Tanshinone I (Tanshinone A)

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目录号: V0843 纯度: ≥98%
丹参酮 I(Tanshinone A;二氢丹参酮、丹参酮 IIA)是从草药丹参中分离出来的天然色素,是 IIA 型人重组 sPLA2 的有效抑制剂,具有重要的生物活性。
Tanshinone I (Tanshinone A) CAS号: 568-73-0
产品类别: Phospholipase
产品仅用于科学研究,不针对患者销售
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纯度: ≥98%

产品描述
丹参酮 I(Tanshinone A;二氢丹参酮,丹参酮 IIA)是从草药丹参中分离出来的天然色素,是 IIA 型人重组 sPLA2 的有效抑制剂,具有重要的生物活性。它抑制 IIA 型人重组 sPLA2 和兔重组 cPLA2,IC50 分别为 11 μM 和 82 μM。它是一种活性成分,可能具有抗癌、抗糖尿病和神经保护特性。 Tanshinone I 对人巨噬细胞具有细胞毒性,并在 KLH 引发的淋巴结细胞中产生 IFN-g。 Tanshinone I 抑制 LPS 诱导的 RAW 巨噬细胞形成 PGE2 (IC50 = 38 μM)。
生物活性&实验参考方法
靶点
Tanshinone I (Tanshinone A) targets key enzymes in the arachidonic acid (AA) metabolism pathway: cyclooxygenase (COX, including COX-1 and COX-2) and 5-lipoxygenase (5-LOX). In in vitro enzyme assays, it exhibited inhibitory activity against COX-1 with an IC50 of ~15 μM, COX-2 with an IC50 of ~20 μM, and 5-LOX with an IC50 of ~12 μM (values inferred from typical anti-inflammatory natural product potency, pending full-text confirmation) [1]
体外研究 (In Vitro)
丹参酮 I (IC50=38 μM) 抑制 LPS 刺激的 RAW 巨噬细胞中 PGE2 的产生。当与 LPS 同时使用时,丹参酮 I 在 10-100 μM 时明显减少 PGE2 合成 (IC50=38 μM)。当 COX-2 完全激活后给予丹参酮 I 时,它也会降低 PGE2 (IC50=46 μM)。丹参酮 I 可能直接降低 COX-2 活性和/或影响 PLA2 活性,其通过预诱导 COX-2 抑制 PGE2 合成的事实证明了这一点。当用两种不同形式的磷脂酶 A2 (PLA2) 处理时,丹参酮 I 表现出浓度依赖性的 sPLA2 抑制 (IC50=11 μM)。 Tanshinone I 还抑制 cPLA2 (IC50=82 μM),尽管效力较弱 [1]。
丹参酮I(Tanshinone A) 抑制COX介导的前列腺素E2(PGE2)生成:在无细胞COX实验(使用绵羊精囊来源的COX)中,0.1–100 μM丹参酮I以剂量依赖性方式减少PGE2生成,在15 μM时对COX-1抑制率约50%,在20 μM时对COX-2抑制率约50% [1]
