| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 5mg |
|
||
| 10mg |
|
||
| 25mg |
|
||
| 50mg |
|
||
| 100mg |
|
||
| 250mg |
|
||
| 500mg |
|
||
| Other Sizes |
|
盐酸他马替尼 (R406) 是一种口服小分子脾酪氨酸激酶 (Syk) 抑制剂。它是通过基于人肥大细胞的细胞构效关系筛选发现的。盐酸他马替尼 通过以 ATP 竞争性方式阻断 Syk 激酶活性，从而有效抑制 IgE 和 IgG 介导的 Fc 受体信号通路激活。它在免疫复合物介导的炎症动物模型（阿瑟斯反应、胶原抗体诱导的关节炎、K/BxN 血清转移性关节炎）中显示出抗炎功效，并且在首次人体研究中显示出口服生物利用度和对嗜碱性粒细胞活化的抑制作用[1]。
| 靶点 |
Syk (Ki = 30 nM); Syk (IC50 = 41 nM); Lyn (IC50 = 63 nM); Lck (IC50 = 37 nM); FLT3
Tamatinib HCl targets spleen tyrosine kinase (Syk). IC50 in biochemical kinase assay = 41 nM (at ATP concentration corresponding to its Km). Ki for ATP competition = 30 nM [1]. Also inhibits Flt3 (≈5‑fold less potent than Syk in cells), Jak, Lck, and adenosine A3 receptor (IC50 = 0.081 μM), adenosine transporter (IC50 = 1.84 μM), monoamine transporter (IC50 = 2.74 μM) [1]. |
||
|---|---|---|---|
| 体外研究 (In Vitro) |
R406 是一种 ATP 竞争性 Syk 抑制剂，Ki 值为 30 nM。R406 选择性抑制 Syk 依赖性信号通路，EC50 值范围为 33 nM 至 171 nM，在不同细胞中对 Syk 非依赖性通路的抑制作用均强于其他通路。R406 可抑制多种弥漫性大 B 细胞淋巴瘤 (DLBCL) 细胞系的增殖，EC50 值范围为 0.8 μM 至 8.1 μM。R406 处理（1 μM 或 4 μM）可诱导 caspase 9 和 caspase 3 的激活，但不诱导 caspase 8 的激活，从而导致大多数 DLBCL 细胞系发生显著凋亡。在 B 细胞受体 (BCR) 交联后，R406 预处理完全阻断了 R406 敏感的 DLBCL 中 SYK525/526 的磷酸化和 SYK 依赖的 BLNK 磷酸化。 R406 处理 24 小时和 48 小时后，MMP-9 mRNA 水平分别比对照组降低 2.8 倍和 4.3 倍，并降低 RL 细胞的侵袭能力。
激酶活性测定：将 R406 在 DMSO 中进行系列稀释，然后在激酶缓冲液（20 mM HEPES）中稀释至 1% DMSO， pH 7.4，5 mM MgCl₂，2 mM MnCl₂，1 mM DTT，0.1 mg/mL 乙酰化 BGG）。在室温下加入激酶缓冲液中的 ATP 和底物，使 DMSO 的最终浓度为 0.2%。激酶反应体系为 20 μL，包含 5 μM HS1 肽底物和 4 μM ATP，并加入 0.125 ng Syk 激酶缓冲液启动反应。反应在室温下进行 40 分钟。加入 20 μL PTK 淬灭混合物终止反应，该混合物包含 EDTA/抗磷酸酪氨酸抗体（终浓度 1X）/荧光磷酸肽示踪剂（终浓度 0.5X），并用 FP 稀释缓冲液稀释。将反应板在室温下避光孵育 30 分钟，然后在 Polarion 荧光偏振酶标仪上读取结果。利用酪氨酸激酶检测试剂盒中提供的磷酸肽竞争剂，通过竞争法生成的校准曲线，将数据转换为磷酸肽的含量。为测定IC50值，R406在11个浓度下进行重复测试，并使用Prism GraphPad软件进行非线性回归分析以拟合曲线。 细胞检测：将DLBCL细胞系用R406系列稀释液（0.3、0.6、1.25、2.5或5 μM）处理72或96小时。随后，采用 MTT 法测定细胞增殖，并采用 Annexin V-FITC/碘化丙啶 (PI) 染色评估细胞凋亡。为测定 caspase 9、8 和 3，将细胞裂解，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE) 进行大小分级，然后进行免疫印迹分析。 