Complex I of the mitochondrial respiratory chain (inhibition) [1]
REDD1 protein (activation) [1]
Insulin receptor substrate (IRS) receptors (inhibition) [1]
AMP-activated protein kinase (AMPK) (activation) [1]
mTOR pathway (blocking) [1]

在HPV阳性头颈癌模型中，苯乙双胍诱导细胞死亡的EC50值比二甲双胍低840倍[1]。在胆管癌（CCA）细胞中，苯乙双胍抑制细胞生长，并诱导这些细胞凋亡和自噬[1]。在卵巢癌（OC）细胞系（SKOV3、IGROV-1和Hey）中，苯乙双胍抑制细胞增殖，并诱导G1期细胞周期阻滞和细胞凋亡。Annexin V检测显示，苯乙双胍处理以剂量依赖的方式诱导G0/G1期细胞周期阻滞并减少S期细胞[1]。在黑色素瘤中，苯乙双胍通过在二维和三维（球状体）模型中诱导细胞凋亡，显著降低黑色素瘤细胞的活力、生长和侵袭能力。它还能降低癌症干细胞（CSC）选择性标志物的表达，而二甲双胍则没有这种作用[1]。在胶质母细胞瘤干细胞（GSC）中，苯乙双胍在高浓度下抑制细胞自我更新并诱导细胞死亡。GSC 对苯乙双胍的敏感性似乎远高于非干细胞胶质瘤细胞，表现出更明显的生长停滞和凋亡诱导[1]。这种效应是通过let-7、miR-137和miR-124的上调以及HMGA2的下调介导的[1]。
苯乙双胍抑制线粒体复合物I，增加细胞内AMP（和ADP）与ATP的比值，导致活性氧（ROS）过度产生[1]。
苯乙双胍激活AMPK，进而通过激活TSC2蛋白抑制mTOR通路，导致S6K蛋白抑制和4E-BP1蛋白激活，从而降低肿瘤细胞生长[1]。
苯乙双胍阻断IR/IGF1R信号转导，并降低下游蛋白（如ErbB2、AKT、ERK和mTOR）的表达[1]。
苯乙双胍抑制CDK4和D-甘氨酸，并激活p21蛋白。 [1].
苯乙双胍会消耗核苷三磷酸（NTP），从而可能阻止核苷酸的合成[1].

在体内乳腺癌异种移植模型中，苯乙双胍在雌激素受体（ER）阳性的MCF-7和三阴性的MDA-MB-231模型中均显示出抗肿瘤潜力[1]。在胆管癌（CCA）模型中，苯乙双胍可抑制体内肿瘤生长[1]。在胶质瘤异种移植模型中，苯乙双胍可延长小鼠的生存期，尤其是在与二氯乙酸（DCA）联合使用时[1]。在采用多种肿瘤细胞系的同源小鼠模型中，与对照组相比，苯乙双胍/草酰胺联合用药可缩小肿瘤体积并增加细胞凋亡[1]。在浆液性卵巢癌小鼠模型中，苯乙双胍显示出抗肿瘤作用[1]。

