| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 1mg |
|
||
| 2mg |
|
||
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 25mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| Other Sizes |
|
| 靶点 |
WDR5 (Ki < 1 nM); WDR5-MLL1 interaction (IC50 = 0.9 nM); MLL1 (IC50 = 0.32 µM)
The primary target of MM-401 is WDR5 (WD repeat domain 5), where it binds with high affinity to disrupt the MLL1-WDR5 interaction. MM-401 exhibits a binding affinity for WDR5 with Ki < 1 nM and an IC50 of 0.9 nM for disrupting the WDR5-MLL1 interaction. By occupying the MLL1-binding interface on WDR5, MM-401 prevents the assembly of the MLL1 core complex, thereby specifically inhibiting MLL1 histone methyltransferase activity (IC50 of 0.32 μM). Importantly, this targeting strategy does not affect the methyltransferase activities of other MLL family members (including MLL2, MLL3, MLL4, SETD1A, and SETD1B), revealing a unique regulatory feature of the MLL1 complex. The primary target of MM-401 is the MLL1 (KMT2A) methyltransferase complex, specifically the interaction between MLL1 and WDR5. MLL1 is a histone methyltransferase that catalyzes the methylation of histone H3 lysine 4 (H3K4), a mark associated with active transcription. WDR5 is a regulatory subunit essential for MLL1 complex assembly and activity. MM-401 acts as an inhibitor of the MLL1-WDR5 interaction, disrupting MLL1 complex formation and reducing H3K4 methylation. This leads to altered gene expression and potential anti-leukemic effects. |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
MM-401 抑制 WDR5-MLL1 相互作用，IC50 值为 0.9 nM，同时保持与 WDR5 的高亲和力，Ki 值 < 1 nM [1]。通过阻止复合物组装和 MLL1-WDR5 相互作用，MM-401 可特异性降低 MLL1 活性（IC50 值：0.32 μM）[1]。具体而言，MM-401（20 μM；48 小时）可抑制细胞中 MLL1 依赖的 H3K4 甲基化 [1]。MM-401 和 MLL1 缺失均可引起 MLL-AF9 转录组的类似改变 [1]。 MM-401（10、20、40 μM；48 小时）通过诱导细胞周期阻滞和细胞死亡，特异性地抑制 MLL 白血病细胞的增殖[1]。体外研究表明，MM-401 通过特异性抑制 MLL1 甲基转移酶活性发挥抗白血病作用。在 MLL 重排的白血病细胞系中，MM-401（10-40 μM，48 小时）以浓度依赖的方式诱导 G1/S 期细胞周期阻滞和细胞凋亡，而对非 MLL 白血病细胞（如 K562、HL60、U937）或正常骨髓细胞无显著抑制作用，其 GI50 值尚未测定。在 MLL-AF9 细胞中，MM-401（20 μM，48 小时）显著降低 H3K4me3 水平，并下调 MLL1 靶基因（包括 Hoxa9 和 Hoxa10）的表达。RNA 测序分析表明，MM-401 处理诱导的基因表达变化与 MLL1 敲除后观察到的变化高度相似。从患者中分离的 MLL 白血病原始细胞也对 MM-401 敏感，而非 MLL 白血病细胞则不敏感。体外实验表明，MM-401 抑制 MLL1-WDR5 相互作用，从而破坏 MLL1 核心复合物的组装。这种抑制作用降低了 H3K4 甲基化水平，并改变了 MLL1 靶基因的表达。该化合物抑制 MLL1 功能的能力使其成为研究 MLL1 在基因调控和癌症中作用的宝贵工具。然而，现有文献中并未提供具体的 IC50 值或详细的活性数据。
