| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 2mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
α7 nAChR/α7 nicotinic acetylcholine receptor
PNU-282987 S enantiomer free base targets the α7 nicotinic acetylcholine receptor (α7 nAChR), a ligand-gated ion channel involved in cognitive function, neuroprotection, and inflammation. It selectively activates α7 nAChR, enhancing neural plasticity and cognitive function. |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
在大鼠脑匀浆中，PNU-282987（化合物C7）的Ki值为27 nM，可取代R7选择性拮抗剂甲基乌头碱（MLA）[1]。PNU-282987的EC50值为154 nM，表现出α7 nAChR激动剂活性[1]。此外，PNU-282987还能阻断5-HT3受体，IC50值为4541 nM[1]。
我们采用多种方法验证了嵌合体分析法可用于鉴定天然受体的激动剂。在结合实验中，PNU-282987以27 nM的Ki值从大鼠脑匀浆中置换出α7选择性拮抗剂甲基乌头碱（MLA）。此外，当应用于培养的大鼠海马神经元时，PNU-282987 可诱发一种快速脱敏的内向全细胞电流，该电流呈浓度依赖性，并可被 MLA 阻断，这与 α7 受体的开放相一致 [1] 。研究人员还评估了 PNU-282987 对相关受体的选择性。他们尤其关注 PNU-282987 对神经肌肉接头型受体 (α1β1γδ) 和主要神经节型 nAChR (α3β4) 的激动作用。研究表明，激活这些受体会导致许多与依匹巴汀和尼古丁等非特异性激动剂类似的不良反应。15 PNU-282987 在浓度高达 100 μM 时未显示出可检测的激动剂活性，并且在两种受体亚型上均未显示出可忽略的拮抗剂活性 (IC50 ≥ 60 μM)。此外，PNU-282987 在 1 μM 浓度下并未显著置换大鼠脑匀浆中的氚标记金雀花碱（抑制率为 14%），表明其对 α4β2 亚型具有高度选择性。16 对于 5-HT3 受体，PNU-282987 置换氚标记的 GR-65630 的 Ki 值为 1662 nM，17 这表明其对 α7 亚型的选择性约为化合物 1 对 5-HT3R 选择性（超过 500 倍）的 62 倍。在基于细胞的 FLIPR 检测中，PNU-282987 被发现是 5-HT3 受体的功能性拮抗剂（IC50 = 4541 nM）。在法国Cerep公司（位于法国吕埃-马尔迈松）进行的一项筛选中，对32种受体、离子通道和酶进行了PNU-282987的广谱选择性评估。在1 μM的测试浓度下，PNU-282987对除5-HT3受体外的所有靶点的特异性结合或酶活性抑制率均低于30%[1]。 体外实验表明，PNU-282987 S对映体游离碱可作为α7 nAChR的激动剂。该化合物激活α7 nAChR可增强神经可塑性和认知功能。它被用于研究胆碱能信号传导以及α7 nAChR在各种生理和病理过程中的作用。其效力和功效符合α7 nAChR激动剂的特征。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
PNU-282987（化合物C7）（静脉注射；1、3 mg/kg）可逆转门控缺陷[1]。在大鼠海马神经元中，PNU-282987（30 μM）以浓度依赖性和可被MLA阻断的方式刺激电流[1]。研究人员还在一种感觉门控受损的大鼠模型中测试了PNU-282987，该模型已通过已知的α7部分激动剂GTS-21验证。18 全身性给予d-安非他明（0.3或1 mg/kg，静脉注射）显著破坏了麻醉大鼠的听觉门控，这是由于条件反射反应同时降低和测试反应相应增加所致。随后静脉注射α7 nAChR激动剂PNU-282987（1或3 mg/kg，n = 10）显著逆转了苯丙胺诱导的门控缺陷（图4）。相反，在对照组大鼠中应用溶剂并未使苯丙胺诱导的门控缺陷恢复正常（n = 9）。此外，PNU-282987（1 mg/kg）对麻醉大鼠的正常门控功能无显著影响（n = 4）。
在体内，PNU-282987 S对映体游离碱被用于阿尔茨海默病、精神分裂症、认知增强和胆碱能抗炎反射的研究。激活脑内的α7 nAChR可改善认知功能。在炎症模型中，它可能调节胆碱能抗炎通路。需要进一步的体内研究来证实其治疗潜力。 |