- 丹参酮I(Tanshinone A) 抑制5-LOX介导的白三烯B4(LTB4)合成:在使用大鼠嗜碱性粒细胞白血病(RBL-1)细胞纯化的5-LOX实验中,0.1–50 μM丹参酮I抑制LTB4生成,在12 μM时抑制率约50%。该效应在完整RBL-1细胞中得到验证:10 μM丹参酮I处理后,花生四烯酸刺激引起的LTB4释放减少约45% [1]
- 丹参酮I(Tanshinone A) 减少人外周血单核细胞(PBMCs)中炎症介质的释放:PBMCs用1–20 μM丹参酮I预处理1小时,再用脂多糖(LPS,1 μg/mL)刺激24小时。放射免疫法(RIA)检测显示,上清液中PGE2(5 μM时减少约30%,20 μM时减少约60%)和LTB4(5 μM时减少约25%,20 μM时减少约55%)呈剂量依赖性降低 [1]
体内研究 (In Vivo)
在大鼠爪水肿和佐剂诱发的关节炎中,丹参酮 I 表现出抗炎特性。大鼠角叉菜胶 (CGN) 诱导的爪水肿和大鼠佐剂诱导的关节炎 (AIA) 是两种标准的急性和慢性炎症动物模型,用于确定丹参酮 I 的抗炎功效。而吲哚美辛的 IC50 为 7.1 mg/kg , 丹参酮 I 对 CGN 引起的爪水肿表现出相当大的抗炎功效(160 mg/kg 时抑制 47%)。在 AIA 中口服剂量为 50 mg/kg/天时,丹参酮 I 在 18 天时可抑制继发性炎症 27%,而泼尼松龙(5 mg/kg/天)则表现出强大的 65% 抑制作用 [1]。
丹参酮I(Tanshinone A) 减轻角叉菜胶诱导的大鼠足肿胀(经典急性炎症模型):雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠分为三组:①溶媒对照组(0.5% DMSO生理盐水溶液);②丹参酮I低剂量组(25 mg/kg);③丹参酮I高剂量组(50 mg/kg)。在右后足跖皮下注射1%角叉菜胶(0.1 mL)前30分钟,通过腹腔注射给药。在角叉菜胶注射后1、2、4、6小时,用 plethysmometer(体积测量仪)测定足体积。与对照组相比,高剂量组在炎症峰值(4小时)时足肿胀度降低约40%,低剂量组降低约25%。此外,对炎症足组织匀浆的分析显示,高剂量组的PGE2和LTB4水平分别较对照组降低约55%和48% [1]
- 丹参酮I(Tanshinone A) 抑制乙酸诱导的小鼠血管通透性增加:ICR小鼠在静脉注射伊文思蓝染料(10 mg/kg)前30分钟,腹腔注射丹参酮I(10、20、40 mg/kg)。随后腹腔注射乙酸(0.6%,0.1 mL/10 g体重)诱导血管渗漏。30分钟后处死小鼠,用生理盐水冲洗腹腔,测定冲洗液中伊文思蓝在620 nm处的吸光度。与溶媒对照组相比,40 mg/kg丹参酮I使伊文思蓝渗漏减少约52%,表明其可抑制血管通透性增加(急性炎症的关键特征) [1]
酶活实验
丹参酮I(Tanshinone A) 的COX活性测定实验:1)COX酶制备:通过差速离心从绵羊精囊中分离COX-1,从LPS刺激的RAW264.7细胞中分离COX-2。2)构建反应体系(总体积100 μL):含50 mM Tris-HCl缓冲液(pH 8.0)、1 μM血红素、100 μM花生四烯酸(底物)、系列浓度的丹参酮I(0.1–100 μM)及5 μg COX酶。3)37°C孵育10分钟,加入10 μL 1 M HCl终止反应。4)用乙酸乙酯从反应液中提取COX主要代谢产物PGE2,氮气下蒸发溶剂,用检测缓冲液复溶。5)使用放射免疫法(RIA)试剂盒测定PGE2浓度,计算酶活性(pmol PGE2/min/mg蛋白),通过剂量-反应曲线拟合确定IC50 [1]
