Akt; ERK; Human mitochondrial caseinolytic protease P (ClpP) was identified as a direct binding protein. ONC201 bound ClpP with approximately 10-fold lower affinity compared to TR compounds in competition assays. [2]

在几种癌细胞系中，TIC10 以不依赖于 p53 的方式诱导 TRAIL 蛋白在细胞表面定位，并以剂量依赖的方式增加 TRAIL mRNA。虽然 TIC10 在体外表现出广谱抗肿瘤活性，并导致 TRAIL 敏感的 HCT116 p53/p53 细胞表现出指示细胞死亡的亚 G1 DNA 含量增加，但正常成纤维细胞在同等剂量下不受 TIC10 影响。 TIC10 可以保护健康的成纤维细胞，同时减少癌细胞系的克隆存活。与 TRAIL 介导的细胞凋亡类似，TIC10 以不依赖 p53 且依赖 Bax 的方式增加癌细胞中亚 G1 DNA 的比例。 TIC10引起的TRAIL上调依赖于Foxo3a，Foxo3a也会上调TRAIL死亡受体DR5和其他靶标，可能使一些TRAIL耐药的肿瘤细胞变得敏感。 ERK 和 Akt 激酶被 TIC10 灭活，导致 Foxo3a 进入细胞核并与 TRAIL 启动子结合以激活基因转录。 Foxo3a 然后被转运到细胞核中。有效的抗肿瘤药物 TIC10 通过增加肿瘤细胞及其周围组织中天然存在的肿瘤抑制因子 TRAIL 的水平来发挥作用。 [1]

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- ONC201在三阴性乳腺癌细胞SUM159和MDA-MB-231中抑制细胞增殖，72小时处理后的IC50值分别为2.96 μM（SUM159）和4.20 μM（MDA-MB-231）（MTS法）。[2]
- ONC201在SUM159和MDA-MB-231细胞中以剂量和时间依赖性方式诱导整合应激反应标志物ATF4和CHOP。增加ATF4所需的浓度与生长抑制的IC50密切相关。CHOP的诱导峰值早于ATF4。[2]
- ONC201（10 μM，24小时）在野生型SUM159细胞中增加CHOP蛋白水平，但该作用在ClpP敲低细胞中被消除。[2]
- ONC201（10 μM，24小时）在SUM159细胞中减少线粒体蛋白TFAM和TUFM；这种减少被ClpP敲低所阻止。[2]
- 通过35S-甲硫氨酸/半胱氨酸掺入实验测定，ONC201在SUM159细胞中处理24小时后显著抑制总蛋白合成（>50%）；这种抑制在ClpP敲低后显著减弱。[2]
- ONC201（高达30 μM）在SUM159细胞中未显著增加caspase 3/7活性（使用荧光底物ACE-DEVD-AMC），也未增加PARP裂解，表明在测试条件下具有细胞静止而非凋亡作用。星形孢菌素（10 nM）作为caspase激活的阳性对照。[2]
- ONC201（300 nM、3 μM、30 μM处理24小时）在SUM159细胞中未诱导显著的caspase活性。[2]
- 细胞计数实验证实，即使孵育72小时后，ONC201处理也未将总细胞数减少到初始接种值以下，这与细胞静止作用一致。[2]

当TIC10和TRAIL以多剂量给药时，TIC10和TRAIL治疗导致HCT116 p53−/−异种移植物中的肿瘤消退到相当的程度。 TIC10 还诱导 MDA-MB-231 人三阴性乳腺癌异种移植物消退，而 TRAIL 治疗的肿瘤则进展。在 DLD-1 结肠癌异种移植物中，TIC10 在治疗一周后诱导肿瘤停滞，而 TRAIL 治疗的肿瘤在单剂量后进展。 SW480异种移植物在接受单剂量TIC10后也表现出持续的消退，无论该药物是口服还是腹膜内给药，都可以看到这种效果。这表明 TIC10 具有良好的口服生物利用度。 TIC10 通过 TRAIL 介导的直接效应和旁观者效应引起肿瘤特异性细胞死亡。 TIC10 是一种针对原位人多形性胶质母细胞瘤的有效抗肿瘤剂。 [1]

