OX1 Receptor ( Ki = 57 nM ); OX1 Receptor ( Ki = 27 nM )

体外活性：SB-408124结合 1 型下丘脑分泌素受体 (HcrtR1)，pKi 值为 7.57。钙动员研究表明，SB-408124 是 OX1 受体的功能性拮抗剂，其亲和力选择性约为 OX2 受体的 50 倍。最近的一项研究表明，在 Orexin A 给药前用 SB-401824 对原代培养的大鼠星形胶质细胞进行预处理，可显着降低 Orexin A 对基础和毛喉素激活的 cAMP 产生的刺激作用。激酶测定：SB408124 是 OX1 受体的非肽拮抗剂，全细胞和膜中的 Ki 值分别为 57 nM 和 27 nM；其选择性比 OX2 受体高 50 倍。细胞测定：SB-408124 结合 1 型下丘脑分泌素受体 (HcrtR1)，pKi 值为 7.57。钙动员研究表明，SB-408124 是 OX1 受体的功能性拮抗剂，其亲和力选择性约为 OX2 受体的 50 倍。最近的一项研究表明，在 Orexin A 给药前用 SB-401824 对原代培养的大鼠星形胶质细胞进行预处理，可显着降低 Orexin A 对基础和毛喉素激活的 cAMP 产生的刺激作用。

SB-408124（30 μg/10 μL，脑室内给药）可减少 Wistar 大鼠中 Orexin-A 诱导的水摄入量。脑室内注射 Orexin-A (30 μg/10 μL) 可阻断组胺或 2.5% NaCl 诱导的加压素 (VP) 水平升高，并且这种阻断作用可通过 SB-408124 预处理来调节。用 SB-408124（50 mM，5 μL/h）脑室内预处理可防止荷包牡丹碱 (BIC) 诱导的内源性葡萄糖生成 (EGP) 增加。

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皮质自由素（CRF）不仅调节下丘脑-垂体-肾上腺轴的活动，而且作为一种神经递质在下丘脑外的大脑区域如杏仁核中起作用，涉及对压力的情绪反应。CRF系统向促食素神经元提供输入，并能调节促食能神经元在应激反应中的活动。一些数据显示食欲素a在消除厌恶记忆中的作用。食欲素系统被证明参与了与扩展的杏仁核结构有关的压力诱导行为，如杏仁核的中央核。目的是通过行为学试验研究食欲素- a拮抗剂SB-408124对捕食者应激大鼠的影响及其对杏仁核CRF水平的影响。本研究选用30只雄性Wistar大鼠。动物接受了一种选择性Orexin受体1型SB-408124鼻内拮抗剂。创伤后应激障碍是通过单一捕食者暴露来模拟的。一组10-12只老鼠和一条印度蟒蛇一起放在一个饲养箱里。暴露于捕食者7天后，采用开阔场地和高架交叉迷宫测试动物行为。采用“空地”试验研究了动物的自由运动活动。为了评估压力，我们使用了“高架交叉迷宫”测试。采用促肾上腺皮质激素释放因子（CRF）检测系统，采用固相ELISA法测定脑组织中CRF的浓度。鼻内注射SB-408124应激组，轻臂停留时间虽有所恢复，但未达到控制值，跑动次数恢复到对照水平，梳理动作次数较对照组和应激组均有所增加。生理盐水应激组的“空旷区”，嗅探和饲养次数减少，但窥视孔的次数增加。鼻内注射SB-408124 20µg应激组与生理盐水组相比，嗅探次数增加，窥孔次数减少。应激大鼠杏仁核匀浆中CRF水平较低（0.44±0.07 ng/mg蛋白，对照组为0.61±0.01 ng/mg蛋白）。鼻内给药SB-408124组无明显下降，杏仁核CRF水平为0.57±0.01 pg/mg蛋白。食欲素A拮抗剂SB-408124可减少精神创伤暴露后的焦虑。捕食者诱导的急性精神创伤暴露降低大鼠杏仁核的CRF水平。鼻内给予选择性食欲素1受体拮抗剂SB-408124使其恢复正常，并对动物行为具有抗焦虑作用[1]

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。 此外，双侧PVN显微注射OX1R拮抗剂SB-408124导致HS摄入时MAP更大的降低（-16±5 mmHg） c

SB-408124是一种非肽拮抗剂，其选择性比 OX2 受体高 50 倍，对 OX1 受体的全细胞和膜 Ki 值分别为 57 nM 和 27 nM。

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[3H] b -674042全细胞结合试验[1]
在96孔Packard培养板中培养过夜后，丢弃培养基，细胞在含有150 mM NaCl、20 mM HEPES和0.5%牛血清白蛋白（pH 7.4）的缓冲液中25°C孵育60分钟。用[3H]SB-674042 （0.2-24 nM）培养细胞进行饱和度研究；总检测体积为250 μl。以0.1 M NaOH溶解细胞，以牛血清白蛋白（BSA）为标准，采用Bradford法（Bradford, 1976）测定蛋白质含量[1]。
加入[3H]SB-674042后1-60 min，测定[3H]SB-674042 （3 nM）的特异性结合，进行关联动力学研究。为了进行解离研究，细胞首先与[3H]SB-674042 （3 nM）孵育60 min，然后在加入3 μM SB-408124后，在2-120 min时测量特异性结合。通过用[3H]SB-674042 （3 nM）和一定浓度的测试化合物孵育细胞进行竞争研究。用250 μl冷水磷酸盐缓冲盐水冲洗细胞3次，终止所有实验。每孔加入体积为100 μl的Microscint 40，在室温下放置2小时。然后使用Packard Topcount测量细胞相关放射性，计数时间为2 min，孔−1。

