Glucagon-like peptide-1 receptor (GLP-1R)

Orforglipron是一种肠促胰岛素，由小肠L细胞在营养物质通过消化道时产生，葡萄糖通过GLP-1受体给予。Orforglipron具有多种作用，包括延迟胃排空和抑制食物摄入[1]。

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在这项研究中，研究人员报告了非肽GLP-1R激动剂LY3502970（OWL833）的发现和作用机制。LY3502970是一种部分激动剂，偏向于G蛋白激活，而不是GLP-1R上的β-arrestin募集。该分子对其他B类G蛋白偶联受体（GPCR）具有高度的效力和选择性，其药代动力学特征有利于口服给药。LY3502970与活性状态GLP-1R复合物的高分辨率结构揭示了上螺旋束中一个独特的结合囊，该化合物在其中被细胞外结构域（ECD）、细胞外环2和跨膜螺旋1、2、3和7结合。这种机制产生了一种独特的受体构象，可以解释化合物的部分激动作用和偏置信号。此外，LY3502970和ECD的灵长类特异性Trp33之间的相互作用告知了该分子的物种选择性活性[2]。

Orforglipron半钙水合物(血浆浓度0.94-4.8 nM，静脉注射30分钟；或0.05-0.1 mg/mL，灌胃，5天)在动物模型食蟹猴中呈剂量依赖性地抑制食物摄入、促进胰岛素分泌和降低血糖[1]。Orforglipron半钙水合物(0.05-1.35 mg/kg，灌胃)给药后2小时达Cmax，血浆药物暴露量的增加与剂量的增加大致成正比，表明Orforglipron半钙水合物以剂量依赖性方式在胃肠道吸收[1]。奥格列酮半钙水合物在食蟹猴体内的药代动力学分析[1] 途径 剂量 (mg/kg) Tmax (h) Cmax (ng/mL) AUC0-24h (ng·h/mL) ig 0.05 2.0 4.78 23.7 ig 0.15 2.0 20.7 135 ig 0.45 2.0 32.0 208 ig 1.35 2.0 148 1040.

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在疗效研究中，口服LY3502970可降低人源化GLP-1R转基因小鼠的血糖，并对非人灵长类动物产生促胰岛素和低血糖作用，表明两种模型的作用大小与注射用艾塞那肽相当。这项工作共同确定了正在开发的用于治疗2型糖尿病的口服药物活性的分子基础，为非肽配体激活B类GPCR提供了见解。[2]

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食蟹猴的药代动力学和功能。除了作为强效的Gs激活剂外，非肽GLP-1R激动剂还必须具有能够口服给药的药代动力学特性。因此，通过静脉注射或口服该化合物的研究，确定了LY3502970在大鼠和食蟹猴体内的药代动力学特征。大鼠（n=4）口服给药后的消除半衰期（T1/2）为10.4至12.4小时，食蟹猴（n=4，n=4）为3.4至4.6小时，经计算口服生物利用度分别为33%至43%和21%至28%。这与迄今为止批准的唯一一种肽GLP-1R激动剂片剂在人体内报告的0.4%至1%的口服生物利用度形成鲜明对比。这些数据表明，在没有基于肽的GLP-1R激动剂所需的复杂口服制剂的情况下，口服LY3502970可能是可行的[2]。

由于Trp33ECD在猴子GLP-1R中的存在以及该物种良好的药代动力学数据，在食蟹猴中测试了LY3502970，以评估该化合物增强葡萄糖刺激的胰岛素分泌和减少食物摄入的能力，这两者都是GLP-1R激动症的治疗标志。进行静脉葡萄糖耐量试验（IVGTT）以评估LY3502970增强胰岛素分泌的能力。静脉注射该化合物或艾塞那肽，然后持续输注，以在测试期间保持稳定的药物浓度。输注LY3502970或艾塞那肽40分钟后给予葡萄糖（图5A）。在葡萄糖给药之前，LY3502970和艾塞那肽均未刺激胰岛素分泌。葡萄糖输注后，载体处理对照组的血糖浓度升高，然后随着时间的推移逐渐下降。血清胰岛素水平略有升高，并在40分钟内保持升高状态。在实验期间，用LY3502970或艾塞那肽治疗显著增加了胰岛素浓度并降低了血糖（图5 B-E）。高剂量LY3502970（稳态浓度：9.1±0.8 nmol/L；平均值±SEM，n=7）对胰岛素分泌的影响与高剂量艾塞那肽（43.0±4.1 pmol/L；平均值？SEM，n=6）刺激的胰岛素分泌相当。这些结果表明，LY3502970可以通过促胰岛素机制降低高血糖，其程度与艾塞那肽相似[2]。

体外药理学。进行了cAMP积累、β-arrestin募集和受体结合试验,根据已发表方法: Nat. Commun. 7, 13384 (2016) and Nat. Chem. Biol. 16, 1105–1110 (2020).

