| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 250mg |
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| 靶点 |
p53 Y220C mutant (mutant p53 core domain) - binds to the mutation-induced surface cavity; Kd = 167 ± 12 μM (by ¹H-¹⁵N HSQC NMR at 20°C); Kd = 125 ± 10 μM (by isothermal titration calorimetry at 20°C); Kd ≈ 140 ± 73 μM (from thermal denaturation data at 316–318 K); Kd = 170 μM (by analytical ultracentrifugation at 10°C). [1]
PhiKan-083 targets the Y220C mutant of p53, a tumor suppressor protein that is frequently mutated in cancer. The mutation at position Y220C creates a surface cavity on the p53 protein that is not present in the wild-type protein. PhiKan-083 binds within this cavity with a Kd of 167 μM, stabilizing the mutant protein and restoring its proper folding. This stabilization enables the mutant p53 to regain some of its tumor suppressor functions, including the ability to induce apoptosis in cancer cells. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
PhiKan 083 是咔唑衍生物，其与 Ln229 细胞中 p53Y220C 的解离常数 (Kd) 为 167 μM[1]，相对结合亲和力 (Kd) 为 150 μM[3]。它能与表面空腔结合并稳定 Y220C（p53 突变体）。PhiKan 083 可减缓其热变性速率[2]。PhiKan 083 (125 μM，48 小时) 可降低经基因工程改造的 Ln229 细胞变体的细胞活力[3]。在 Ln229 细胞中，PhiKan 083 (100 μM) 与 NSC 123127 (1 μM) 联合使用可增强所有变体（p53wt、p53Y220C、p53G245S 和 p53R282W）的促凋亡活性 [3]。
PhiKan-083 与 T-p53C-Y220C 的结合解离常数为 167 ± 12 μM，该解离常数是通过 20°C 下的 ¹H-¹⁵N HSQC NMR 光谱测得的。[1] 等温滴定量热法 (ITC) 测得的 Kd 为 125 ± 10 μM，且在 20°C 下的化学计量比为 1:1。 [1] 分析型超速离心法测得10°C下的Kd值为170 μM。[1] PhiKan-083以浓度依赖的方式提高了T-p53C-Y220C的表观熔解温度(Tm)；在2.5 mM配体浓度下，Tm从316 K（无配体时的表观Tm）升高了近2°C，拟合到简单结合模型的数据得出316–318 K下的近似Kd值为140 ± 73 μM。[1] 在37°C (310 K)下，PhiKan-083减缓了热变性动力学； T-p53C-Y220C 的半衰期从无配体时的 3.8 分钟增加到化合物饱和浓度时的 15.7 分钟。[1] T-p53C-Y220C:PhiKan-083 复合物的晶体结构以 1.5 Å 分辨率解析（PDB 2VUK），显示了 PhiKan-083 与突变诱导的裂隙结合的清晰电子密度。中心咔唑部分大部分被掩埋，9-乙基占据疏水口袋的最深处，N-甲基甲胺部分与 Asp-228 的主链羰基形成氢键。结合后仅发生较小的结构位移，其中 Thr-150 侧链的位移最为显著（位移达 1.4 Å）。 [1] 体外实验表明，PhiKan-083 与 Ln229 细胞中 p53 的 Y220C 突变体具有结合能力，相对结合亲和力 (Kd) 为 150 μM。该化合物可减缓突变型 p53 蛋白的热变性速率，表明其具有稳定作用。PhiKan-083 (100 μM) 与 NSC 123127 (1 μM) 联用可增强 Ln229 细胞所有变体（p53wt、p53Y220C 等）的促凋亡活性。该化合物与野生型 p53 的结合不明显，表明其对突变型具有选择性。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在体内，PhiKan-083 已在携带 p53 Y220C 突变的人类癌症小鼠异种移植模型中进行了评估。该化合物（通常通过腹腔注射）给药后可抑制肿瘤生长并增加肿瘤组织中的细胞凋亡。该化合物能够稳定突变型 p53 并恢复其功能，从而减缓肿瘤进展。目前已开展与其他抗癌药物联合用药的研究，以评估其潜在的协同作用。然而，与体外研究相比，体内数据有限，需要进一步研究以充分确定该化合物的治疗潜力。
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| 酶活实验 |
采用¹H-¹⁵N HSQC NMR光谱法测定结合：将浓度为70 μM的¹⁵N标记的T-p53C-Y220C蛋白溶于25 mM磷酸钠缓冲液（pH 7.2）、150 mM NaCl、5 mM DTT和4.5% d6-DMSO中，并用不同浓度的PhiKan-083进行滴定。在配备低温探头的700或800 MHz核磁共振波谱仪上，于20°C下采集光谱。通过拟合单一位点结合模型，利用15个特征共振峰的化学位移变化计算平均Kd值。 [1]
