| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 25mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
α7 nAChR/α7 nicotinic acetylcholine receptor
PNU282987 freebase targets α7 nicotinic acetylcholine receptor (α7 nAChR) as a full agonist, with a Ki value of 18 nM (radioligand binding assay) and an EC₅₀ value of 0.5 μM (ion channel activation assay) [1] |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
在大鼠脑匀浆中，PNU-282987（游离碱）（化合物 C7）取代了 Ki 为 27 nM 的 R7 选择性拮抗剂甲基乌头碱 (MLA) [1]。 PNU-282987 的 EC50 为 154 nM，具有 α7 nAChR 激动剂活性 [1]。此外，PNU-282987 还能阻断 5-HT3 受体，IC50 为 4541nM[1]。
使用了几种试验来验证嵌合体试验可用于鉴定天然受体的激动剂。在结合试验中，PNU-282987以27 nM的Ki从大鼠脑匀浆中置换了α7选择性拮抗剂甲基乌头碱（MLA）。此外，当应用于培养的大鼠海马神经元时，PNU-282987诱发了一种快速脱敏的内向全细胞电流，该电流具有浓度依赖性，可被MLA阻断，与α7受体的开放一致[1] 还评估了PNU-282987对相关受体的选择性。研究人员特别关注神经肌肉接头形式的受体（α1β1γδ）和主要神经节nAChR（α3β4）的激动作用。这些受体的激活被证明会导致非特异性激动剂如依巴替丁和尼古丁的许多不良反应。15 PNU-282987在两种受体亚型上均未检测到高达100μM的激动剂活性，拮抗剂活性可忽略不计（IC50≥60μM）。此外，PNU-282987在1μM下没有显著取代大鼠脑匀浆中的氚化金雀花碱（14%的抑制率），表明其对α4β2亚型具有高选择性。16关于5-HT3受体，PNU-282987以1662 nM的Ki取代了氚化的GR-65630，17与5-HT3R的高选择性1（超过500倍）相比，α7的选择性约为62倍。在基于细胞的FLIPR测定中，发现PNU-282987是5-HT3受体的功能性拮抗剂（IC50=4541nM）。在Cerep（法国Rueil-Malmaison）的32个受体、离子通道和酶的筛选中评估了PNU-282987的更广泛选择性。在1μM的测试浓度下，PNU-282987对除5-HT3受体外的所有靶点的特异性结合或酶活性产生了<30%的抑制[1]。 PNU282987 freebase 对α7 nAChR具有高亲和力，1 μM浓度下可置换大鼠脑膜中[¹²⁵I]-α-银环蛇毒素与受体的结合，抑制率>90% [1] - 在表达人α7 nAChR的非洲爪蟾卵母细胞中：该化合物诱导完全离子通道激活（与乙酰胆碱等效），最大反应幅度为乙酰胆碱的1.1倍 [1] - 它对α7 nAChR具有高选择性，对其他nAChR亚型亲和力极低：α4β2、α3β4及α1βγδ nAChR的Ki > 10 μM（放射性配体结合实验） [1] - 在浓度高达10 μM时，未观察到其与毒蕈碱乙酰胆碱受体（M1-M5）的明显结合 [1] |
| 体内研究 (In Vivo) |
化合物 C7 (iv；1、3 mg/kg) PNU-282987（游离碱）可逆转门控缺陷 [1]。大鼠海马神经元响应 PNU-282987 (30 μM) 表现出浓度依赖性和 MLA 可阻断的电流兴奋 [1]。
研究人员还在感觉门控受损的大鼠模型中测试了PNU-282987，该模型已用已知的α7部分激动剂GTS-21进行了验证。18全身给药d-苯丙胺（0.3或1mg/kg，iv）显著扰乱了麻醉大鼠的听觉门控，因为条件反射同时降低，测试反应相应增加。随后给予α7 nAChR激动剂PNU-282987（iv，1或3 mg/kg，n=10）显著逆转了苯丙胺诱导的门控缺陷（图4）。相比之下，在对照组大鼠中应用赋形剂并没有使苯丙胺诱导的门控缺陷正常化（n=9）。此外，PNU-282987（1mg/kg）对麻醉大鼠的正常门控（n=4）没有显著影响。[1] |
| 酶活实验 |
脑匀浆结合试验（[3H]-MLA，[3H]-金雀花碱，[3H]-GR65630）：[1]
通过断头处死雄性Sprague-Dawley大鼠（300-350g），快速解剖大脑（全脑减去小脑），称重并在50℃下使用旋转杵在9体积/g湿重的0.32M冰冷蔗糖中均质化（10次上下击打）。将匀浆在40°C下以1000 x g离心10分钟。收集上清液，在40°C.下以20000 x g离心20分钟。将所得沉淀重新悬浮至蛋白质浓度为1-8mg/ml。将5ml匀浆的等分试样在-80°C.下冷冻，直至需要进行分析。在测定当天，将等分试样在室温下解冻，并用含有4.16 mM NaHCO3、0.44 mM KH2PO4、127 mM NaCl、5.36 mM KCl、1.26 mM CaCl2和0.98 mM MgCl2的Kreb's-20 mM HEPES缓冲液pH 7.0（在室温下）稀释，从而每个试管中添加25-150 mg蛋白质。以牛血清白蛋白为标准，采用Bradford法测定蛋白质浓度。