ChIP测定[1]
如前所述，用Foxo3a的ChIP级抗体或等效浓度的兔免疫球蛋白G作为非特异性对照，对TRAIL启动子进行ChIP测定。

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- 亲和层析竞争实验：将HeLa细胞裂解液与载体（2% DMSO）或不同浓度的ONC201（文本中未明确此实验的具体浓度）混合15分钟，然后与TR-80琼脂糖珠混合，在室温下旋转1小时。洗涤珠子，在SDS样品缓冲液中煮沸，通过SDS-PAGE分离，并用ClpP抗体进行免疫印迹。当应用于细胞裂解液或活细胞时，ONC201以剂量依赖性方式减少ClpP与TR-81珠的结合。[2]
- 重组人ClpP肽酶活性测定：将纯化的重组人ClpP（1 μg/mL）在测定缓冲液（50 mM Tris，10 mM MgCl2，100 mM KCl，1 mM DTT，4 mM ATP，0.02% Triton X-100，5%甘油，pH 8.0）中与10 μM荧光底物Ac-WLA-AMC孵育。使用两种方案：方案1 – 通过直接混合酶、底物和化合物立即启动反应；方案2 – 在加入底物前将酶和化合物在37°C预孵育60分钟。监测荧光（激发350 nm，发射460 nm）。ONC201以剂量和时间依赖性方式增加ClpP肽酶活性。[2]
- ClpP蛋白酶活性测定（酪蛋白降解）：将重组ClpP在测定缓冲液中与DMSO或ONC201在37°C预孵育1小时，然后与5 μM α-酪蛋白再孵育一小时。反应产物通过12% SDS-PAGE分离并进行银染。ONC201增加酪蛋白水解，半数有效剂量约为1.25 μM。[2]

用 10 μM ONC201 或 DMSO 处理细胞 24 小时。
菌落形成测定[1]
将所指示的细胞系以每孔500个细胞进行铺板并使其粘附，然后第二天在新鲜的完全培养基中处理。治疗后3天，用无药物培养基代替培养基，细胞繁殖10天，每3天给予一次新鲜培养基。在10天周期结束时，将细胞在PBS中洗涤，用甲醇固定，用考马斯蓝染色，漂洗，并干燥以进行定量

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蛋白质印迹分析[1]
如前所述（41）用NuPAGE 4-12%双-三凝胶进行蛋白质印迹分析，并用SuperSignal West Femto和x射线胶片进行可视化。用NIH ImageJ进行密度测定。用细胞质裂解缓冲液（10mM Hepes、10mM KCl、2mM MgCl2、1mM二硫苏糖醇）制备细胞核和细胞质提取物，然后制备细胞核裂解缓冲液。对于所有裂解缓冲液，在使用前立即加入新鲜蛋白酶抑制剂和1mM原钒酸钠。

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细胞实验： - 细胞活力测定（刃天青法）：将SUM159细胞（1000个/孔）接种在96孔板中，贴壁过夜，然后用指定浓度的ONC201处理72小时。加入刃天青（0.6 mM，20 μL）并在37°C孵育30分钟。测量试卤灵的相对荧光（激发540-20，发射590-20）。使用GraphPad Prism 7计算IC50。[2]
- 总细胞计数（Hoechst染色）：将SUM159细胞（1000个/孔）接种在96孔板中，用ONC201处理，在指定时间点（0、24、48、72小时）吸去培养基，加入Hoechst染液（1 μg/mL）在37°C孵育30分钟。使用Celigo成像细胞仪定量总细胞数。[2]
- 结晶紫集落形成实验：将SUM159细胞（1000个/孔）接种在6孔板中，用ONC201处理48小时，然后更换为含或不含药物的新鲜培养基。孵育直至一个孔达到100%融合，用0.5%结晶紫（溶于20%甲醇）在室温下染色10分钟，冲洗并干燥。用Sorenson缓冲液（0.1 M柠檬酸钠，50%乙醇，pH 4.2）溶解染色液，在570 nm处测量吸光度进行定量。[2]
- 免疫印迹：将SUM159或MDA-MB-231细胞用化合物处理，用冷PBS冲洗，在补充有磷酸酶和蛋白酶抑制剂的RIPA缓冲液（不含SDS）中裂解。澄清裂解液，通过SDS-PAGE分离，转移到膜上，用一抗（ATF4、CHOP、β-肌动蛋白、TFAM、TUFM、ClpP）按1:1000稀释孵育，然后用二抗（1:10,000）孵育。用ECL试剂显影并成像。[2]
- siRNA反向转染：将siRNA储备液（20 μM）重悬。将Dharmafect I按1:266稀释于OptiMEM中，与siRNA混合（终浓度125 nM），室温孵育30分钟，加入板中。将SUM159细胞胰酶消化，重悬于含5% FBS、5 μg/mL胰岛素、1 μg/mL氢化可的松的DMEM:F12中，密度为1×10^5细胞/mL（6孔板）或1×10^4细胞/mL（96孔板），加入含siRNA的孔中，孵育24小时。通过免疫印迹验证ClpP敲低。[2]
- Caspase 3/7活性测定：将SUM159细胞（每6厘米培养皿8×10^5个细胞）用ONC201（300 nM、3 μM、30 μM）、DMSO（0.1%）或星形孢菌素（10 nM）处理24小时。将细胞刮入裂解缓冲液（50 mM HEPES pH 7.4，5 mM CHAPS，5 mM DTT）中，使用荧光肽底物（7-氨基-4-甲基香豆素）测量caspase活性。[2]
- 新生蛋白合成测定（35S代谢标记）：将SUM159细胞在无甲硫氨酸和半胱氨酸的培养基中用ONC201孵育15分钟，然后加入35S标记的甲硫氨酸/半胱氨酸（125 μCi）孵育30分钟。洗涤细胞，在RIPA缓冲液中裂解，通过Bradford法测定蛋白浓度。加入TCA（终浓度20%），将沉淀蛋白捕获在玻璃微纤维滤膜上，用20% TCA和100%乙醇洗涤，风干，用闪烁计数器定量放射性。结果以蛋白浓度标准化。[2]

