GLS1 (IC50 = 23 nM); GLS1 (IC50 = 28 nM); GLS2 (IC50 >1 μM); The target of Telaglenastat (CB-839) is glutaminase (GLS), an enzyme that catalyzes the conversion of glutamine to glutamate. It inhibits GLS with an IC50 of 2.4 nM [1]

在 HCC1806 和 MDA-MB-231 细胞中，telaglenastat (CB-839)（0.1-1000 nM；72 小时）表现出抗增殖活性，IC50 分别为 49 nM 和 26 nM[1]。当暴露于 telaglenastat (CB-839)（1 μM；72 小时）时，MDA-MB-231 和 HCC1806 细胞会发生凋亡，因为它会激活 caspase 3/7[1]。

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替拉格来纳司他（Telaglenastat, CB-839）对三阴性乳腺癌（TNBC）细胞系具有强效抗增殖活性。以0.1-10 μM的浓度处理细胞时，可呈剂量依赖性降低细胞活力，在敏感的TNBC细胞系中IC50为0.3-3 μM。这种效应与谷氨酸生成减少、三羧酸（TCA）循环中间产物水平降低及ATP生成受损相关，表明谷氨酰胺代谢受到抑制 [1]
在TNBC细胞中，替拉格来纳司他（Telaglenastat, CB-839）可诱导凋亡，表现为caspase-3和PARP的切割增加，膜联蛋白V染色增强。它还能降低集落形成能力，在浓度≥1 μM时，集落数量较未处理对照组减少50-70% [1]
在胰腺癌细胞中，替拉格来纳司他（Telaglenastat, CB-839）可抑制谷氨酰胺酶活性，导致谷氨酸水平降低。但这些细胞通过增加其他氨基酸（如丝氨酸、甘氨酸）的摄取及相关代谢酶的上调进行代谢补偿，部分减弱了其抗增殖作用 [2]

在 TNBC 异种移植模型中，telaglenastat (CB-839)（200 mg/kg；口服；每天两次，持续 28 天）表现出抗癌活性[1]。

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在TNBC异种移植模型中，每日口服替拉格来纳司他（Telaglenastat, CB-839） 100-300 mg/kg可显著抑制肿瘤生长，与溶媒处理小鼠相比，肿瘤体积减少40-60%。处理组的肿瘤样本中谷氨酸水平降低，增殖标志物（如Ki-67）的表达减少 [1]
在胰腺癌异种移植模型中，替拉格来纳司他（Telaglenastat, CB-839）单药（200 mg/kg，口服，每日）可适度抑制肿瘤生长（20-30%），与补偿性代谢通路抑制剂（如丝氨酸羟甲基转移酶抑制剂）联合使用时，抑制效果增强 [2]

测定缓冲液含有 50 mM Tris-Acetate pH 8.6、150 mM K2HPO4、0.25 mM EDTA、0.1 mg/mL 牛血清白蛋白、1 mM DTT、2 mM NADP+ 和 0.01% Triton X-100，用于测量酶活性。为了量化抑制作用，首先将谷氨酰胺和谷氨酸脱氢酶 (GDH) 与抑制剂（在 DMSO 中制备）预混合，然后通过添加 rHu-GAC 开始反应。最终反应中存在 2 nM rHu-GAC、10 mM 谷氨酰胺、6 单位/mL GDH 和 2% DMSO。在 SpectraMax M5e 读板机上，使用荧光 (Ex340/Em460 nm) 每分钟跟踪 NADPH 生成情况，持续 15 分钟。使用标准 NADPH 曲线，将相对荧光单位 (RFU) 转换为 NADPH 浓度单位 (μM)。每个检测板都有对照反应，可追踪 GDH 如何将谷氨酸 (1–75 µM) + NADP+ 转化为 α-酮戊二酸 + NADPH。在这些测定条件下，GDH 按化学计量将高达 75 µM 谷氨酸转化为 α-酮戊二酸/NADPH。将直线拟合到每条进度曲线的前五分钟即可得出初始反应速度。使用以下形式的四参数剂量反应方程来拟合抑制曲线：％活性=底部+（顶部-底部）/（1+10^（（LogIC50-X）* HillSlope））。

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为测量GLS抑制活性，将重组GLS酶与谷氨酰胺及不同浓度的替拉格来纳司他（Telaglenastat, CB-839）共同孵育。采用比色法分析反应混合物中谷氨酸的生成量，吸光度信号与谷氨酸浓度成正比。IC50定义为使GLS活性降低50%所需的替拉格来纳司他（Telaglenastat, CB-839）浓度 [1]

细胞增殖测定[1]
细胞类型： HCC1806、MDA-MB-231 细胞
测试浓度： 0.1、1、10、100、1000 nM
孵育持续时间：72 小时
实验结果：对两种 TNBC 细胞系的增殖具有有效作用（IC50 为 49 nM， HCC1806 和 MDA-MB-231 细胞为 26 nM）。

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细胞凋亡分析[1]
细胞类型： MDA-MB-231、HCC1806 细胞
测试浓度： 1 μM
孵育持续时间：72小时
实验结果：Caspase 3/7激活。

