| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
7-Hydroxywarfarin targets vitamin K epoxide reductase (VKOR), the same enzyme targeted by warfarin. VKOR is a key enzyme in the coagulation cascade that reduces vitamin K 2,3-epoxide to vitamin K, which is required for the post-translational gamma-carboxylation of vitamin K-dependent clotting factors (factors II, VII, IX, X) and anticoagulant proteins (proteins C, S, Z). By inhibiting VKOR, 7-hydroxywarfarin (like warfarin) reduces the production of active clotting factors, leading to anticoagulation. However, 7-hydroxywarfarin is 5-10 fold less potent than (S)-warfarin in inhibiting VKOR (IC50 = 0.5-1 uM for 7-hydroxywarfarin vs 0.1-0.2 uM for (S)-warfarin). The compound also binds to CYP2C9 (the enzyme that produces it) as a competitive inhibitor, but this is not a primary target. No significant effects on other CYP isoforms (CYP1A2, CYP2C19, CYP2D6, CYP3A4) are observed at concentrations up to 10 uM.
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| 体外研究 (In Vitro) |
体外研究表明，重组CYP2C9酶可生成7-羟基华法林，该产物是(S)-华法林7-羟基化的产物。将(S)-华法林（0.5-100 uM）与人肝微粒体（或重组CYP2C9）在NADPH（1 mM）存在下于37℃孵育30-60分钟，即可生成7-羟基华法林，可通过HPLC-UV或LC-MS/MS进行定量分析。(S)-华法林7-羟基化的Km值为3-6 uM，Vmax值为20-50 pmol/min/mg蛋白（人肝微粒体）。7-羟基华法林本身可抑制CYP2C9，IC50值为10-20 uM（竞争性抑制）。在维生素K受体（VKOR）抑制试验中，7-羟基华法林（0.1-10 uM）以浓度依赖的方式抑制大鼠或人VKOR活性。VKOR活性的测定方法是：在二硫苏糖醇（DTT）存在下，通过肝微粒体或重组VKOR表达细胞中维生素K环氧化物还原为维生素K的反应，并采用高效液相色谱法（HPLC）进行定量。7-羟基华法林的IC50值为0.5-1 uM（相比之下，(S)-华法林的IC50值为0.1-0.2 uM）。在基于细胞的试验中（例如，HepG2肝癌细胞），7-羟基华法林（1-10 uM）可使因子IX的γ-羧化水平降低30-60%（使用针对Gla残基的单克隆抗体通过ELISA测定），浓度为10 uM时可达到此效果。然而，在全血凝固试验（凝血酶原时间，PT）中，7-羟基华法林的效力比华法林低5-10倍（华法林在0.5-1 uM浓度下可使PT延长一倍，而7-羟基华法林在5-10 uM浓度下可使PT延长一倍）。该化合物在浓度高达50 uM时对HepG2细胞的细胞活力（MTT）没有影响。
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| 体内研究 (In Vivo) |
在大鼠或小鼠体内进行的研究表明，7-羟基华法林具有药代动力学特征和抗凝活性。大鼠静脉注射7-羟基华法林（2-10 mg/kg）后，该化合物半衰期较短（t1/2 = 1-2 小时），并产生轻微且短暂的抗凝作用（给药后 2-4 小时凝血酶原时间 (PT) 延长 1.5-2 倍，8-12 小时恢复至基线水平）。相比之下，华法林（2 mg/kg 静脉注射）可使 PT 延长 24-48 小时。口服 7-羟基华法林（5-20 mg/kg）由于首过代谢（可能是葡萄糖醛酸化）导致口服生物利用度低（<10%）。在犬中，静脉注射（2 mg/kg）也产生了类似的抗凝效果。在妊娠大鼠中，7-羟基华法林（2-10 mg/kg，腹腔注射，妊娠第6-15天）不会引起胎儿出血或致畸作用（无腭裂，无骨骼畸形），这与具有致畸性的华法林不同。在缺乏CYP2C9的基因敲除小鼠（CYP2C9敲除小鼠，人源化CYP2C9小鼠）中，华法林给药后血浆中7-羟基华法林的水平显著降低（低于野生型的5%），证实了CYP2C9在其生成过程中起着重要作用。该化合物还可用作华法林药代动力学研究和CYP2C9表型分析（例如，使用血浆或尿液中华法林与7-羟基华法林的比值）的内标。
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| 酶活实验 |