细胞增殖和活力检测：本研究评估了苯乙双胍对多种癌细胞系（包括卵巢癌细胞（SKOV3、IGROV-1、Hey）、乳腺癌细胞（MCF-7、MDA-MB-231）、头颈癌细胞、胆管癌细胞和黑色素瘤细胞）增殖的影响。细胞用递增浓度的苯乙双胍处理，并在特定时间（例如 48-72 小时）后，使用标准检测方法（例如 MTT、CellTiter-Glo）检测细胞活力。结果表明，苯乙双胍对细胞增殖具有剂量依赖性抑制作用，且其抑制效果显著强于二甲双胍[1]。
细胞周期分析：将卵巢癌细胞（SKOV3、IGROV-1、Hey）用苯乙双胍处理一定时间。随后固定细胞，用碘化丙啶 (PI) 染色，并通过流式细胞术进行分析。该检测结果显示，苯乙双胍处理可诱导 G0/G1 期细胞周期阻滞，并以剂量依赖的方式降低 S 期细胞的比例 [1]。
细胞凋亡检测：使用 Annexin V-FITC/PI 双染试剂盒结合流式细胞术评估苯乙双胍诱导的细胞凋亡。苯乙双胍处理的癌细胞（例如卵巢癌、黑色素瘤）中 Annexin V 阳性细胞的比例显著增加，表明细胞发生凋亡 [1]。
Western blot 分析：为了研究其作用机制，使用特异性抗体对苯乙双胍处理组和对照组细胞的全细胞裂解物进行 Western blot 分析。主要研究结果包括：苯乙双胍治疗导致AMPK及其底物ACC的磷酸化水平升高，表明AMPK被激活。同时，苯乙双胍治疗还导致S6K和4E-BP1的磷酸化水平降低，表明mTOR通路受到抑制。此外，苯乙双胍降低了ErbB2、AKT、ERK和CDK4等蛋白的表达，同时提高了p21的水平[1]。癌症干细胞（CSC）检测：通过检测CSC特异性标志物（例如ALDH活性）的表达，或在肺癌中进行侧群（SP）分析，以及在胶质母细胞瘤和黑色素瘤中进行球体形成实验，评估了苯乙双胍对CSC的影响。苯乙双胍治疗降低了这些模型中的CSC标志物表达，并抑制了其自我更新能力[1]。

乳腺癌异种移植模型：** 将MCF-7（ER阳性）或MDA-MB-231（三阴性）人乳腺癌细胞原位移植到雌性无胸腺裸鼠体内。待肿瘤形成后，将小鼠随机分为两组，分别接受载体对照组或苯乙双胍治疗。苯乙双胍的给药剂量和方案具体未在正文中详细说明。通过游标卡尺测量监测肿瘤生长情况，结果显示，与对照组相比，苯乙双胍在两种模型中均显著抑制了肿瘤生长[1]。* **黑色素瘤异种移植模型：** 将携带黑色素瘤异种移植瘤（具体情况未详细说明）的小鼠分别接受苯乙双胍单药治疗、BRAF抑制剂（例如PLX4720）单药治疗或二者联合治疗。 苯乙双胍以特定剂量（例如，一系列剂量）和频率（例如，每日一次或两次）通过灌胃（PO）给药。监测肿瘤大小和小鼠存活率。联合疗法显示出比单独使用任一药物更强的抗肿瘤疗效[1]。
* **胶质母细胞瘤异种移植模型：**将胶质母细胞瘤干细胞（GSCs）颅内植入裸鼠体内。然后用苯乙双胍、替莫唑胺（TMZ）或二者联合治疗小鼠。苯乙双胍通过灌胃给药。联合治疗协同诱导GSC死亡并延长小鼠的存活时间[1]。

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乳腺癌异种移植模型：将MCF-7（ER阳性）或MDA-MB-231（三阴性）人乳腺癌细胞原位植入雌性无胸腺裸鼠体内。当肿瘤形成后，将小鼠随机分为两组，分别接受载体对照组或苯乙双胍组。苯乙双胍的给药剂量和方案有特定规定（文中未详细说明）。通过游标卡尺测量监测肿瘤生长情况，结果显示，与对照组相比，苯乙双胍在两种模型中均显著抑制了肿瘤生长[1]。
黑色素瘤异种移植模型：携带黑色素瘤异种移植瘤（具体细节未详细说明）的小鼠分别接受苯乙双胍单药治疗、BRAF抑制剂（例如PLX4720）单药治疗或二者联合治疗。苯乙双胍通过灌胃法给药，剂量（例如，一系列剂量）和给药频率（例如，每日一次或两次）有特定规定。监测肿瘤大小和小鼠存活情况。与任何单一药物相比，联合疗法显示出更强的抗肿瘤疗效[1]。
胶质母细胞瘤异种移植模型：将胶质母细胞瘤干细胞（GSCs）颅内植入裸鼠体内。随后，分别用苯乙双胍、替莫唑胺（TMZ）或二者联合治疗小鼠。苯乙双胍采用灌胃给药。联合治疗可协同诱导GSC死亡并延长小鼠的生存期[1]。

