LPA receptors

溶血磷脂酸（LPA）是血清的重要成分，具有促有丝分裂活性。几种基因的血清诱导至少部分地受到与c-fos血清反应元件（SRE）相关的序列的调节。用LPA处理SRE控制下含有β-半乳糖苷酶报告基因的Rat-2成纤维细胞系。溶血磷脂酸诱导β-半乳糖苷酶活性的时间和剂量依赖性增加。用1-油酰基-LPA处理5小时后，观察到β-半乳糖苷酶活性增加了3倍。相比之下，内源性碱性磷酸酶活性没有与β-半乳糖苷酶活性平行变化，表明诱导是特异性的。在sn-1位置具有不同酰基的各种LPAs诱导了β-半乳糖苷酶活性，其效力按顺序为1-油酰基-LPA>1-棕榈酰基-LPA>或=1-肉豆蔻酰基-LPA>1-硬脂酰基-LPA。磷脂酸大约等于1-硬脂酰-LPA。钙离子载体（A23187）和12-O-十四烷酰佛波醇13-乙酸酯均未诱导β-半乳糖苷酶活性。这些数据表明，LPA可能通过调节SRE控制的基因来发挥其部分作用[2]。

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溶血磷脂酸（LPA）是一种具有生长因子样活性的天然磷脂[van Corven，Groenink，Jalink，Eichholtz&Moolenaar（1989）Cell 45，45-54]。我们研究了LPA的各种结构类似物刺激静止成纤维细胞DNA合成的能力。当酰基链长变化时，促有丝分裂效力的顺序为：1-油酰基LPA与1-棕榈酰基LPA一致，大于1-肉豆蔻酰基LPA，大于1-月桂酰基LPA大于1-癸酰基LPA；最后一种化合物在测试的浓度范围（1-100微M）内几乎没有活性。与浓度低于25微M的酯连接类似物相比，醚连接的LPA（1-O-十六烷基甘油3-磷酸）的促有丝分裂活性大大降低，在较高浓度下具有细胞毒性。缺乏甘油骨架的磷酸十六酯的活性可以忽略不计。以摩尔计，二酰基磷脂酸（PA）的效力与相应的LPA类似物大致相同，显示出类似的酰基链长度依赖性；这些数据反驳了PA的促有丝分裂作用是由于LPA污染痕迹的可能性。尽管LPA和PA的短链类似物不能拮抗长链（L）PA的作用，但聚阴离子药物苏拉明以可逆和剂量依赖的方式抑制LPA和BA诱导的DNA合成，其浓度[IC50（浓度为50%抑制）约为70微摩尔]不影响表皮生长因子诱导的DNA合成。苏拉明似乎在细胞周期的早期G0/G1期发挥作用，阻断对LPA的即时反应，如磷酸肌醇水解。我们得出结论，LPA和PA都可以作为促进生长的磷脂，脂肪酸链长是有丝分裂潜能的主要决定因素。[3]

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溶血磷脂酸（LPA）是一种生物活性磷脂，其功能由多种G蛋白偶联受体介导。我们已经证明，成骨细胞产生LPA，这增加了它介导成骨细胞和破骨细胞之间细胞间信号传导的可能性。在这里，我们研究了破骨细胞中LPA受体的表达、信号传导和功能。局部应用LPA可引起细胞质钙浓度（[Ca（2+）]（i））的短暂增加，50%的破骨细胞在约400nm LPA处有反应。百日咳毒素或LPA（1/3）受体拮抗剂VPC-32183阻断了LPA诱导的[Ca（2+）]（i）升高。LPA导致破骨细胞持续收缩，并破坏外周肌动蛋白带。回撤对VPC-32183或百日咳毒素不敏感，表明涉及不同的信号通路。在这方面，抑制Rho相关激酶刺激了LPA诱导收缩后的呼吸。实时逆转录PCR揭示了编码LPA（1）的转录本，并在较小程度上编码了LPA（2）、LPA（4）和LPA（5）受体亚型。LPA诱导NFATc1的核转位并增强破骨细胞存活，这些作用被VPC-32183或NFAT激活的特定肽抑制剂阻断。LPA在体外略微降低了破骨细胞的再吸收活性。因此，LPA与破骨细胞上的至少两种受体亚型结合：LPA（1）通过G（i/o）偶联以升高[Ca（2+）]（i），激活NFATc1并促进存活，第二种受体可能通过G（12/13）和Rho偶联，通过肌动蛋白细胞骨架的重组来引发和维持回缩。这些发现揭示了骨中的一个信号轴，成骨细胞产生的LPA通过该轴作用于多种受体亚型，以诱导破骨细胞活性和功能的多效性效应[4]。

