OX1 Receptor ( Ki = 57 nM ); OX1 Receptor ( Ki = 27 nM )
OX1 receptor (orexin-1 receptor)

体外活性：将新生SD大鼠下丘脑原代神经元培养物与SB-408124 (100 µM) 和食欲素A (1 µM) 共同培养6小时。SB-408124可降低食欲素A诱导的精氨酸加压素 (AVP) mRNA水平（降低2.7倍，而食欲素A诱导的AVP mRNA水平为1.2倍）[3]。SB408124 HCl是一种强效且选择性的非肽类OX1受体拮抗剂。在全细胞测定中，其Ki值为57 nM，在膜制备物中为27 nM。SB408124对OX2受体的选择性是其50倍。它与下丘脑泌素1型受体 (HcrtR1) 结合，pKi值为7.57。 SB408124 对人源 OX1 的 Kb 值为 21.7 nM；对人源 OX2 的 Kb 值为 1405 nM，表明其具有高度选择性。SB408124 是一种非肽类拮抗剂，可调节食欲素 A 信号通路。

SB-408124 可减轻经历心理创伤事件后的焦虑。当捕食者诱发急性心理创伤时，大鼠杏仁核的促肾上腺皮质激素释放激素（CRF）水平会降低。鼻内给药后，SB-408124 对动物行为的抗焦虑作用可恢复至接近正常水平[2]。与使用 Dahl 盐敏感性麻醉并喂食生理盐水（-4 mmHg）的大鼠相比，高盐摄入（-16 mmHg）的大鼠在双侧室旁核微量注射 SB-408124（30 pmol/50 nL）后，平均动脉压（MAP）下降幅度更大[3]。促肾上腺皮质激素释放激素（CRF）不仅调节下丘脑-垂体-肾上腺轴的活动，而且还作为神经递质在下丘脑外脑区（如杏仁核）发挥作用，参与应激的情绪反应。促肾上腺皮质激素释放因子（CRF）系统为食欲素神经元提供输入信号，并能调节应激反应中食欲素能神经元的活性。一些数据表明，食欲素A在厌恶记忆的消退中发挥作用。研究表明，食欲素系统参与了与杏仁核扩展结构（如杏仁核中央核）相关的应激诱导行为。本研究旨在通过行为学测试，研究食欲素A拮抗剂SB-408124对捕食者诱导应激后大鼠的影响，以及其对杏仁核中CRF水平的影响。本研究使用了30只雄性Wistar大鼠。动物经鼻内给予选择性食欲素受体1型拮抗剂SB-408124。采用单次捕食者暴露模型构建创伤后应激障碍（PTSD）模型。将10-12只大鼠置于装有印度蟒的饲养箱中。暴露于捕食者7天后，对动物进行旷场实验和高架十字迷宫实验，以评估其行为。旷场实验用于研究动物的自由运动活性。高架十字迷宫实验用于评估应激反应。采用促肾上腺皮质激素释放因子（CRF）检测系统，通过固相酶联免疫吸附试验（ELISA）测定脑组织中CRF的浓度。在鼻内给予SB-408124的应激大鼠组中，大鼠在明亮臂的停留时间有所恢复，但未达到对照组水平；奔跑次数恢复至对照组水平；与对照组和应激组相比，梳理行为次数增加。在旷场实验中，给予生理盐水的应激大鼠组的嗅探和站立次数减少，但窥视孔洞的次数增加。在鼻内给予 20 µg SB-408124 的应激大鼠组中，与给予生理盐水的应激大鼠相比，嗅探次数增加，窥视孔次数减少。应激大鼠杏仁核匀浆中的促肾上腺皮质激素释放因子 (CRF) 水平较低（0.44±0.07 ng/mg 蛋白，对照组为 0.61±0.01 ng/mg）。在鼻内给予 SB-408124 的组中，未观察到这种降低，杏仁核中的 CRF 水平为 0.57±0.01 pg/mg 蛋白。食欲素 A 拮抗剂 SB-408124 可减轻心理创伤暴露后的焦虑。捕食者诱发的急性心理创伤暴露会降低大鼠杏仁核中的 CRF 水平。鼻内给予选择性食欲素1受体拮抗剂SB-408124可使平均动脉压（MAP）恢复至接近正常水平，并对动物行为具有抗焦虑作用。[1]此外，双侧室旁核（PVN）微量注射OX1R拮抗剂SB-408124可使高盐饮食组（HS）麻醉Dahl S大鼠的平均动脉压（MAP）降低幅度（-16 ± 5 mmHg）大于正常盐饮食组（-4 ± 4 mmHg）。这些结果表明，PVN OX1R激活增强可能通过增强AVP信号传导而导致SSHTN。[2]体内研究表明，口服SB408124可减轻食欲素A对血管加压素（VP）释放的阻断作用。该化合物对OX1受体的选择性高于OX2受体，使其成为研究食欲素受体在睡眠-觉醒调节、摄食行为和成瘾中不同作用的宝贵工具。SB408124在研究中用于区分OX1介导的信号通路和OX2介导的效应。