吸收、分布和排泄
苯乙双胍易于从胃肠道吸收。其半衰期短（3小时），作用持续时间也相应较短。缓释胶囊可将降血糖作用延长至6至14小时。(14) 将C标记的苯乙双胍分别给予大鼠（100 mg/kg，口服或腹腔注射）和豚鼠（25 mg/kg，口服或腹腔注射，12.5 mg/kg）。豚鼠体内放射性物质及其代谢物的排泄速度较慢，这可能部分解释了其对苯乙双胍药理反应增强的原因。大鼠在6小时内通过胆汁清除了26%的十二指肠内注射的标记苯乙双胍（20 mg/kg），而豚鼠仅为6%。在8名糖尿病患者中，苯乙双胍的半衰期与肾功能损害程度无关，而胰岛素和肌酐的肾清除率降低与代谢物半衰期延长显著相关。对羟基苯乙双胍。

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代谢/代谢物
在大鼠和豚鼠中，苯乙双胍的主要代谢物是N(1)-β-苯乙双胍，其O-醚葡萄糖醛酸苷也已被检测到。
大鼠和豚鼠的代谢。大鼠排泄大量4-羟基苯乙双胍（游离型和葡萄糖醛酸苷结合型）和少量未代谢的苯乙双胍。代谢物随剂量和给药途径而变化。
豚鼠腹腔注射后排泄少量4-羟基苯乙双胍，但口服后不排泄。
已给予标记化合物。在豚鼠中，口服给药后24小时尿液放射性中，47%（占给药剂量的17%）为一种未鉴定的代谢物及其葡萄糖醛酸苷，该代谢物可能由脂肪族C-或N-羟基化产生。
单次口服苯乙双胍50 mg/kg 26小时后，对羟基苯乙双胍是快速代谢表型个体尿液中的主要代谢物，但在慢速代谢表型个体中未观察到。
在8例肾功能不全的糖尿病患者中，代谢物对羟基苯乙基双胍的排泄量存在差异（占总尿液剂量损失的4.9%至27%），这可能与肝脏羟基化机制的遗传多态性有关。
苯乙双胍的已知代谢产物包括对羟基苯乙基双胍。

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苯乙双胍的亲脂性比二甲双胍强，因此对线粒体膜具有更高的亲和力[1]。
由于其亲脂性，苯乙双胍可以自由穿过细胞膜，无需像二甲双胍那样依赖有机阳离子转运蛋白（OCT）进行细胞摄取[1]。这使得苯乙双胍在肿瘤细胞内浓度更高，使其对OCT未过表达的肿瘤也有效[1]。
苯乙双胍的组织生物利用度高于二甲双胍[1]。

药物相互作用
据报道，苯乙双胍可增强华法林的活性。推测的机制是，苯乙双胍在治疗的最初几个月内增强了华法林的纤溶作用。糖尿病患者使用普萘洛尔可能导致碳水化合物代谢紊乱，应避免使用。如果同时服用胰岛素和普萘洛尔，应定期监测血糖水平。与同时使用苯乙双胍时也应采取类似的预防措施。接受苯乙双胍治疗的糖尿病患者应避免饮酒，因为同时饮酒可能导致低血糖或危及生命的乳酸性酸中毒伴休克。腹腔注射苯妥英钠可降低大鼠肝脏中硫胺素、核黄素、烟酸和泛酸的水平。同时给予乙酰甲硫氨酸或苯乙双胍可使肝脏硫胺素水平恢复正常。有关苯乙双胍相互作用的更完整数据（共 6 项），请访问 HSDB 记录页面。

