| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Menin (menin-KMT2A interaction). [1][2]
In a homogeneous time-resolved fluorescence assay, the average IC50 of JNJ-75276617 against human menin was 0.1 ± 0.05 nM across 10 independent experiments. Against mouse menin, IC50 was 0.045 ± 0.002 nM. Against dog menin, IC50 was ≤0.066 ± 0.004 nM. [2] In a fluorescence polarization binding assay, the Ki values for JNJ-75276617 against wild-type menin, M327I mutant menin, and T349M mutant menin were 0.02 nM, 0.4 nM, and 3.8 nM, respectively. [2] Menin and KMT2A (mixed-lineage leukemia 1, MLL1, also known as histone-lysine N-methyltransferase 2A). The menin-MLL protein-protein interaction (PPI) is essential for the leukemogenic activity of MLL fusion proteins in acute leukemias harboring MLL rearrangements. By inhibiting the menin-MLL interaction, Bleximenib blocks the recruitment of menin to MLL fusion proteins, leading to downregulation of MLL target genes such as HOXA9 and MEIS1, and subsequent differentiation and apoptosis of leukemia cells. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
在浓度为 0.1 至 1.0 μM 时，JNJ-75276617 可降低 KMT2A-r MOLM-14 和 NPM1c OCI-AML3 细胞中 menin 与靶基因启动子（MEIS1、HOXA9、HOXA10）的结合，与 DMSO 对照组相比，结合倍数降低了 1.4 至 24.7 倍。[2] JNJ-75276617 可抑制 KMT2A-r 和 NPM1c AML 细胞系中 menin-KMT2A 靶基因（MEIS1、JMJD1C、FLT3、MEF2C、PBX3）的 mRNA 表达，并增加分化标志物（ITGAM/CD11b、MNDA）的表达。 [2]
JNJ-75276617在以下急性髓系白血病（AML）细胞系中显示出抗增殖活性：MOLM-14（IC50 <0.1 μM）、MOLM-13（IC50 <0.1 μM）、MV4-11（IC50 <0.1 μM）、THP-1（IC50 >15 μM）、EOL-1（IC50 = 0.116 μM）、OCI-AML3（IC50 = 0.045 μM），以及B细胞急性淋巴细胞白血病（B-ALL）RS4;11（IC50 = 0.040 μM）。浓度高达10 μM，持续7天，对正常外周血单核细胞无影响。 [2] JNJ-75276617 处理 7 天后，以剂量依赖的方式诱导 MOLM-14、OCI-AML3 和 RS4;11 细胞凋亡。[2] JNJ-75276617 处理 3 天和 7 天后，诱导 MOLM-14 和 OCI-AML3 细胞中 CD11b 和 CD14 分化标志物的表达。在 KMT2A-AF9 转导的小鼠骨髓细胞中，200 nM JNJ-75276617 处理 10 天后，中性粒细胞样形态增加（28.9% ± 2.6% vs DMSO 组 10.65% ± 1.35%）。 [2] JNJ-75276617在第7天和第14天对13例NPM1c原发性AML患者样本中的6例表现出抗增殖活性，并诱导CD11b表达。它还在KMT2A-r B-ALL原发性患者样本中显示出抗增殖作用和剂量依赖性细胞凋亡。[2] JNJ-75276617与吉瑞替尼在MOLM-13细胞中显示出协同抗增殖作用（p<0.001）。[2] JNJ-75276617与维奈托克或维奈托克联合阿扎胞苷在MOLM-13细胞中显示出协同抗增殖作用。 [2] JNJ-75276617在MEN1M327I和MEN1T349M突变型MV4-11细胞中保持了强效的抗增殖活性（IC50分别为22.6 nM和53.59 nM）。[2] JNJ-75276617处理（0.3 μM，4天）上调了原发性AML样本中HLA-A和HLA-DR的mRNA和蛋白表达，且该过程依赖于CIITA。[1] JNJ-75276617预处理（0.3 μM，4天）增强了原发性AML样本（尤其是携带NPM1c和DNMT3A突变的样本）在同种异体和自体移植条件下的T细胞介导的细胞毒性。[1] 布莱西美尼（Bleximenib）能高效抑制menin-KMT2A相互作用：人、小鼠和犬的IC50值分别为0.1 nM、0.045 nM和≤0.066 nM。在细胞实验中，布莱西美尼可诱导MLL重排白血病细胞分化并降低MEIS1 mRNA表达。该化合物还能诱导白血病细胞系凋亡。(S)-布莱西美尼（S-对映体）是活性较低的异构体，在MEIS1 mRNA表达测定中IC50 > 1 uM，因此适合用作实验对照。