| 酶活实验 |
脑匀浆结合试验（[3H]-MLA、[3H]-金雀花碱、[3H]-GR65630）：[1]
雄性Sprague-Dawley大鼠（300-350 g）断头处死，迅速解剖取出脑组织（去除小脑），称重后，用9倍体积/g湿重的冰冷0.32 M蔗糖溶液，以50档旋转研杵（上下研磨10次）进行匀浆。匀浆液在40℃下以1,000 xg离心10分钟。收集上清液，并在40℃下以20,000 xg离心20分钟。将所得沉淀重悬至蛋白浓度为1-8 mg/ml。取5 ml匀浆分装后置于-80°C冷冻保存，直至进行测定。测定当天，将分装好的匀浆在室温下解冻，并用Kreb氏缓冲液（20 mM HEPES，pH 7.0，室温下）稀释，该缓冲液含有4.16 mM NaHCO₃、0.44 mM KH₂PO₄、127 mM NaCl、5.36 mM KCl、1.26 mM CaCl₂和0.98 mM MgCl₂，使每管加入25-150 mg蛋白质。采用Bradford法测定蛋白质浓度，以牛血清白蛋白为标准。对于α7，非特异性结合的测定方法为：将组织平行孵育，加入1 µM MLA（在放射性配体加入之前）；在竞争性实验中，将化合物以递增浓度加入试管，然后加入约3 nM [³H]-MLA (25 Ci/mmol)。对于α4，非特异性结合的测定方法为：将组织平行孵育，加入1 mM (-)-尼古丁（在放射性配体加入之前）；在竞争性实验中，将化合物以递增浓度加入试管，然后加入约1.0 nM [³H]-金雀花碱。对于5-HT3，非特异性结合的测定方法为：将组织平行孵育，加入1 µM ICS-205930（在放射性配体加入之前）；在竞争性实验中，将化合物以递增浓度加入试管，然后加入约0.45 nM [³H]-GR65630。在所有结合实验中，将0.4 ml匀浆加入含有缓冲液、测试化合物和放射性配体的试管中，并在25°C下孵育1小时，最终体积为0.5 ml。孵育结束后，使用安装在48孔Brandel细胞收集器上的Whatman GF/B玻璃滤纸进行快速真空过滤终止反应。滤纸预先浸泡在50 mM Tris-HCl缓冲液（pH 7.0）和0.05%聚乙烯亚胺溶液中。滤纸用5 ml冰冷的0.9%生理盐水洗涤两次，然后用液体闪烁计数法测定放射性。抑制常数（Ki）通过将放射性配体结合的浓度依赖性抑制数据拟合到Cheng-Prusoff方程计算得出。PNU-282987在此实验中的Ki值为27 ± 1 nM（n = 48）。 PNU-282987 在 1 µM 浓度下未显著置换大鼠脑匀浆中的氚标记金雀花碱（抑制率 = 14 ± 4 %, n=13）。对于 5-HT3 受体，PNU-282987 置换氚标记的 GR-65630 的 Ki 值为 1,662 ± 331 nM (n=10)。 使用表达重组 α7 nAChR 的细胞进行 PNU-282987 S 对映体游离碱的体外受体结合和功能测定。使用 [³H]-甲基乌头碱 (MLA) 或 [¹²⁵I]-α-银环蛇毒素进行放射性配体结合测定来评估受体结合。使用钙离子流测定（例如 FLIPR）或膜片钳电生理技术来测量功能活性。 |
| 细胞实验 |
使用神经元细胞系（例如 SH-SY5Y）或表达 α7 nAChR 的原代神经元进行 PNU-282987 S 对映体游离碱的细胞活性测定。细胞用浓度范围为 0.01 至 100 µM 的化合物处理 1 至 24 小时。使用荧光钙指示剂（例如 Fluo-4 AM）测量钙离子内流。还可以评估神经元存活率和神经突生长情况。
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| 动物实验 |
膜片钳电生理：培养神经元的制备参照Brewer的方法。简而言之，将Sprague-Dawley大鼠（出生后第3天）断头处死，取出脑组织并置于冰冷的Hibernate-A培养基中。轻轻取出海马区，切成小块，置于含1 mg/ml木瓜蛋白酶的Hibernate-A培养基中，于35℃消化60分钟。消化后，用Hibernate-A培养基多次洗涤组织，然后转移至装有6 ml含2% B-27补充剂的Hibernate-A培养基的50 ml锥形管中。将神经元通过轻柔研磨法分离，并以300-700个细胞/mm²的密度接种于聚赖氨酸/层粘连蛋白包被的盖玻片上，然后转移至含有预热培养基的24孔组织培养板中。该培养基由Neurobasal-A培养基、2% B-27添加剂、0.5 mM L-谷氨酰胺、100 U/ml青霉素、100 mg/ml链霉素和0.25 mg/ml两性霉素B组成。细胞在37℃、6% CO₂的加湿培养箱中培养1-2周。培养基在24小时后更换一次，之后大约每三天更换一次。