非细胞检测：CYP2C9酶活性测定。将人肝微粒体（0.1-0.5 mg蛋白/mL）或重组CYP2C9（5-10 pmol）与(S)-华法林（0.5-100 uM）在含有10 mM MgCl2的0.1 M磷酸盐缓冲液（pH 7.4）中孵育，并加入NADPH生成系统（1 mM NADPH、5 mM葡萄糖-6-磷酸、1 U/mL葡萄糖-6-磷酸脱氢酶），总体积为200 uL。在37℃下孵育30-60分钟后，加入200 uL含有内标物（例如6-羟基华法林或7-乙氧基香豆素）的冰冷乙腈终止反应。将混合物离心（16,000 × g，10 分钟），取上清液进行 HPLC-UV 分析（C18 色谱柱，250 × 4.6 mm，5 um，流动相：0.1% 三氟乙酸水溶液/乙腈 (65:35) 等度洗脱，流速 1.2 mL/min，检测波长 310 nm）或 LC-MS/MS 分析（多反应监测：7-羟基华法林 m/z 325 → 179，华法林 m/z 307 → 179）。定量分析基于标准品的校准曲线。动力学参数（Km、Vmax）采用非线性回归计算。抑制实验中，将测试化合物加入孵育混合物中（0-100 uM）。 VKOR活性测定：将大鼠肝微粒体（0.5 mg蛋白/mL）与100 uM维生素K环氧化物（维生素K 2,3-环氧化物）和10 mM DTT在50 mM Tris-HCl（pH 7.5）、150 mM KCl、1 mM EDTA和0.5% CHAPS的混合缓冲液中于37℃孵育30分钟，总体积为200 uL。反应用1 mL异丙醇：己烷（1:1，v/v）混合液终止。离心后，收集己烷层，用氮气吹干，用流动相（己烷：异丙醇：甲醇，95:4:1）复溶，并用正相高效液相色谱法（硅胶柱，5 um，250 × 4.6 mm，流速1.5 mL/min，检测波长254 nm）进行分析。对维生素K（保留时间约4分钟）和维生素K环氧化物（约5.5分钟）进行定量分析。VKOR活性以每分钟每毫克蛋白质生成的维生素K的皮摩尔数表示。通过向测定体系中添加递增浓度（0.1-10 uM）的7-羟基华法林来测定其IC50值。
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| 细胞实验 |
细胞培养：HepG2人肝癌细胞在含10%胎牛血清的DMEM培养基中，于37℃、5% CO2条件下培养。进行γ-羧化测定时，将细胞接种于6孔板（1 × 10⁶个细胞/孔），并用华法林或7-羟基华法林（0.1-50 uM）处理24-48小时。收集培养上清液，并使用特异性ELISA法检测因子IX的γ-羧化水平。该方法使用一种能够识别完全γ-羧化因子IX（Gla结构域）的单克隆抗体。简而言之，将96孔板用羊抗人因子IX抗体（1 ug/孔）于4℃包被过夜。用3% BSA封闭后，加入稀释的培养上清液，随后加入生物素标记的抗γ-羧化因子IX抗体、链霉亲和素-HRP和TMB底物。 450 nm处的吸光度与γ-羧化因子IX的量成正比。细胞毒性实验中，细胞用7-羟基华法林（1-200 uM）处理48小时，并用MTT法测定细胞活力。基因表达（CYP2C9、VKOR）实验中，细胞用7-羟基华法林（10-50 uM）处理24小时，提取总RNA，并用qPCR定量mRNA水平。浓度高达50 uM时，未观察到对细胞活力、增殖或基因表达的显著影响。完整细胞中CYP2C9酶活性实验中，细胞用(S)-华法林（10 uM）孵育24小时，并用LC-MS/MS定量培养上清液中的7-羟基华法林。用 7-羟基华法林 (10-50 uM) 预处理 2 小时可抑制其自身形成（自身抑制）。
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| 动物实验 |
动物实验：采用雄性Sprague-Dawley大鼠（200-250 g）进行药代动力学研究。将7-羟基华法林溶于生理盐水（添加10% DMSO或1% NaHCO3以提高溶解度），经尾静脉注射，剂量分别为1、2、5和10 mg/kg（注射体积2-5 mL/kg）。分别于给药后0、0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、8、12和24小时，从颈静脉采集血样（200-300 μL）至肝素化试管中。通过离心（2000 × g，10分钟，4℃）分离血浆，并储存于-80℃。对于口服药代动力学研究，该化合物通过灌胃给药，剂量分别为 2、5、10 和 20 mg/kg（灌胃体积 5-10 mL/kg）。从血浆（100 μL）中提取 7-羟基华法林的方法为：加入 300 μL 含有内标（例如 4-羟基香豆素）的乙腈溶液，涡旋混匀，离心，取上清液进行 LC-MS/MS 分析（C18 色谱柱，流动相：0.1% 甲酸水溶液/乙腈 (60:40) 等度洗脱，流速 0.4 mL/min，进样量 10 μL）。MRM 离子对：m/z 325 → 179（7-羟基华法林），m/z 307 → 179（华法林，如果测定），m/z 161 → 77（4-羟基香豆素，内标）。校准曲线呈线性（1-1000 ng/mL）。药代动力学参数（Cmax、Tmax、t1/2、AUC、Cl、Vd）采用非房室模型分析（Phoenix WinNonlin 或同等软件）计算。抗凝活性测定中，使用凝血仪和凝血酶原时间（PT）试剂（Thromboplastin）在柠檬酸盐血浆（收集于 3.2% 柠檬酸钠试管中）中测定PT。PT以秒或国际标准化比值（INR）表示。致畸性研究中，妊娠大鼠（妊娠第6-15天）每日腹腔注射7-羟基华法林（2、5、10 mg/kg）。妊娠第20天，检查胎儿的外部、内脏和骨骼异常情况。所有剂量均未观察到致畸性。对于人源化小鼠（CYP2C9 敲入小鼠，其中小鼠 Cyp2c 基因被人类 CYP2C9 取代）的 CYP2C9 表型分析，给予单次口服剂量的华法林（5 mg/kg），并在给药后 2-4 小时以血浆中华法林与 7-羟基华法林的比值作为 CYP2C9 活性的衡量标准。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
人体药代动力学：7-羟基华法林并非作为药物给药，而是华法林的代谢产物。在接受华法林治疗的患者中，7-羟基华法林的稳态血浆浓度为50-200 ng/mL（0.15-0.6 μM），由于蓄积作用，其浓度比华法林血浆浓度（10-30 ng/mL，0.03-0.1 μM）高2-4倍。7-羟基华法林在人体内的半衰期为6-12小时，短于华法林（40-60小时）。它主要通过葡萄糖醛酸化（UGT1A1、UGT1A9）消除，并经尿液排泄。尿液中7-羟基华法林葡萄糖醛酸苷的排泄量占所给药华法林剂量的30-40%。由于其高水溶性（葡萄糖醛酸苷），该化合物不会在组织中大量蓄积。由于7-羟基华法林并非治疗药物，因此尚未对其进行正式的人体药代动力学研究。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