|
| 体内研究 (In Vivo) |
现有研究表明，MM-401通过靶向MLL1-WDR5相互作用，在动物模型中表现出体内抗白血病活性。MM-401的衍生物具有更优的药代动力学特性和体内生物利用度，已被证实能够抑制MLL白血病小鼠模型的肿瘤生长并延长生存期。尽管MM-401本身的药代动力学特性限制了其作为工具化合物的直接体内应用，但其衍生物在静脉注射后能有效抑制小鼠体内MLL白血病细胞的扩增，且未观察到对正常造血功能的毒性。在体内，MM-401被用于研究MLL1在白血病和其他癌症中的功能。通过抑制MLL1-WDR5相互作用，该化合物有望降低H3K4甲基化水平，并抑制参与白血病发生的MLL1靶基因的表达。然而，现有文献中并未提供来自动物模型的具体体内疗效数据。该化合物仅供研究使用，不可用于治疗用途。
|
| 酶活实验 |
组蛋白甲基转移酶活性测定[1]
HMT 活性测定按先前所述方法进行（Dou 等，2005）。抑制剂研究中，首先将不同浓度的化合物与预组装的复合物孵育，然后加入底物启动反应。动力学分析中，绘制反应进程曲线以确定室温下反应的线性范围。Lineweaver-Burk 曲线的绘制方法为：反应（0.5 µM 酶复合物和 50 µM 底物）启动，4 分钟后加入终浓度为 178 µM 的 β-巯基乙醇终止反应。 晶体结构[1] WDR5/MM-401 或 WDR5/MM-NC-401 二元复合物由 WDR5 与化合物按 1:2 的摩尔比混合制得。该复合物在 22°C 下通过悬滴气相扩散法结晶。详情见补充信息。 WDR5蛋白表达与纯化：表达重组人WDR5蛋白，并通过亲和层析和尺寸排阻层析进行纯化。生物层干涉法：使用Octet RED系统，将生物素化的WDR5固定在链霉亲和素传感器上，并与不同浓度的MM-401孵育，以确定结合亲和力（KD < 1 nM）。荧光偏振竞争实验：将WDR5蛋白与荧光标记的MLL1肽（FAM-WIN肽）和不同浓度的MM-401孵育，测量荧光偏振的变化，计算出MM-401破坏WDR5-MLL1相互作用的IC50值为0.9 nM。体外组蛋白甲基转移酶活性测定：将MLL1核心复合物（MLL1-WDR5-ASH2L-RbBP5）与不同浓度的MM-401预孵育，加入底物（组蛋白H3和[³H]-SAM）启动反应，通过闪烁计数法测定[³H]-甲基的掺入量，计算IC50值为0.32 μM。共结晶结构测定：将WDR5和MM-401按1:2的摩尔比混合，采用悬滴气相扩散法结晶，并以2.1 Å分辨率测定共晶体结构以确认结合模式。 对于MLL1-WDR5相互作用抑制剂，标准的无细胞检测方法包括使用重组MLL1和WDR5蛋白的荧光偏振法、AlphaScreen法或ELISA法。将该化合物与蛋白质孵育，并通过测量相互作用的抑制情况来确定IC50值。表面等离子共振（SPR）可用于测量结合亲和力。 |
| 细胞实验 |
细胞凋亡分析[1]
细胞类型：小鼠 MLL-AF9 和 Hoxa9/Meis1 细胞 测试浓度： 0、20、40 μM 孵育时间： 48 小时 实验结果： 特异性诱导 MLL-AF9 细胞凋亡。 细胞周期分析[1] 细胞类型：小鼠 MLL-AF9 和 Hoxa9/Meis1 细胞 测试浓度： 10、20、40 μM 孵育时间： 48 小时 实验结果： 浓度依赖性地诱导 MLL-AF9 细胞发生显著的 G1/S 期停滞。 RT-PCR[1] 细胞类型： MLL-AF9 细胞 测试浓度： 20 μM 孵育时间： 48 小时 实验结果： H3K4me 和 5 个 Hox A 基因的表达显著降低，尤其是 Hoxa9 和 Hoxa10。 细胞活力、Wright-Giemsa 染色、细胞凋亡、细胞周期和细胞分化检测 [1] 将抑制剂从原液稀释到含有 0.1% DMSO 的培养基中。对于细胞活力检测，细胞以 1×10⁵/ml 的浓度培养，每 2 天传代一次。使用 CellTiterGlo® 试剂盒，按照制造商的说明测定细胞活力。使用 Molecular Dynamics 酶标仪监测发光值。染色时，将分别用 10、20 和 40 µM /MM-401、40 µM MM-NC-401 或 DMSO 溶剂处理 4 天的细胞稀释至 2.5×10⁵/ml，溶于 1× PBS 中，然后通过细胞离心法固定于载玻片上，并进行 Wright-Giemsa 染色。使用光学显微镜在 40 倍放大倍率下拍摄细胞图像。细胞凋亡、细胞周期和细胞分化分析均采用标准方案进行（参见补充信息）。 实时 PCR、RNA-seq 和 ChIP 检测[1] 将 MLL1-AF9 细胞在 /MM-401 或 MM-NC-401 存在下培养 2 天。处理结束后，以 300×g 离心收集细胞，并用 1× PBS 洗涤。采用标准方案提取重复生物学样本的RNA。取10ng RNA用于Illumina测序文库构建。将四个RNA测序样本进行多重化，并加载到Hi-seq测序仪的同一泳道中。RNA测序分析方法详见补充信息。ChIP实验按先前所述进行。 