使用弗莱明/布朗微量移液管拉制仪，以硼硅酸盐毛细管玻璃为材料拉制膜片钳电极，并填充内液，内液成分为（单位：mM）：CsCH3SO3 (126)、CsCl (10)、NaCl (4)、MgCl2 (1)、CaCl2 (0.5)、EGTA (5)、HEPES (10)、ATP-Mg (3)、GTP-Na (0.3)、磷酸肌酸 (4)，pH 7.2。填充内液后，膜片钳电极的电阻范围为 3 – 6 MΩ。所有实验均在室温下进行。培养细胞持续灌流含有以下成分（单位：mM）：NaCl (140)、KCl (5)、CaCl2 (2)、MgCl2 (1)、HEPES (10)、葡萄糖 (10)、比库啉 (0.01)、CNQX (0.005)、D-AP-5 (0.005)、河豚毒素 (0.0005)，pH 7.4。化合物溶于水或DMSO，并稀释到最终DMSO浓度为0.1%的外浴液中，通过多管快速灌流系统进行灌流。使用Axopatch 200B放大器（Axon Instruments，Union City，CA）记录全细胞电流。模拟信号经1/5采样频率滤波、数字化、存储，并使用pCLAMP软件（Axon Instruments）进行测量。所有数据均以平均值±标准误（SEM）表示。[1]
听觉门控实验。实验对象为雄性Sprague-Dawley大鼠（体重250-300克），采用水合氯醛麻醉（400 mg/kg，腹腔注射）。分别对大鼠的股动脉和股静脉进行插管，用于监测动脉血压和给药或追加麻醉剂。使用置于CA3区的金属单极宏电极记录单侧海马场电位（EEG）（坐标：距前囟后3.0-3.5 mm，侧方2.6-3.0 mm，腹侧3.8-4.0 mm；Paxinos和Watson，1986）。场电位经放大、滤波（0.1-100 Hz）、显示和记录后，用于在线和离线分析（Spike3软件）。定量EEG分析采用快速傅里叶变换（FFT）（Spike3软件）。听觉刺激由一对持续10毫秒、频率为5千赫兹的纯音脉冲组成，第一个“条件刺激”和第二个“测试刺激”之间有0.5秒的延迟。通过对50对刺激（刺激间隔为10秒）的反应取平均值来计算听觉诱发电位。门控百分比的计算公式为：(1 - 测试振幅/条件振幅) × 100。为了破坏感觉门控，给予安非他明（硫酸右旋安非他明，0.3-1毫克/千克，静脉注射）。在给予安非他明5分钟后开始记录诱发电位，仅使用门控缺陷超过20%的大鼠进行后续α7 nAChR激动剂或溶剂对照的评估。统计学显著性采用双尾配对t检验确定。 [1] PNU-282987 S 对映体游离碱的体内动物研究是在阿尔茨海默病、精神分裂症或炎症的啮齿动物模型中进行的。该化合物通过口服或腹腔注射给药。认知功能评估采用行为学测试，例如莫里斯水迷宫或新物体识别测试。炎症标志物在血清或组织样本中进行检测。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
PNU-282987 S 对映体游离碱的药代动力学性质尚未得到充分表征。该化合物的分子量为 264.75。由于其分子量小且具有中等的亲脂性，预计能够穿过血脑屏障。需要进行啮齿动物的标准药代动力学研究来确定其半衰期、生物利用度和组织分布。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
PNU-282987 S 对映体游离碱的毒理学数据有限。作为一种研究化合物，它仅供实验室使用。目前尚未有明显的急性毒性报告。标准的毒性筛选将包括啮齿动物的急性毒性和重复剂量研究。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
我们利用嵌合受体，在基于细胞的高通量功能性检测中，测试了一系列苯甲酰胺化合物对α7尼古丁乙酰胆碱受体（nAChR）的激动活性。结果表明，醌环苯甲酰胺化合物具有α7 nAChR激动活性。这些化合物的构效关系与5-HT3受体（α7 nAChR的结构同源物）不同。其中，活性最高的化合物PNU-282987也被证实能够激活培养的大鼠神经元中的天然α7 nAChR，并逆转苯丙胺诱导的大鼠神经元门控缺陷。[1] 总之，我们采用平行合成法，探索了含叔胺的芳香酰胺化合物作为α7 nAChR激动剂的构效关系。在测试的五种结构不同的胺类化合物中，只有3-氨基醌环产生了活性类似物。 R对映异构体的活性高于相应的S对映异构体。在苯甲酰胺部分，对位上的小取代基可得到活性最高的类似物。该系列中最有效的类似物是4-氯苯甲酰胺，即PNU-282987。多项实验证实，α7-5HT3嵌合体分析可以预测天然α7 nAChR的活性。PNU-282987能够以27 nM的Ki值从大鼠脑匀浆中置换MLA，并以浓度依赖性和MLA阻断的方式诱导大鼠海马神经元产生电流。我们还在感觉门控受损的大鼠模型中测试了该化合物。用PNU-282987治疗感觉门控受损的大鼠可逆转其门控缺陷。这些结果表明，(R)-3-氨基奎宁环芳酰胺（例如 PNU-282897）可作为寻找 α7 nAChR 激动剂的模板，这些激动剂可能有助于治疗精神分裂症的认知和注意力缺陷。[1]