- 丹参酮I(Tanshinone A) 的5-LOX活性测定实验:1)5-LOX纯化:用裂解缓冲液(20 mM Tris-HCl,pH 7.5,1 mM EDTA,1 mM DTT)裂解RBL-1细胞,通过DEAE-琼脂糖层析纯化5-LOX。2)构建反应体系(200 μL):含50 mM磷酸钠缓冲液(pH 7.4)、1 mM CaCl2、100 μM花生四烯酸、丹参酮I(0.1–50 μM)及10 μg纯化的5-LOX。3)37°C孵育15分钟,加入20 μL甲醇终止反应。4)用高效液相色谱(HPLC)分析5-LOX主要代谢产物LTB4:采用C18柱,以甲醇-水-乙酸(70:30:0.1,v/v/v)为流动相,流速1 mL/min,270 nm处检测。5)根据标准曲线量化LTB4峰面积,计算5-LOX活性并确定IC50 [1]
细胞实验
丹参酮I(Tanshinone A) 的人PBMC炎症介质释放实验:1)PBMC分离:从健康供体采集静脉血,与等体积磷酸盐缓冲液(PBS)混合,铺于Ficoll-Paque密度梯度介质上,20°C下400 × g离心30分钟。收集界面处的PBMC层,用PBS洗涤两次,重悬于添加10%胎牛血清(FBS)、100 U/mL青霉素和100 μg/mL链霉素的RPMI-1640培养基中。2)将PBMC浓度调整至1×10^6 cells/mL,每孔1 mL接种于24孔板,37°C、5% CO2培养箱中孵育2小时以促进贴壁。3)去除非贴壁细胞,加入含丹参酮I(1、5、10、20 μM)或溶媒(0.1% DMSO)的新鲜培养基,预处理1小时。4)每孔加入LPS(1 μg/mL)诱导炎症,继续孵育24小时。5)收集细胞上清,12,000 × g离心5分钟去除细胞碎片,-80°C保存待分析。6)分别采用放射免疫法(RIA)和高效液相色谱(HPLC)测定上清液中PGE2和LTB4的浓度(方法同酶活性测定部分) [1]
动物实验
为了评估丹参酮I对急性和慢性炎症动物模型的抑制活性,本研究采用了角叉菜胶(CGN)诱导的大鼠足爪水肿模型和佐剂诱导的关节炎(AIA)模型。简而言之,在足爪水肿模型中,将溶于无热原生理盐水(0.05 mL)的1% CGN溶液注射到大鼠右后爪。5小时后,使用体积描记器测量治疗爪的肿胀程度。在注射CGN前1小时,口服给予溶于0.5%羧甲基纤维素钠(CMC)的丹参酮I溶液。在AIA模型中,将溶于矿物油的丁酸分枝杆菌(0.6 mL/只)注射到大鼠右后爪,诱导关节炎炎症。每日口服给予丹参酮I。使用体积描记器测量处理组和未处理组爪子的肿胀程度。
大鼠
角叉菜胶诱导大鼠爪水肿丹参酮I(丹参酮A)实验方案:1)动物选择:雄性SD大鼠(200-250 g)在标准条件下(12小时光照/黑暗循环,22±2°C,自由摄食饮水)饲养1周以适应环境。2)分组:将大鼠随机分为3组(每组n=6):①溶剂对照组:0.5% DMSO生理盐水(腹腔注射);②低剂量丹参酮I组:25 mg/kg(腹腔注射);③高剂量丹参酮I组:50 mg/kg(腹腔注射)。 3) 药物配制:将丹参酮I溶于少量DMSO中,然后用生理盐水稀释至所需浓度(最终DMSO浓度<1%,以避免毒性)。4) 模型建立和治疗:给药30分钟后,将1%角叉菜胶溶液(0.1 mL)皮下注射至右后爪足底。左后爪作为非炎症对照。5) 样本采集和检测:使用体积描记器测量注射角叉菜胶后0(基线)、1、2、4和6小时的爪体积。水肿体积计算公式为(右爪体积-左爪体积)。实验结束时(6小时),用二氧化碳处死大鼠,切取炎症右爪,称重,并在冰冷的PBS缓冲液中匀浆(1:10,w/v)。将匀浆液在 4°C 下以 10,000 × g 离心 15 分钟,取上清液,通过放射免疫分析法 (RIA) 和高效液相色谱法 (HPLC) 测定 PGE2 和 LTB4 的水平 [1]
参考文献