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[3H]SB-674042 membrane-based SPA binding assays/SB-674042膜基SPA结合试验[1]
CHO-K1_OX1细胞膜（75 μg ml−1）在含有25 mM HEPES、2.5 mM MgCl2、0.5 mM EDTA和0.025%杆菌肽（pH 7.4）的缓冲液中，用wheatgerm-凝集素聚乙烯（WGA-PVT）闪烁接近实验（SPA）珠（5 mg ml−1）在4℃下振荡预偶联1小时。珠膜悬浮液在300 × g离心，在相同体积的室温实验缓冲液中重悬。取体积为100 μl的珠膜悬浮液与[3H]SB-674042 （5 nM）在96孔Packard Optiplate中以200 μl的总检测体积孵育，最终蛋白浓度为7.5 μg孔−1。以3 μM SB-408124为非特异性结合。实验板摇摇10分钟，室温孵育4小时，然后在Packard TopCount闪烁计数器上计数（计数时间2分钟，孔- 1）[1]。
通过在浓度范围为[3H]SB-674042 （0.1-20 nM）的条件下培养珠膜（相当于7.5 μg蛋白well - 1和2.5 mg珠ml - 1）进行饱和度研究。用Bradford方法（Bradford, 1976）测定蛋白质含量，以牛血清白蛋白为标准。在加入珠膜（相当于7.5 μg蛋白well - 1和2.5 mg珠ml - 1）后1 - 30分钟，通过测量[3H]SB-674042 （5 nM）的特异性结合进行了关联动力学研究。为了进行解离研究，头膜首先与[3H]SB-674042 （5 nM）孵育30分钟。然后在加入3 μM SB-408124后，在2-120分钟测量特异性结合。通过用[3H]SB-674042 （5 nM）和一定浓度的测试化合物孵育珠膜（相当于7.5 μg蛋白孔- 1和2.5 mg珠ml - 1）来进行竞争研究。

SB-408124 与下丘脑分泌素 1 型受体 (HcrtR1) 结合的 pKi 为 7.57。根据钙动员研究，SB-408124作为 OX1 受体的功能性拮抗剂，其亲和力比 OX2 受体的选择性高大约 50 倍。根据最近的一项研究，在给予 Orexin A 之前用 SB-401824 预处理大鼠星形胶质细胞的原代培养物时，Orexin A 对基础和毛喉素激活的 cAMP 产生的刺激作用显着降低。

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orexin A/食欲素a诱导的脑神经元AVP mRNA表达的测定。[3]
下丘脑原代神经元培养物与载体对照或不同浓度的食欲素A （10 nM、100 nM、1 μM或10 μM）在dmme - hsps中孵育6小时。去除培养基，用冷PBS洗涤细胞，收集细胞，并进行RNA分离。Real-time PCR检测AVP mRNA水平。为了检测食欲素受体介导食欲素诱导的AVP升高，我们将1 μM orexin A与OX1R拮抗剂SB-408124（100µM）或OX2Ra TCS-OX2-29（100µM）共孵育6小时。通过实时定量PCR检测AVP mRNA水平。每组实验在24孔板上用3个培养孔进行，所有cDNA样品重复检测。整个实验重复了两到三次。数据归一化为GAPDH mRNA。

PVN injections were performed as previously described. Animals were placed in a stereotaxic head frame, and the skull was leveled between the bregma and lambda for PVN injections. A small piece of the skull was removed so that a single-barreled glass microinjector pipette could be lowered vertically into the PVN. The stereotaxic coordinates for PVN injections were as follows: 1.2–1.6 mm caudal to the bregma, 0.5–0.7 mm lateral to the midline, and 7.0–7.4 mm ventral to the dura. After a 20-min baseline period, SB-408124 (30 pmol) was microinjected into the PVN bilaterally in a volume of 50 nl/side with a pneumatic pump (World Precision Instruments). The OX1R antagonist SB-408124 was dissolved in DMSO. The interval between two bilateral injections was ∼5 min.[2]

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Dissolved in saline; 30 μg/10 μL; Intracerebroventricularly (i.c.v.) injected into the lateral ventricle of the rat.

Male Wistar rats

[1]. Characterisation of the binding of [3H]-SB-674042, a novel nonpeptide antagonist, to the human orexin-1 receptor. Br.J.Pharmacol. 2004 Jan;141(2):340-6.

[2]. OX1R ANTAGONIST SB408124 ACTION AND EXTRAHYPOTHALAMIC CRF IN RATS AFTER PSYCHOTRAUMATIC EXPOSURE. Georgian Med News. 2019 May;(290):127-131.

