PF-06815345 HCl

别名: PF06815345 HClPF 06815345 HClPF-06815345 HClPF-06815345 hydrochloride
目录号: V41854 纯度: ≥98%
PF-06815345 HCl (PF06815345) 是一种 PCSK9 抑制剂的肝脏靶向前药,具有相同的生物利用度,必须通过肝脏羧酸酯酶 (CES1) 转化为其两性离子活性药物,选择性抑制 PCSK9 蛋白质合成。
PF-06815345 HCl CAS号: 2334434-49-8
产品类别: New2
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
规格 价格 库存 数量
1mg
5mg
10mg
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产品描述
PF-06815345 HCl (PF06815345) 是一种靶向肝脏的 PCSK9 抑制剂前药,具有口服生物利用度,需经肝羧酸酯酶 (CES1) 转化为两性离子活性药物,从而选择性抑制 PCSK9 蛋白的合成。PCSK9 是预防和治疗动脉粥样硬化的新型治疗靶点。前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin 9 型 (PCSK9) 通过与低密度脂蛋白受体 (LDLR) 结合,导致其降解,在调节脂蛋白代谢中发挥重要作用。目前,人们正在研发通过抑制 PCSK9 来降低低密度脂蛋白胆固醇 (LDL-C) 的药物,用于治疗高胆固醇血症并降低其相关的动脉粥样硬化性心血管疾病 (CVD) 风险。两种 PCSK9 阻断单克隆抗体 (mAb),阿利西尤单抗和依洛尤单抗,已于 2015 年获批上市。
PF-06815345 HCl(CAS号:2334434-49-8)是PF-06815345的盐酸盐,是一种口服有效的肝脏靶向前药,可抑制前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶/kexin 9型(PCSK9)的合成。它可被肝羧酸酯酶1(CES1)选择性激活为活性两性离子形式,因此是研究PCSK9抑制和高胆固醇血症等脂质代谢紊乱的重要研究工具。
生物活性&实验参考方法
靶点
The compound targets PCSK9 protein synthesis, not the PCSK9-LDLR interaction. Following conversion by liver carboxylesterase 1 (CES1) to its active zwitterionic form, the active drug selectively inhibits PCSK9 translation, thereby lowering PCSK9 protein levels and influencing LDL receptor (LDLR) regulation. This mechanism is distinct from that of other PCSK9 inhibitors that block the PCSK9-LDLR interaction.
体外研究 (In Vitro)
在人类肠道细胞和肝细胞中,PF-06815345 盐酸盐(实施例 7)(1-30 μM;5-1440 分钟)的 CLint 值分别为 <82.9 μL/min/mg 和 97.6 μL/min/mg [2]。
PF-06815345 在体外以 13.4 uM 的 IC50 值抑制 PCSK9 的翻译,对 CDH1、HSD17B11、PCBP2、RPL27 和 BCAP31 等非靶蛋白具有选择性(4.95 倍至 >27 倍)。在人源化 PCSK9 小鼠模型中,口服给药可显著降低血浆 PCSK9 水平。活性形式在肝细胞中达到高浓度(小鼠口服 300 mg/kg 后 0.5 小时浓度为 33.9 ug/mL),其中人 CES1 同工酶是主要的转化酶。
体内研究 (In Vivo)
PF-06815345 盐酸盐(实施例 7)(100-500 mg/kg;方法;单次给药)可降低人源化 PCSK9 小鼠模型中的 PCSK9 水平。治疗 4 小时后,在 500 mg/kg 的剂量下,骨骼 PCSK9 降低了 72% [2]。
PF-06815345 HCl 能有效降低人源化 PCSK9 小鼠的血浆 PCSK9 水平(口服 100、300 和 500 mg/kg 剂量后 5 小时分别降低 26%、42% 和 53%)。500 mg/kg 剂量下,给药 4 小时后血浆 PCSK9 水平降低 72%。该化合物在大鼠和猴子体内具有良好的耐受性。PF-06815345 HCl(口服 300 mg/kg)在小鼠体内给药 0.5 小时后,肝脏活性药物浓度达到 33.9 ug/mL。需要注意的是,PF-06815345 对非人源化野生型啮齿动物无效,因为它需要人源 PCSK9 才能发挥作用。
酶活实验
生化活性通过其在无细胞翻译系统中抑制PCSK9翻译的能力来测定。将重组或细胞提取物的翻译机制与人PCSK9 mRNA在不同浓度的PF-06815345(转化为活性形式后)存在下孵育。蛋白质合成通过放射性标记甲硫氨酸的掺入或荧光素酶报告基因进行监测。
细胞实验
在人肝癌细胞系(例如HepG2或Huh-7)中,采用Western blot法检测PCSK9蛋白水平。细胞用PF-06815345 HCl(1-100 uM)处理24-48小时。处理后,裂解细胞,并使用特异性抗PCSK9抗体通过Western blot法定量裂解液和培养基中的PCSK9蛋白。同时,采用ELISA法检测上清液中分泌的PCSK9。细胞表面LDLR的表达水平则通过流式细胞术,使用LDLR特异性抗体进行评估。
动物实验
在人源化PCSK9小鼠模型(人PCSK9转基因小鼠)中,雄性小鼠(8-10周龄)经口灌胃给予PF-06815345 HCl,剂量为100-500 mg/kg(单次给药)。在不同时间点(0.5、1、2、4、8、24小时)采集血样。采用ELISA法检测血浆PCSK9水平,并采用酶法分析血浆胆固醇水平。同时采集肝组织用于PCSK9 mRNA和蛋白定量分析。
药代性质 (ADME/PK)
PF-06815345 是一种口服有效的、具有高肝脏特异性的前药。口服后,它经肝羧酸酯酶 1 (CES1) 转化为两性离子活性形式。在小鼠中,口服 300 mg/kg 剂量后,0.5 小时肝脏活性药物浓度可达 33.9 μg/mL;而在猴子中,口服 30 mg/kg 剂量后,肝脏活性药物浓度可达 9.0 μg/mL。该化合物对野生型啮齿动物无活性,因此人源化 PCSK9 小鼠是进行疗效研究的必要模型。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
PF-06815345 已在大鼠和猴子身上进行评估,据报道,在测试剂量下(小鼠最高剂量达 500 mg/kg)耐受性良好。一项针对健康受试者的 I 期临床试验 (NCT02728544) 已终止,但具体终止原因尚未公开。作为 PCSK9 抑制剂,潜在的安全性问题包括注射部位反应(针对注射用生物制剂),但对于这种口服小分子药物而言,肝脏特异性毒性和胃肠道反应是典型的监测重点。
参考文献