在 9 周大的雄性 Wistar 大鼠中，当呈现新的情况[1]。溶血磷脂酸（LPA）在控制情绪行为中的作用还有待确定。我们分析了1-油酰基-LPA（LPA18∶1）在大鼠进食、焦虑和抑郁行为测试中的中心给药效果。为此，进行了高架+迷宫、开阔场地、Y迷宫、强迫游泳和食物摄入测试。此外，还测定了c-Fos在中脑导水管背侧周围灰质（DPAG）中的表达。结果显示，LPA18∶1给药缩短了在高架+迷宫开放臂中的时间，并诱导开放域中的低运动，表明其具有焦虑样表型。有趣的是，在新奇条件下输注LPA18∶1后，这些效果是存在的，但在习惯条件下没有。在强迫游泳试验中，LPA18∶1的给药剂量依赖性地增加了抑郁样行为，根据静止时间进行评估。LPA处理对饲养没有影响。免疫组化分析显示，LPA18∶1可增加DPAG中c-Fos的表达。用免疫细胞化学方法检测了LPA18∶1的主要靶点之一LPA1受体在参与情绪行为控制的脑区的大量表达。这些发现表明，LPA是一种相关的递质，可能参与正常和病理性的情绪反应，包括焦虑和抑郁[1]。

实时RT-PCR分析使用TRIZOL试剂和RNeasy Mini试剂盒（Qiagen）从纯化的骨髓来源的破骨细胞中分离总RNA。小鼠LPA1（Edg2，Mm00439145_m1）、LPA2（Edg4，Mm004 69562_m1），LPA3（Edg7，Mm04 69694_m1），LPA4（GPR23，Mm01228533_m1）和LPA5（GPR92，Mm02621109_s1），降钙素受体（Calcr，Mm0403227_1），甘油醛-3-磷酸脱氢酶（Gapdh，产品编号4308313）和18S核糖体RNA（产品编号4308329）的引物和探针来自Applied Biosystems（基因表达测定）。根据制造商的建议，使用TaqMan一步RT-PCR Master Mix试剂盒（Applied Biosystems）和ABI Prism 7900HT序列检测器（AppliedBiosystems。样品放大三份。使用从小鼠骨髓来源的破骨细胞、小肠、卵巢和MC3T3-E1细胞获得的总RNA的稀释液来验证引物/探针组的相对扩增效率。将mRNA的量标准化为相同样品中18S核糖体RNA的水平[4]。

骨髓来源的破骨细胞[4]
如前所述，使用6-10周龄雄性C57Bl/6小鼠股骨和胫骨的骨髓细胞制备破骨细胞。分离后，将细胞悬浮在补充有FBS（10%）和抗生素（1%）的α-最低必需培养基中，并用重组人巨噬细胞集落刺激因子（25 ng/ml）在T75组织培养瓶（每瓶15×106个细胞）中培养。24小时后，取出非粘附细胞并将其重悬于含有FBS（10%）、抗生素（1%）、巨噬细胞集落刺激因子（50ng/ml）和重组人RANKL（huRANKL-LZ，100ng/ml）的α-最低必需培养基中，并以10×104个细胞/cm2在悬浮培养皿 中铺板。将得到的细胞再培养3天。然后在4°C下，通过在不含Ca2+/Mg2+的PBS中孵育10分钟将细胞悬浮，并通过FBS的单位重力速度沉淀富集破骨细胞（2次）。

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RAW-264.7衍生的破骨细胞样细胞[4]
小鼠白血病单核巨噬细胞系RAW 264.7从美国典型培养物保藏中心获得，并保存在含有FBS（10%）和抗生素溶液（1%）的Dulbecco改良Eagle培养基中。将RAW 264.7细胞以1.3×104个细胞/cm2的密度培养，并用huRANKL LZ（100ng/ml）处理4天以产生多核破骨细胞样细胞。

动物/疾病模型： 9周龄雄性Wistar大鼠[1]
剂量： 0.4-2 μg
给药途径： 脑室内注射 (Icv)
实验结果： 在迷宫实验中，LPA在陌生条件下减少了开放臂的探索行为，但在习惯化条件下则无影响。

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鉴于LPA受体在全身广泛分布，我们采用脑室内注射方案来研究LPA在大脑中的特异性作用，从而避免潜在的外周效应造成的混淆结果。[1]
脑室内注射和给药采用先前描述的方法。将不锈钢引导套管植入大鼠左侧或右侧侧脑室。用马来酸麻醉动物，并将其固定在立体定位仪上，门齿棒设置在耳间线上方5 mm处。将一根引导套管（7 mm，23号）用两颗不锈钢螺钉和牙科水泥固定在颅骨上，开口用30号闭塞器封闭。根据Paxinos和Watson的大鼠脑立体定位坐标，植入坐标为：前囟后方0.6 mm，侧方±2.0 mm，颅骨表面下方3.2 mm。该坐标使套管位于脑室上方1 mm处。术后7天恢复期后，通过重力流经插入引导套管内并超出套管尖端1 mm的8 mm长30号注射器来确认套管通畅性。此步骤用于使动物熟悉注射技术（假注射）。将闭塞器从引导套管中取出，然后将连接有70厘米校准聚乙烯-10导管的8毫米注射器（30号不锈钢管）插入脑室。随后向上提升导管直至开始输液，并在30-60秒内注入5微升药物或赋形剂溶液。注射器在引导套管内停留30秒以促进溶液扩散，随后取出。立即重新插入导丝。

[1]. 1-Oleoyl lysophosphatidic acid: a new mediator of emotional behavior in rats. PLoS One. 2014;9(1):e85348.