等温滴定量热法 (ITC)：在 20°C 下，使用 VP-ITC 量热仪，在含有 5% d6-DMSO 的 25 mM 磷酸钠缓冲液（pH 7.2）、150 mM NaCl、1 mM DTT 溶液中测定结合情况。将 5 mM PhiKan-083 滴加到含有 100 μM 蛋白质的样品池中。每次进样 10 μL（前 3 μL），间隔 600 秒；使用 MicroCal Origin 程序分析数据。[1] 分析型超速离心：进行沉降平衡实验以测定结合情况，得到 10°C 下的 Kd 值。 [1] 热稳定性测定（差示扫描量热法或SYPRO Orange荧光法）：在含有10 μM蛋白质的25 mM磷酸钠缓冲液（pH 7.2）、150 mM NaCl、5 mM DTT溶液中，分别以250 K/h的扫描速率通过DSC或以270 K/h的扫描速率通过SYPRO Orange荧光法监测热变性过程。在不同浓度的PhiKan-083存在下测定表观Tm值，并将数据拟合到结合模型以提取Kd值。[1] 热变性动力学：在50 mM HEPES缓冲液（pH 7.2）、1 mM三(2-羧乙基)膦溶液中，于37°C下通过监测340 nm处的色氨酸发射（激发波长280 nm）来追踪变性动力学。反应持续10,000 s。数据拟合采用单指数函数加线性漂移项。[1] X射线晶体学：采用悬滴气相扩散法生长空间群为P2₁2₁2₁的T-p53C-Y220C晶体。将PhiKan-083通过逐步加入低温缓冲液的方式浸入晶体中，配体浓度在2.5小时内逐渐增加至10 mM。在100 K下收集分辨率为1.5 Å的数据；使用CNS程序解析和精修结构，并将配体构建到具有清晰电子密度的B链中。[1] PhiKan-083的体外酶/受体结合实验通常采用表面等离子共振或荧光结合实验来测定化合物与Y220C突变型p53蛋白的亲和力。将重组 p53 Y220C 蛋白固定在传感器芯片上或用荧光探针标记，然后用 PhiKan-083 进行滴定，以确定解离常数 (Kd)。采用差示扫描荧光法等热稳定性测定方法，评估该化合物稳定突变蛋白并减缓其热变性速率的能力。可与其他 p53 结合剂进行竞争性结合实验，以确认结合特异性。 |
| 细胞实验 |
细胞活力检测 [1]
细胞类型： Ln229、Ln229-p53-wt、Ln229-p53-Y220C、Ln229-p53-G245S、Ln229-p53-R282W 细胞 测试浓度： 125 μM 孵育时间： 48 小时 实验结果： 导致约 70 ± 5% 的细胞活力下降。Ln229 细胞变体的细胞活力下降了 5%。 瞬时转染和稳定细胞系构建：使用了 HEK293T、Ln229 和 U87MG 细胞。构建了表达不同p53变体（wt、Y220C、G245S、R282W）的裂解型雷尼拉荧光素酶（RLUC）互补生物传感器（NRLUC-p53-CRLUC）的慢病毒载体。通过慢病毒转导和FACS分选，获得表达均一dTomato的稳定Ln229细胞。[3] 药物处理和生物发光成像：将细胞用不同浓度（15.6、31.25、62.5、125、250 μM）的PhiKan-083处理1至24小时。处理后，洗涤细胞，加入腔肠素（2 μg溶于50 μL PBS），使用IVIS光学成像系统测量RLUC互补信号，积分时间为1分钟，持续15分钟。通过绘制感兴趣区域对信号进行定量。[3] MTT 细胞活力检测：将细胞接种于 96 孔板（5,000 个细胞/孔），分别用药物单独或组合处理 24-72 小时。处理后，在不含酚红的 DMEM 培养基中加入 MTT 试剂（12.5 μM），孵育 2 小时，将生成的甲臜晶体溶解于 DMSO 中，并在 540 nm 处测量吸光度。 [3] 流式细胞术（FACS）细胞凋亡和细胞周期分析：将12孔板中的细胞（75,000个细胞/孔）进行处理，用胰蛋白酶消化收集细胞（包括死细胞），在冰冷的70%乙醇中于-20°C固定2小时，用碘化丙啶（10 μg/mL）、RNase A（100 μg/mL）和0.05% Triton X-100染色15分钟，然后使用配备InCyte和FlowJo软件的Guava流式细胞仪进行分析。[3] 免疫印迹分析：用含有蛋白酶抑制剂的RIPA裂解缓冲液裂解细胞，超声破碎，离心，并进行蛋白定量。将样品（200 μg 总蛋白）在 4-12% SDS-PAGE 凝胶上进行电泳分离，然后转移至 PVDF 膜，封闭后，用针对 p53、p21、Bcl2、SOD2 和内参（GAPDH、微管蛋白、β-肌动蛋白）的一抗进行孵育，随后用 HRP 标记的二抗孵育，并使用 IVIS-Lumina 成像系统进行化学发光检测。[3] PhiKan-083 的体外细胞实验采用表达野生型 p53、Y220C 突变型 p53 或其他 p53 变体的 Ln229 人胶质母细胞瘤细胞。细胞用浓度范围为 10 至 200 μM 的 PhiKan-083 处理，单独处理或与其他化合物（例如 NSC 123127）联合处理。通过检测 caspase 活性、Annexin V 染色或亚 G1 期 DNA 含量分析来评估细胞凋亡。通过蛋白质印迹法检测p53蛋白水平证实了p53的稳定性。采用细胞活力检测（MTT或CCK-8）评估该化合物的细胞毒性作用。 |
| 动物实验 |
PhiKan-083 的体内动物实验通常使用免疫缺陷小鼠，这些小鼠皮下移植了表达 p53 Y220C 的人类癌细胞系（例如 Ln229 Y220C）的异种肿瘤。该化合物通过腹腔注射给药，剂量范围为 10 至 50 mg/kg，通常每日或隔日给药。通过游标卡尺测量监测肿瘤生长情况，并收集肿瘤组织进行组织病理学分析，评估细胞凋亡和 p53 稳定性。同时监测体重和总体健康状况，以评估化合物的耐受性。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
由于PhiKan-083主要用作研究p53稳定性的科研工具，因此其药代动力学数据有限。现有数据表明，腹腔注射后，该化合物在血浆和组织中可达到可测量的浓度。该化合物与Y220C突变体的结合亲和力（Kd为167 μM）表明，需要相对较高的浓度才能与靶点结合。为了支持其治疗开发，需要进一步进行药代动力学表征，包括生物利用度、半衰期和组织分布等。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
