Nenocorilant

GR/glucocorticoid receptor (Ki: 0.15 nM)

Nenocorilant (Relacorilant)（0-1000 nM；0-72 h；OvCa 细胞）具有促凋亡特性，可部分恢复紫杉醇和吉西他滨对肿瘤细胞的凋亡诱导，同时还能抵消皮质醇的作用 [1]。当在 MIA PaCa-2 和 OVCAR5 细胞中以 100 nM 浓度应用 4 小时时，GR 靶基因 SGK1 和 MKP1 不会被 dex 上调 [2]。

---

在MIA PaCa-2细胞系中，皮质醇削弱了紫杉醇驱动的细胞凋亡作用，而Relacorilant可恢复该作用。在OVCAR5细胞系中，relacorilant提高了紫杉醇的疗效和铂类药物的效力。一项筛选relacorilant最佳联合用药方案的研究显示，微管靶向药物始终能从与relacorilant的联合用药中获益。

---

皮质醇抑制而Relacorilant在体外恢复紫杉醇的凋亡效应:[1]
为解释relacorilant与细胞毒性疗法联合的效果，首先需要表征单独使用GC（糖皮质激素）的效果。研究人员筛选出生长受GC影响的实体瘤细胞系（表1）。GC提高了三种细胞系的存活率，这表明GR拮抗剂可能在不依赖细胞毒性药物活性的情况下降低这些细胞系的存活率。这类细胞系被排除在进一步研究之外，因为无法轻易区分细胞毒性药物的增效作用与对存活率的直接影响。相比之下，像OVCAR5这样的细胞系为研究GC对细胞毒性药物活性的影响提供了更易解释的模型，因为单独使用GC不会显著影响其生长。为避免胎牛血清（FBS）中GC的干扰，FBS被稀释至2.5%（体积比）或使用经活性炭-葡聚糖处理的FBS（CDS-FBS，其中GC已被去除）。在不同组织来源的细胞系中，以及在标准2.5% FBS和CDS-FBS中，均观察到GC的类似效果。这些初步实验使用存活率检测法（CellTiter-Glo）进行，因此无法区分对生长速率的影响与对细胞凋亡的影响。

为探究relacorilant与紫杉醇联合用药的促凋亡效应的广泛性，接下来用不同的细胞毒性药物和GR激动剂地塞米松评估MIA PaCa-2细胞。使用100 nM地塞米松，通过存活率（CellTiter-Glo）终点检测法评估MIA PaCa-2细胞在一系列吉西他滨组合中的存活率。地塞米松在数值上提高了吉西他滨的IC50（即降低效力）（图1C），尽管该效应不显著。这一适度效应可通过添加Relacorilant剂量依赖性地逆转（图1C），而该效应同样不显著。地塞米松提高了高剂量（> 0.1 μM）吉西他滨的残余存活率（即降低最大疗效）（图1D）。单独使用relacorilant未表现出脱靶、非激动剂依赖性活性，这与竞争性拮抗剂中和激动剂（地塞米松或皮质醇）活性的机制一致。在这些实验中，既评估了用于模拟内源性GR激动作用的皮质醇，也评估了用于评估更具GR特异性的激动剂的地塞米松。图1中的数据表明，两种激动剂在不同细胞毒性药物存在下均可促进MIA PaCa-2细胞存活，而relacorilant可逆转这些效应。

为确认观察到的GR激动剂和拮抗剂效应的剂量依赖性，在评估细胞存活率的同时对地塞米松或relacorilant进行滴定。使用OVCAR5细胞将研究结果扩展到不同组织来源的细胞中，并选择卡铂因其在卵巢癌临床实践中的应用。在100 nM地塞米松存在下，增加relacorilant浓度可提高卡铂效力（图2A）。计算每个relacorilant浓度下的卡铂IC50并绘制图表，以证明relacorilant对卡铂效力的剂量依赖性影响（图2B）。相反，增加地塞米松浓度会降低卡铂效力（图2C）。地塞米松对卡铂效力的影响可被relacorilant消除（图2C）。这些数据支持relacorilant对卡铂效力的靶向、GR介导、剂量依赖性效应。