细胞培养：将MLL重排白血病细胞（例如，MLL-AF9转导的小鼠骨髓细胞、ML-2、KOPN-8、MV4-11）和非MLL白血病细胞（K562、HL60、U937）培养于含10-20%胎牛血清的RPMI-1640培养基中，置于37℃、5% CO₂培养箱中培养。细胞活力检测：将细胞接种于96孔板（1×10⁵/mL），用不同浓度的MM-401（0-40 μM）或对照MM-NC-401处理3天，使用CellTiter-Glo发光法检测细胞活力，并计算GI50值。细胞周期分析：用MM-401（10、20、40 μM）处理48小时后，用70%乙醇固定细胞，用碘化丙啶染色，并通过流式细胞术分析细胞周期分布。细胞凋亡检测：用MM-401（10、20、40 μM）处理48小时后，用Annexin V-FITC/PI染色，并通过流式细胞术检测细胞凋亡率。 Wright-Giemsa染色：MM-401处理4天后，进行细胞涂片，Wright-Giemsa染色，并在光学显微镜下观察形态学变化和髓系分化标志物。RT-PCR和Western Blot：MM-401（20 μM）处理48小时后，提取RNA或蛋白质，检测Hoxa9、Hoxa10基因表达和H3K4me3水平。对于MLL1抑制剂，标准细胞实验包括用测试化合物处理白血病细胞系48-72小时。通过Western blot或质谱法检测H3K4甲基化水平。通过qPCR评估MLL1靶基因（例如HOXA9、MEIS1）的表达。评估细胞活力（MTT或CellTiter-Glo）和增殖情况。 |
| 动物实验 |
动物模型：通过尾静脉注射MLL重排的白血病细胞（例如MLL-AF9细胞）至免疫缺陷小鼠（例如NSG小鼠）体内，建立播散性白血病模型。给药方案：连续数周每日静脉注射MM-401衍生物（例如MM-589）。疗效评估：通过生物发光成像监测肿瘤负荷，记录生存期，并通过流式细胞术检测外周血和骨髓中白血病细胞的百分比。毒性评估：监测动物体重变化、行为表现和外周血细胞计数，以评估造血功能。数据分析：比较治疗组和安慰剂组的生存差异和肿瘤负荷变化，并使用 Kaplan-Meier 分析计算中位生存期。
对于 MLL1 抑制剂的体内评估，标准动物模型包括使用 MLL1 重排白血病细胞系的白血病异种移植模型。该化合物通常口服或腹腔注射给药 2-4 周。评估肿瘤生长、H3K4 甲基化、MLL1 靶基因表达和生存情况。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
作为一种环肽工具化合物，MM-401 的药代动力学性质已通过结构优化得到改善。与母体化合物 MM-101 相比，MM-401 通过环化策略展现出更高的代谢稳定性。已有的 MM-401 衍生物（例如 MM-589）已证实具有更优的药代动力学性质和体内生物利用度。MM-401 可溶于 DMSO，常用作体外实验的储备液。该化合物应储存于 -20°C，干燥避光。对于体内应用，建议使用溶解度更高的盐形式（例如 MM-401 TFA 盐）并配合合适的制剂载体。
现有资料中未提供 MM-401 的详细药代动力学数据。作为一种具有中等亲脂性的小分子，预计其具有良好的细胞渗透性。治疗开发需要进行全面的药代动力学研究。 |
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
根据现有研究数据，MM-401 对正常细胞具有良好的安全性。在 MLL 白血病细胞、非 MLL 白血病细胞和正常骨髓细胞的对比研究中，MM-401 特异性抑制 MLL 重排白血病细胞的增殖，而对非 MLL 白血病细胞或正常骨髓细胞无显著细胞毒性。具体而言，MM-401 处理后，未观察到 K562、HL60 和 U937 非 MLL 白血病细胞的生长抑制，GI50 值尚未测定。此外，MM-401 处理不会诱导正常骨髓细胞发生显著的凋亡或分化异常。根据供应商提供的信息，MM-401 的纯度≥98%，仅供研究使用，不得用于人体或兽医用途。操作时应遵循标准实验室安全操作规程。
现有资料中未提供MM-401的详细毒理学数据。作为一种靶向MLL1的研究化合物，其治疗开发需要进行标准的临床前毒理学研究。需要评估该化合物对正常细胞中H3K4甲基化和基因表达的影响。该化合物仅供研究使用，不得用于治疗用途。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
本文全面阐述了我们近期开发的抑制剂MM-401，该抑制剂靶向MLL1 H3K4甲基转移酶的活性。MM-401通过阻断MLL1-WDR5相互作用，特异性抑制MLL1活性，从而抑制该复合物的组装。这种靶向策略不影响其他混合谱系白血病（MLL）家族中的组蛋白甲基转移酶（HMT），揭示了MLL1复合物独特的调控特性。我们利用MM-401及其对映体对照MM-NC-401证明，抑制MLL1甲基转移酶活性可通过诱导细胞周期阻滞、凋亡和髓系分化，特异性抑制MLL细胞增殖，且对正常骨髓细胞或非MLL细胞无毒性。更重要的是，转录组分析表明，MM-401诱导的基因表达变化与MLL1缺陷诱导的基因表达变化相似，这支持了MLL1活性在MLL1依赖性白血病转录程序调控中起主导作用的观点。我们设想MM-401在基础研究和转化研究中均具有广泛的应用前景。[1]
