Phalloidin

别名: 17466-45-4; Phalloidin from Amanita phalloides; 28-(2,3-Dihydroxy-2-methylpropyl)-18-hydroxy-34-(1-hydroxyethyl)-23,31-dimethyl-12-thia-10,16,22,25,27,30,33,36-octazapentacyclo[12.11.11.03,11.04,9.016,20]hexatriaconta-3(11),4,6,8-tetraene-15,21,24,26,29,32,35-heptone; SCHEMBL39329; GTPL4736; KPKZJLCSROULON-UHFFFAOYSA-N; NSC523214; SMP1_000234; 毒伞素;毒蠅虎蕈鹼;二羟鬼笔毒肽;鬼笔环肽; 鬼笔鹅膏素;鬼笔环肽 来源于鬼笔鹅膏;伞毒素, 来源于鬼笔鹅膏;鬼笔环肽
目录号: V32285 纯度: ≥98%
鬼笔环肽 [肥大细胞脱颗粒 (MCD) 肽] 是一种源自蘑菇的新型强效毒素,可用于用荧光染料标记细胞骨架的 F-肌动蛋白(λex=495 nm,λem=520 nm)。
Phalloidin CAS号: 17466-45-4
产品类别: New2
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产品描述
鬼笔环肽 [肥大细胞脱颗粒 (MCD) 肽] 是一种源自蘑菇的新型强效毒素,可用于用荧光染料标记细胞骨架的 F-肌动蛋白(λex=495 nm,λem=520 nm)。其序列为Ala-{d-Thr}-Cys-{Hyp}-Ala-Trp-Leu(二硫桥:Cys3-Cys6);和 A-{d-Thr}-C-{Hyp}-AWL(二硫桥:Cys3-Cys6)的序列缩短。
生物活性&实验参考方法
靶点
Fluorescent Dye; F-actin
体外研究 (In Vitro)
鬼笔环肽染色对固定在含有 0.2% 戊二醛的 PBS 中的细胞效果良好,但对固定细胞则效果不佳(可能是因为肌动蛋白丝断裂的缺陷)[1]。
真核细胞已经进化到划分其功能并在细胞间运输各种代谢物。因此,在细胞生物学中,研究组织和结构/功能关系具有重要意义。细胞骨架由一系列丝状结构组成,包括中间丝、肌动蛋白丝和微管。免疫荧光染色最常用于研究细胞骨架成分。然而,也可以用荧光标记分离的细胞骨架蛋白,并将其显微注射回细胞中,或将其添加到固定的、可渗透的细胞中。或者,如本文所述,可以使用蘑菇衍生的荧光毒素,phalloidin或phallacidin来标记细胞骨架的F-actin。Phalloidin可用不同的荧光团标记。特定荧光团的选择应取决于生物碱标记肌动蛋白是否是双重标记实验的一部分。在大多数细胞中,肌动蛋白丝的丰富应该提供非常强烈的信号。在双标记实验中,应选择荧光团来考虑这一点。一般来说,罗丹明标签更耐光漂白,可以承受更精细结构所需的更长时间的曝光[1]。
细胞实验
1. 用PBS将荧光标记的鬼笔环肽(300单位/mL原液)按1:200比例稀释 [1]
2. 吸弃培养于盖玻片上的细胞培养基
3. 用PBS漂洗细胞三次
4. 用3.7%甲醛溶液固定细胞10分钟
5. PBS漂洗已固定细胞三次(每次5分钟)
6. 用0.2% Triton X-100溶液透化处理细胞5分钟
7. PBS再次漂洗三次
8. 室温下用荧光标记鬼笔环肽染色5-10分钟
9. PBS漂洗三次(每次5分钟)
10. 封片后根据所用探针选择相应荧光滤光片观察
注:所有操作步骤均需使用无菌PBS缓冲液完成。
药代性质 (ADME/PK)
吸收、分布和排泄
本研究在体内和体外比较了成年大鼠和幼鼠(17-19日龄)肝脏对鬼笔环肽的吸收、结合和排泄情况。两组大鼠肝脏中毒物浓度与毒性之间均无相关性。虽然幼鼠对鬼笔环肽的耐受性显著高于成年大鼠,但幼鼠肝脏中毒物浓度更高,且排泄速度显著慢于成年大鼠。肝脏中鬼笔环肽的极高结合力和浓度可归因于其极低的解离常数。
在给大鼠服用毒鹅膏菌提取物后,第一天即可在尿液中检测到鬼笔环肽和γ-鹅膏蕈碱,第二天即可在尿液中检测到鬼笔环肽。
代谢/代谢物
各种观察结果表明,鬼笔环肽(毒鹅膏菌中的一种有毒成分)本身并不具有毒性,而是在肝脏中发生生物活化。使用(3)H-去甲基鬼笔环己烷(一种有毒的鬼笔环己烷衍生物),/得出结论/……(3)H-去甲基鬼笔环己烷,以及很可能还有鬼笔环己烷,在大鼠和小鼠的肝脏中不被代谢。在受试动物的尿液中发现的次级排泄产物是(3)H标记衍生物的自降解化合物。
毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK)
相互作用
预先口服利福平(100 或 300 mg/kg)可保护小鼠免受鬼笔环肽(3 mg/kg,腹腔注射)的毒性,这体现在死亡率的降低上。
在小鼠中,用水飞蓟宾(一种从水飞蓟中分离的植物化合物)治疗可预防鬼笔环肽引起的急性肝脏出血性坏死。单次给予水飞蓟宾预处理可完全消除毒素引起的形态学变化,并显著降低血清酶的活性。