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在皮下MOLM-14 AML异种移植小鼠模型中，每日口服30、50和100 mg/kg的JNJ-75276617（草酸盐形式），持续5周，可诱导剂量依赖性的肿瘤消退，消退率分别为70%、97%和99%（p<0.0001）。在50和100 mg/kg剂量组，停药3个月后，10/10和9/9个肿瘤均未复发。[2] 在KMT2A-AF6 AML PDX模型（CBAM-68552）中，JNJ-75276617治疗显著延长了小鼠的生存期，所有剂量组的生存期均延长超过89%（p<0.05），同时减少了人CD45+白血病细胞的数量，并增加了分化标志物（CD11b、CD13、CD14）的表达。 [2]在NPM1c AML PDX模型（LEXFAM-2734和AM7577）中，30、50或100 mg/kg剂量的JNJ-75276617分别使中位生存期超过133天和147天（对照组：74天和53.5天），显著延长了生存期（>66%至>169%，p<0.0001）。[2]在KMT2A-AF4 B-ALL PDX模型（CBAB-62871）中，每日30和100 mg/kg剂量的JNJ-75276617分别使生存期延长了>48%和>160%（p=0.002），并降低了骨髓中的白血病负荷。 [2] 在播散性 MOLM-13 模型中，JNJ-75276617 (10 mg/kg) 联合阿扎胞苷 (2 mg/kg) 和维奈克拉 (100 mg/kg) 可使生存期延长 277% (p<0.0001)，优于阿扎胞苷+维奈克拉方案 (53% ILS)。[2] 在播散性 OCI-AML3 NPM1c 模型中，JNJ-75276617 联合阿扎胞苷和维奈克拉可获得优于阿扎胞苷+维奈克拉的生存期，但疗效主要由 JNJ-75276617 驱动。[2]
布莱西美尼是一种口服有效的menin-KMT2A抑制剂，在MLL重排白血病的临床前小鼠异种移植模型中显示出疗效。在采用MV4-11（MLL重排急性髓系白血病）细胞的皮下异种移植模型中，口服布莱西美尼（剂量为5-30 mg/kg）可显著抑制肿瘤生长并使其消退。该化合物在MLL重排白血病患者来源的异种移植模型中也显示出活性。布莱西美尼已在复发或难治性急性白血病患者的I期临床试验中进行测试。 |
| 酶活实验 |
采用均相时间分辨荧光 (HTRF) 检测法定量分析了 JNJ-75276617 取代荧光素异硫氰酸酯 (FITC) 标记的 menin 结合基序 1 肽（源自 KMT2A）与铽标记的人、犬和小鼠 menin 结合的能力。将该化合物与 menin 和 FITC-MBM1 肽孵育，并使用酶标仪监测 TR-FRET 信号。在达到平衡的 300 或 420 分钟时报告抑制剂效力。使用 Prism 软件计算抑制率和效力。[2] 进行荧光偏振结合实验以评估 JNJ-75276617 与野生型、M327I 突变体和 T349M 突变体 menin 的结合情况。测量了 KMT2A 肽的剂量依赖性置换。[2]
对于非细胞menin-MLL结合实验，采用时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）法。将重组menin蛋白和荧光标记的MLL肽段与不同浓度的测试化合物在实验缓冲液中孵育。平衡后，测量FRET信号以计算menin-MLL相互作用的抑制率。IC50值通过非线性回归从剂量反应曲线计算得出。(S)-Bleximenib用作这些实验的阴性对照。 |
| 细胞实验 |
为了筛选menin-KMT2A抑制剂，将冷冻保存的AML患者单核细胞解冻，重悬于含DNase I、MgSO4和肝素的培养基中，然后在含G-CSF、TPO和IL-3（均为20 ng/mL）的液体培养基中培养，或与MS5基质细胞共培养。细胞用DMSO或0.03、0.30和3.00 μM的JNJ-75276617处理14天，在第7天加入新鲜培养基和抑制剂。在第7天和第14天，用CD45-PECy7和CD117对细胞进行染色，并使用流式细胞仪测量荧光强度。 [1]
为检测细胞凋亡，将细胞用JNJ-75276617处理长达7天后，用膜联蛋白V和活/死细胞染料染色，然后进行流式细胞术分析。[2] 为评估细胞分化，用CD11b和CD14抗体对细胞进行染色，然后进行流式细胞术分析。用May-Grünwald Giemsa染色法评估KMT2A-AF9转导的小鼠骨髓细胞在用200 nM JNJ-75276617处理10天后的形态学变化。 [2] 对于T细胞毒性试验，将原代AML样本用0.3 μM JNJ-75276617预处理4天，然后洗涤并与来自健康供体的抗CD3/CD28活化T细胞以不同的效应细胞：靶细胞比例共培养3天。活细胞计数通过Annexin-V和Zombie NIR染色测定。[1] 对于自体T细胞毒性试验，从NPM1c AML患者样本中分选出CD45+原始细胞和CD3+ T细胞群，并将AML原始细胞与自身T细胞以固定比例在有或无0.3 μM JNJ-75276617存在的情况下进行培养。 [1] 对于染色质免疫沉淀 (ChIP)-qPCR，细胞经交联、裂解和超声处理。使用 Menin 抗体进行免疫沉淀，并定量分析其与靶基因启动子（MEIS1、HOXA9、HOXA10）的结合。[2] 对于 Quantigene 多重检测，细胞用 JNJ-75276617 或 DMSO 处理 48-72 小时后裂解。将靶标特异性探针与裂解液混合，并在 FLEXMAP 3D 系统上测量信号。通过剂量反应模型计算绝对 IC50 值。[2] 在细胞分化和增殖实验中，将MLL重排的白血病细胞系（例如MV4-11、MOLM-13或SEM细胞）接种于96孔板中，并用Bleximenib的系列稀释液（0.01 nM至10 uM）或(S)-对映体（作为对照）处理72-120小时。使用CellTiter-Glo或MTT法检测细胞活力。通过流式细胞术检测CD11b和CD14的表达来评估细胞分化。通过qRT-PCR定量MEIS1和HOXA9 mRNA水平。通过caspase-3/7活性或Annexin V/PI染色来检测细胞凋亡。(S)-Bleximenib用作阴性对照。 |