总之，我们在此报道的高选择性MLL1抑制剂在基础研究中具有广阔的应用前景，并为未来在临床领域开发有效疗法奠定了基础。我们设想未来可能出现以下研究方向：首先，随着化学探针MM-401的开发，可以研究H3K4甲基化在各种生物学背景下的基本功能。与基因敲除模型相比，MM-401等药物的靶向抑制作用会对MLL1复合物产生微小但特异性的扰动，从而确定其甲基转移酶活性的功能。第二，鉴于MLL1和H3K4me调控MLL白血病中的几个关键靶点（例如Hoxa9、Myc和Bcl2）（图7C），比较依赖于MLL1和MLL融合蛋白的基因通路至关重要，以确定它们是否高度重叠，或者属于对MLL白血病进展至关重要的不同通路。第三，测试MLL1抑制剂是否具有治疗除MLL白血病以外的多种疾病的潜力至关重要。具体而言，抑制MLL1活性可能有助于治疗具有野生型MLL1等位基因和Hoxa9过表达的急性髓系白血病（AML）和骨髓增生异常综合征（MDS）（Ayton和Cleary，2001；Dou和Hess，2008）。它也可能适用于MLL1扩增和串联重复的AML。未来，在多种人类疾病中测试 MM-401 或其衍生物将提供更深入的见解。[1] MM-401 是一种小分子抑制剂，通过抑制 MLL1-WDR5 相互作用靶向 MLL1 甲基转移酶复合物。它用于研究 MLL1 在基因调控中的功能及其在白血病和其他癌症中的作用。目前尚未发现任何监管部门批准的药物。 |
| 分子式 |
C29H46N8O5
|
|---|---|
| 分子量 |
586.726146221161
|
| 精确质量 |
586.359
|
| 元素分析 |
C, 59.37; H, 7.90; N, 19.10; O, 13.63
|
| CAS号 |
1442106-10-6
|
| 相关CAS号 |
MM-401 TFA;1442106-11-7
|
| PubChem CID |
71586081
|
| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
|
| LogP |
0.9
|
| tPSA |
210
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
7
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
6
|
| 可旋转键数目(RBC) |
8
|
| 重原子数目 |
42
|
| 分子复杂度/Complexity |
977
|
| 定义原子立体中心数目 |
4
|
| SMILES |
CC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(=O)NCCCC[C@@](C(=O)N[C@H](C(=O)N1)CCCN=C(N)N)(C)NC(=O)C(C)C)C2=CC=CC=C2
|
| InChi Key |
SILRGLDFBXVGOQ-ZMROOPMESA-N
|
| InChi Code |
InChI=1S/C29H46N8O5/c1-5-20-24(39)36-22(19-12-7-6-8-13-19)26(41)32-16-10-9-15-29(4,37-23(38)18(2)3)27(42)35-21(25(40)34-20)14-11-17-33-28(30)31/h6-8,12-13,18,20-22H,5,9-11,14-17H2,1-4H3,(H,32,41)(H,34,40)(H,35,42)(H,36,39)(H,37,38)(H4,30,31,33)/t20-,21-,22+,29+/m0/s1
|
| 化学名 |
N-[6(S)-Ethyl-9(S)-(3-guanidino-propyl)-12(R)-methyl-2,5,8,11-tetraoxo-3(R)-phenyl-1,4,7,10tetraaza-cyclohexadec-12-yl]-isobutyramide
|
| 别名 |
MM 401; MM-401; 1442106-10-6; MM-401; CHEMBL3798088; isobutyryl-D-aMeLys(1)-Arg-Abu-D-Phg-(1); N-[(3R,6S,9S,12R)-9-[3-(diaminomethylideneamino)propyl]-6-ethyl-12-methyl-2,5,8,11-tetraoxo-3-phenyl-1,4,7,10-tetrazacyclohexadec-12-yl]-2-methylpropanamide; CID 71586081; SCHEMBL15004652; BDBM50164787; MM401
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.7044 mL | 8.5218 mL | 17.0436 mL | |
| 5 mM | 0.3409 mL | 1.7044 mL | 3.4087 mL | |
| 10 mM | 0.1704 mL | 0.8522 mL | 1.7044 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
COA
粤公网安备 44011102003439号
463611831