动物/疾病模型：食蟹猴模型[1]
剂量： 0.9-4.8 nM；或 0.05-0.1 mg/mL
给药途径： 持续静脉注射 30 分钟，直至血浆浓度达到稳态 0.9-4.8 nM；或以 0.05-0.1 mg/mL 的剂量灌胃给药 5 天
实验结果： 胰岛素分泌增加，血浆葡萄糖水平降低。食物摄入量呈剂量依赖性抑制。

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化合物配方。LY3502970 配制于 10% 聚乙二醇 400 (PEG400)/10% 丙二醇 (PG)/80% 甘氨酸缓冲液（100 mM 甘氨酸，64 mM NaOH，pH 10）中。艾塞那肽配制于含0.05% (w/v) Tween80的磷酸盐缓冲液(PBS)中。不含受试物的溶剂溶液用作对照。[2]

药代动力学。[2]
LY3502970分别以0.05、0.15或0.45 mg/kg的剂量口服或以0.15 mg/kg的剂量静脉注射给8周龄雄性大鼠（每组n = 4只大鼠），或以0.04、0.12或0.36 mg/kg的剂量口服或以0.12 mg/kg的剂量静脉注射给3岁雄性食蟹猴（每组n = 4只猴子）。口服给药组分别于给药前及给药后30分钟、1、2、3、4、6、8、12、16和24小时采集血样。静脉给药组也分别于给药前及给药后2、10和30分钟、1、2、4、8、12、16和24小时采集血样。采用液相色谱-串联质谱法测定化合物浓度，该方法的定量下限为0.1 ng/mL。药代动力学参数采用Phoenix WinNonlin软件进行非房室模型分析（线性/对数梯形法则）计算。口服生物利用度 (BA) 的计算方法为：口服和静脉给药后浓度-时间曲线下面积（AUC），公式为 BA (%) = AUCinf, 口服 (po) / AUCinf, iv × 100。[2]

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葡萄糖耐量试验。[2]
小鼠禁食过夜后，口服给予赋形剂或 LY3502970，5 小时后腹腔注射葡萄糖 (2 g/kg)。使用血糖仪测量葡萄糖给药后 120 分钟内的血糖浓度。数据用于计算曲线下面积 (AUC)（每组 n = 5 只小鼠）。雄性食蟹猴（3.9～7.5 kg）静脉注射硫酸阿托品（0.5 mg，Tanabe，0.02 mL/kg），并肌注盐酸氯胺酮（500 mg，50 mg/mL，0.2 mL/kg）进行镇静。随后，使用呼吸机吸入异氟烷（Isoflu，0.5%～2.0%）进行麻醉。为维持受试药物的稳态浓度，采用手动推注的方式给予LY3502970或艾塞那肽，随后通过注射器、留置针、延长管、三通旋塞和注射泵，经前臂头静脉或下肢隐静脉持续输注80分钟。 LY3502970 的低剂量和高剂量分别为 1800 ng/kg 和 5400 ng/kg，艾塞那肽的低剂量和高剂量分别为 4.2 ng/kg 和 13.4 ng/kg。推注给药的剂量为 2 mL/kg，LY3502970 低剂量和高剂量的输注速率分别为 1280 ng·kg⁻¹·h⁻¹ 和 3840 ng·kg⁻¹·h⁻¹，艾塞那肽低剂量和高剂量的输注速率分别为 6.5 ng·kg⁻¹·h⁻¹ 和 21.8 ng·kg⁻¹·h⁻¹。输注剂量为 2.7 mL/kg，输注速率为 2 mL·kg⁻¹·h⁻¹。给药开始 40 分钟后，经头静脉或大隐静脉以 1.25 mL·kg⁻¹·min⁻¹ 的速率输注 40% 葡萄糖溶液。在给药前后 5 分钟，以及给予 40% 葡萄糖后 5、10、15、20、30 和 40 分钟，从股静脉采集血液样本。研究采用 7 × 6 交叉设计，每隔 7 天或 24 天（第 8、15、22、29、36 和 60 天）进行一次。[2]

