5-HT1C/5-HT2 Receptor

研究了微离子定向应用5-羟色胺（5-HT）和6-氯-2[1-哌嗪基]吡嗪（MK-212）对水合氯醛麻醉大鼠自发放电的体感觉大脑皮层神经元和中叶背神经元的抑制作用。在皮质神经元上，与5-HT相比，MK-212仅对细胞外记录的神经元活动产生微弱和可变的抑制作用。然而，对中缝细胞，MK-212发挥了强有力的抑制作用，与5-HT观察到的效果相当。与d -麦角酸二乙胺（LSD）和5-羟色胺对5-羟色胺自受体的抑制作用相反，MK-212不影响甲氧thepin刺激大鼠下丘脑切片中[3H]5-羟色胺的体外释放。这些发现，加上先前报道的MK-212的行为、生化和电生理效应，可能表明这种新型5 -羟色胺能激动剂在中枢神经系统中独特地区分5 -羟色胺能受体亚群。[3]

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喹帕嗪和6-氯-2-[1-哌嗪基]-吡嗪（MK-212）均能刺激大脑皮层磷酸肌肽水解，而酮色林可阻断这一作用。对这些激动剂的最大反应是对5-HT最大反应的80%。间三氟甲基苯基哌嗪（TFMPP）、间氯苯哌嗪（MCPP）和1-（1-萘基）-哌嗪（1- np）在阻断5-HT作用的浓度下不刺激大脑皮层磷酸肌肽水解。在脉络膜丛中，TFMPP和MCPP，以及MK-212和喹帕嗪，增加的磷酸肌肽水解和米安色林阻断了这些作用。MK-212的疗效与5-HT相当，而喹帕嗪、MCPP和TFMPP是脉络膜丛的部分激动剂。1-NP不刺激脉络膜丛磷酸肌肽水解，但完全阻断5-HT的作用。基于这些数据，我们得出结论，喹帕嗪和MK-212是大脑皮层5-HT-2受体的部分激动剂，而1-NP、TFMPP和MCPP是皮层5-HT-2受体的纯拮抗剂。然而，TFMPP和MCPP以及quipazine和MK-212是5-HT-1c受体的激动剂，而1-NP是脉络膜丛5-HT-1c受体的纯拮抗剂。［２］

6-氯-2-（1-哌嗪）吡嗪（MK-212）是一种中枢作用的5-HT1C/5-HT2激动剂，对23名精神分裂症患者和22名正常人的体温和行为的影响采用单盲交叉设计。给药前测定体温，每隔30分钟测定一次，持续3小时。每位受试者均给予安慰剂或MK-212。MK-212显著提高了正常对照组的体温。在精神分裂症患者中，与安慰剂相比，mk -212没有引起总体体温升高；然而，23名患者中有13名（56.5%）服用MK-212后体温升高幅度大于安慰剂，23名患者中有3名（13.1%）没有变化，而23名患者中有7名（30.4%）服用安慰剂后的体温变化大于MK-212后的体温变化。MK-212显著增加了恶心、奇怪感和兴奋感，但这些影响在两组之间没有差异。这些结果与一些精神分裂症患者的5-HT2受体反应性下降一致。[１]

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脉冲前抑制（PPI）在许多神经精神疾病中被破坏。5-HT2C受体激动剂等分子可缓解啮齿类动物的PPI缺陷；然而，精确的机制和大脑的关键区域负责这些激动剂的逆转作用仍然没有定论。本研究旨在研究5-HT2C受体激动剂对小鼠PPI缺陷逆转作用的关键脑区。结果显示，全身给药5-HT2C受体激动剂MK212不影响正常的PPI行为，但逆转了n -甲基d-天冬氨酸受体拮抗剂MK801诱导的小鼠PPI缺陷。此外，尽管MK801治疗，5-HT2C受体拮抗剂SB242084对PPI行为没有影响。此外，将MK212局部灌注到内侧前额叶皮层和腹侧海马，而不包括伏隔核或腹侧被盖区，可以挽救MK801诱导的PPI缺陷。这些数据表明，内侧前额叶皮层和腹侧海马是负责逆转5-HT2C激动剂对PPI缺陷的关键脑区。该结果将有助于我们目前对5-HT2C受体激动剂抗精神病作用的分子和神经机制的了解，特别是5-HT2C受体活性调节的神经回路。[4]

MK212 and MK801 were dissolved in 0.9% saline solution. [4]
Experiment 1: Effects of systemic administration of MK212 on normal PPI[4]
To investigate whether the systemic administration of 5-HT2C receptor agonists influences normal PPI behavior, the mice were randomly assigned to one of the following treatment groups: saline, MK212 (0.5 mg/kg), or MK212 (1.0 mg/kg). Twenty minutes before the formal PPI tests, saline and two doses of MK212 were intraperitoneally administered, and then the mice were placed in the SR-LAB™ startle response system to test their PPI.