SB-408124是一种非肽类拮抗剂，对OX2受体的选择性是其50倍，对OX1受体的Ki值在全细胞和细胞膜上分别为57 nM和27 nM。

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[3H]SB-674042全细胞结合实验[1]
在96孔Packard培养板中过夜培养后，弃去培养基，将细胞置于含有150 mM NaCl、20 mM HEPES和0.5%牛血清白蛋白（pH 7.4）的缓冲液中，于25°C孵育60分钟。饱和实验通过将细胞与一系列浓度的[3H]SB-674042（0.2–24 nM）孵育来进行；总实验体积为250 μl。采用0.1 M NaOH裂解细胞，并使用Bradford法（Bradford，1976）以牛血清白蛋白（BSA）为标准测定蛋白质含量。结合动力学研究通过测定加入[3H]SB-674042（3 nM）后1-60分钟内其特异性结合情况进行。解离研究首先将细胞与[3H]SB-674042（3 nM）孵育60分钟，然后在加入3 μM SB-408124后2-120分钟内测定其特异性结合情况。竞争研究通过将细胞与[3H]SB-674042（3 nM）和一系列浓度的测试化合物孵育来进行。所有实验均以250 μl冰冷的磷酸盐缓冲液洗涤细胞三次终止。向每个孔中加入100 μl Microscint 40，并将培养板在室温下放置2小时。然后使用Packard Topcount计数仪测量细胞相关的放射性，计数时间为每孔2分钟。

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[3H]SB-674042 膜基 SPA 结合分析[1]
将 CHO-K1_OX1 细胞膜 (75 μg ml−1) 与小麦胚凝集素聚乙烯甲苯 (WGA-PVT) 闪烁邻近分析 (SPA) 微珠 (5 mg ml−1) 在含有 25 mM HEPES、2.5 mM MgCl2、0.5 mM EDTA 和 0.025% 杆菌肽 (pH 7.4) 的缓冲液中于 4°C 振荡预偶联 1 小时。将微珠-膜悬浮液以 300 × g 离心，并重悬于等体积的室温分析缓冲液中。将 100 μl 的微珠-膜悬浮液与 [3H]SB-674042 (5 nM) 在 96 孔 Packard Optiplate 中孵育，总反应体积为 200 μl，最终蛋白浓度为 7.5 μg/孔。非特异性结合通过在 3 μM SB-408124 存在下剩余的蛋白量来测定。将反应板振荡 10 分钟，然后在室温下孵育 4 小时，最后使用 Packard TopCount 闪烁计数器进行计数（计数时间为 2 分钟/孔）。饱和度研究通过将微珠-膜（相当于 7.5 μg 蛋白/孔和 2.5 mg 微珠/ml）与一系列浓度的 [3H]SB-674042 (0.1–20 nM) 孵育来进行。采用Bradford法（Bradford，1976）测定蛋白质含量，以牛血清白蛋白为标准。结合动力学研究通过测定加入微珠膜（相当于每孔7.5 μg蛋白质和每毫升2.5 mg微珠）后1-30分钟内[3H]SB-674042（5 nM）的特异性结合来进行。解离研究首先将微珠膜与[3H]SB-674042（5 nM）孵育30分钟。然后加入3 μM SB-408124后2-120分钟内测定特异性结合。竞争性研究通过将微珠膜（相当于每孔7.5 μg蛋白和每毫升2.5 mg微珠）与[3H]SB-674042 (5 nM) 和一系列浓度的测试化合物孵育来进行。

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使用放射性配体结合试验在全细胞和膜制备物中测定OX1受体结合亲和力，以确定Ki值。使用比较结合试验评估对OX2的选择性。Kb值通过功能性拮抗剂试验确定。

