼胚胎处理：受精后3小时（hpf）的斑马鱼胚胎分别置于1% DMSO（溶剂对照）或2.5 μM MitoBloCK-6（溶于缓冲水中）中。胚胎发育至72 hpf，并通过显微镜观察发育情况。为研究可逆性，胚胎在3至24 hpf期间用MitoBloCK-6处理，随后去除该化合物，继续发育至72 hpf。[1]
- 斑马鱼邻二甲氧基联苯胺染色：72 hpf的胚胎用邻二甲氧基联苯胺染色，该化合物可与血红素结合，以观察造血发育和红细胞。 [1]
- 斑马鱼心脏成像：使用了一种转基因斑马鱼品系，其DsRed基因在心脏特异性心肌肌球蛋白轻链启动子（cmlc2）的控制下靶向线粒体。胚胎分别用DMSO或2.5 μM MitoBloCK-6处理，并在受精后72小时（hpf）通过荧光显微镜观察心脏发育和线粒体荧光。同时测量心率。[1]
- 斑马鱼吗啉代寡核苷酸注射：将4 ng靶向ALR的ATG吗啉代寡核苷酸注射到单细胞斑马鱼胚胎中，以抑制ALR的翻译。将表型与MitoBloCK-6处理的胚胎进行比较。在联合用药研究中，将胚胎用亚最佳浓度的MitoBloCK-6（1或2 μM）处理，并注射不同剂量的亚最佳ALR ATG吗啉代寡核苷酸（1或2 ng）。 [1]
在所提供的检索结果中，关于MitoBloCK-6的体内研究记录并不完善。如果开展此类研究，很可能需要通过腹腔注射或静脉注射的方式将该化合物应用于动物模型（例如小鼠）。该化合物将配制在合适的溶剂中（例如DMSO或DMSO与生理盐水的混合物）。在不同时间点采集组织样本（例如肝脏、心脏、脑组织），以评估线粒体功能、蛋白质输入和细胞凋亡标志物。

该研究指出，基于液相色谱-质谱联用（LC-MS）分析，MitoBloCK-6 在 pH 3.4 至 7.4 的范围内稳定。[1] 提供的搜索结果中没有 MitoBloCK-6 的具体药代动力学（PK）数据。作为一种分子量为 357.24 g/mol 的小分子，预计其具有良好的细胞渗透性。它在 DMSO 中的溶解度足以满足体外研究的要求。其在较宽 pH 范围内的稳定性表明它可能具有良好的体内应用特性。然而，仍需进行详细的 ADME 研究以全面表征其药代动力学特征。

在 HeLa 细胞中，浓度高达 100 μM 的 MitoBloCK-6 不会显著降低细胞活力（MTT 检测），并且在 50 μM 浓度下处理 12-16 小时也不会破坏线粒体形态或导致细胞色素 c 释放。[1] 在斑马鱼胚胎中，浓度高于 2.5 μM 的 MitoBloCK-6 具有毒性。[1] MitoBloCK-6 不会改变分离线粒体的线粒体膜完整性，因为未检测到标记蛋白（乌头酸酶、AAC、Tim54、Mia40、Ccp1、细胞色素 c）的释放。 [1]- MitoBloCK-6 不会耗散线粒体膜电位 (Δψ) 或干扰氧化磷酸化，这是通过 Clark 型电极测定的耗氧量得出的结论。[1] 提供的搜索结果中未详细列出 MitoBloCK-6 的具体毒性数据。体外研究表明，它可以通过释放细胞色素 c 诱导人胚胎干细胞 (hESC) 凋亡，表明其对某些细胞类型具有潜在的细胞毒性。然而，这种效应可能与其作用机制（抑制线粒体蛋白输入）有关，而非非特异性毒性。它对 Erv1/ALR 的选择性高于 PDI 和琥珀酸脱氢酶，表明其具有一定的靶点特异性。需要进行全面的毒理学研究来确定其完整的安全性。

[1]. A small molecule inhibitor of redox-regulated protein translocation into mitochondria. Dev Cell. 2013 Apr 15;25(1):81-92.