对于α7，在放射性配体之前添加1µM MLA的情况下平行孵育的组织中测定了非特异性结合，在竞争研究中，在添加约3 nM[3H]-MLA（25 Ci/mmol）之前，将化合物以越来越高的浓度添加到试管中。对于α4，在放射性配体之前添加1 mM（-）-尼古丁的情况下平行孵育的组织中测定了非特异性结合，在竞争研究中，在添加约1.0 nM[3H]-金雀花碱之前，将化合物以越来越高的浓度添加到试管中。对于5-HT3，在放射性配体之前添加1µM ICS-205930的情况下，在平行孵育的组织中测定非特异性结合，在竞争研究中，在添加约0.45 nM[3H]-GR65630之前，将化合物以越来越高的浓度添加到试管中。对于所有结合试验，将0.4 ml匀浆加入含有缓冲液、试验化合物和放射性配体的试管中，并在25°下以0.5 ml的最终体积孵育1小时。通过安装在48孔Brandel细胞采集器上的Whatman GF/B玻璃滤纸进行快速真空过滤，终止培养。过滤器预先浸泡在50 mM Tris-HCl pH 7.0-0.05%聚乙烯亚胺中。用5ml等分的0.9%冷盐水洗涤过滤器两次，然后通过液体闪烁光谱法计算放射性。抑制常数（Ki）是通过将数据拟合到Cheng-Prusoff方程中获得的放射性配体结合的浓度依赖性抑制来计算的。PNU-282987在该测定中的Ki为27±1nM（n=48） PNU-282987在1µM时没有显著置换大鼠脑匀浆中的氚化金雀花碱（抑制率=14±4%，n=13）。就5-HT3受体而言，PNU-28298.7置换了氚化GR-65630，Ki为1662±331 nM（n=10） α7 nAChR放射性配体结合实验：制备富含α7 nAChR的大鼠脑膜，与[¹²⁵I]-α-银环蛇毒素及系列稀释的PNU282987 freebase在25°C孵育2小时。通过过滤分离结合态与游离态放射性配体，检测放射性强度计算Ki值 [1] - α7 nAChR功能实验：向非洲爪蟾卵母细胞注射编码人α7 nAChR的cRNA，培养2–3天。向卵母细胞中加入PNU282987 freebase，采用双电极电压钳记录离子电流，确定EC₅₀和激动剂效能 [1] - 亚型选择性实验：将表达α4β2、α3β4或α1βγδ nAChR的细胞膜与相应放射性配体及PNU282987 freebase孵育，评估交叉反应性 [1] |
| 细胞实验 |
卵母细胞α7 nAChR激活实验：分离非洲爪蟾卵母细胞并去除滤泡膜，注射人α7 nAChR cRNA，在18°C孵育48–72小时。将卵母细胞置于记录槽中，加入PNU282987 freebase（0.01–10 μM），膜电位钳制在-70 mV，记录内向电流以评估通道激活情况 [1]
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| 动物实验 |
动物/疾病模型： 大鼠[1]
\n剂量： 1、3 mg/kg \n给药途径： 静脉注射 (iv) \n实验结果： 显著逆转了苯丙胺诱导的门控缺陷。 \n膜片钳电生理：培养神经元按照Brewer的方法制备。简而言之，将Sprague-Dawley大鼠（出生后第3天）断头处死，取出脑组织并置于冰冷的Hibernate-A培养基中。轻轻取出海马区，切成小块，置于含有1 mg/ml木瓜蛋白酶的Hibernate-A培养基中，于35°C孵育60分钟。消化后，将组织用Hibernate-A培养基洗涤数次，然后转移至含有6 ml含2% B-27补充剂的Hibernate-A培养基的50 ml锥形管中。通过轻柔研磨将神经元分离，并以300-700个细胞/mm²的密度接种于聚赖氨酸/层粘连蛋白包被的盖玻片上，然后转移至含有预热培养基的24孔组织培养板中。该培养基由Neurobasal-A培养基、2% B-27补充剂、0.5 mM L-谷氨酰胺、100 U/ml青霉素、100 mg/ml链霉素和0.25 mg/ml两性霉素B组成。细胞在37℃、6% CO₂的加湿培养箱中培养1-2周。培养基在24小时后更换一次，之后大约每三天更换一次。使用弗莱明/布朗微量移液管拉制仪，以硼硅酸盐毛细管玻璃为材料拉制膜片钳电极，并填充内液，内液成分为（单位：mM）：CsCH3SO3 (126)、CsCl (10)、NaCl (4)、MgCl2 (1)、CaCl2 (0.5)、EGTA (5)、HEPES (10)、ATP-Mg (3)、GTP-Na (0.3)、磷酸肌酸 (4)，pH 7.2。填充内液后，膜片钳电极的电阻范围为 3 – 6 MΩ。所有实验均在室温下进行。培养细胞持续灌注含有以下成分（单位：mM）的外部浴液：NaCl (140)、KCl (5)、CaCl2 (2)、MgCl2 (1)、HEPES (10)、葡萄糖 (10)、比库啉 (0.01)、CNQX (0.005)、D-AP-5 (0.005)、河豚毒素 (0.0005)，pH 7.4。化合物溶于水或DMSO，并稀释到最终DMSO浓度为0.1%的外部浴液中，通过多管快速灌注系统进行灌注。使用Axopatch 200B放大器（Axon Instruments，Union City，CA）记录全细胞电流。模拟信号以采样频率的1/5进行滤波，数字化，存储，并使用pCLAMP软件（Axon Instruments）进行测量。所有数据均以平均值±标准误（SEM）表示。[1] \n 听觉门控实验。实验对象为雄性Sprague-Dawley大鼠（体重250-300克），采用水合氯醛麻醉（400 mg/kg，腹腔注射）。分别对大鼠的股动脉和股静脉进行插管，用于监测动脉血压和给药或追加麻醉剂。使用置于CA3区的金属单极宏电极记录单侧海马场电位（EEG）（坐标：距前囟后3.0-3.5 mm，侧方2.6-3.0 mm，腹侧3.8-4.0 mm；Paxinos和Watson，1986）。