| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Nuclear factor of activated T-cells c1 (NFATc1). No direct binding IC50, Ki, EC50 values are provided. The mechanism is inferred from immunofluorescence showing inhibition of NFATc1 nuclear translocation. [1]
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| 体外研究 (In Vitro) |
- RAW264.7细胞中的细胞毒性(MTT法): A04在高达2.5 μM浓度下对RAW264.7细胞活力无显著细胞毒性(存活率>87%)。CC50(使细胞活力降低50%的浓度)为7.4 μM。[1]
- 抑制RANKL诱导的破骨细胞形成: RAW264.7细胞用RANKL(100 ng/mL)和2.5 μM A04处理。与仅RANKL处理的对照组相比,TRAP阳性多核细胞(TRAP+ MNCs)数量降至0.1 ± 0.1%。抑制破骨细胞形成的IC50为1.57 ± 0.14 μM。[1] - 剂量依赖性抑制破骨细胞形成: A04在1.5、2.0和2.5 μM浓度下,以剂量依赖性方式显著减少TRAP阳性多核破骨细胞的数量和大小,且在这些浓度下无细胞毒性。[1] - 抑制骨吸收(陷窝形成实验): RAW264.7细胞在牙本质片上与RANKL(100 ng/mL)和A04(1.5或2.0 μM)共培养4天。2.0 μM A04将骨吸收面积减少至RANKL处理组的约23.22%;1.5 μM A04将骨吸收面积减少至约63.98%。在光学显微镜下观察总骨吸收陷窝,并使用ImageJ软件量化。[1] - 抑制RANKL诱导的NFATc1核转位: RAW264.7细胞在RANKL(100 ng/mL)存在或不存在下,与A04(1.5或2.0 μM)处理24小时。免疫荧光染色显示,A04阻断了NFATc1的核转位并降低了NFATc1蛋白水平。在未刺激细胞中,NFATc1位于细胞质。RANKL刺激后,NFATc1转位至细胞核(合并图像中呈黄色)。A04处理阻止了这一转位。[1] NFATc1-IN-1(化合物 A04)(0-2.5 μM,4 天)表现出对破骨细胞形成和功能的强烈抑制,从而导致骨吸收减少 [1]。 NFATc1-IN-1 (1.5-2.5 μM, 24 h) 降低 NFATc1 水平并防止 NFATc1 核易位 [1]。 |
| 细胞实验 |
- 细胞培养: 小鼠单核/巨噬细胞RAW264.7细胞(破骨细胞前体细胞)在含10%热灭活FBS的DMEM中,于37°C、5% CO2条件下培养。[1]
- MTT细胞毒性实验: RAW264.7细胞接种于96孔板(2×10⁴细胞/孔),用不同浓度化合物处理48小时。加入MTT溶液(终浓度0.5 mg/mL),37°C孵育2小时。甲臜晶体用DMSO溶解,在570 nm处用ELISA读数仪测量吸光度。细胞活力以对照(溶剂处理)细胞的百分比表示。计算CC50值(使细胞活力降低50%的浓度)。[1] - 破骨细胞分化实验(TRAP染色): RAW264.7细胞接种于96孔板(8×10³细胞/孔),在含10% FBS的α-MEM中,与RANKL(100 ng/mL)和测试化合物(2.5 μM)共培养4天。每2天更换一次含RANKL和化合物的新鲜培养基。细胞用4%多聚甲醛固定20分钟,使用商品化试剂盒(Sigma-Aldrich 387A-1KT)进行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色。在显微镜下计数具有五个或更多细胞核的TRAP阳性多核细胞(TRAP+ MNCs)。IC50值计算为与RANKL处理对照组相比,抑制50% TRAP+ MNC形成所需的浓度。[1] - NFATc1转位的免疫荧光检测: RAW264.7细胞接种于8孔腔室玻片(5×10³细胞/孔),在含10% FBS的α-MEM中,与或不与RANKL(100 ng/mL)和测试化合物处理24小时。细胞用PBS洗涤,4%多聚甲醛固定20分钟,用洗涤缓冲液(含0.1% BSA的PBS)洗涤,用封闭缓冲液(10% PBS、10% BSA、0.3% Triton X-100)在室温下透化45分钟。细胞与抗NFATc1单克隆抗体(1:100)在稀释缓冲液(1% BSA、1% FBS、0.3% Triton X-100的PBS溶液)中室温孵育过夜,洗涤后与FITC标记的抗小鼠IgG抗体(1:50)在室温下孵育1小时。细胞核用DAPI(1 μg/mL)在PBS中复染3分钟。使用荧光显微镜观察荧光。[1] - 陷窝形成实验(骨吸收): RAW264.7细胞(10⁴细胞/孔)接种于24孔板中的牙本质片上,在含10% FBS的α-MEM中,与或不与RANKL(100 ng/mL)和测试化合物共培养4天。每2天更换一次培养基。为观察吸收陷窝,用PBS和1 M氢氧化铵洗涤孔以完全去除附着细胞。在光学显微镜下观察总骨吸收陷窝。使用ImageJ软件量化每个切片视野中化合物处理组相对于RANKL处理组的骨吸收百分比。[1] 细胞活力测定 [1] 细胞类型:破骨细胞前体 RAW 264.7 细胞 测试浓度:0、0.5、1.0、1.5、2.0 和 2.5 μM 培养时间:4天 实验结果:在一定浓度下,红色TRAP阳性多核破骨细胞的数量和大小在1.5、2.0和2.5μM。以剂量依赖性方式(1.5、2.0 和 2.5 μM)显着抑制破骨细胞形成,且浓度高达 2.5 μM 时不会对破骨细胞前体细胞产生细胞毒性作用。 免疫荧光[1] 细胞类型: RAW264.7 细胞 测试浓度: 1.5 或 2.5 μM 孵育持续时间:24 小时 实验结果:阻断 NFATc1 核转位并降低 NFATc1 水平。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