SB-408124 与下丘脑泌素 1 型受体 (HcrtR1) 结合时的 pKi 值为 7.57。根据钙动员研究，SB-408124 可作为 OX1 受体的功能性拮抗剂，其对 OX1 受体的亲和力选择性约为对 OX2 受体的 50 倍。根据最近的一项研究，当用SB-401824预处理大鼠星形胶质细胞原代培养物后再给予食欲素A时，食欲素A对基础和福斯克林激活的cAMP产生的刺激作用显著降低。

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测定培养的脑神经元中食欲素A诱导的AVP mRNA表达。[3]
将下丘脑原代神经元培养物在DMEM-HSPS培养基中与载体对照或不同浓度的食欲素A（10 nM、100 nM、1 μM或10 μM）孵育6小时。移除培养基，用冰冷的PBS洗涤细胞，收集细胞并进行RNA提取。进行实时PCR以测定AVP mRNA水平。为了检测哪种食欲素受体介导了食欲素诱导的AVP增加，我们将神经元培养物与1 μM食欲素A共培养6小时，同时加入或不加入OX1R拮抗剂SB-408124 (100 µM)或OX2Ra TCS-OX2-29 (100 µM)。采用实时定量PCR测定AVP的mRNA水平。每组实验均使用24孔板中的3个培养孔，所有cDNA样品均进行重复检测。整个实验重复2-3次。数据以GAPDH mRNA进行标准化。

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通过测量受体激活和抑制来评估表达OX1或OX2受体的细胞的细胞效力。用不同浓度的SB408124处理细胞，并测量食欲素A诱导的信号传导。评估该化合物选择性抑制OX1介导的信号传导的能力。

溶于生理盐水；30 μg/10 μL；脑室内（icv）注射至大鼠侧脑室。
雄性Wistar大鼠的PVN注射按先前所述方法进行。将动物固定于立体定位仪上，并将颅骨调整至前囟和后囟之间水平，以便进行PVN注射。移除一小部分颅骨，以便将单管玻璃微量注射器垂直插入PVN。PVN注射的立体定位坐标如下：前囟后方1.2–1.6 mm，中线外侧0.5–0.7 mm，硬脑膜下方7.0–7.4 mm。在 20 分钟的基线期后，使用气动泵（World Precision Instruments）将 30 pmol 的 SB-408124 双侧微量注射到室旁核 (PVN) 中，每侧注射体积为 50 nl。OX1R 拮抗剂 SB-408124 溶解于 DMSO 中。两次双侧注射间隔约 5 分钟。[2] 在体内，SB408124 经口服给药，用于评估其对食欲素 A 介导的血管加压素释放的影响。该化合物用于动物模型，以研究 OX1 受体在睡眠-觉醒调节、摄食行为、成瘾和其他生理过程中的作用。通过测量药效学生物标志物来确认靶点结合情况。

由于SB408124 HCl主要用作研究工具，因此其药代动力学数据有限。该化合物具有口服活性。临床前研究提供了详细的药代动力学参数，例如半衰期、清除率和生物利用度。

由于SB408124 HCl主要用于研究用途，因此其全面的毒理学数据有限。操作过程中应遵守标准的实验室安全预防措施。该化合物不适用于人类治疗用途。

[1]. Characterisation of the binding of [3H]-SB-674042, a novel nonpeptide antagonist, to the human orexin-1 receptor. Br.J.Pharmacol. 2004 Jan;141(2):340-6.

[2]. OX1R ANTAGONIST SB408124 ACTION AND EXTRAHYPOTHALAMIC CRF IN RATS AFTER PSYCHOTRAUMATIC EXPOSURE. Georgian Med News. 2019 May;(290):127-131.

[3]. Increased activity of the orexin system in the paraventricular nucleus contributes to salt-sensitive hypertension. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2017 Dec 1;313(6):H1075-H1086.

