体外活性：R406 是 Syk 的 ATP 竞争性抑制剂，Ki 值为 30 nM。 R406 选择性抑制 Syk 依赖性信号传导，EC50 值范围为 33 nM 至 171 nM，比不同细胞中的 Syk 独立途径更有效。 R406 可抑制大量弥漫性大 B 细胞淋巴瘤 (DLBCL) 细胞系的细胞增殖，EC50 值范围为 0.8 μM 至 8.1 μM。 R406 处理（1 μM 或 4 μM）诱导 caspase 9 和 3 激活，但不激活 caspase 8，导致大多数 DLBCL 细胞系显着凋亡。 R406 预处理可完全阻断 B 细胞受体 (BCR) 交联后 R406 敏感 DLBCL 中 SYK525/526 的磷酸化和 SYK 依赖性 BLNK 磷酸化。治疗 24 小时和 48 小时后，R406 有效降低 MMP-9 mRNA 水平，分别比对照低 2.8 倍和 4.3 倍，并降低 RL 细胞的侵袭能力。激酶测定：R406 在 DMSO 中连续稀释，然后在激酶缓冲液（20 mM HEPES、pH 7.4、5 mM MgCl2、2 mM MnCl2、1 mM DTT、0.1 mg/mL 乙酰化 BGG）中稀释至 1% DMSO。在室温下添加激酶缓冲液中的 ATP 和底物，最终 DMSO 浓度为 0.2%。激酶反应在含有 5 μM HS1 肽底物和 4 μM ATP 的最终体积 20 μL 中进行，并通过在激酶缓冲液中添加 0.125 ng Syk 开始。使反应在室温下进行40分钟。通过添加 20 μL PTK 淬灭混合物来终止反应，该混合物含有用 FP 稀释缓冲液稀释的 EDTA/抗磷酸酪氨酸抗体（1X 最终）/荧光磷酸肽示踪剂（0.5X 最终）。将板在室温下黑暗中孵育 30 分钟，然后在 Polarion 荧光偏振板读数器上读数。使用通过与酪氨酸激酶测定试剂盒中提供的磷酸肽竞争剂竞争生成的校准曲线将数据转换为存在的磷酸肽的量。对于 IC50 测定，R406 在 11 个浓度下进行重复测试，并使用 Prism GraphPad 软件通过非线性回归分析进行曲线拟合。细胞测定：DLBCL 细胞系用 R406（0.3、0.6、1.25、2.5 或 5 μM）系列稀释液处理 72 或 96 小时。此后，通过 MTT 测定测定细胞增殖，并使用膜联蛋白 V-FITC/碘化丙啶 (PI) 染色评估细胞凋亡。为了测定 caspase 9、8 和 3，细胞被裂解，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE) 进行大小分级，并进行免疫印迹。

R406 在许多免疫疾病动物模型中显示出功效。与对照组相比，患有免疫复合物介导炎症的小鼠口服 R406 1 mg/kg 和 5 mg/kg 时，可显着抑制皮肤逆转被动阿蒂斯反应，分别约 72% 和 86%。 10 mg/kg 的 R406 治疗可显着减轻炎症和肿胀，将被动抗胶原抗体攻击小鼠的进行性关节炎降低至较低水平，并延迟 K/BxN 小鼠的发病时间并将爪子增厚和临床关节炎减少约 50%血清转移小鼠模型。

:J Pharmacol Exp Ther.2006 Dec;319(3):998-1008;Blood.2008 Feb 15;111(4):2230-7.

841290-81-1;841290-80-0;R406

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

Note: Listed below are some common formulations that may be used to formulate products with low water solubility (e.g. < 1 mg/mL), you may test these formulations using a minute amount of products to avoid loss of samples.

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Injection Formulation 1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (i.e. 100 μL DMSO stock solution → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*Preparation of saline: Dissolve 0.9 g of sodium chloride in 100 mL ddH ₂ O to obtain a clear solution.
Injection Formulation 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (i.e. 100 μL DMSO → 400 μLPEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
Injection Formulation 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (i.e. 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
Example: Take the Injection Formulation 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) as an example, if 1 mL of 2.5 mg/mL working solution is to be prepared, you can take 100 μL 25 mg/mL DMSO stock solution and add to 900 μL corn oil, mix well to obtain a clear or suspension solution (2.5 mg/mL, ready for use in animals).

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Injection Formulation 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in saline = 10 : 90 [i.e. 100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in saline)]
*Preparation of 20% SBE-β-CD in Saline (4°C，1 week): Dissolve 2 g SBE-β-CD in 10 mL saline to obtain a clear solution.
Injection Formulation 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (i.e. 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin → 500 μL Saline)
Injection Formulation 6: DMSO : PEG300 : castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (i.e. 50 μL DMSO → 100 μLPEG300 → 200 μL castor oil → 650 μL Saline)
Injection Formulation 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (i.e. 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
Injection Formulation 8: Dissolve in Cremophor/Ethanol (50 : 50), then diluted by Saline
Injection Formulation 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (i.e. 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
Injection Formulation 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (i.e. 100 μL EtOH → 400 μLPEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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Oral Formulation 1: Suspend in 0.5% CMC Na (carboxymethylcellulose sodium)
Oral Formulation 2: Suspend in 0.5% Carboxymethyl cellulose
Example: Take the Oral Formulation 1 (Suspend in 0.5% CMC Na) as an example, if 100 mL of 2.5 mg/mL working solution is to be prepared, you can first prepare 0.5% CMC Na solution by measuring 0.5 g CMC Na and dissolve it in 100 mL ddH2O to obtain a clear solution; then add 250 mg of the product to 100 mL 0.5% CMC Na solution, to make the suspension solution (2.5 mg/mL, ready for use in animals).

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Oral Formulation 3: Dissolved in PEG400
Oral Formulation 4: Suspend in 0.2% Carboxymethyl cellulose
Oral Formulation 5: Dissolve in 0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose
Oral Formulation 6: Mixing with food powders

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Note: Please be aware that the above formulations are for reference only. InvivoChem strongly recommends customers to read literature methods/protocols carefully before determining which formulation you should use for in vivo studies, as different compounds have different solubility properties and have to be formulated differently.

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。