[1]. Overcoming the Challenges of Making a Single Enantiomer N-1 Substituted Tetrazole Prodrug Using a Tin-Mediated Alkylation and Enzymatic Resolution. Organic Process Research & Development, 2019, 23(6): 1167-1177.

[2]. Preparation of substituted amide compounds as PCSK9 inhibitors: Canada, CA2907071 A1 2016-04-08.

其他信息
PF-06815345 HCl 是一种研究级化合物,与已获临床批准的注射用 PCSK9 单克隆抗体(例如,alirocumab、evolocumab)和 siRNA 疗法(inclisiran)不同。它代表了一种新型的口服 PCSK9 抑制剂,其作用机制是通过抑制蛋白质合成而非阻断蛋白质-蛋白质相互作用。该化合物已完成一项 I 期临床试验,但目前研发阶段已暂停。该化合物仅供研究用途。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C27H30CL2FN9O4
分子量
634.489406108856
精确质量
633.178
CAS号
2334434-49-8
相关CAS号
PF-06815345;1900686-46-5
PubChem CID
168006835
外观&性状
White to off-white solid powder
tPSA
142
氢键供体(HBD)数目
2
氢键受体(HBA)数目
11
可旋转键数目(RBC)
10
重原子数目
43
分子复杂度/Complexity
927
定义原子立体中心数目
2
SMILES
CN1N=CC(C2C=CC(C(=O)N([C@H]3CNCCC3)C3N=CC=CC=3Cl)=CC=2F)=C1C1=NN=NN1[C@H](C)OC(=O)OCC.Cl
InChi Key
RFEUFHPTEFEGDQ-KUGOCAJQSA-N
InChi Code
InChI=1S/C27H29ClFN9O4.ClH/c1-4-41-27(40)42-16(2)38-25(33-34-35-38)23-20(15-32-36(23)3)19-10-9-17(13-22(19)29)26(39)37(18-7-5-11-30-14-18)24-21(28)8-6-12-31-24/h6,8-10,12-13,15-16,18,30H,4-5,7,11,14H2,1-3H31H/t16-,18+/m0./s1
化学名
(S)-1-(5-(4-(4-((3-chloropyridin-2-yl)((R)-piperidin-3-yl)carbamoyl)-2-fluorophenyl)-1-methyl-1H-pyrazol-5-yl)-1H-tetrazol-1-yl)ethyl ethyl carbonate hydrochloride
别名
PF06815345 HClPF 06815345 HClPF-06815345 HClPF-06815345 hydrochloride
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中,避免吸湿/受潮。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO : ~50 mg/mL (~78.80 mM)
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.5761 mL 7.8803 mL 15.7607 mL
5 mM 0.3152 mL 1.5761 mL 3.1521 mL
10 mM 0.1576 mL 0.7880 mL 1.5761 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
+
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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