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苯乙双胍 因其导致致命性乳酸性酸中毒的高风险，于 20 世纪 70 年代末撤出市场 [1]。
苯乙双胍 的亲脂性结构使其对线粒体膜具有高亲和力，从而干扰氧化磷酸化并导致乳酸性酸中毒 [1]。
苯乙双胍 的效力几乎是二甲双胍的 50 倍，但其导致乳酸性酸中毒的可能性也是二甲双胍的 20 倍 [1]。

[1]. Phenformin as an Anticancer Agent: Challenges and Prospects. Int J Mol Sci. 2019 Jul 5;20(13):3316.

[2]. A review of phenformin, metformin, and imeglimin. Drug Dev Res. 2020 Jun;81(4):390-401.

苯乙双胍属于双胍类药物，这类药物的特点是末端氮原子被2-苯乙基取代。它曾被用作抗糖尿病药物，但由于潜在的乳酸性酸中毒风险而被撤出市场。苯乙双胍具有抗肿瘤、抗衰老和降血糖作用，其作用机制与其他双胍类药物类似。苯乙双胍是一种双胍类降血糖药物，其作用和用途与二甲双胍相似。尽管它通常被认为与高发（通常致命）的乳酸性酸中毒相关，但在一些国家仍然可以买到。（摘自《马丁代尔药典》第30版，第290页）苯乙双胍是一种具有降血糖活性的双胍类抗糖尿病药物。由于其与高乳酸性酸中毒风险相关，苯乙双胍已不再用于临床。苯乙双胍是一种双胍类降血糖药物，其作用和用途与二甲双胍相似。尽管苯乙双胍通常被认为与高发（通常致命）乳酸性酸中毒相关，但在一些国家仍然可以买到。（摘自《马丁代尔药典》第30版，第290页）适应症：用于治疗2型糖尿病。作用机制：苯乙双胍与AMP激活蛋白激酶（AMPK）结合。AMPK是一种高度敏感的细胞能量传感器，可监测能量消耗并在激活后下调ATP消耗。研究表明，双胍类药物苯乙双胍可以独立地降低离子转运过程，影响细胞代谢并激活AMPK。苯乙双胍的降血糖活性与其激活AMPK有关，AMPK激活会使胰岛素敏感细胞误认为胰岛素水平低，从而使身体像处于低热量消耗状态一样利用葡萄糖。该药物似乎还能抑制几种ATP敏感性钾通道（特别是受体亚型Kir6.1）。体外研究表明，较高剂量的苯乙双胍可通过增强无氧糖酵解来增加葡萄糖的利用率。这被认为是由于抑制细胞呼吸所致，或与之同时发生。……三磷酸腺苷 (ATP) 浓度降低，乳酸浓度升高。该药物的第二个作用是减少糖异生。……最近发现的一个作用是抑制肠道对葡萄糖以及其他一些物质的吸收；例如，已观察到维生素 B12 吸收减少。……对健康个体无效……可能是因为外周葡萄糖利用率的增加被肝脏葡萄糖的增加所补偿……双胍类药物显然通过抑制糖异生和提高胰岛素敏感性来间接降低血糖。口服降血糖药：它们诱导并增加外周组织对葡萄糖的利用，减少肝脏糖异生，并降低肠道对葡萄糖、维生素 B 和胆汁酸的吸收。双胍类药物：苯乙双胍通常仅降低糖尿病患者的血糖；它还可以降低营养不良者的血糖水平，但对营养良好的人没有影响。在常用剂量下，苯乙双胍不会引起健康个体的乳酸性酸中毒。苯乙双胍需要胰岛素才能发挥作用，但不会引起血浆胰岛素水平升高。

