In INS-1 cells, SRI-37330 (1 μM, 24 hours) suppresses the activity of the human TXNIP promoter [1]. In INS-1 cells, TXNIP's mRNA and protein levels are inhibited by SRI-37330 (1 μM, 24 hours) [1]. The binding of polymerase II (Pol II) to the TXNIP promoter's E-box motif region is inhibited by SRI-37330 (5 μM, 24 hours) [1]. In TC1-6 cells, SRI-37330 (5 μM, 24 hours) decreases glucagon secretion [1]. In primary hepatocytes, glucagon-induced glucose production is inhibited by SRI-37330 (0-5 μM, 24 hours) [1].

在 INS-1 细胞中，SRI-37330（1 μM，24 小时）抑制人 TXNIP 启动子的活性 [1]。在 INS-1 细胞中，TXNIP 的 mRNA 和蛋白质水平被 SRI-37330（1 μM，24 小时）抑制 [1]。 SRI-37330（5 μM，24 小时）可抑制聚合酶 II (Pol II) 与 TXNIP 启动子的 E-box 基序区域的结合 [1]。在 TC1-6 细胞中，SRI-37330（5 μM，24 小时）可减少胰高血糖素分泌 [1]。在原代肝细胞中，胰高血糖素诱导的葡萄糖生成被 SRI-37330（0-5 μM，24 小时）抑制 [1]。

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SRI-37330 在荧光素酶报告基因实验中，能抑制 INS-1 细胞中的人 TXNIP 启动子活性约 70%。
在 7 点剂量反应 qRT-PCR 实验中，SRI-37330 抑制 INS-1 细胞内源性 TXNIP mRNA 表达，IC50 为 0.64 µM，且未观察到细胞毒性。
SRI-37330 以剂量依赖的方式抑制 INS-1 细胞中的 TXNIP 蛋白水平。
在高葡萄糖 (25 mM) 条件下，SRI-37330 能显著抑制大鼠 INS-1 细胞、原代小鼠胰岛和分离的人胰岛中的 TXNIP 表达。
对经 SRI-37330 处理的人胰岛进行 RNA 测序，结果显示参与 TXNIP 调控和信号通路的基因表达发生改变，包括 TXNIP 和 MLXIPL 的下调，以及 IGF-1R、MAFA、BCL2L1 和 CTGF 的上调。
SRI-37330 不影响其他抑制蛋白基因 (ARRB1, ARRDC3) 或硫氧还蛋白的表达，表明其作用具有特异性。
SRI-37330 抑制小鼠 alpha TC1-6 细胞的胰高血糖素分泌，但不影响胰高血糖素原基因表达或胰高血糖素含量。TXNIP 敲低可模拟此抑制作用，而过表达 TXNIP 则可逆转此作用。
在低葡萄糖条件下，或当胰高血糖素分泌被精氨酸和去甲肾上腺素最大程度刺激时，SRI-37330 不抑制胰高血糖素分泌。
在原代小鼠肝细胞中，无胰高血糖素存在时，SRI-37330 不影响基础或乳酸刺激的葡萄糖输出。然而，在有胰高血糖素存在时，它能剂量依赖性地降低葡萄糖输出，并抑制胰高血糖素诱导的 cAMP 产生以及糖异生基因 (Pck1, G6pc) 的表达。
SRI-37330 对肝细胞葡萄糖输出和 cAMP 产生的抑制作用在肝特异性胰高血糖素受体敲除小鼠的肝细胞中消失，但在 TXNIP 缺陷小鼠的肝细胞中依然存在，表明其肝脏效应依赖胰高血糖素受体但不依赖 TXNIP。
染色质免疫沉淀实验表明，SRI-37330 抑制 RNA 聚合酶 II 与 TXNIP 启动子 E-box 基序区域的结合。突变该 E-box 基序会消除 SRI-37330 对启动子活性的抑制作用，且该基序可赋予异源启动子对 SRI-37330 的响应性。
[1]