- 化学名称: 5-氟-N-(2-氟-4-碘苯基)-2-羟基苯甲酰胺。[1]
- 合成方法: 5-氟水杨酸与亚硫酰氯反应生成酰氯,再与2-氟-4-碘苯胺在THF中反应得到A04。产率:45%;白色粉末;熔点:236-237°C。提供了1H NMR、13C NMR和HRMS(ESI)表征数据。[1] - 构效关系(SAR): 在A系列(水杨酰苯胺)化合物中,B环4-位上具有较重卤素取代基(I > Br > Cl > F)的化合物表现出更强的抗破骨细胞生成活性。A04在B环4-位含有碘,这是其最高效力的原因之一。A环上的5-氟取代基也增强了活性。[1] - 与其他化合物的比较: A04(IC50 = 1.57 μM)比阳性对照1a(NDMC101,IC50 = 10.0 μM)、1d(IC50 = 7.1 μM)和5d(IC50 = 4.9 μM)更有效。[1] - 作用机制: A04通过抑制NFATc1核转位来抑制RANKL诱导的破骨细胞生成。研究提出其抗破骨细胞生成作用是通过NFATc1通路介导的。[1] |
| 分子式 |
C13H8F2INO2
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|---|---|
| 分子量 |
375.11
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| 精确质量 |
374.956
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| CAS号 |
1912422-56-0
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| PubChem CID |
127043724
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| LogP |
3.8
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| tPSA |
49.3
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
4
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| 可旋转键数目(RBC) |
2
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| 重原子数目 |
19
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| 分子复杂度/Complexity |
332
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
C(NC1=CC=C(I)C=C1F)(=O)C1=CC(F)=CC=C1O
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| InChi Key |
IGRCFOGPIJEESA-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C13H8F2INO2/c14-7-1-4-12(18)9(5-7)13(19)17-11-3-2-8(16)6-10(11)15/h1-6,18H,(H,17,19)
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| 化学名 |
5-fluoro-N-(2-fluoro-4-iodophenyl)-2-hydroxybenzamide
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| 别名 |
NFATc1-IN-1; A04; 1912422-56-0; 5-Fluoro-N-(2-fluoro-4-iodophenyl)-2-hydroxybenzamide; NFATc1 inhibitor A04; orb1688505;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~125 mg/mL (~333.24 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 :Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案: 1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL; 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用! 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 2.6659 mL | 13.3294 mL | 26.6588 mL | |
| 5 mM | 0.5332 mL | 2.6659 mL | 5.3318 mL | |
| 10 mM | 0.2666 mL | 1.3329 mL | 2.6659 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);
4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度: mg/mL;
DMSO母液配制方法: mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。
体内配方配制方法:取 μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。