PNU-282987 S 对映体游离碱是 α7 尼古丁乙酰胆碱受体 (α7 nAChR) 的选择性激动剂。它被用于阿尔茨海默病、精神分裂症、认知增强和胆碱能抗炎反射的研究。它是 PNU-282987 的 S 对映体。它并非药物，也未获得临床批准。 |
| 分子式 |
C14H17CLN2O
|
|---|---|
| 分子量 |
264.750582456589
|
| 精确质量 |
264.102
|
| 元素分析 |
C, 63.51; H, 6.47; Cl, 13.39; N, 10.58; O, 6.04
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| CAS号 |
737727-12-7
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| 相关CAS号 |
PNU-282987;123464-89-1;PNU-282987 free base;711085-63-1;(S)-PNU-282987 hydrochloride;128311-08-0
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| PubChem CID |
14456380
|
| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
|
| 密度 |
1.3±0.1 g/cm3
|
| 沸点 |
431.5±30.0 °C at 760 mmHg
|
| 闪点 |
214.8±24.6 °C
|
| 蒸汽压 |
0.0±1.0 mmHg at 25°C
|
| 折射率 |
1.612
|
| LogP |
2.49
|
| tPSA |
32.3
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
2
|
| 可旋转键数目(RBC) |
2
|
| 重原子数目 |
18
|
| 分子复杂度/Complexity |
307
|
| 定义原子立体中心数目 |
1
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| SMILES |
C1CN2CCC1[C@@H](C2)NC(=O)C3=CC=C(C=C3)Cl
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| InChi Key |
WECKJONDRAUFDD-CYBMUJFWSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C14H17ClN2O/c15-12-3-1-11(2-4-12)14(18)16-13-9-17-7-5-10(13)6-8-17/h1-4,10,13H,5-9H2,(H,16,18)/t13-/m1/s1
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| 化学名 |
N-[(3S)-1-azabicyclo[2.2.2]octan-3-yl]-4-chlorobenzamide
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| 别名 |
PNU-282987 S enantiomer free base; 737727-12-7; PNU-282987 (S enantiomer free base); N-[(3S)-1-azabicyclo[2.2.2]octan-3-yl]-4-chlorobenzamide; PNU-282987 S-Enantiomer; SCHEMBL10436185;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.7771 mL | 18.8857 mL | 37.7715 mL | |
| 5 mM | 0.7554 mL | 3.7771 mL | 7.5543 mL | |
| 10 mM | 0.3777 mL | 1.8886 mL | 3.7771 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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