当以 100 mg/kg 的剂量在饮用水中口服三周时，SRI-37330 会抑制肝葡萄糖的产生并减少胰高血糖素的分泌 [1]。雄性 C57BL/6J 小鼠服用 SRI-37330（100 mg/kg，口服，饮用水中）三周后反应良好 [1]。小鼠接受 SRI-37330（100 mg/kg，口服，饮用水中）治疗三周后，肝脏脂肪变性、STZ 引起的高血糖和肥胖症得到改善 [1]。

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给雄性 C57BL/6J 小鼠口服 SRI-37330（100 mg/kg/天，溶于饮水）持续 3 周，耐受性良好，未引起体重变化，处死后未观察到明显的器官异常。
SRI-37330 处理在 3 天内显著降低 C57BL/6J 小鼠的非空腹和空腹血糖水平，此效应持续 3 周。它还能改善腹腔葡萄糖耐量测试 (GTT) 的结果，但不改变胰岛素耐量测试 (ITTs) 的结果。
SRI-37330 处理的 C57BL/6J 小鼠空腹血清胰高血糖素水平显著降低，而空腹血清胰岛素水平不变。
对 C57BL/6J 小鼠进行高胰岛素-正葡萄糖钳夹实验发现，SRI-37330 显著下调基础肝葡萄糖产生，但不影响胰岛素敏感性、胰岛素刺激的骨骼肌或白色脂肪组织葡萄糖摄取、葡萄糖输注率或肝脏胰岛素作用。
与对照组相比，SRI-37330 处理的 C57BL/6J 小鼠肝脏中糖异生酶 (Pck1, G6pc) 的表达较低，肝糖原含量较高。肝脏和血清甘油三酯水平较低，且未观察到肝转氨酶升高。
在肥胖的糖尿病 db/db 小鼠中，口服 SRI-37330（100 mg/kg/天，持续 4 周）不影响体重，但显著降低非空腹和空腹血糖水平，使其恢复正常血糖水平。空腹血清胰高血糖素降低，而空腹血清胰岛素不变。
对 db/db 小鼠的高胰岛素-正葡萄糖钳夹实验证实，SRI-37330 处理可显著降低基础肝葡萄糖产生，而胰岛素刺激的肌肉和脂肪组织葡萄糖摄取仍然很低且无变化。
SRI-37330 处理未引起 db/db 小鼠 alpha 细胞增生；相反，它导致 alpha 细胞质量和数量小幅但显著下降，而 beta 细胞质量和数量保持不变。
SRI-37330 显著改善了 db/db 小鼠中观察到的严重肝脂肪变性。
在链脲佐菌素 (STZ) 诱导的糖尿病 C57BL/6J 小鼠中，口服 SRI-37330（在 STZ 方案后开始）能维持比未处理小鼠显著更低的血糖水平。在此模型中，此效果优于二甲双胍和恩格列净。
与未处理的对照组相比，SRI-37330 处理的 STZ 糖尿病小鼠尿糖更低（与恩格列净不同）、血清甘油三酯更低、体重更高、血清胰岛素更高，且空腹血清胰高血糖素水平显著降低 (3.6 倍)。
即使在 STZ 诱导的明显糖尿病发作两周后才开始治疗，SRI-37330 也能有效改善血糖稳态。
每天两次口服灌胃给予 SRI-37330 也证明了对肥胖和 STZ 诱导的糖尿病有效，显示出剂量依赖的降糖效果。
在 TXNIP 缺陷小鼠中，SRI-37330 处理不再改善血糖稳态或降低血清胰高血糖素水平，这强调了抑制 TXNIP 在其作用机制中的作用。
即使在胰岛素诱导的低血糖期间，SRI-37330 处理的小鼠也能维持与未处理小鼠无差异的血糖水平，表明其低血糖风险较低。

RT-PCR[1]
细胞类型： INS-1 细胞
测试浓度： 1 μM
孵育时间： > 24 小时
实验结果： 抑制内源 TXNIP mRNA 表达，IC50 为 0.64 μM。

