MMP-9 (IC50 = 5 nM); MMP-9 (IC50 = 0.26 nM); MMP-2 (Ki = 0.05 nM); MMP-1 (IC50 = 79 nM); MMP-3 (IC50 = 6.3 nM); MMP-3 (Ki = 0.3 nM); collagenases 3 (Ki = 0.03 nM)

Prinomastat（AG3340；0.1–1 µg/mL；4 天；C57MG/Wnt1 细胞）抑制 Wnt1 诱导的 MMP-3 的产生。普利诺司他可逆转 Wnt1 诱导的 EMT 和 β-连环蛋白转录活性 [1]。当L/Wnt3a细胞和CT7细胞共培养时，CT7细胞中的Topflash活性增加；同样，将 L/Wnt3a 细胞和过表达 MMP-3 的 C57MG 细胞与 CT7 细胞共培养，CT7 细胞中的 Topflash 荧光素酶活性会增加到超出观察到的水平。 Prinomastat (AG3340) 可抑制这些作用。 Erk1/2 和细胞周期蛋白 D1 磷酸化表达的减少与 Prinomastat 对 C57MG/Wnt1 细胞进入 S 期的抑制相关。然后使用体外伤口测定，研究普利诺司他对 Wnt1 诱导的迁移的影响。正如预测的那样，C57MG/Wnt1 细胞的迁移量是 C57MG 细胞的 1.8 倍。 Prinomastat 抵消 Wnt1 对 C57MG/Wnt1 细胞中波形蛋白细胞分布的影响 [1]。

在人类纤维肉瘤 (HT1080) 小鼠模型中，动物腹腔注射 50 mg/kg/天，持续 14-16 天，从肿瘤接种后的第 3 天开始，到第 6 天结束。这些动物对 Primastat 反应良好，没有体重减轻或任何副作用的迹象。 Pronostat半衰期短，为1.6小时，具有良好的肿瘤生长抑制作用[1]。

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研究人员研究了AG3340，一种具有pM亲和力的强效金属蛋白酶（MMP）抑制剂，在许多肿瘤模型中抑制明胶酶（MMP-2和-9）、MT-MMP-1（MMP-14）和胶原酶-3（MMP-13）。AG3340产生剂量依赖性药代动力学，在小鼠腹腔内（i.p.）和口服给药后耐受良好。在人类肿瘤模型中，AG3340在肿瘤植入后早期或晚期开始给药时会产生严重的肿瘤生长延迟，尽管所有已建立的肿瘤类型对AG3340都没有反应。在三种模型中探索了剂量反应关系：COLO-320DM结肠、MV522肺和MDA-MB-435乳腺。在结肠和肺模型中观察到肿瘤生长的剂量依赖性抑制（超过12.5-200mg/kg，每日两次，b.i.d.）；在第三种情况下（乳房），最低剂量的AG3340（50mg/kg，b.i.d.）产生了最大的抑制作用。在另一种模型中，AG3340（100mg/kg，每日一次，腹腔注射）显著抑制了U87胶质瘤的生长并提高了动物存活率。AG3340还抑制了肿瘤生长，并提高了携带雄激素非依赖性PC-3前列腺肿瘤的裸鼠的存活率。在第六个模型中，KKLS胃，AG3340没有抑制肿瘤生长，但增强了紫杉醇的疗效。重要的是，AG3340显著降低了肿瘤血管生成（通过CD-31染色评估）和细胞增殖（通过溴脱氧尿苷掺入评估），并增加了肿瘤坏死和凋亡（通过苏木精、伊红和TUNEL染色评估）。这些效应依赖于模型，但血管生成通常受到抑制。在MV522肺癌癌症模型中，AG3340的治疗指数优于细胞毒性药物卡铂和紫杉醇。结合使用，AG3340在不改变药物耐受性的情况下增强了这些细胞毒性药物的疗效。此外，当与卡铂或紫杉醇联合使用时，AG3340减少了静脉转移模型中肺部出现的小鼠黑色素瘤（B16-F10）病变的数量。这些研究直接支持AG3340在晚期肺和前列腺恶性肿瘤患者正在进行的临床试验中用于一线联合化疗。[3]