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治疗用途
降血糖药物
实验应用：从3.5月龄开始，每周5天给C3H/SN小鼠服用苯乙双胍（2毫克），直至死亡，结果显示自发性肿瘤数量减少了4倍，动物的平均生存期延长了100天。
每日需要超过40单位胰岛素的患者可能对苯乙双胍无反应。 ...苯乙双胍与雌激素联合使用已成功用于降低心肌梗死幸存者的死亡率。
苯乙双胍用于治疗成人发病型糖尿病……
有关苯乙双胍（8种类型）治疗用途的更完整数据，请访问HSDB记录页面。

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药物警告
肾性糖尿时可能发生致命性低血糖。
两名接受苯乙双胍治疗的糖尿病患者出现不可逆性乳酸性酸中毒。
据报道，口服苯乙双胍（一种抗糖尿病药物）会导致短暂性……一名53岁糖尿病患者出现近视。
严重肝肾功能不全或充血性心力衰竭的患者不适合服用口服降糖药。……目前不建议孕妇服用。
有关苯乙双胍（共11项）药物警告的更完整数据，请访问HSDB记录页面。

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药效学
苯乙双胍是一种双胍类（含有两个胍基）降血糖药，用于治疗糖尿病，其作用和用途与二甲双胍（格华止）相似。两种药物的作用机制是：(1) 减少肠道对葡萄糖的吸收；(2) 减少肝脏葡萄糖的生成；(3) 提高机体对胰岛素的利用率。更具体地说，苯乙双胍通过提高胰岛素敏感性来改善血糖控制。苯乙双胍通常与较高的酸中毒发生率相关。通常，双胍类药物仅适用于病情稳定的II型糖尿病患者，这些患者没有肝脏、肾脏或心血管疾病，且无法通过饮食控制血糖。

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苯乙双胍是一种口服双胍类药物，最初用于治疗2型糖尿病[1]。
苯乙双胍不仅通过激活AMPK诱导低血糖发挥抗肿瘤作用，而且还能阻断mTOR调节复合物[1]。
添加苯乙双胍可以消除对血管生成抑制剂酪氨酸激酶抑制剂（TKI）的耐药性[1]。
苯乙双胍正在被研究作为一种抗癌药物，尤其是在与其他疗法联合使用时。纪念斯隆-凯特琳癌症中心正在开展一项 I 期临床试验 (NCT03026517)，旨在评估苯乙双胍联合标准化疗（达拉非尼加曲美替尼）治疗 BRAF 突变型黑色素瘤患者的安全性 [1]。苯乙双胍具有抑制氧化磷酸化 (OXPHOS) 的能力，而氧化磷酸化在癌症干细胞 (CSC) 中通常处于高表达状态 [1]，因此苯乙双胍在靶向癌症干细胞方面显示出潜在疗效。苯乙双胍的拟定联合治疗方案包括：与草酰胺/二氯乙酸 (DCA) 联合使用以诱导代谢灾难；与 BRAF 抑制剂（例如 PLX4720、维莫非尼）联合使用以克服黑色素瘤的耐药性；与 ERK 抑制剂（例如 SCH772984）联合使用以治疗 NF1 突变型癌症。并与替莫唑胺（TMZ）联合用于治疗胶质母细胞瘤[1]。

C10H15N5

205.27

205.132

114-86-3

Phenformin hydrochloride;834-28-6

8249

White to off-white solid powder

1.2±0.1 g/cm3

332.2±35.0 °C at 760 mmHg

280-282°C

154.7±25.9 °C

0.0±0.7 mmHg at 25°C

1.620

-0.6

97.78

3

1

4

15

236

0

ICFJFFQQTFMIBG-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C10H15N5/c11-9(12)15-10(13)14-7-6-8-4-2-1-3-5-8/h1-5H,6-7H2,(H6,11,12,13,14,15)

1-(diaminomethylidene)-2-(2-phenylethyl)guanidine

BRN 1977317 Azucaps DebeonePhenformin Insoral

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。