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对于 TXNIP 启动子活性实验，使用稳定转染了人 TXNIP 启动子荧光素酶报告质粒的 INS-1 大鼠 beta 样细胞。细胞在 5 mM 葡萄糖培养基中过夜培养，然后在含有或不含测试化合物的 25 mM 葡萄糖培养基中培养 24 小时。测量荧光素酶活性以识别抑制剂。
对于 TXNIP mRNA 表达实验，用化合物处理培养在 96 孔板中的 INS-1 细胞。提取 RNA，并使用特异性引物进行一步法 qRT-PCR。使用 18S 核糖体亚基作为内参校正基因表达。
为了评估对人胰岛基因表达的影响，将分离的人胰岛在 5 mM 葡萄糖中过夜培养，然后在含有或不含 SRI-37330 的 25 mM 葡萄糖中培养 24 小时，之后进行 RNA 提取和 RNA 测序分析。
对于 alpha 细胞研究，将小鼠 alpha TC1-6 细胞与 SRI-37330 或载体一起孵育。24 小时后通过 qRT-PCR 评估胰高血糖素原 mRNA。孵育 1 小时后，使用胰高血糖素 ELISA 试剂盒测量胰高血糖素含量和分泌，并用总蛋白标准化。
对于 alpha 细胞中 TXNIP 的调控，使用转染试剂将细胞转染 TXNIP 特异性 siRNA 或乱序 siRNA，或转染 TXNIP 表达质粒或对照质粒。转染后评估胰高血糖素分泌。
对于肝细胞研究，分离原代小鼠肝细胞并培养在胶原包被的板中。贴壁后，细胞与不同浓度的 SRI-37330 孵育 24 小时。在孵育的最后 6 小时内，在无底物或含乳酸的培养基中，有或无胰高血糖素存在下，评估葡萄糖输出。测量培养基中的葡萄糖浓度并用总蛋白标准化。
对于肝细胞 cAMP 产生实验，处理后的细胞经洗涤后收集。使用直接免疫测定试剂盒测量细胞内 cAMP 水平。
对于染色质免疫沉淀 (ChIP)，用甲醛交联 INS-1 细胞。超声破碎染色质，并用抗 RNA 聚合酶 II 抗体或对照 IgG 进行免疫沉淀。纯化沉淀的 DNA，并使用针对 TXNIP 启动子 E-box 区域和对照区域的特异性引物通过实时定量 PCR 进行定量。

Animal/Disease Models: C57BL/6J mice[1]
Doses: 100 mg/kg
Route of Administration: Orally (po), dissolved in drinking water, for 3 weeks.
Experimental Results: diminished serum glucagon levels, inhibited hepatic glucose production and improved glucose homeostasis in mice.

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For studies in lean C57BL/6J mice and STZ-induced diabetic C57BL/6J mice, SRI-37330 was administered orally in the drinking water at a dose of 100 mg/kg/day. Control mice received untreated water. The dose was chosen based on previous studies with verapamil in similar models. Blood glucose was monitored using a glucometer.
For studies in obese, diabetic db/db mice, SRI-37330 was similarly administered in drinking water at 100 mg/kg/day for 4 weeks.
For comparative drug studies in STZ-diabetic mice, metformin (250 mg/kg/day) and empagliflozin (10 mg/kg/day) were also administered in the drinking water.
For oral gavage experiments, mice were dosed with SRI-37330 twice a day, 12 hours apart.
For STZ-induced diabetes, C57BL/6J mice received multiple low-dose streptozotocin injections (40 mg/kg/day for 5 days, freshly prepared in sodium citrate buffer, pH 4.5).
For glucose tolerance tests (GTTs), mice were fasted for 4 hours and then injected intraperitoneally with glucose (3 g/kg). For insulin tolerance tests (ITTs), fasted mice were injected intraperitoneally with insulin (1 U/kg).
For hyperinsulinemic-euglycemic clamp studies, lean C57BL/6J or db/db mice treated with SRI-37330 underwent survival surgery to implant a jugular vein catheter. After an overnight fast, a 2-hour clamp was conducted in awake mice with a primed and continuous infusion of human insulin. Euglycemia was maintained by variable rate glucose infusion. Whole-body glucose turnover was assessed with a continuous infusion of [3-³H]glucose, and tissue-specific glucose uptake was measured using a bolus of 2-deoxy-D-[1-¹⁴C]glucose administered during the clamp. At the end, mice were anesthetized and tissues collected for analysis.
For assessment of islet cell morphometry, pancreata from treated and untreated mice were sectioned and immunofluorescently stained for insulin and glucagon. Images were analyzed to quantify alpha and beta cell area, mass, and number.
For liver histology and glycogen assessment, liver tissues were collected, sectioned, and stained (e.g., for steatosis) or homogenized for biochemical glycogen measurement.