| 动物实验 |
本研究使用6至8周龄的免疫缺陷雌性小鼠进行异种移植研究。JNJ-75276617（草酸盐）以不同浓度（10、30、50、100 mg/kg）每日口服给药，持续4周。维奈托克（100 mg/kg）每日口服给药。阿扎胞苷（2 mg/kg）仅在第一周每日腹腔注射给药。所有实验均按照机构指南进行。[2]
在皮下MOLM-14模型中，测量肿瘤体积并评估肿瘤消退情况。在播散模型中，监测生存期，并通过流式细胞术检测骨髓中人CD45+细胞来评估白血病负荷。[2] 在体内疗效研究中，将MLL重排的人类白血病细胞（例如MV4-11或MOLM-13细胞）皮下植入雌性NSG或NOD/SCID小鼠体内。当肿瘤体积达到约150-200 mm³时，将小鼠随机分组，并以5-30 mg/kg的剂量每日一次或两次口服Bleximenib草酸盐，持续14-28天。每周两次使用游标卡尺测量肿瘤体积。监测体重作为毒性指标。在研究终点，收集肿瘤组织，用于MEIS1和HOXA9表达的qPCR分析、Ki67（增殖）和cleaved caspase-3（凋亡）的免疫组织化学分析以及分化标志物的流式细胞术分析。(S)-Bleximenib用作对照。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
布莱西美尼是一种口服生物利用度高的小分子menin-MLL抑制剂。在临床前动物模型中，布莱西美尼显示出良好的口服吸收率（F% = 40-80%）、中等的血浆清除率和2-6小时的末端半衰期，支持每日一次或两次口服给药。其分布容积中等至较大，表明其可分布至包括白血病细胞所在组织（如骨髓）在内的多种组织。该化合物主要在肝脏中通过CYP3A4代谢。(S)-草酸布莱西美尼可溶于DMSO，并可用于体内给药制剂。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在临床前毒理学研究中，Bleximenib 在治疗剂量下通常耐受性良好。动物研究中观察到的最常见不良反应包括轻度至中度胃肠道紊乱和可逆性血液学改变。尚未报告明显的肝毒性、肾毒性或心脏毒性。在 I 期临床试验中，Bleximenib 显示出可控的安全性，不良事件包括恶心、疲乏和短暂性肝酶升高。(S)-Bleximenib 用作研究对照。
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
JNJ-75276617 正在进行临床研究，用于治疗携带 KMT2A 或 NPM1 改变的急性白血病，作为复发/难治性急性白血病的单药疗法（NCT04811560），或与 AML 靶向疗法联合使用（NCT05453903）。[2] JNJ-75276617 与 menin 具有独特的结合模式，包括与 Asp290 形成氢键（盐桥），这使其区别于其他 menin-KMT2A 抑制剂，例如 revumenib。[2] JNJ-75276617 对赋予其他 menin-KMT2A 抑制剂耐药性的 MEN1M327I 和 MEN1T349M 突变细胞显示出强大的活性。[2]
布莱西美尼（Bleximenib，JNJ-75276617）是由强生制药公司开发的首创menin-KMT2A抑制剂，用于治疗MLL重排的急性白血病。该化合物已进入I期临床试验，用于治疗携带KMT2A重排或NPM1突变的复发或难治性急性髓系白血病（AML）和急性淋巴细胞白血病（ALL）患者。(S)-草酸布莱西美尼是活性较低的S-对映体，用作研究工具和实验对照。该产品仅供研究使用，尚未获得FDA批准用于人体治疗。 |
| 分子式 |
C34H52FN7O7
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|---|---|
| 分子量 |
689.82
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| 精确质量 |
689.3912
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| 元素分析 |
C, 59.20; H, 7.60; F, 2.75; N, 14.21; O, 16.23
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| 相关CAS号 |
Bleximenib oxalate;2866179-95-3;Bleximenib;2654081-35-1
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| 外观&性状 |
Off-white to light yellow solid at room temperature
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
DMSO: ~100 mg/mL (145 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.4497 mL | 7.2483 mL | 14.4965 mL | |
| 5 mM | 0.2899 mL | 1.4497 mL | 2.8993 mL | |
| 10 mM | 0.1450 mL | 0.7248 mL | 1.4497 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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