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食物摄入量研究。[2]
采用 8 × 5 交叉设计，每天一次给予 LY3502970、艾塞那肽或赋形剂，连续 5 天，并设置 2 天的恢复期。在喂食后 90 分钟内，对先前已接受 LY3502970、艾塞那肽或载体处理的动物进行食物摄入量测量，具体如下：1) 在喂食前 180 分钟口服 LY3502970 0.05 或 0.1 mg/kg，2) 在喂食前 30 分钟皮下注射艾塞那肽 0.3 或 0.6 µg/kg，或 3) 在适当时间给予匹配的载体。

[1]. Pyrazolopyridine derivative having glp-1 receptor agonist effect. WO2018056453A1.

[2]. Structural basis for GLP-1 receptor activation by LY3502970, an orally active nonpeptide agonist. Proc Natl Acad Sci U S A. 2020;117(47):29959-29967.

由于肽类GLP-1R激动剂具有抑制食欲的作用，这是其改善代谢控制整体能力的一部分，因此本研究对猴子口服LY3502970，以考察该化合物抑制摄食的能力。在给予LY3502970或艾塞那肽治疗后，测量90分钟内的食物摄入量。本研究中，LY3502970在喂食前180分钟口服给药，艾塞那肽在喂食前30分钟皮下注射给药，这与猴子药代动力学研究中观察到的最大浓度时间（Tmax）一致。每日给药一次，连续5天，间隔2天的恢复期。 LY3502970 以 0.05 和 0.1 mg/kg 的剂量给药后，在给药的第 1 天至第 5 天呈剂量依赖性地降低了食物摄入量（图 5F），与艾塞那肽 0.3 和 0.6 µg/kg 的给药效果相似（图 5G）。降低食物摄入量所需的 LY3502970 和艾塞那肽的平均浓度分别为 8.3 ± 0.8 nmol/L 和 83.1 ± 4.5 pmol/L（平均值 ± 标准误，n = 8）。这些结果表明，口服 LY3502970 可以达到与注射用 GLP-1 受体激动剂艾塞那肽相似的食物摄入量降低效果。综上所述，LY3502970 的临床前药效学特征与已上市的肽类 GLP-1 受体激动剂相似，并且具有适合人体口服给药的药代动力学特性。因此，LY3502970 目前正在早期临床试验中评估其作为抗糖尿病药物的潜力（标识符，NCT04426474）。[2]