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普利诺司他治疗组和对照组的平均增殖性玻璃体视网膜病变（PVR）评分分别为2.62和3.57（p=0.038；Wilcoxon秩和）。对照组76%的兔子出现了具有临床意义的PVR伴视网膜脱离（PVR≥3级），而接受普诺马司他治疗的兔子中有51%出现了这种情况。 结论：在利用dispase诱导PVR的实验模型中，玻璃体内注射普诺他可减少PVR的发展[4]。

本文介绍了一系列新型非肽环磷酰胺基异羟肟酸作为基质金属蛋白酶MMP-1、MMP-3和MMP-9抑制剂的设计、合成和构效关系（SAR）。基于模型研究和X射线分析，获得了这些新化合物在MMP活性位点结合模式的模型。该模型为观测到的SAR数据提供了合理的解释，其中包括对不同S1'定向取代基、锌络合基团、手性以及环状磷酰和磷酰亚胺环的变化的系统研究。评估了四种化合物在人纤维肉瘤小鼠模型（HT1080）中的体内作用，并将其与参考化合物Prinomastat进行了比较。所有四种化合物均观察到对肿瘤生长的抑制[1]。

蛋白质印迹分析[1]
细胞类型： C57MG/Wnt1 细胞
测试浓度： 0.1 µg/mL、1 µg/mL
孵育时间：4天
实验结果：C57MG/Wnt1细胞中MMP-3启动子活性显着降低。

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细胞增殖和细胞运动测定。[2]
对于FACS®分析，将细胞接种到100 mm板中，并在有或没有10µg/ml的Prinomastat (AG3340)的情况下培养至融合。细胞在PBS中洗涤，重新悬浮在70%乙醇中，并在4°C下储存过夜。将细胞与20µg/ml RNase A在37°C下孵育30分钟，离心，并重新悬浮在含有40µg/ml碘化丙啶的PBS中。使用Expo 32（1.2版）软件在EPICS Elite ESP细胞分选机上进行分析。为了评估细胞迁移，用移液管尖端刮擦C57MG或C57MG/Wnt1细胞的融合单层，以形成无细胞区域。在有或没有MMP抑制剂的情况下孵育细胞24小时，并使用配备奥林巴斯DPII数码相机的奥林巴斯IMT-2显微镜通过摄影记录反映细胞迁移的伤口闭合情况。对于每种情况，沿伤口选择10个微观区域，并对从伤口边缘迁移到无细胞空间的细胞进行计数。

本研究旨在评估基质金属蛋白酶合成抑制剂普利诺司他（AG3340）治疗玻璃体内注射分散酶诱导的实验性增生性玻璃体视网膜病变（PVR）的疗效。
\n\n将53只新西兰白兔的单眼玻璃体内注射0.07单位分散酶以诱导PVR。PVR诱导一周后，将53只兔子随机分为两组（27:26），分别接受0.5 mg普利诺司他或药物赋形剂（酸化水）的玻璃体内注射，每两周一次。对PVR严重程度进行评分（1-5分），并将普利诺司他治疗组与对照组进行比较。 [4]\n

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\n\n肿瘤生物学：人源异种移植研究[3]
\n在实验动物资源中心开展了人结肠癌、前列腺癌、肺癌、胃癌和鼠黑色素瘤的研究。使用 COLO-320DM 细胞的研究首先从供体无胸腺小鼠中收集连续传代的肿瘤（约 500-1000 mm³），并制备 1-2 mm 的肿瘤组织块，用于移植到未接受过任何处理的小鼠体内。肿瘤细胞或组织块双侧植入（每只小鼠 2 个部位）。使用其他人类细胞系的研究首先从细胞培养物中收集处于指数生长期的细胞，并制备细胞悬液用于皮下植入。肿瘤植入后，将小鼠随机分组，进行耳部打孔以进行识别，并以 3 只/笼的密度饲养；每项研究均包含对照组和普利诺司他 (AG3340) 治疗组，每组 10-12 只动物。通常情况下，在开始给予 AG3340 或赋形剂（pH 2.3 的无菌水）给药前，肿瘤需生长 5 天。AG3340 采用无菌 20 g × 1.5 英寸的胃内灌注针进行口服给药。动物每周给药 7 天，每日两次，分别在上午 9 点和下午 4 点左右。因此，对于每日两次给予 100 mg/kg AG3340 的组，每日总剂量为 200 mg/kg。\n
\n使用电子游标卡尺测量皮下肿瘤的长度和宽度，然后计算肿瘤体积，以此评估肿瘤生长情况。体积计算采用公式 1/2 (长度)(宽度)²。此外，在整个实验过程中，还评估了给药方案、载体和 AG3340 对小鼠体重和总体健康状况的影响。\n