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在细胞活力实验中，将TNBC细胞接种于96孔板，用0.01-100 μM的替拉格来纳司他（Telaglenastat, CB-839）处理72小时。使用比色试剂测量细胞活力并确定IC50值 [1]
为评估凋亡，用1-10 μM的替拉格来纳司他（Telaglenastat, CB-839）处理TNBC细胞48小时。用膜联蛋白V和碘化丙啶染色细胞，通过流式细胞术量化凋亡细胞。采用蛋白质印迹法检测caspase-3和PARP的切割情况 [1]
在集落形成实验中，用0.1-10 μM的替拉格来纳司他（Telaglenastat, CB-839）处理TNBC细胞24小时，然后低密度接种并孵育10-14天。对集落进行染色和计数，结果以未处理对照组的集落百分比表示 [1]
在胰腺癌细胞中，用1 μM的替拉格来纳司他（Telaglenastat, CB-839）处理24小时后，分别采用放射性示踪剂和比色法测量谷氨酰胺摄取和谷氨酸生成。通过质谱法进行代谢物分析，评估TCA循环中间产物和氨基酸水平的变化 [2]

Animal/Disease Models: Female nu/nu (nude) mice with age 4–6 weeks (TNBC patient- derived xenograft model)[1]
Doses: 200 mg/kg
Route of Administration: Oral administration; twice (two times) daily for 28 days
Experimental Results: Suppressed tumor growth by 61% relative to vehicle control at the end of study.

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In TNBC xenograft models, female nude mice are implanted subcutaneously with TNBC cell lines. Once tumors reach a volume of ~100 mm³, mice are randomized to vehicle or Telaglenastat (CB-839) treatment. Telaglenastat (CB-839) is formulated in a vehicle containing a solubilizer and administered orally via gavage at 100-300 mg/kg once daily for 21 days. Tumor volume is measured twice weekly using calipers, and mice are monitored for body weight changes. At study end, tumors are harvested for metabolite analysis and immunohistochemical staining for Ki-67 [1]
In pancreatic cancer xenografts, mice with established tumors are treated with Telaglenastat (CB-839) (200 mg/kg, oral, daily) alone or in combination with other metabolic inhibitors for 28 days. Tumor growth is monitored, and tumor tissues are analyzed for metabolic changes via mass spectrometry [2]

In animal studies, Telaglenastat (CB-839) at doses up to 300 mg/kg daily for 21 days does not cause significant weight loss or overt toxicity. Plasma levels of Telaglenastat (CB-839) reach concentrations sufficient to inhibit GLS activity in tumors [1]

[1]. Antitumor activity of the glutaminase inhibitor CB-839 in triple-negative breast cancer. Mol Cancer Ther. 2014 Apr;13(4):890-901.

[2]. Compensatory metabolic networks in pancreatic cancers upon perturbation of glutaminemetabolism. Nat Commun. 2017 Jul 3;8:15965.

[3]. Estrogen inhibits autophagy and promotes growth of endometrial cancer by promoting glutamine metabolism. Cell Commun Signal. 2019 Aug 20;17(1):99.

Telaglenastat Hydrochloride is the hydrochloride salt form of CB-839, an orally bioavailable inhibitor of glutaminase, with potential antineoplastic and immunostimulating activities. Upon oral administration, CB-839 selectively and reversibly binds to and inhibits human glutaminase, an enzyme that is essential for the conversion of the amino acid glutamine into glutamate. Blocking glutamine metabolism inhibits proliferation in rapidly growing tumor cells and leads to an induction of cell death. Unlike normal healthy cells, glutamine-dependent tumors heavily rely on the intracellular conversion of exogenous glutamine into glutamate and glutamate metabolites to both provide energy and generate building blocks for the production of macromolecules, which are needed for cellular growth and survival. In addition, CB-839 causes accumulation of glutamine in tumor cells and increases glutamine concentration in the tumor microenvironment (TME) upon cell death. As glutamine is essential for T-cell generation, CB-839 may also enhance T-cell proliferation and activation in the TME, which may lead to further killing of tumor cells.

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Telaglenastat (CB-839) is a selective glutaminase inhibitor that blocks glutamine metabolism, a pathway critical for energy production and biosynthesis in many cancer cells, including TNBC and pancreatic cancer. Its efficacy is dependent on cancer cells' reliance on glutamine, with greater activity in tumors with high GLS expression [1] [2]

C26H25CLF3N7O3S

607.14

C, 51.36; H, 4.14; Cl, 5.83; F, 9.37; N, 16.13; O, 7.89; S, 5.27

1874231-60-3

Telaglenastat;1439399-58-2

118867525

Solid

160

3

12

12

41

812

0

Cl.S1C(NC(CC2C=CC=CN=2)=O)=NN=C1CCCCC1=CC=C(N=N1)NC(CC1C=CC=C(C=1)OC(F)(F)F)=O

NMVMURBPQFKTAX-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C26H24F3N7O3S.ClH/c27-26(28,29)39-20-9-5-6-17(14-20)15-22(37)31-21-12-11-18(33-34-21)7-1-2-10-24-35-36-25(40-24)32-23(38)16-19-8-3-4-13-30-19;/h3-6,8-9,11-14H,1-2,7,10,15-16H2,(H,31,34,37)(H,32,36,38);1H

2-(pyridin-2-yl)-N-(5-(4-(6-(2-(3-(trifluoromethoxy)phenyl)acetamido)pyridazin-3-yl)butyl)-1,3,4-thiadiazol-2-yl)acetamide hydrochloride

CB-839 hydrochloride; 1874231-60-3; Telaglenastat (hydrochloride); Telaglenastat hydrochloride [USAN]; B33561JJ61; N-[6-[4-[5-[(2-pyridin-2-ylacetyl)amino]-1,3,4-thiadiazol-2-yl]butyl]pyridazin-3-yl]-2-[3-(trifluoromethoxy)phenyl]acetamide;hydrochloride; Telaglenastat hydrochloride (USAN);

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。