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Experiment 2: Effects of systemic administration of MK212 on PPI deficits[4]
We then examined whether the systemic administration of MK212 can reverse the PPI deficits in mice. The mice were randomly assigned to one of five treatment groups, as shown in Table 1. The doses of the test drugs were chosen based on a literature review (Suryavanshi et al., 2014) and pilot experiments. MK801, an NMDA receptor antagonist, was used to induce PPI deficits. The procedures of the administration of saline and drugs on the formal test days are shown in Table 1. After systemic administration, the mice were placed in the SR-LAB™ startle response system to test their PPI.

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Experiment 4: Investigation of the critical brain regions responsible for the reversal effect of MK212 on PPI deficits[4]
To investigate the critical brain regions responsible for the reversal effects of MK212 on PPI deficits, we infused MK212 into the nucleus accumbens (NAcc), medial prefrontal cortex (mPFC), ventral hippocampus (VH), and ventral tegmental area (VTA) before performing the PPI tests. Briefly, for each target brain region, mice were implanted with guide cannulas, and were then assigned to the saline + saline, MK801 + saline, and MK801 + MK212 treatment groups. On the formal test days, MK212 (0.25 μg/0.25 μl/side) and saline (0.25 μl/side) were locally infused into the target brain regions (NAcc, mPFC, VH, or VTA) at a rate of 0.2 μl/min. The procedures for the administration of saline and drugs are shown in Table 3. The bilateral internal cannulas were kept for an additional 2 min before removal to allow drug diffusion. The mice were returned to their cages after infusion. Afterwards, the mice were then placed in the SR-LAB™ startle response system to test for PPI.

大鼠口服LD50为79600微克/千克，美国专利文件，编号4409228

[1]. Effect of the serotonin agonist, MK-212, on body temperature in schizophrenia. Biol Psychiatry. 1992 Mar 1;31(5):460-70.

[2]. Relative efficacies of piperazines at the phosphoinositide hydrolysis-linked serotonergic (5-HT-2 and 5-HT-1c) receptors. J Pharmacol Exp Ther. 1987 Aug;242(2):552-7.

[3]. A comparative electrophysiological and biochemical assessment of serotonin (5-HT) and a novel 5-HT agonist (MK-212) on central serotonergic receptors. Neuropharmacology . 1984 Nov;23(11):1271-7.

[4]. MK212, a 5-hydroxytryptamine 2C receptor agonist, reverses prepulse inhibition deficits in the medial prefrontal cortex and ventral hippocampus. Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry . 2022 Mar 8:113:110441.

本研究发现，全身性给予5-HT2C受体激动剂MK212或拮抗剂SB242084并不影响正常的PPI行为；然而，MK212可逆转非竞争性NMDA受体拮抗剂MK801诱导的PPI缺陷。此外，将MK212局部注射到内侧前额叶皮层和腹侧海马可逆转MK801诱导的PPI缺陷。这些结果有助于我们进一步了解5-HT2C受体激动剂抗精神病作用的精确分子和神经机制。[4]

C8H12CL2N4

235.112

234.044

C, 40.87; H, 5.14; Cl, 30.16; N, 23.83

61655-58-1

MK-212;64022-27-1; 61655-58-1 (HCl)

198421

White to off-white solid powder

1.735

41.05

2

4

1

14

160

0

C1CN(CCN1)C2=CN=CC(=N2)Cl.Cl

PFIZGLUIYAZQFU-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C8H11ClN4.ClH/c9-7-5-11-6-8(12-7)13-3-1-10-2-4-13;/h5-6,10H,1-4H2;1H

2-chloro-6-piperazin-1-ylpyrazine;hydrochloride

MK-212; MK 212; 61655-58-1; MK-212 hydrochloride; MK 212 HYDROCHLORIDE; 2-chloro-6-(piperazin-1-yl)pyrazine hydrochloride; 2-Chloro-6-(1-piperazinyl)pyrazine monohydrochloride; MK-212 HCl; 67250-10-6; EINECS 262-883-0; MK212

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

H2O : ~10 mg/mL (~42.53 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。