SRI-37330 is described as orally bioavailable.
In mice receiving SRI-37330 at 100 mg/kg/day in drinking water, the average plasma concentration achieved was 5 µmol/L.
No further detailed pharmacokinetic parameters (e.g., half-life, AUC, oral bioavailability percentage) are provided in the manuscript.

SRI-37330 showed no cytotoxicity in vitro in a cellular cytotoxicity assay (CC50/72h > 5 µM).
In vivo, oral administration of SRI-37330 at 100 mg/kg/day for 3 weeks to C57BL/6J mice was well tolerated, caused no change in body weight, and no gross abnormalities in any organs were observed at sacrifice.
SRI-37330 treatment did not cause any elevation in liver transaminase levels in mice.
No issues with hypoglycemia were observed under any circumstances, including during insulin-induced hypoglycemia challenges.
The manuscript states that SRI-37330 has a favorable safety profile and lack of off-target liabilities in the available screening panel.

[1]. Identification of an Anti-diabetic, Orally Available Small Molecule that Regulates TXNIP Expression and Glucagon Action. Cell Metab. 2020 Sep 1;32(3):353-365.e8.

SRI-37330 is a substituted quinazoline sulfonamide small molecule identified through high-throughput screening of 300,000 compounds and extensive medicinal chemistry optimization.
It represents a novel approach to diabetes treatment by targeting TXNIP expression and glucagon action, addressing underlying processes of the disease characterized by hyperglycemia, beta-cell loss, and persistent glucagon secretion.
Its mechanism involves TXNIP-dependent inhibition of alpha cell glucagon secretion and glucagon receptor-dependent (but TXNIP-independent) inhibition of hepatic glucagon sensitivity and action.
Compared to existing oral anti-diabetic drugs like metformin and SGLT2 inhibitors (e.g., empagliflozin), SRI-37330 showed superior or comparable glucose-lowering effects in mouse models without increasing urinary glucose excretion.
SRI-37330 improved hepatic steatosis in diabetic mice, suggesting potential therapeutic benefit for non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), a common diabetes comorbidity.
Unlike verapamil (a known TXNIP-lowering L-type calcium channel blocker), SRI-37330 is not a calcium channel blocker, potentially avoiding limitations like hypotension.
The studies suggest SRI-37330 may be a promising candidate for treating both type 1 and type 2 diabetes, potentially as an oral therapy.
A patent is related to this work: WO 2019/089693 A1.
Limitations of the study include that the precise molecular target of SRI-37330 (especially for its TXNIP-independent hepatic effects) remains unidentified, and the drug has not been tested in high-fat-fed mice or spontaneous autoimmune type 1 diabetes models.

C16H19F3N4O2S

388.41

388.12

C, 49.48; H, 4.93; F, 14.67; N, 14.42; O, 8.24; S, 8.25

2322245-42-9

SRI-37330 hydrochloride;2322245-49-6

142582737

White to off-white solid powder

2.7

83.6

1

9

4

26

581

0

WRSNFEVXRKOMLL-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C16H19F3N4O2S/c1-26(24,25)22-8-11-3-2-6-23(9-11)15-13-7-12(16(17,18)19)4-5-14(13)20-10-21-15/h4-5,7,10-11,22H,2-3,6,8-9H2,1H3

N-[[1-[6-(trifluoromethyl)quinazolin-4-yl]piperidin-3-yl]methyl]methanesulfonamide

SRI-37330 free base; SRI37330 free base, SRI 37330 free base

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~100 mg/mL (~257.46 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。