[2]. Activation of serum response element-regulated genes by lysophosphatidic acid. Nucleic Acids Res. 1994;22(3):450-452.

[3]. Mitogenic action of lysophosphatidic acid and phosphatidic acid on fibroblasts. Dependence on acyl-chain length and inhibition by suramin. Biochem J. 1992 Jan 1;281 ( Pt 1)(Pt 1):163-9.

[4]. Lysophosphatidic acid signals through multiple receptors in osteoclasts to elevate cytosolic calcium concentration, evoke retraction, and promote cell survival. J Biol Chem. 2010 Aug 13;285(33):25792-801.

1-油酰基-sn-甘油-3-磷酸酯是一种1-酰基-sn-甘油-3-磷酸酯，其1-O-酰基为油酰基。它是1-油酰基-sn-甘油-3-磷酸酯(2-)的共轭酸。
LPA(18:1(9Z)/0:0)是存在于大肠杆菌（K12菌株、MG1655菌株）中或由其产生的代谢产物。
PA(18:1(9Z)/0:0)是存在于酿酒酵母中或由其产生的代谢产物。

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溶血磷脂酸(LPA)是一种天然存在的磷脂，具有生长因子样活性[van Corven, Groenink, Jalink, Eichholtz & Moolenaar (1989) Cell 45, 45-54]。我们研究了多种LPA结构类似物刺激静止成纤维细胞DNA合成的能力。当酰基链长度变化时，其促有丝分裂效力的排序为：1-油酰LPA与1-棕榈酰LPA相当，其次是1-肉豆蔻酰LPA，再次是1-月桂酰LPA，最后是1-癸酰LPA；在所测试的浓度范围（1-100 μM）内，最后一种化合物几乎没有活性。醚键连接的LPA（1-O-十六烷基甘油-3-磷酸酯）在浓度低于25 μM时，其促有丝分裂活性远低于酯键连接的类似物，并且在高浓度下具有细胞毒性。缺乏甘油骨架的十六烷基磷酸酯几乎没有活性。以摩尔浓度计，二酰基磷脂酸 (PA) 与相应的 LPA 类似物效力大致相当，且表现出相似的酰基链长度依赖性；数据表明，PA 的促有丝分裂作用并非由痕量 LPA 污染所致。尽管 LPA 和 PA 的短链类似物不能拮抗长链 (L)PA 的作用，但多阴离子药物苏拉明能够以可逆且剂量依赖的方式抑制 LPA 和 PA 诱导的 DNA 合成，其浓度 [IC50（抑制 50% 的浓度）约为 70 μM] 不会影响表皮生长因子诱导的 DNA 合成。苏拉明似乎作用于细胞周期的早期 G0/G1 期，阻断 LPA 的即时反应，例如磷脂酰肌醇水解。我们得出结论，LPA 和 PA 均可作为促生长磷脂发挥作用，脂肪酸链长是其促有丝分裂效力的主要决定因素。[1]

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LPA 是一种强效的促有丝分裂因子和运动因子，与乳腺癌和卵巢癌骨转移有关。此外，过表达 LPA1 的乳腺癌细胞可促进破骨细胞募集至转移部位并刺激骨吸收。我们之前的研究表明，成骨细胞可以产生 LPA。这种 LPA 可能吸引并激活肿瘤细胞，并调节破骨细胞的运动和存活。因此，成骨细胞释放的 LPA 可能是一种重要的自分泌和旁分泌介质，在生理上调节骨骼发育和重塑，在病理上促进骨转移性疾病的发生。[4]

C21H41O7P

436.519808530808

436.259

65528-98-5

1-Oleoyl lysophosphatidic acid sodium;325465-93-8

5311263

Colorless to light yellow liquid

1.1±0.1 g/cm3

581.5±60.0 °C at 760 mmHg

305.5±32.9 °C

0.0±3.7 mmHg at 25°C

1.490

6.18

123.1

3

7

21

29

462

1

CCCCCCCC/C=C\CCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(=O)(O)O)O

WRGQSWVCFNIUNZ-GDCKJWNLSA-N

InChI=1S/C21H41O7P/c1-2-3-4-5-6-7-8-9-10-11-12-13-14-15-16-17-21(23)27-18-20(22)19-28-29(24,25)26/h9-10,20,22H,2-8,11-19H2,1H3,(H2,24,25,26)/b10-9-/t20-/m1/s1

[(2R)-2-hydroxy-3-phosphonooxypropyl] (Z)-octadec-9-enoate

1-Oleoyl Lysophosphatidic Acid; 65528-98-5; 1-Oleoyl-sn-glycerol 3-phosphate; lysophosphatidic acid; 1-Oleoyl-sn-glycero-3-phosphate; CHEBI:62837; 1-(9Z-octadecenoyl)-sn-glycero-3-phosphate; PA(18:1/0:0);

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。