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\n\n在卡尔加里大学进行的研究[3]
\n人 U87 胶质瘤研究已获得机构动物护理和使用委员会的批准。研究开始时，将 5 × 10⁶ 个细胞/位点植入对照组和普利诺司他 (AG3340) 治疗组，每组 5-8 只动物。肿瘤形成 2 至 4 周后，开始腹腔注射载体或普利诺司他 (AG3340)。动物每天给药一次，每周 5 天（MF）；周六给予双倍剂量，周日不给药。肿瘤面积根据面积公式（长度）×（宽度）进行测量。\n

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\n\n在罗氏公司进行的研究[3]
\n对人MDA-MB-435乳腺癌细胞进行了研究。研究开始时，将1.5 × 10⁶个细胞植入无胸腺小鼠的乳腺脂肪垫中，分为对照组和普利诺司他（AG3340）治疗组（每组n=10）。待肿瘤形成超过2周后，开始以每周7天的给药方案，每日两次口服给予赋形剂或普利诺司他（AG3340）。肿瘤体积采用公式 1/2 (长度)(宽度)² 计算。\n

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\n\n肿瘤生物学：小鼠静脉注射诱导转移研究[3]
\n对数生长期的B16-F10细胞用0.25%胰蛋白酶-EDTA消化后从培养物中分离，用含胎牛血清（FCS）的培养基洗涤，离心后重悬于无血清培养基中。然后将细胞置于冰上。实验中，将对照组和普利诺司他（AG3340）处理组随机分为12只/组。使用装有30G无菌针头的1ml无菌注射器，将10⁵个B16-F10细胞以0.2ml的体积注入C57BL/6小鼠的尾静脉，形成肿瘤。细胞活力超过 90%，并且在将肿瘤细胞植入小鼠体内所需的 1-2 小时内保持活力。\n

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\n\nMMP 抑制对肿瘤形成的影响。[2]
\n将 MMTV-Wnt1 小鼠进行繁殖，并观察其乳腺肿瘤的形成情况，同时与每周两次腹腔注射 50 mg/kg 剂量的 Prinomastat (AG3340) 的同窝小鼠进行比较。每周通过触诊监测小鼠是否出现小肿瘤结节，并记录肿瘤发生的年龄。

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MMTV-Wnt1转基因小鼠的预防性治疗研究：** 本研究使用雌性MMTV-Wnt1小鼠（由于MMTV启动子驱动的Wnt1过表达而发生乳腺肿瘤）。从6周龄开始，小鼠每周两次腹腔注射AG3340，剂量为50 mg/kg。对照组同窝小鼠不接受任何治疗。每周通过触诊监测小鼠乳腺肿瘤的发生情况。记录肿瘤发生的年龄，并使用Kaplan-Meier分析比较治疗组和未治疗组的无瘤生存期[2]。

生物半衰期
2-5 小时

[1]. Cyclic phosphinamides and phosphonamides, novel series of potent matrix metalloproteinase inhibitors with antitumour activity. Bioorg Med Chem. 2003 Dec 1;11(24):5461-84.

[2]. Stromelysin-1 (MMP-3) is a target and a regulator of Wnt1-induced epithelial-mesenchymal transition (EMT). Cancer Biol Ther. 2010 Jul 15;10(2):198-208.

[3]. Broad antitumor and antiangiogenic activities of AG3340, a potent and selective MMP inhibitor undergoing advanced oncology clinical trials. Ann N Y Acad Sci. 1999 Jun 30;878:236-70.