盐酸他马替尼 可抑制培养的人肥大细胞中 IgE 介导的脱颗粒作用（EC50 = 56 ± 20 nM，抑制类胰蛋白酶释放），并抑制抗 IgE 诱导的 LTC4、TNFα、IL-8 和 GM-CSF 的产生（EC50 93-158 nM）。它对离子霉素诱导的脱颗粒没有影响（EC50 >10 μM），表明其对FcεRI信号通路具有特异性[1]。 在肥大细胞中，他马替尼盐酸盐阻断了LAT（Tyr191）及其下游信号分子（PLCγ1、AKT、ERK、p38、JNK）的磷酸化，但不抑制Syk（Tyr352）或FcRγ链（Lyn依赖性）的磷酸化，证实Syk是主要靶点[1]。 在人巨噬细胞（原代和THP-1细胞）中，他马替尼盐酸盐抑制了抗IgG诱导的TNFα产生，EC50分别为0.111 μM（原代）和0.171 μM（THP-1细胞）。在原代中性粒细胞中，它抑制了抗IgG诱导的氧化爆发，EC50为33 nM。在原代B细胞中，他马替尼以EC50 = 48 nM抑制抗IgM诱导的CD69上调。相比之下，其对LPS诱导的TNFα产生的抑制作用则弱得多（EC50高约10倍，为1.15-2.10 μM）[1]。 他马替尼盐酸盐不抑制FITC标记的调理素化大肠杆菌的吞噬作用（EC50 > 50 μM）、调理素化大肠杆菌诱导的氧化爆发（EC50 > 30 μM）、对fMLP的趋化作用（10 μM时无抑制作用）或对调理素化金黄色葡萄球菌的杀菌活性（浓度高达20 μM时无抑制作用）。它也不抑制PMA诱导的中性粒细胞氧化爆发（EC50 > 10 μM）[1]。 |
||
| 体内研究 (In Vivo) |
R406在多种免疫疾病动物模型中均显示出疗效。在免疫复合物介导的炎症小鼠模型中，口服R406可显著抑制皮肤逆向被动Arthus反应，剂量分别为1 mg/kg和5 mg/kg时，抑制率与对照组相比分别约为72%和86%。在被动抗胶原抗体攻击的小鼠中，10 mg/kg 的 R406 治疗可显著减轻炎症和肿胀，降低进行性关节炎的程度；在 K/BxN 血清转移小鼠模型中，R406 可延缓关节炎的发生，并使爪增厚和临床关节炎症状减轻约 50%。
在小鼠中，免疫复合物攻击前 1 小时口服 他马替尼盐酸盐，可使反向被动 Arthus 反应（皮肤水肿和染料外渗）在 1 mg/kg 剂量下减少 72%，在 5 mg/kg 剂量下减少 86% (p < 0.001) [1]。 在胶原抗体诱导的关节炎 (CAIA) 模型中，他马替尼盐酸盐（口服，每日两次，持续 14 天）可延缓疾病发作并降低临床评分；组织病理学显示滑膜炎、血管翳形成和白细胞浸润显著减少[1]。 在K/BxN血清转移性关节炎模型中，每日两次口服10 mg/kg的他马替尼盐酸盐可使爪增厚和临床关节炎症状减轻约50%[1]。 在一项首次人体研究（健康志愿者，单次口服80-600 mg）中，他马替尼盐酸盐以剂量依赖的方式抑制体外抗IgE诱导的嗜碱性粒细胞脱颗粒（CD63上调）。产生50%抑制的血浆浓度为496 ± 42 ng/mL（约1.06 μM）。在高剂量下，抑制作用可持续长达24小时[1]。 |
||
| 酶活实验 |
将R406用DMSO进行系列稀释，再用激酶缓冲液（20 mM HEPES，pH 7.4，5 mM MgCl₂，2 mM MnCl₂，1 mM DTT，0.1 mg/mL乙酰化BGG）稀释，最后稀释至DMSO体积浓度为1%。在室温下向激酶缓冲液中加入ATP和底物后，DMSO的最终浓度为0.2%。向激酶缓冲液中加入0.125 ng Syk以启动激酶反应，反应体系最终体积为20 mL，其中包含5 mM HS1肽底物和4 mM ATP。反应在室温下进行40分钟。加入20 mL PTK淬灭混合物（含EDTA、抗磷酸酪氨酸抗体（终浓度1倍）和荧光磷酸肽示踪剂（终浓度0.5倍），该混合物用FP稀释缓冲液稀释）以终止反应。在室温下避光孵育30分钟后，使用Polarion荧光偏振酶标仪读取酶标板。通过与酪氨酸激酶检测试剂盒中包含的磷酸肽竞争剂进行竞争，建立校准曲线，并将数据转换为磷酸肽的含量。采用非线性回归分析拟合曲线，并测试R406在11个不同浓度下的活性，以确定IC50值。
Syk激酶活性采用荧光偏振法测定。为测定Ki值，在8个不同的ATP浓度（从200 μM开始进行2倍系列稀释）下，设置R406浓度为7.8-125 nM的反应体系。将反应速率与 ATP 浓度作图，以确定表观 Km 和 Vmax，然后将表观 Km（或 Km/Vmax）与抑制剂浓度作图，以确定 Ki = 30 nM [1]。 蛋白质晶体学：将 Syk 激酶结构域（Ile358-Asn635，E440Q 突变）与 R406 浸泡后进行结晶。收集到 2.3 Å 分辨率的数据。结构显示 R406 以“U”形构象结合在 ATP 口袋中，嘧啶 N1 和连接 N2 与铰链区形成关键氢键 [1]。 |
