| 规格 | 价格 | |
|---|---|---|
| 500mg | ||
| 1g | ||
| Other Sizes |
| 靶点 |
MDM2 (mouse double minute 2) – a potent inhibitor of the MDM2/p53 protein-protein interaction. Also exhibits moderate inhibitory activity against MDM4/p53 interaction [1].
IC50: 39.6 nM (HCT-116 cells); 4.28μM (HEK-293 cells)[1]. |
|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
体外活性： JN122是一种高效MDM2抑制剂，在荧光偏振结合实验中的Ki值为0.7 ± 0.1 nM。它还抑制MDM4/p53结合，Ki值为527 ± 14 nM [1]。
在细胞生长抑制实验中，JN122对多种携带野生型p53的癌细胞系表现出强效抗增殖活性：HCT-116（结直肠癌）IC50 < 1.0 nM，RKO（结直肠癌，MDM4过表达）IC50 = 43.2 ± 7.7 nM，U2-OS（骨肉瘤）IC50 = 10.8 ± 5.4 nM，A549（肺癌）IC50 = 2.9 ± 1.6 nM，MSTO-211H（间皮瘤）IC50 = 9.48 ± 9.42 nM，HepG2（肝癌）IC50 = 0.32 ± 0.21 nM，H460（肺癌）IC50 = 0.26 ± 0.10 μM，MOLM-13（急性髓系白血病）IC50 = 6.4 ± 4.3 nM（2天处理）。相比之下，在p53突变的SW480细胞和p53检测不到的HeLa细胞中，JN122的活性弱得多（IC50分别为7.10 ± 0.24 μM和12.24 ± 1.71 μM），表明其抗增殖活性依赖于p53 [1]。 在HCT-116细胞中，JN122在24和48小时剂量依赖性地增加p53、p21和MDM2蛋白水平，并在5-10 μM浓度下诱导PARP切割（凋亡标志物）。48小时时，观察到PUMA和BAX上调，较高浓度下MDM2和MDM4因细胞死亡而减少。在RKO细胞中，JN122（78.1 nM）的p53激活效果与RG7388在312.5 nM时相当（改善4倍）。JN122还在H460、A549、U2-OS、MSTO-211H和RKO细胞中诱导MDM4降解 [1]。 流式细胞术分析显示，JN122在HCT-116细胞中低浓度时剂量依赖性地增加G1期细胞比例，高浓度时增加G2期细胞比例。在48小时处理后，12.5和25 μM浓度下剂量依赖性地诱导凋亡 [1]。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
体内活性： 在雌性NOD.CB17-PrkdcscidIl2rgtm1/Bcgen（B-NDG）小鼠的全身性MOLM-13异种移植模型（AML）中，JN122以25、50和100 mg/kg的剂量每日一次口服给药，连续21天。溶媒对照组小鼠的中位总生存期为20天（范围18-26天）。JN122显著延长中位生存期：25 mg/kg剂量组为25.5天（范围20-27天，p < 0.01），50 mg/kg剂量组为25.5天（范围17-28天，p < 0.001），100 mg/kg剂量组为31天（范围26-33天，p < 0.001）。相比之下，RG7388（50 mg/kg）将生存期延长至27.5天（范围26-30天，p < 0.001）[1]。
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| 酶活实验 |
酶学实验： 对于MDM2和MDM4结合亲和力的测定，采用荧光偏振实验。将重组GST-MDM2（1-118）或GST-MDM4（1-123）蛋白与荧光标记的p53肽及梯度稀释的测试化合物孵育。室温孵育30分钟后，使用酶标仪测量偏振值。使用Cheng-Prusoff方程计算Ki值 [1]。
对于计算对接，从Protein Data Bank获取MDM2（PDB: 4LWU）和MDM4（PDB: 6Q9W）的结构。使用Protein Preparation Wizard模块优化MDM2结构。生成以活性位点为中心的20 × 20 × 20 ų网格框。制备JN122的构象并生成其离子化状态（pH 7.4 ± 1.0）。使用Glide模块进行对接，基于对接评分选择最佳结合模式 [1]。 |
| 细胞实验 |
细胞实验： 对于细胞生长抑制实验，将细胞以每孔3,000-20,000个的密度接种于96孔板中。处理4天后（MOLM-13为2天），使用CCK-8试剂或CellTiter-Glo 2.0试剂盒测定细胞活力。在450 nm处检测吸光度，使用GraphPad Prism通过非线性回归曲线拟合计算IC50值 [1]。
对于Western blot分析，将细胞接种于6孔板中，用化合物处理24或48小时。用含PMSF的RIPA缓冲液裂解细胞，离心裂解液。蛋白质（20-40 μg/泳道）通过SDS-PAGE分离，转移至硝酸纤维素膜，用5%脱脂牛奶封闭，与一抗（p53、MDM2、p21、MDM4、PUMA、BAX、PARP等）在4°C孵育过夜，然后与HRP标记的二抗孵育。使用增强化学发光法显影蛋白质 [1]。 对于qPCR分析，HCT-116细胞用化合物处理48小时。使用试剂盒提取总RNA，合成cDNA。使用SYBR Green和针对MDM2、p21、PUMA、BAX、MDM4和TP53的引物进行定量PCR。表达量以GAPDH为内参进行标准化 [1]。 对于细胞周期分析，HCT-116细胞处理24小时，用70%乙醇固定，碘化丙啶染色，流式细胞术分析 [1]。 对于凋亡分析，HCT-116细胞处理48小时，用FITC Annexin V和碘化丙啶染色，流式细胞术分析 [1]。 |
| 动物实验 |
动物实验方案： 对于MOLM-13异种移植瘤药效研究，50只雌性NOD.CB17-PrkdcscidIl2rgtm1/Bcgen（B-NDG）小鼠在第1天静脉注射2 × 10⁴个MOLM-13细胞（200 μL PBS中）。在第6天，小鼠每日一次口服给予溶媒（5% DMSO + 10% Cremophor EL + 85%生理盐水）、JN122（25、50或100 mg/kg）或RG7388（50 mg/kg），连续21天。监测小鼠体重并记录生存情况。生成Kaplan-Meier生存曲线 [1]。