毒性概述
它与肌动蛋白结合,阻止其解聚并导致细胞中毒。鬼笔环肽特异性地结合于F-肌动蛋白亚基之间的界面,将相邻的亚基锁定在一起。鬼笔环肽是一种双环七肽,它与肌动蛋白丝的结合力远强于与肌动蛋白单体的结合力,导致肌动蛋白亚基从丝末端解离的速率常数降低,从而通过阻止丝解聚来稳定肌动蛋白丝。此外,研究发现鬼笔环肽还能抑制F-肌动蛋白的ATP水解活性(L1183)。
LD50:2 mg/kg(小鼠)(T258)
参考文献

[1]. Chazotte B. Labeling cytoskeletal F-actin with rhodamine phalloidin or fluorescein phalloidin for imaging. Cold Spring Harb Protoc. 2010 May;2010(5):pdb.prot4947.

其他信息
鬼笔环肽是一种含有硫桥的同型双环七肽。
据报道,鬼笔环肽存在于小伞菌(Amanita suballiacea)、毒鹅膏菌(Amanita phalloides)以及其他有相关数据的生物体中。
这是一种剧毒多肽,主要从毒鹅膏菌(Amanita phalloides,伞菌科)或称“死亡杯”中分离得到;可导致蘑菇中毒,造成致命的肝脏、肾脏和中枢神经系统损伤;常用于肝损伤的研究。
作用机制
与正常肝细胞不同,AS-30D 大鼠肝瘤细胞对鬼笔环肽不敏感。肝瘤细胞显然不会像正常肝细胞那样消耗这种毒素。
耐受剂量的鬼笔环肽可以保护小鼠免受致死剂量鬼笔环肽的伤害。鬼笔环肽的1/10 LD95即可产生耐药性,并在预处理后约8小时出现。
成年大鼠原代肝细胞培养物暴露于50 μg/ml鬼笔环肽后1小时内,60-70%的细胞死亡(台盼蓝染色)。在不含Ca2+的培养基中,相同细胞暴露于鬼笔环肽后未出现活力丧失。鬼笔环肽最初通过一种不依赖于Ca2+的过程与细胞膜相关肌动蛋白相互作用。第二步是一个依赖于Ca2+的过程,很可能代表Ca2+通过受损的细胞膜通透性屏障流入细胞,并沿着细胞内外之间存在的陡峭浓度梯度向下流动。这些结果强化了体内诱导Ca2+稳态紊乱的假设。
给雄性大鼠连续7天(500 μg/kg/天)注射鬼笔环肽后,肝脏丝状肌动蛋白的平均含量增加。胆汁流量和胆汁酸排泄量均相应减少。微丝可能影响肝细胞间紧密连接的通透性。在鬼笔环肽诱导的胆汁淤积中,胆汁成分可能从胆小管反流至细胞间隙。
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C35H48N8O12S
分子量
804.867020000001
精确质量
788.316
CAS号
17466-45-4
PubChem CID
441542
外观&性状
White to off-white solid powder
密度
1.51g/cm3
沸点
1370.5ºC at 760mmHg
熔点
MAXIMUM ABSORPTION (WATER): 295 NM (E= 0.597, 1%, 1 CM); MELTING POINT: 280-282 °C /HEXAHYDRATE/
闪点
782.6ºC
蒸汽压
0mmHg at 25°C
折射率
1.683
LogP
-1.7
tPSA
316.92
氢键供体(HBD)数目
11
氢键受体(HBA)数目
12
可旋转键数目(RBC)
4
重原子数目
55
分子复杂度/Complexity
1510
定义原子立体中心数目
10
SMILES