食欲素系统参与精氨酸加压素（AVP）的调节，其过度激活与高血压相关。然而，其在盐敏感性高血压（SSHTN）中的作用尚不明确。本研究旨在探讨室旁核（PVN）食欲素系统的过度激活是否通过增强AVP信号传导导致SSHTN。将8周龄雄性Dahl盐敏感性（Dahl S）大鼠和年龄、性别匹配的Sprague-Dawley（SD）大鼠分别喂以高盐（HS；8% NaCl）或正常盐（NS；0.4% NaCl）饮食，持续4周。结果显示，高盐饮食并未改变平均动脉压（MAP）或PVN中食欲素受体1（OX1R）或OX2R的mRNA水平，但轻微增加了SD大鼠PVN中AVP mRNA的表达。高盐饮食显著提高了Dahl S大鼠平均动脉压（MAP）和室旁核（PVN）中OX1R、OX2R和AVP的mRNA水平。脑室内注射食欲素A（0.2 nmol）显著提高了SD大鼠室旁核（PVN）中无血管加压素（AVP）的mRNA水平和免疫反应性。用食欲素A孵育新生SD大鼠培养的下丘脑神经元可增加AVP mRNA的表达，而OX1R阻滞剂可减弱这种增加。此外，脑室内注射氯化钠溶液（4 µmol）以提高脑脊液钠离子浓度，可提高SD大鼠PVN中OX1R和AVP的mRNA水平及其免疫反应性。此外，将OX1R拮抗剂SB-408124微量注射到双侧室旁核（PVN）后，高盐摄入组的平均动脉压（MAP）显著降低（-16 ± 5 mmHg），而正常盐摄入组的平均动脉压为-4 ± 4 mmHg。这些结果表明，PVN中OX1R激活增强可能通过增强血管紧张素（AVP）信号传导导致盐敏感性高血压（SSHTN）。新发现及意义：据我们所知，本研究首次探讨了食欲素系统在盐敏感性高血压中的作用。我们的结果表明，食欲素系统可能通过增强下丘脑室旁核中的血管加压素信号传导参与Dahl盐敏感性高血压模型。 [3]

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1. 本研究表征了一种新型非肽类拮抗剂放射性配体[(3)H]SB-674042（1-(5-(2-氟苯基)-2-甲基噻唑基-4-基)-1-((S)-2-(5-苯基-(1,3,4)恶二唑-2-基甲基)-吡咯烷-1-基)-甲基酮）与稳定表达于中国仓鼠卵巢 (CHO) 细胞中的人食欲素-1 (OX(1)) 受体的结合。采用了两种方法：全细胞测定和基于细胞膜的闪烁邻近测定 (SPA)。2. 在全细胞测定和细胞膜测定中，[(3)H]SB-674042 的特异性结合均达到饱和。分析揭示了一个高亲和力结合位点的存在，在全细胞和膜结合状态下，K_d值分别为3.76±0.45 nM和5.03±0.31 nM，相应的B_max值分别为30.8±1.8 pmol/mg蛋白和34.4±2.0 pmol/mg蛋白。动力学研究也得到了类似的K_d值。3. 全细胞竞争实验表明，天然食欲素肽对OX₁受体的亲和力较低，其中食欲素A的亲和力约为食欲素B的五倍（K_i值分别为318±158 nM和1516±597 nM）。 4. SB-334867、SB-408124（1-(6,8-二氟-2-甲基-喹啉-4-基)-3-(4-二甲氨基苯基)-脲）和SB-410220（1-(5,8-二氟-喹啉-4-基)-3-(4-二甲氨基苯基)-脲）均对全细胞（K(i) 值分别为 99±18、57±8.3 和 19±4.5 nm）和膜（K(i) 值分别为 38±3.6、27±4.1 和 4.5±0.2 nm）中的 OX(1) 受体表现出高亲和力。 5. 钙动员研究表明，SB-334867、SB-408124 和 SB-410220 均为 OX(1) 受体的功能性拮抗剂，其效力与其亲和力（通过放射性配体结合试验测定）一致，且对食欲素-2 受体的选择性约为 50 倍。6. 这些研究表明，[(3)H]SB-674042 是一种特异性高亲和力的 OX(1) 受体放射性配体。该放射性配体的可用性将成为研究 OX(1) 受体生理功能的宝贵工具。[1]

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SB408124 HCl 是一种用于研究食欲素信号传导中 OX1 受体功能的研究工具。它是一种强效、选择性的非肽类 OX1 受体拮抗剂，对 OX2 的选择性约为 50 倍。该化合物的Ki值分别为57 nM（全细胞）和27 nM（膜）。SB408124用于研究食欲素受体在睡眠-觉醒调节、摄食行为、成瘾和其他生理过程中的作用。

C19H19CLF2N4O

392.83

392.121

1431697-90-3

SB-408124; 288150-92-5

71576692

White to gray solid powder

57.3

3

5

3

27

484

0

DIHXPSGMLOETTI-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C19H18F2N4O.ClH/c1-11-8-17(15-9-12(20)10-16(21)18(15)22-11)24-19(26)23-13-4-6-14(7-5-13)25(2)3;/h4-10H,1-3H3,(H2,22,23,24,26);1H

1-(6,8-difluoro-2-methylquinolin-4-yl)-3-[4-(dimethylamino)phenyl]urea;hydrochloride

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。