[3]. Increased activity of the orexin system in the paraventricular nucleus contributes to salt-sensitive hypertension. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2017 Dec 1;313(6):H1075-H1086.

The orexin system is involved in arginine vasopressin (AVP) regulation, and its overactivation has been implicated in hypertension. However, its role in salt-sensitive hypertension (SSHTN) is unknown. Here, we tested the hypothesis that hyperactivity of the orexin system in the paraventricular nucleus (PVN) contributes to SSHTN via enhancing AVP signaling. Eight-week-old male Dahl salt-sensitive (Dahl S) and age- and sex-matched Sprague-Dawley (SD) rats were placed on a high-salt (HS; 8% NaCl) or normal-salt (NS; 0.4% NaCl) diet for 4 wk. HS intake did not alter mean arterial pressure (MAP), PVN mRNA levels of orexin receptor 1 (OX1R), or OX2R but slightly increased PVN AVP mRNA expression in SD rats. HS diet induced significant increases in MAP and PVN mRNA levels of OX1R, OX2R, and AVP in Dahl S rats. Intracerebroventricular infusion of orexin A (0.2 nmol) dramatically increased AVP mRNA levels and immunoreactivity in the PVN of SD rats. Incubation of cultured hypothalamus neurons from newborn SD rats with orexin A increased AVP mRNA expression, which was attenuated by OX1R blockade. In addition, increased cerebrospinal fluid Na+ concentration through intracerebroventricular infusion of NaCl solution (4 µmol) increased PVN OX1R and AVP mRNA levels and immunoreactivity in SD rats. Furthermore, bilateral PVN microinjection of the OX1R antagonist SB-408124 resulted in a greater reduction in MAP in HS intake (-16 ± 5 mmHg) compared with NS-fed (-4 ± 4 mmHg) anesthetized Dahl S rats. These results suggest that elevated PVN OX1R activation may contribute to SSHTN by enhancing AVP signaling.NEW & NOTEWORTHY To our best knowledge, this study is the first to investigate the involvement of the orexin system in salt-sensitive hypertension. Our results suggest that the orexin system may contribute to the Dahl model of salt-sensitive hypertension by enhancing vasopressin signaling in the hypothalamic paraventricular nucleus.[3]

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1. This study characterises the binding of a novel nonpeptide antagonist radioligand, [(3)H]SB-674042 (1-(5-(2-fluoro-phenyl)-2-methyl-thiazol-4-yl)-1-((S)-2-(5-phenyl-(1,3,4)oxadiazol-2-ylmethyl)-pyrrolidin-1-yl)-methanone), to the human orexin-1 (OX(1)) receptor stably expressed in Chinese hamster ovary (CHO) cells in both a whole cell assay and in a cell membrane-based scintillation proximity assay (SPA) format. 2. Specific binding of [(3)H]SB-674042 was saturable in both whole cell and membrane formats. Analyses suggested a single high-affinity site, with K(d) values of 3.76+/-0.45 and 5.03+/-0.31 nm, and corresponding B(max) values of 30.8+/-1.8 and 34.4+/-2.0 pmol mg protein(-1), in whole cell and membrane formats, respectively. Kinetic studies yielded similar K(d) values. 3. Competition studies in whole cells revealed that the native orexin peptides display a low affinity for the OX(1) receptor, with orexin-A displaying a approximately five-fold higher affinity than orexin-B (K(i) values of 318+/-158 and 1516+/-597 nm, respectively). 4. SB-334867, SB-408124 (1-(6,8-difluoro-2-methyl-quinolin-4-yl)-3-(4-dimethylamino-phenyl)-urea) and SB-410220 (1-(5,8-difluoro-quinolin-4-yl)-3-(4-dimethylamino-phenyl)-urea) all displayed high affinity for the OX(1) receptor in both whole cell (K(i) values 99+/-18, 57+/-8.3 and 19+/-4.5 nm, respectively) and membrane (K(i) values 38+/-3.6, 27+/-4.1 and 4.5+/-0.2 nm, respectively) formats. 5. Calcium mobilisation studies showed that SB-334867, SB-408124 and SB-410220 are all functional antagonists of the OX(1) receptor, with potencies in line with their affinities, as measured in the radioligand binding assays, and with approximately 50-fold selectivity over the orexin-2 receptor. 6. These studies indicate that [(3)H]SB-674042 is a specific, high-affinity radioligand for the OX(1) receptor. The availability of this radioligand will be a valuable tool with which to investigate the physiological functions of OX(1) receptors.[1]

C19H19CLF2N4O

392.83

392.121

1431697-90-3

SB-408124; 288150-92-5

71576692

White to gray solid powder

57.3

3

5

3

27

484

0

DIHXPSGMLOETTI-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C19H18F2N4O.ClH/c1-11-8-17(15-9-12(20)10-16(21)18(15)22-11)24-19(26)23-13-4-6-14(7-5-13)25(2)3;/h4-10H,1-3H3,(H2,22,23,24,26);1H

1-(6,8-difluoro-2-methylquinolin-4-yl)-3-[4-(dimethylamino)phenyl]urea;hydrochloride

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。