---

Relacorilant增强微管抑制剂的疗效: [1]
图2和表1中的观察结果提出了一种可能性，即relacorilant对细胞毒性药物效力或疗效的影响可能与细胞毒性药物的作用机制有关。最初单独使用19种细胞毒性药物测试OVCAR5细胞的存活率以确定基线效力和疗效（数据未显示）。随后，在GR激动剂、GR拮抗剂、两者或均不存在的情况下，对每种药物进行剂量反应测试。Relacorilant改善了多种药物的IC50、残余存活率或两者（图3）。在OVCAR5细胞系中，微管抑制剂与relacorilant联合使用始终表现出获益。

在生理皮质醇条件下的异种移植模型中，Nenocorilant (Relacorilant)（30 mg/kg；口服；每四天一次，持续 25 天；雌性 Balb/c 裸鼠）可增强细胞毒治疗的有效性并刺激细胞凋亡活性 [1]。

---

在生理性皮质醇条件下的异种移植模型中，Nenocorilant（Relacorilant）（30 mg/kg；口服；每四天一次，持续25天；雌性Balb/c裸鼠）可增强细胞毒性疗法的有效性并刺激凋亡活性。

---

Relacorilant在异种移植模型中增强细胞毒性疗法的凋亡活性: [1]
为评估relacorilant在生理性GC条件下的作用，研究人员开展了异种移植实验。通过延长适应期和减少操作，确保小鼠处理过程不改变其以皮质酮为主的正常GC水平。与体外实验结果一致，Relacorilant提高了MIA PaCa-2异种移植模型中紫杉醇的疗效（图4A）。鉴于吉西他滨+紫杉醇是胰腺癌的标准治疗方案，研究还评估了relacorilant在该联合方案基础上的增效作用（图4B）。吉西他滨+紫杉醇联用比单用紫杉醇更有效，而relacorilant进一步增强了该联合方案的疗效。为拓展该发现，研究还评估了不同组织来源的异种移植模型。在HeLa（宫颈癌）异种移植和CC6279（患者来源的胆管癌异种移植）模型中，添加relacorilant均显著提升了紫杉醇的疗效（图4C和4D）。与体外结果一致，单独使用relacorilant在CC6279模型中无效果（图4D），因此未纳入其他异种移植研究以避免不必要的重复验证。这些数据共同证明relacorilant能在体内增强化疗疗效。 早期体外观察表明，Relacorilant联合细胞毒性疗法主要通过增加凋亡而非降低增殖率发挥作用（图1）。为验证该机制是否在体内重现，研究人员检测了relacorilant处理的异种移植模型中的凋亡标志物。选择relacorilant效应最显著的CC6279胆管癌模型进行分析。与单用紫杉醇相比，relacorilant+紫杉醇联用组小鼠的cleaved caspase 3活性在定性和定量上均升高，而CK18（肿瘤细胞标志物）和Ki67（增殖标志物）未见差异（图4E和4F）。这与初期体外观察一致，证实relacorilant在异种移植模型中促进肿瘤细胞凋亡。

体外活力测定[1]
将肿瘤细胞接种于96孔板中，体积为180 μL，孵育期间密度达到3-5倍。1 d后加入地塞米松、皮质醇和relacorilant，1 d后再加入细胞毒性药物。细胞再孵育3天，然后用CellTiter-Glo®检测。每个板的高（未经处理）和低（未镀细胞）对照进行归一化，并使用公式计算剩余活力：剩余活力=（最高浓度下细胞毒剂的最大活力）/（高对照-低对照）× 100。GraphPad Prism采用4参数拟合进行曲线拟合。除去培养基，每孔加入200 μL CellTiter-Glo试剂。摇板2分钟，然后平衡10分钟，然后在Biotech Synergy II型微孔板读取仪上读取发光。

---

体外细胞凋亡测定[1]< > 采用Incucyte®NucLight Rapid Red和Incucyte Caspase 3/7试剂在180 μL的体积中接种肿瘤细胞进行动态图像检测。使用Incucyte S3活细胞成像系统，每天/井获得1 - 3张图像。播种后第1天开始图像采集，同时添加皮质醇/relacorilant(第1天；0 h)。第2天（24 h）添加紫杉醇。使用诱导细胞分析软件进行图像分析，以确定每种荧光标记阳性的细胞数量。用caspase 3/7阳性细胞数除以NucLight阳性细胞总数计算凋亡指数。