对于ICR小鼠的PK研究，化合物以5 mg/kg静脉注射或15 mg/kg口服给药。在不同时间点采集血样，通过LC-MS/MS分析血浆药物浓度 [1]。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
在ICR小鼠中，以15 mg/kg口服给予JN122后，T1/2为7.42 ± 0.35小时，Cmax为4151 ± 1049 ng/mL，AUC(0-∞)为58429 ± 14155 h·ng/mL，口服生物利用度为30.3 ± 7.3%。以5 mg/kg静脉注射后，T1/2为5.35 ± 0.47小时，Cmax为23760 ± 18476 ng/mL，AUC为4251 ± 4098 h·ng/mL，清除率为1.21 ± 0.10 mL/min/kg [1]。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在MOLM-13异种移植瘤药效研究中，JN122在所有三个剂量（25、50、100 mg/kg）下，从首次给药后第1-15天引起小于2 g（<10%）的体重下降，表明耐受性良好，体内毒性低。在第22天，溶媒组和25、50 mg/kg剂量组因疾病进展出现大于10%的体重下降（>2 g），但100 mg/kg剂量组未出现 [1]。
在HEK-293正常肾细胞中，JN122抑制细胞生长的IC50为4.28 μM，比其在p53野生型癌细胞系中的抗增殖IC50值高出>100倍，表明可能具有良好的安全性。微粒体稳定性研究表明，JN122在人、犬和猴微粒体中稳定，但在大鼠和小鼠微粒体中相对不稳定 [1]。 |
| 参考文献 | |
| 其他信息 |
JN122是一种含螺吲哚结构的MDM2抑制剂，通过对RG7388衍生化合物的基于结构的优化而发现。它具有新颖的螺环结构，区别于已知的螺-氧吲哚类MDM2抑制剂。JN122能有效激活p53及其靶基因（p21、MDM2、PUMA、BAX），抑制细胞周期进程，并在野生型p53癌细胞中诱导凋亡。有趣的是，JN122还能在多种癌细胞系中促进MDM4降解。活性对映体为(-)-60，其在MDM2结合和细胞实验中比其(+)-对映体强>100倍。该化合物具有良好的口服PK特性和在全身性AML异种移植模型中强大的体内抗肿瘤疗效。JN122在水溶液中稳定，不像螺-氧吲哚类MDM2抑制剂那样发生自发性的开环-闭环异构化 [1]。
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| 分子式 |
C33H37CL2N3O4
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|---|---|
| 分子量 |
610.57
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| 精确质量 |
609.2200
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| 元素分析 |
C, 64.92; H, 6.11; Cl, 11.61; N, 6.88; O, 10.48
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| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
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| SMILES |
CC(C)(C)C[C@H](N(CC)[C@H]1C(NC2=C(OC)C=C(C(O)=O)C=C2)=O)[C@]3(C4=CC=C(Cl)C=C4NC3)[C@H]1C5=CC(Cl)=CC=C5
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| InChi Key |
AJQDQXYTMUFRRF-MKYOLNSUSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C33H37Cl2N3O4/c1-6-38-27(17-32(2,3)4)33(18-36-25-16-22(35)11-12-23(25)33)28(19-8-7-9-21(34)14-19)29(38)30(39)37-24-13-10-20(31(40)41)15-26(24)42-5/h7-16,27-29,36H,6,17-18H2,1-5H3,(H,37,39)(H,40,41)/t27-,28-,29+,33-/m0/s1
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| 化学名 |
4-((2'S,3S,4'R,5'R)-6-chloro-4'-(3-chlorophenyl)-1'-ethyl-2'-neopentylspiro[indoline-3,3'-pyrrolidine]-5'-carboxamido)-3-methoxybenzoic acid
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| 别名 |
JN-122; JN 122
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
Typically soluble in DMSO (e.g. 10 mM)
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 1.6378 mL | 8.1891 mL | 16.3781 mL | |
| 5 mM | 0.3276 mL | 1.6378 mL | 3.2756 mL | |
| 10 mM | 0.1638 mL | 0.8189 mL | 1.6378 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
ReACp53 scrambled peptide TFA
p53-hDM2 cyclic peptide inhibitor 16e
MMRi6
dsP53-285 saRNA
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