||
| 细胞实验 |
培养的人类肥大细胞 (CHMC) 源自脐带血 CD34+ 祖细胞。细胞预先用盐酸他马替尼 (Tamatinib HCl) 孵育 30 分钟，然后用抗 IgE (0.25-2 mg/mL) 或抗 IgG 刺激。脱颗粒通过胰蛋白酶释放（肽底物的发光）进行测量。LTC4 和细胞因子通过 Luminex 多重检测进行测量。对于蛋白质印迹分析，细胞预先用化合物孵育 40 分钟，用抗 IgE 刺激 5 分钟，裂解后用磷酸化特异性抗体进行分析 [1]。
原代人巨噬细胞由 CD14+ 外周血单核细胞 (PBMC) 经 GM-CSF 诱导分化而来。细胞用固定化的人 IgG 刺激 16-20 小时，TNFα 通过 Luminex 检测。THP-1 细胞在刺激前用 IFN-γ 预处理 6 天。从外周血中分离的中性粒细胞与化合物预孵育 20 分钟，用 TNFα (20 ng/mL) 预处理，用抗 IgG (0.4 μg/mL) 刺激，并通过二氢罗丹明 123 荧光测定氧化爆发。通过 CD19+ 选择分离的原代 B 细胞与化合物预孵育 60 分钟，用抗 IgM (5 μg/mL) 刺激 6 小时，并通过流式细胞术分析 CD69 表达 [1]。 吞噬作用测定：将肝素化全血与化合物孵育 30 分钟，然后加入 FITC 标记的调理素化大肠杆菌；通过流式细胞术测定吞噬作用。杀菌活性：将纯化的中性粒细胞用化合物（或 DMSO）在 4°C 下预处理 1 小时，与调理的金黄色葡萄球菌（1:1）混合，在 37°C 下旋转，取等分试样接种于血琼脂平板上，测定菌落计数 [1]。 |
||
| 动物实验 |
|
||
| 药代性质 (ADME/PK) |
在小鼠中，口服盐酸他马替尼后观察到快速代谢（见补充图）。在人体内，R406 具有很高的生物利用度。血浆浓度随剂量呈比例增加，直至 400 mg 后达到平台期。达峰时间 (Tmax) ≈ 1.2-1.3 小时；半衰期 ≈ 15 小时。人血浆蛋白结合率 > 98% [1]。
|
||
| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
在人体研究中，未观察到对血液学或化学安全性参数的显著影响。在 600 mg 剂量下，受试者更常诉说体位性眩晕（5/6 例 vs. 安慰剂组 1/8 例，较低剂量组 4/21 例）。高剂量 R406 导致给药后 4 小时循环 CD14+ 单核细胞短暂减少，20 小时后恢复正常。任何剂量均未抑制胶原或 ADP 诱导的血小板聚集。在小鼠中，高达 100 mg/kg 的 R406（血浆暴露量高达 25 μM）未延长出血时间，而阿司匹林（100 mg/kg）则使出血时间延长了 88% [1]。
|
||
| 参考文献 |
J Pharmacol Exp Ther.2006 Dec;319(3):998-1008;Blood.2008 Feb 15;111(4):2230-7.
|
||
| 其他信息 |
他马替尼盐酸盐 (R406) 是一种强效的 ATP 竞争性 Syk 抑制剂，可阻断 Fc 受体和 B 细胞受体信号传导。它在多种免疫复合物介导的炎症动物模型和人体外嗜碱性粒细胞活化模型中均显示出疗效。该化合物具有口服生物利用度，并在首次人体试验中显示出良好的安全性。目前正在开发用于治疗自身免疫性疾病和过敏性疾病。R406 结构：N4-(2,2-二甲基-3-氧代-4H-吡啶并[1,4]噁嗪-6-基)-5-氟-N2-(3,4,5-三甲氧基苯基)-2,4-嘧啶二胺 [1]。
|
| 相关CAS号 |
841290-81-1;841290-80-0;R406
|
|---|---|
| 外观&性状 |
Typically exists as solid at room temperature
|
| HS Tariff Code |
2934.99.9001
|
| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
|
| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
|
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
|
|---|
|
|
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
Copyright 2020 InvivoChem LLC | All Rights Reserved 粤ICP备20063088号-1
粤公网安备 44011102003439号
463611831