动物/疾病模型：雌性Balb/c裸鼠[1]
剂量：30 mg/kg
给药途径：po（口服灌胃）每四天一次，持续25天
实验结果：抑制肿瘤生长并增加caspase 3的表达水平。

---

MIA PaCa-2异种移植瘤[1]
将3 × 10⁶个MIA PaCa-2（胰腺）细胞接种于雌性Balb/c裸鼠右侧腹部，接种液为100 μL磷酸盐缓冲液（PBS）与Matrigel®按1:1比例混合。随机分组后开始治疗，使用溶于 10% DMSO/0.1% Tween® 80/89.9% HPMC (0.5%) 的 relacorilant 30 mg/kg 和/或溶于 0.9% 氯化钠溶液的紫杉醇。紫杉醇每四天 (Q4D) 静脉注射一次，relacorilant 在紫杉醇给药前一天和当天通过灌胃给药。HeLa 异种移植 [1] 将 5 × 10⁶ 个 HeLa（宫颈）细胞接种于雌性 Balb/c 裸鼠右侧腹部，接种液为 100 μL PBS 与 Matrigel 1:1 混合液。随机分组后开始治疗，使用瑞可利兰（relacorilant）30 mg/kg（溶于 10% DMSO/0.1% Tween 80/89.9% HPMC (0.5%) 溶液中）和/或紫杉醇（溶于 0.9% 氯化钠溶液中）。紫杉醇每 4 天静脉注射一次，瑞可利兰在紫杉醇给药前一天和当天通过灌胃给药。

---

CC6279 异种移植瘤[1]
从携带已建立的 CC6279（胆管癌）患者来源肿瘤的小鼠中收集新鲜肿瘤组织，并将其切成小块（直径约 2-3 mm）。将肿瘤碎片植入雌性 Balb/c 裸鼠的右侧腹部，植入物为 100 μL PBS 与 Matrigel 1:1 混合液。随机分组后开始治疗，使用瑞可利兰（relacorilant）30 mg/kg（溶于 10% DMSO/0.1% Tween 80/89.9% HPMC (0.5%) 溶液）和/或紫杉醇（溶于 0.9% 氯化钠溶液）。紫杉醇每 4 天静脉注射一次，瑞可利兰每日灌胃一次。治疗结束后，切除肿瘤，用 10% 中性缓冲福尔马林固定，然后进行石蜡包埋。

[1]. Glucocorticoid receptor antagonism promotes apoptosis in solid tumor cells. Oncotarget. 2021 Jun 22;12(13):1243-1255.

[2]. Glucocorticoid receptor activation inhibits chemotherapy-induced cell death in high-grade serous ovarian carcinoma. Gynecol Oncol. 2015 Sep;138(3):656-62.

[3]. WHO Drug Information. International Nonproprietary Names for Pharmaceutical.

背景：抗增殖化疗耐药性仍然是实体瘤患者治疗中面临的一项重大挑战。糖皮质激素，包括内源性皮质醇，已被证实能够诱导上皮肿瘤细胞的促生存通路。虽然在特定条件下已证实糖皮质激素受体 (GR) 拮抗剂具有促凋亡作用，但这些作用的范围和性质尚未完全明确。
材料与方法：为了指导癌症患者的研究，我们评估了瑞拉可兰（relacorilant）——一种在研的选择性 GR 调节剂 (SGRM)，可拮抗皮质醇活性——在多种肿瘤类型、多种细胞毒性药物联合用药以及生理浓度皮质醇存在下的作用。
结果：在 MIA PaCa-2 细胞系中，皮质醇可抑制紫杉醇诱导的细胞凋亡，而瑞拉可兰可恢复这种凋亡。在OVCAR5细胞系中，relacorilant提高了紫杉醇的疗效和铂类药物的效力。筛选relacorilant的最佳联合用药方案显示，微管靶向药物与relacorilant联合用药均能持续获益。这些发现已在异种移植模型中得到证实，包括MIA PaCa-2、HeLa和胆管癌患者来源的异种移植模型。体内实验表明，在多种模型中，relacorilant与紫杉醇联合用药可增加肿瘤细胞凋亡。结论：这些观察结果支持了近期报道的在卵巢癌和胰腺癌患者中，relacorilant联合紫杉醇治疗可带来临床获益，并为relacorilant与其他细胞毒性药物联合用药提供了新的理论依据。[1]