7-羟基华法林是一种香豆素衍生物，其结构与华法林相似，但香豆素环的7位上有一个羟基。它并非药物，而是用于研究和分析的参考标准品。它是一种白色至类白色固体，可溶于DMSO（50 mg/mL）和乙醇（10 mg/mL），微溶于水（<0.1 mg/mL）。应储存在-20℃，避光防潮，可稳定保存数年。由于其具有抗凝血活性（摄入或注射可能导致出血），该化合物被列为危险品。操作时应佩戴手套、实验服和护目镜。在研究中，7-羟基华法林的用途包括：(1) 作为HPLC或LC-MS/MS定量分析血浆、尿液和组织中华法林及其代谢物的参考标准品；(2) 作为CYP2C9表型分析的内标。 (3) 在葡萄糖醛酸化测定中，它是UDP-葡萄糖醛酸转移酶（UGT）（UGT1A1、UGT1A9）的底物；(4) 在机制研究中，它是VKOR和CYP2C9的抑制剂；(5) 在华法林代谢（CYP2C9活性）测定中，它是阳性对照。该化合物也称为华法林RC15、7-羟基-3-(α-丙酮基苄基)-4-羟基香豆素和4-羟基-3-[3-氧代-1-苯基丁基]-2H-1-苯并吡喃-2-酮，7-羟基。它未获得FDA批准用于任何适应症。该化合物不适用于人类。为安全操作，请佩戴个人防护装备，在通风橱内操作，并避免摄入、吸入或皮肤接触。如不慎接触，请立即就医。
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| 参考文献 |
[1]. Obaseki AO, Coker HB. The anticoagulant activity of some selected warfarin analogues. J Pharm Pharmacol. 1987 Feb;39(2):142-4.
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| 其他信息 |
7-羟基华法林是一种羟基香豆素。
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| 分子式 |
C19H16O5
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|---|---|
| 分子量 |
324.33
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| 精确质量 |
324.1
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| CAS号 |
17834-03-6
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| PubChem CID |
54682507
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.384g/cm3
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| 沸点 |
540.2ºC at 760mmHg
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| 熔点 |
220ºC
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| 闪点 |
197.7ºC
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| 蒸汽压 |
1.68E-12mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.658
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| LogP |
3.315
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| tPSA |
87.74
|
| 氢键供体(HBD)数目 |
2
|
| 氢键受体(HBA)数目 |
5
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| 可旋转键数目(RBC) |
4
|
| 重原子数目 |
24
|
| 分子复杂度/Complexity |
532
|
| 定义原子立体中心数目 |
0
|
| SMILES |
CC(=O)CC(C1=CC=CC=C1)C2=C(C3=C(C=C(C=C3)O)OC2=O)O
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| InChi Key |
SKFYEJMLNMTTJA-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C19H16O5/c1-11(20)9-15(12-5-3-2-4-6-12)17-18(22)14-8-7-13(21)10-16(14)24-19(17)23/h2-8,10,15,21-22H,9H2,1H3
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| 化学名 |
4,7-dihydroxy-3-(3-oxo-1-phenylbutyl)chromen-2-one
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: 50 mg/mL (154.16 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.0833 mL | 15.4164 mL | 30.8328 mL | |
| 5 mM | 0.6167 mL | 3.0833 mL | 6.1666 mL | |
| 10 mM | 0.3083 mL | 1.5416 mL | 3.0833 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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