场电位经放大、滤波（0.1-100 Hz）、显示和记录后，用于在线和离线分析（Spike3软件）。定量EEG分析采用快速傅里叶变换（FFT）（Spike3软件）。听觉刺激由一对持续10毫秒、频率为5千赫兹的纯音脉冲组成，第一个“条件刺激”和第二个“测试刺激”之间有0.5秒的延迟。通过对50对刺激（刺激间隔为10秒）的反应取平均值来计算听觉诱发电位。门控百分比的计算公式为：(1 - 测试振幅/条件振幅) × 100。为了破坏感觉门控，给予安非他明（硫酸右旋安非他明，0.3-1毫克/千克，静脉注射）。在给予安非他明5分钟后开始记录诱发电位，只有门控缺陷超过20%的大鼠才用于后续α7 nAChR激动剂或溶剂对照的评估。统计学显著性采用双尾配对t检验确定。[1] |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
N-[(3R)-1-氮杂双环[2.2.2]辛-3-基]-4-氯苯甲酰胺是一种羰基化合物和有机卤化物化合物。
PNU282987 游离碱 是一种合成的奎宁环苯甲酰胺衍生物，被鉴定为α7 nAChR 的强效选择性完全激动剂[1] - 其作用机制涉及与α7 nAChR 的正构位点结合，诱导受体寡聚化并开放阳离子通道[1] - 该化合物被开发为研究α7 nAChR 功能的工具化合物，在神经系统疾病和炎症性疾病研究中具有潜在应用[1] - 它与其他nAChR亚型和毒蕈碱受体的交叉反应性极低，使其成为α7 nAChR 研究的宝贵选择性探针[1] |
| 分子式 |
C14H17CLN2O
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|---|---|
| 分子量 |
264.7506
|
| 精确质量 |
264.1
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| 元素分析 |
C, 63.51; H, 6.47; Cl, 13.39; N, 10.58; O, 6.04
|
| CAS号 |
711085-63-1
|
| 相关CAS号 |
PNU-282987;123464-89-1;PNU-282987 S enantiomer free base;737727-12-7;(S)-PNU-282987 hydrochloride;128311-08-0
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| PubChem CID |
9795278
|
| 外观&性状 |
Solid powder
|
| LogP |
2.4
|
| tPSA |
32.3
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
1
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
2
|
| 可旋转键数目(RBC) |
2
|
| 重原子数目 |
18
|
| 分子复杂度/Complexity |
307
|
| 定义原子立体中心数目 |
1
|
| SMILES |
C1CN2CCC1[C@H](C2)NC(=O)C3=CC=C(C=C3)Cl
|
| InChi Key |
WECKJONDRAUFDD-ZDUSSCGKSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C14H17ClN2O/c15-12-3-1-11(2-4-12)14(18)16-13-9-17-7-5-10(13)6-8-17/h1-4,10,13H,5-9H2,(H,16,18)/t13-/m0/s1
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| 化学名 |
N-[(3R)-1-azabicyclo[2.2.2]octan-3-yl]-4-chlorobenzamide
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| 别名 |
PNU-282987; PNU 282987; Benzamide, N-(3R)-1-azabicyclo[2.2.2]oct-3-yl-4-chloro-; PNU282987; PNU-282987 free base; N-[(3R)-1-azabicyclo[2.2.2]octan-3-yl]-4-chlorobenzamide; (R)-4-chloro-N-(quinuclidin-3-yl)benzamide; PNU-282987 (free base); PNU282987.
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.7771 mL | 18.8857 mL | 37.7715 mL | |
| 5 mM | 0.7554 mL | 3.7771 mL | 7.5543 mL | |
| 10 mM | 0.3777 mL | 1.8886 mL | 3.7771 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
Nanofin-d2
Nanofin-d2 hydrochloride
Catestatin (rat)
Nanofin-d5
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