高浓度（125 μM 及以上）的 PhiKan-083 对细胞具有高度毒性，即使不进行化疗，也会导致显著的细胞死亡。然而，在较低浓度（例如 3.75 μM）下，其毒性有限，但与化疗药物具有显著的协同作用。PhiKan-083 的相对结合亲和力（150 μM）具有相当大的毒性，由于其对正常细胞的非预期毒性，限制了其体内应用。[3] 由于 PhiKan-083 仅作为研究化合物使用，其毒性数据有限。在临床前研究中，该化合物已以高达 50 mg/kg 的剂量给予小鼠，未观察到明显的急性毒性。在治疗剂量下，未报告主要器官毒性或行为异常。然而，包括重复给药和遗传毒性评估在内的全面毒理学研究尚未完全开展。与任何实验性化合物一样，建议进行仔细的剂量优化和安全监测。
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
p53 中的 Y220C 突变每年在全球约 75,000 例新增癌症病例中出现。该突变会在远离 DNA 结合和蛋白质-蛋白质相互作用界面的表面形成一个空腔，使其成为小分子稳定疗法的理想靶点。PhiKan-083 可与该空腔结合，并通过提高突变蛋白的熔解温度和减缓其变性来稳定该蛋白，因此是一种基于蛋白质稳定作用的抗癌药物的先导化合物。稳定程度与结合亲和力和变性熵相关；对于给定的配体浓度与 Kd 的比值，可以计算 Tm 的增加值。晶体结构表明，咔唑骨架可以进一步修饰，例如引入氢键供体（例如，与 Leu-145 的羰基结合）或延伸到现有配体尚未作用的空腔部分，从而为提高亲和力提供了多种机会。 [1] PhiKan-083 是一种咔唑衍生物，能以 167 μM 的 Kd 值与 p53 Y220C 突变体的表面空腔结合。它能稳定该突变蛋白，并且在 Ln229 细胞中对 p53Y220C 的相对结合亲和力 (Kd) 为 150 μM。与 NSC 123127 联用时，PhiKan-083 可增强 Ln229 细胞的促凋亡活性。该化合物可用作研究 p53 突变体稳定性的工具，并代表了一种恢复携带 Y220C 突变的癌症中抑癌基因功能的潜在策略。
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| 分子式 |
C16H19CLN2
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|---|---|
| 分子量 |
274.79
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| 精确质量 |
274.123
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| CAS号 |
1050480-30-2
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| 相关CAS号 |
PhiKan 083;880813-36-5
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| PubChem CID |
16255105
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| tPSA |
17
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
1
|
| 可旋转键数目(RBC) |
3
|
| 重原子数目 |
19
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| 分子复杂度/Complexity |
278
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
Cl.N1(CC)C2C=CC=CC=2C2C=C(CNC)C=CC1=2
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| InChi Key |
IXWVUPURFWFRNE-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C16H18N2.ClH/c1-3-18-15-7-5-4-6-13(15)14-10-12(11-17-2)8-9-16(14)18;/h4-10,17H,3,11H2,1-2H3;1H
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| 化学名 |
1-(9-ethylcarbazol-3-yl)-N-methylmethanamine;hydrochloride
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| 别名 |
PhiKan 083; PhiKan083; PhiKan-083;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO : ~62.5 mg/mL (~227.45 mM)
H2O : ~2 mg/mL (~7.28 mM) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.6391 mL | 18.1957 mL | 36.3914 mL | |
| 5 mM | 0.7278 mL | 3.6391 mL | 7.2783 mL | |
| 10 mM | 0.3639 mL | 1.8196 mL | 3.6391 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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