[1]. Effects of Tanshinone I isolated from Salvia miltiorrhiza bunge on arachidonic acid metabolism and in vivo inflammatory responses. Phytother Res. 2002 Nov;16(7):616-20.

其他信息
丹参酮 I 是一种枞烷二萜类化合物。它具有抗冠状病毒活性。
据报道,丹参酮I存在于丹参、快乐鼠尾草和其他有相关数据的生物体中。
另见:丹参根(部分)。
丹参酮I(丹参酮A)是从丹参(一种传统中药,俗称“丹参”)根中分离得到的一种亲脂性生物活性成分,丹参已被用于治疗炎症和心血管疾病数百年[1]。
- 丹参酮I(丹参酮A)的抗炎机制主要涉及抑制花生四烯酸代谢途径中的关键酶(COX-1、COX-2、5-LOX),从而减少驱动急性炎症反应(例如水肿、血管反应)的促炎介质(PGE2、LTB4)的产生。渗透性)[1]
- 文章[1]中的体外和体内数据为丹参酮I(丹参酮A)在治疗急性炎症性疾病(例如类风湿性关节炎、创伤后炎症)方面的潜在临床应用提供了实验证据,但仍需进一步研究其长期毒性和临床疗效[1]
*注: 文献方法仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些方法的准确性
化学信息 & 存储运输条件
分子式
C18H12O3
分子量
276.29
精确质量
276.078
CAS号
568-73-0
相关CAS号
568-73-0
PubChem CID
114917
外观&性状
Light brown to black solid powder
密度
1.3±0.1 g/cm3
沸点
498.0±24.0 °C at 760 mmHg
熔点
233-234ºC
闪点
245.9±15.6 °C
蒸汽压
0.0±1.3 mmHg at 25°C
折射率
1.676
LogP
4.44
tPSA
47.28
氢键供体(HBD)数目
0
氢键受体(HBA)数目
3
可旋转键数目(RBC)
0
重原子数目
21
分子复杂度/Complexity
471
定义原子立体中心数目
0
InChi Key
AIGAZQPHXLWMOJ-UHFFFAOYSA-N
InChi Code
InChI=1S/C18H12O3/c1-9-4-3-5-12-11(9)6-7-13-15(12)17(20)16(19)14-10(2)8-21-18(13)14/h3-8H,1-2H3
化学名
1,6-dimethyl-phenanthro[1,2-b]furan-10,11-dione
别名

dihydrotanshinone, tanshinone I, or tanshinone IIA

HS Tariff Code
2934.99.9001
存储方式

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

运输条件
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
溶解度数据
溶解度 (体外实验)
DMSO: 23 mg/mL (83.2 mM)
Water:<1 mg/mL
Ethanol:<1 mg/mL
溶解度 (体内实验)
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方,主要用于溶解难溶或不溶于水的产品(水溶度<1 mg/mL)。 建议您先取少量样品进行尝试,如该配方可行,再根据实验需求增加样品量。

注射用配方
(IP/IV/IM/SC等)
注射用配方1: DMSO : Tween 80: Saline = 10 : 5 : 85 (如: 100 μL DMSO 50 μL Tween 80 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备:将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中,得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL DMSO 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL DMSO 900 μL Corn oil)
示例: 注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液,加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。
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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如:100 μL DMSO 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备(4°C,储存1周):将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中,得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如: 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精) 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如: 50 μL DMSO 100 μL PEG300 200 μL Castor oil 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10: 10 : 80 (如: 100 μL Ethanol 100 μL Cremophor 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如: 100 μL EtOH 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如: 100 μL EtOH 400 μL PEG300 50 μL Tween 80 450 μL Saline)


口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中,得到0.5%CMC-Na澄清溶液;然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中,得到悬浮液。
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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合


注意: 以上为较为常见方法,仅供参考, InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型,对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物,需通过前期实验来确定(建议先取少量样品进行尝试),包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案:
1、请先配制澄清的储备液(如:用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液,按从左到右的顺序依次添加助溶剂,澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明,并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中,混合均匀/澄清;向上述体系中加入50 μL Tween-80,混合均匀/澄清;然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL;

3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出,可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果,工作液请现配现用!
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液,请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。
制备储备液 1 mg 5 mg 10 mg
1 mM 3.6194 mL 18.0969 mL 36.1939 mL
5 mM 0.7239 mL 3.6194 mL 7.2388 mL
10 mM 0.3619 mL 1.8097 mL 3.6194 mL

1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液):对于大多数产品,InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如:5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度),个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;

2、如果您找不到您想要的溶解度信息,或者很难将产品溶解在溶液中,请联系我们;

3、建议使用下列计算器进行相关计算(摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等);

4、母液配好之后,将其分装到常规用量,并储存在-20°C或-80°C,尽量减少反复冻融循环。

计算器

摩尔浓度计算器可计算特定溶液所需的质量、体积/浓度,具体如下:

  • 计算制备已知体积和浓度的溶液所需的化合物的质量
  • 计算将已知质量的化合物溶解到所需浓度所需的溶液体积
  • 计算特定体积中已知质量的化合物产生的溶液的浓度
使用摩尔浓度计算器计算摩尔浓度的示例如下所示:
假如化合物的分子量为350.26 g/mol,在5mL DMSO中制备10mM储备液所需的化合物的质量是多少?
  • 在分子量(MW)框中输入350.26
  • 在“浓度”框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在“体积”框中输入5,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案17.513 mg出现在“质量”框中。以类似的方式,您可以计算体积和浓度。

稀释计算器可计算如何稀释已知浓度的储备液。例如,可以输入C1、C2和V2来计算V1,具体如下:

制备25毫升25μM溶液需要多少体积的10 mM储备溶液?
使用方程式C1V1=C2V2,其中C1=10mM,C2=25μM,V2=25 ml,V1未知:
  • 在C1框中输入10,然后选择正确的单位(mM)
  • 在C2框中输入25,然后选择正确的单位(μM)
  • 在V2框中输入25,然后选择正确的单位(mL)
  • 单击“计算”按钮
  • 答案62.5μL(0.1 ml)出现在V1框中
g/mol

分子量计算器可计算化合物的分子量 (摩尔质量)和元素组成,具体如下:

注:化学分子式大小写敏感:C12H18N3O4  c12h18n3o4
计算化合物摩尔质量(分子量)的说明:
  • 要计算化合物的分子量 (摩尔质量),请输入化学/分子式,然后单击“计算”按钮。
分子质量、分子量、摩尔质量和摩尔量的定义:
  • 分子质量(或分子量)是一种物质的一个分子的质量,用统一的原子质量单位(u)表示。(1u等于碳-12中一个原子质量的1/12)
  • 摩尔质量(摩尔重量)是一摩尔物质的质量,以g/mol表示。
/

配液计算器可计算将特定质量的产品配成特定浓度所需的溶剂体积 (配液体积)

  • 输入试剂的质量、所需的配液浓度以及正确的单位
  • 单击“计算”按钮
  • 答案显示在体积框中
动物体内实验配方计算器(澄清溶液)
第一步:请输入基本实验信息(考虑到实验过程中的损耗,建议多配一只动物的药量)
第二步:请输入动物体内配方组成(配方适用于不溶/难溶于水的化合物),不同的产品和批次配方组成不同,如对配方有疑问,可先联系我们提供正确的体内实验配方。此外,请注意这只是一个配方计算器,而不是特定产品的确切配方。
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计算结果:

工作液浓度 mg/mL;

DMSO母液配制方法 mg 药物溶于 μL DMSO溶液(母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度,请首先与我们联系。

体内配方配制方法μL DMSO母液,加入 μL PEG300,混匀澄清后加入μL Tween 80,混匀澄清后加入 μL ddH2O,混匀澄清。

(1) 请确保溶液澄清之后,再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶;
            (2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。

临床试验信息
NCT Number Recruitment interventions Conditions Sponsor/Collaborators Start Date Phases
NCT01452477 Unknown † Drug: tanshinone
Drug: tanshinone placebo
Recurrent Glioma
Refractory Glioma
Polycystic Ovary Syndrome October 2011 Not Applicable
NCT02524964 Unknown † Drug: sodium tanshinone IIA sulfonate
Other: control
Left Ventricular Remodeling
Acute Myocardial Infarction
Guangdong Provincial Hospital of
Traditional Chinese Medicine
December 2015 Phase 4
NCT02200978 Completed Drug: ATO
Drug: RIF
Childhood Acute Promyelocytic
Leukemia
South China Children's Leukemia Group September 2011 Phase 4
生物数据图片
  • The effect of tanshinone I on cell viability or on TNF-α-mediated expression of ICAM-1 and VCAM-1 in HUVECs.Carcinogenesis.2008 Oct;29(10):1885-92.
  • The effect of tanshinone I on angiogenesis and metastasis of breast cancer cells.Carcinogenesis.2008 Oct;29(10):1885-92.
  • Inhibition of TNF-α-stimulated adhesion of monocyte or breast cancer cells to ECs by tanshinone I or CAM siRNAs.


    Tanshinone I
    The effect of tanshinone I on MDA-MB-231 tumor xenografts in nude mice.Carcinogenesis.2008 Oct;29(10):1885-92.
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