C[C@H]1C(=O)N[C@H]2CC3=C(NC4=CC=CC=C34)SC[C@@H](C(=O)N5C[C@H](C[C@H]5C(=O)N1)O)NC(=O)[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC2=O)C[C@](C)(CO)O)C)[C@H](C)O
InChi Key
KPKZJLCSROULON-QKGLWVMZSA-N
InChi Code
InChI=1S/C35H48N8O11S/c1-15-27(47)38-22-10-20-19-7-5-6-8-21(19)41-33(20)55-13-24(34(53)43-12-18(46)9-25(43)31(51)37-15)40-32(52)26(17(3)45)42-28(48)16(2)36-30(50)23(39-29(22)49)11-35(4,54)14-44/h5-8,15-18,22-26,41,44-46,54H,9-14H2,1-4H3,(H,36,50)(H,37,51)(H,38,47)(H,39,49)(H,40,52)(H,42,48)/t15-,16-,17-,18-,22-,23-,24-,25-,26+,35+/m0/s1
化学名
(1S,14R,18S,20S,23S,28S,31S,34R)-28-[(2R)-2,3-dihydroxy-2-methylpropyl]-18-hydroxy-34-[(1S)-1-hydroxyethyl]-23,31-dimethyl-12-thia-10,16,22,25,27,30,33,36-octazapentacyclo[12.11.11.03,11.04,9.016,20]hexatriaconta-3(11),4,6,8-tetraene-15,21,24,26,29,32,35-heptone
别名
17466-45-4; Phalloidin from Amanita phalloides; 28-(2,3-Dihydroxy-2-methylpropyl)-18-hydroxy-34-(1-hydroxyethyl)-23,31-dimethyl-12-thia-10,16,22,25,27,30,33,36-octazapentacyclo[12.11.11.03,11.04,9.016,20]hexatriaconta-3(11),4,6,8-tetraene-15,21,24,26,29,32,35-heptone; SCHEMBL39329; GTPL4736; KPKZJLCSROULON-UHFFFAOYSA-N; NSC523214; SMP1_000234;
HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意: 请将本产品存放在密封且受保护的环境中(例如氮气保护),避免吸湿/受潮和光照。
运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 1.2424 mL 6.2122 mL 12.4244 mL
5 mM 0.2485 mL 1.2424 mL 2.4849 mL
10 mM 0.1242 mL 0.6212 mL 1.2424 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

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