MitoBloCK-6 (2,4-二氯-6-(((苯氨基)苯基)亚氨基)甲基)苯酚) 是从 Chembridge、Kwon 和 Asinex 化合物库中约 50,000 个化合物的高通量筛选中鉴定出来的，筛选浓度为 10 μM。该筛选产生了 184 个主要候选抑制剂，MitoBloCK-6 被选中作为“MitoBloCK”（线粒体蛋白导入阻断剂，由 Carla Koehler 实验室开发）化合物进行进一步表征。[1] 其作用机制涉及抑制 Erv1/ALR 氧化酶活性，从而损害 Mia40/Erv1 二硫键传递系统。MitoBloCK-6 破坏 Erv1 与其伴侣蛋白 Mia40 和细胞色素 c 之间的相互作用（分别降低了 75% 和 95%）。 [1] MitoBloCK-6 特异性抑制 Mia40/Erv1 通路和 TIM22 通路底物的导入，但不抑制 TIM23 通路底物的导入。[1] SAR 化合物 ES-2（而非 ES-1）对 Erv1 功能的抑制作用与 MitoBloCK-6 类似（ES-2 的 IC50 为 2.2 μM）。[1] MitoBloCK-6 不抑制分化细胞（HeLa、HEK293、NHDF），但特异性诱导人胚胎干细胞（hESCs）凋亡，表明 ALR 在多能干细胞维持中发挥着独特的作用。经维甲酸处理的分化 HSF1 细胞对 MitoBloCK-6 具有抗性。 [1] 在斑马鱼中，MitoBloCK-6 处理模拟了 ATR 基因敲低（ATG 吗啉代寡核苷酸）的表型，导致心脏缺陷、水肿和红细胞生成受损。当亚最佳浓度的 MitoBloCK-6 和吗啉代寡核苷酸联合使用时，这些效应具有叠加效应。[1] MitoBloCK-6 是一种用于研究线粒体蛋白输入机制（特别是 Mia40/Erv1 二硫键接力系统）的研究化合物。它是研究线粒体蛋白输入在各种细胞过程和疾病（包括癌症代谢和神经退行性疾病）中作用的重要工具。该化合物尚未获准用于临床，仅供研究用途。它通过高通量筛选发现，凸显了化学生物学方法在解析复杂生物通路方面的强大作用。

C19H14CL2N2O

357.234

356.048

C, 63.88; H, 3.95; Cl, 19.85; N, 7.84; O, 4.48

303215-67-0

303215-67-0

1035235

Yellow to orange solid

1.3±0.1 g/cm3

535.1±50.0 °C at 760 mmHg

277.4±30.1 °C

0.0±1.5 mmHg at 25°C

1.627

6.34

44.6

2

3

4

24

406

0

ClC1=C([H])C(=C([H])C(/C(/[H])=N/C2C([H])=C([H])C(=C([H])C=2[H])N([H])C2C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=2[H])=C1O[H])Cl

DBYOPSAQYAKIQV-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C19H14Cl2N2O/c20-14-10-13(19(24)18(21)11-14)12-22-15-6-8-17(9-7-15)23-16-4-2-1-3-5-16/h1-12,23-24H

2-[(4-anilinophenyl)iminomethyl]-4,6-dichlorophenol

MitoBlock6; MitoBlock-6; Mito BloCK-6; 303215-67-0; 2-[[(4-Anilinophenyl)imino]methyl]-4,6-dichlorophenol; 2-{[(4-anilinophenyl)imino]methyl}-4,6-dichlorophenol; 2-[(4-anilinophenyl)iminomethyl]-4,6-dichlorophenol; MitoBlock 6

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 本产品在运输和储存过程中需避光。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO: ~50 mg/mL (~140.0 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。