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对于治疗方案估计值，4 每剂奥格列酮均导致 A1C 显著降低。在体重这一关键次要终点中，12 mg 和 36 mg 剂量组均取得了具有统计学意义的显著降低。
糖化血红蛋白 (A1C) 降低：1.2% (3 mg)、1.5% (12 mg)、1.5% (36 mg)、0.4% (安慰剂)
体重降低百分比：4.5% (3 mg)、5.8% (12 mg)、7.6% (36 mg)、1.7% (安慰剂)
体重减轻：4.2 kg (9.3 磅；3 mg)、5.2 kg (11.5 磅；12 mg)、7.2 kg (15.8 磅；36 mg)、1.5 kg (3.4 磅；安慰剂)
在 ACHIEVE-1 研究中，奥福格列隆的总体安全性与已确立的 GLP-1 类药物一致。最常报告的不良事件为胃肠道相关不良事件，且通常为轻度至中度。接受奥福格列酮（3 mg、12 mg 和 36 mg）治疗的受试者中最常见的不良事件为腹泻（分别为 19%、21% 和 26%，而安慰剂组为 9%）、恶心（分别为 13%、18% 和 16%，而安慰剂组为 2%）、消化不良（分别为 10%、20% 和 15%，而安慰剂组为 7%）、便秘（分别为 8%、17% 和 14%，而安慰剂组为 4%）以及呕吐（分别为 5%、7% 和 14%，而安慰剂组为 1%）。因不良事件导致的治疗中断率，奥福格列酮组分别为 6%（3 mg）、4%（12 mg）和 8%（36 mg），而安慰剂组为 1%。未观察到肝脏安全性信号。
ACHIEVE-1 研究结果将在 ADA 第 85 届科学年会上公布，并将在同行评审期刊上发表。今年晚些时候，我们将分享更多 ACHIEVE III 期临床试验项目的结果，以及评估 orforglipron 用于体重管理的 ATTAIN III 期临床试验项目的研究结果。礼来公司预计将于今年年底前向全球监管机构提交用于体重管理的奥福格列隆（orforglipron）的上市申请，并计划于2026年提交用于治疗2型糖尿病的上市申请。
关于奥福格列隆
奥福格列隆（orforglipron）是一种在研的每日一次口服小分子（非肽类）胰高血糖素样肽-1受体激动剂，可在一天中的任何时间服用，且不受食物和水摄入限制。⁵ 奥福格列隆由中外制药株式会社发现，并于2018年由礼来公司获得许可。中外制药和礼来公司共同发表了该分子的临床前药理学数据。⁶ 礼来公司正在进行奥福格列隆治疗2型糖尿病以及用于肥胖或超重且至少伴有一种体重相关疾病的成年人的体重管理的3期临床试验。目前，该药物正被研究作为治疗肥胖成人阻塞性睡眠呼吸暂停和高血压的潜在疗法。
关于 ACHIEVE-1 和 ACHIEVE 临床试验项目
ACHIEVE-1 (NCT05971940) 是一项 3 期、为期 40 周的随机、双盲、安慰剂对照试验，旨在比较奥福格列酮 3 mg、12 mg 和 36 mg 单药治疗与安慰剂治疗在仅通过饮食和运动无法有效控制血糖的 2 型糖尿病成人患者中的疗效和安全性。该试验在美国、中国、印度、日本和墨西哥随机分配了 559 名受试者，按 1:1:1:1 的比例分别接受奥福格列酮 3 mg、12 mg 或 36 mg 治疗或安慰剂治疗。本研究旨在证明，对于既往至少90天未服用任何降糖药物且未接受过胰岛素治疗的2型糖尿病患者，奥福格列酮（3 mg、12 mg、36 mg）在40周后较基线水平更能有效降低糖化血红蛋白（HbA1c）。研究参与者的HbA1c水平在≥7.0%至≤9.5%之间，且体重指数（BMI）≥23 kg/m²。所有奥福格列酮治疗组的参与者均以每日一次1 mg的剂量开始研究，然后以四周为间隔逐步增加剂量，直至达到最终随机分配的维持剂量：3 mg（每次增加1 mg）、12 mg（分别以1 mg、3 mg和6 mg递增）或36 mg（分别以1 mg、3 mg、6 mg、12 mg和24 mg递增）。不允许灵活给药。
奥福格列酮 (orforglipron) 的 ACHIEVE III 期全球临床开发项目已在全球五项注册试验中招募了超过 6,000 名 2 型糖尿病患者。该项目于 2023 年启动，预计将于今年晚些时候以及 2026 年公布结果。https://investor.lilly.com/news-releases/news-release-details/lillys-oral-glp-1-orforglipron-demonstrated-statistically

C48H48F2N10O5.1/2CA.H2O

921.02

940.35087

3008544-96-2

2212020-52-3 (free);2415797-61-2 (calcium); 3008544-96-2; 2212021-26-4 (calcium hydrate);

171390963

White to off-white solid powder

145Ų

2

11

7

67

1950

4

[Ca].FC1C(C)=CC(=CC=1C)N1C(=C2C(CCN([C@H]2C)C(C2=CC3C=C([C@H]4CCOC(C)(C)C4)C=CC=3N2[C@@]2(C3=NOC(N3)=O)C[C@@H]2C)=O)=N1)N1C=CN(C2C=CC3=C(C=NN3C)C=2F)C1=O.O

XMVXKSTUSYLMQM-BJPQXFNBSA-N

InChI=1S/C48H48F2N10O5.Ca.H2O/c1-25-18-32(19-26(2)40(25)49)60-42(58-16-15-57(46(58)63)37-11-10-36-33(41(37)50)24-51-55(36)7)39-28(4)56(14-12-34(39)53-60)43(61)38-21-31-20-29(30-13-17-64-47(5,6)23-30)8-9-35(31)59(38)48(22-27(48)3)44-52-45(62)65-54-44;;/h8-11,15-16,18-21,24,27-28,30H,12-14,17,22-23H2,1-7H3,(H,52,54,62);;1H2/t27-,28-,30-,48-;;/m0../s1

LY3502970 hemicalcium hydrate; GLP-1 receptor agonist 1 hemicalcium hydrate

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : 25 mg/mL (27.14 mM; with sonication)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。