[4]. The effect of prinomastat (AG3340), a potent inhibitor of matrix metalloproteinases, on a subacute model of proliferative vitreoretinopathy. Curr Eye Res. 2000 Jun;20(6):447-53.

普利诺司他是一种羟肟酸，其化学名称为(3S)-N-羟基-2,2-二甲基硫代吗啉-3-甲酰胺，其中硫代吗啉氮原子上的氢被[4-(吡啶-4-氧基)苯基]磺酰基取代。它是一种选择性基质金属蛋白酶(MMPs) 2、3、9、13和14抑制剂。它具有抗肿瘤活性，可作为基质金属蛋白酶抑制剂和EC 3.4.24.35（明胶酶B）抑制剂。普利诺司他属于羟肟酸、硫代吗啉类化合物、磺酰胺类化合物、芳香醚类化合物和吡啶类化合物。它是普利诺司他(1+)的共轭碱。普利诺司他是一种具有潜在抗肿瘤活性的合成羟肟酸衍生物。普利诺司他是一种合成的羟肟酸衍生物，具有潜在的抗肿瘤活性。普利诺司他通过抑制基质金属蛋白酶（MMPs）（特别是MMP-2、9、13和14）来诱导细胞外基质降解，从而抑制血管生成、肿瘤生长、侵袭和转移。作为一种亲脂性药物，普利诺司他能够穿过血脑屏障。 (NCI04)

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药物适应症
已研究用于治疗脑癌、肺癌和前列腺癌。

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基质金属蛋白酶 (MMPs) 在肿瘤进展的后期阶段发挥着明确的作用。然而，有证据表明它们也参与了恶性转化的早期阶段。Wnt 信号转导通路在许多上皮癌的发生发展和发病机制中起着关键作用。本研究利用 Wnt1 诱导的 C57MG 小鼠乳腺上皮细胞上皮-间质转化 (EMT) 来研究 MMPs 在恶性进展早期阶段的作用。在 C57MG 细胞中过表达 Wnt1 可促进 EMT、β-catenin 从细胞膜向细胞核的转位及其转录活性、细胞增殖和细胞迁移。同时，我们观察到，与未表达Wnt1的C57MG细胞相比，表达Wnt1的C57MG细胞中基质金属蛋白酶-3 (MMP-3) 的表达增加，且MMP-3启动子活性提高了5.5倍。用MMP抑制剂AG3340处理Wnt过表达细胞后，MMP-3的表达降低。我们还发现，MMP-3和Wnt3a协同增强C57MG细胞中β-catenin的转录活性。与此一致的是，MMP抑制剂或siRNA下调MMP-3后，Wnt1对EMT、增殖和迁移的影响均受到抑制。这些结果表明，MMP-3既是Wnt/β-catenin信号通路的直接转录靶点，也是该通路的必要组成部分。[2]

423.092

C, 51.05; H, 5.00; N, 9.92; O, 18.89; S, 15.14

192329-42-3

Prinomastat hydrochloride;1435779-45-5

466151

White to off-white solid powder

1.377g/cm3

1.615

4.123

146

2

8

5

28

638

1

O=C([C@@H]1N(S(=O)(C2=CC=C(OC3=CC=NC=C3)C=C2)=O)CCSC1(C)C)NO

YKPYIPVDTNNYCN-INIZCTEOSA-N

InChI=1S/C18H21N3O5S2/c1-18(2)16(17(22)20-23)21(11-12-27-18)28(24,25)15-5-3-13(4-6-15)26-14-7-9-19-10-8-14/h3-10,16,23H,11-12H2,1-2H3,(H,20,22)/t16-/m0/s1

(S)-N-hydroxy-2,2-dimethyl-4-((4-(pyridin-4-yloxy)phenyl)sulfonyl)thiomorpholine-3-carboxamide

AG3340; AG-3340; AG 3340; KBR-9896; CHEMBL75094; (3S)-N-hydroxy-2,2-dimethyl-4-(4-pyridin-4-yloxyphenyl)sulfonylthiomorpholine-3-carboxamide; 10T6626FRK;KBR 9896; KBR9896; Prinomastat.

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO :< 1 mg/mL

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。