---

目的：验证糖皮质激素受体（GR）激活是否会增加高级别浆液性卵巢癌（HGS-OvCa）的化疗耐药性，以及使用GR拮抗剂治疗是否会提高化疗敏感性。
方法：采用qRT-PCR和Western blot分析检测卵巢癌细胞系中GR的表达，并采用免疫组织化学（IHC）检测异种移植瘤和原发性人肿瘤中GR的表达。我们还研究了GR激活与抑制对卵巢癌细胞系和异种移植瘤模型中化疗诱导细胞毒性的影响。
结果：除IGROV-1细胞外，所有检测的卵巢癌细胞系均通过Western blot和qRT-PCR分析检测到GR表达。在检测的27例人原发性HGS-OvCa中，有25例通过IHC检测表达GR。Western blot分析未检测到任何细胞系表达孕激素受体（PR）或雄激素受体（AR）。体外实验表明，在糖皮质激素受体（GR）阳性的HeyA8和SKOV3细胞中，地塞米松（100 nM）处理可上调促生存基因SGK1和MKP1/DUSP1的表达，并抑制卡铂/吉西他滨诱导的细胞死亡。同时使用两种GR拮抗剂，米非司酮（100 nM）或CORT125134（100 nM），可部分逆转这些作用。在GR蛋白表达缺失的IGROV-1细胞中，地塞米松对化疗诱导的细胞死亡没有抗凋亡作用。单独使用米非司酮对任何细胞系均无细胞毒性。HeyA8卵巢癌异种移植瘤研究表明，与单独使用卡铂/吉西他滨相比，在卡铂/吉西他滨方案中加入米非司酮可使肿瘤缩小48%（P=0.0004）。结论：这些结果表明，GR拮抗作用通过抑制GR介导的细胞存活途径，使GR+卵巢癌细胞对化疗诱导的细胞死亡更加敏感。[2]

C26H21F4N7O3S

587.548657178879

587.136

C, 53.15; H, 3.60; F, 12.93; N, 16.69; O, 8.17; S, 5.46

1496509-78-4

89954189

White to off-white solid powder

3.2

124

0

12

5

41

1140

1

C([C@@]12C(=CC3N(C4=CC=C(F)C=C4)N=CC=3C1)CCN(S(C1C=NN(C)N=1)(=O)=O)C2)(C1=NC=CC(C(F)(F)F)=C1)=O

PZIQQHVUAHTSJN-VWLOTQADSA-N

InChI=1S/C26H21F4N7O3S/c1-35-32-14-23(34-35)41(39,40)36-9-7-17-11-22-16(13-33-37(22)20-4-2-19(27)3-5-20)12-25(17,15-36)24(38)21-10-18(6-8-31-21)26(28,29)30/h2-6,8,10-11,13-14H,7,9,12,15H2,1H3/t25-/m0/s1

[(4aR)-1-(4-fluorophenyl)-6-(2-methyltriazol-4-yl)sulfonyl-4,5,7,8-tetrahydropyrazolo[3,4-g]isoquinolin-4a-yl]-[4-(trifluoromethyl)pyridin-2-yl]methanone

Nenocorilant; 1496509-78-4; Nenocorilant [INN]; MV83V7AT2Z; CHEMBL4068844; HY-147293; [(4aR)-1-(4-fluorophenyl)-6-(2-methyltriazol-4-yl)sulfonyl-4,5,7,8-tetrahydropyrazolo[3,4-g]isoquinolin-4a-yl]-[4-(trifluoromethyl)pyridin-2-yl]methanone; ((4aR)-1-(4-Fluorophenyl)-1,4,5,6,7,8-hexahydro-6-((2-methyl-2H-1,2,3-triazol-4-yl)sulfonyl)-4ah-pyrazolo(3,4-g)isoquinolin-4a-yl)(4-(trifluoromethyl)-2-pyridinyl)methanone;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

---

注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

View More

注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

---

口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

View More

口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

---

注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

---

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。