雌性无胸腺裸鼠
25、50、100 mg/kg
腹腔注射/口服

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所有动物实验均按照宾夕法尼亚州立大学医学院机构动物护理和使用委员会的规定进行。对于皮下异种移植，将4至6周龄的雌性无胸腺裸鼠（查尔斯河实验室）每侧后腹部接种1 × 10⁶个指定细胞系（T98G细胞为2.5 × 10⁶个），细胞悬液为200 μl，1:1 Matrigel（BD）/PBS混合液。注射后，所有皮下肿瘤均培养1至4周，直至体积达到约125 mm³，然后开始治疗。[1]

吸收
多达维普隆最大浓度 (Cmax) 为 2.8 mcg/mL (42%)，总系统暴露量 (AUC) 为 23 小时 × mcg/mL (48%)。在 125 至 625 mg 的剂量范围内，多达维普隆的 Cmax 和 AUC 呈剂量比例增加。多达维普隆达到最大血浆浓度的中位时间 (Tmax) 为 1.4 小时（0.5 小时，5.6 小时）。与高脂餐（800 至 1000 卡路里，50% 脂肪）同服后，多达维普隆的 Cmax 下降了 40%，而 AUC 无变化。
消除途径
单次服用放射性标记的多达维普隆后，约 70% 的剂量从尿液中排出，20% 从粪便中排出，尿液或粪便中未检测到明显的未代谢的多达维普隆。
分布容积
多达维普隆表观（口服）分布容积为 450 L (40%)。体外血药浓度与血浆浓度的中位数为 0.67。多达维普隆可透过血脑屏障。
清除率
表观清除率约为 27 L/hr (48%)。
蛋白结合率
多达维普隆的血浆蛋白结合率为 95% 至 97%，且体外与浓度无关。
代谢/代谢物
多达维普隆主要由 CYP3A4 代谢，CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2D6 和 CYP3A5 的贡献较小。其代谢途径和代谢物尚未完全阐明。
生物半衰期
多达维普隆的平均终末半衰期为 11 小时（30%）。

疗效和安全性：疗效评估纳入了来自五项在美国开展的开放标签、非随机临床试验（ONC006 [NCT02525692]、ONC013 [NCT03295396]、ONC014 [NCT03416530]、ONC016 [NCT05392374] 和 ONC018 [NCT03134131]）的50例复发性H3 K27M突变型弥漫性中线胶质瘤成人和儿童患者。疗效评估人群包括接受单药多达韦隆治疗的H3 K27M突变型弥漫性中线胶质瘤患者，这些患者根据神经肿瘤学反应评估-高级别胶质瘤（RANO-HGG）标准，存在进展性且可测量的疾病。患者均已接受放疗至少90天，且既往抗癌治疗已充分清除，Karnofsky功能状态评分/Lansky功能状态评分（KPS/LPS）≥60分，糖皮质激素用量稳定或逐渐减少。弥漫性内生性脑桥胶质瘤、原发性脊髓肿瘤、非典型组织学类型或脑脊液播散的患者被排除在外。主要疗效指标为客观缓解率（ORR），由独立中心盲法审查（BICR）根据RANO 2.0标准进行评估，缓解持续时间（DOR）作为次要疗效指标。ORR为22%（95% CI：12，36），中位DOR为10.3个月（95% CI：7.3，15.2）。在11例达到客观缓解的患者中，73%的患者DOR≥6个月，27%的患者DOR≥12个月。多达韦罗酮的处方信息包括对过敏、QTc 间期延长和胚胎-胎儿毒性的警告和注意事项。

[1]. Sci Transl Med. 2013 Feb 6;5(171):171ra17.

[2]. ACS Chem Biol. 2019 May 17;14(5):1020-1029.

多达维普隆 (ONC-201) 正在进行临床试验 NCT03394027（ONC201 用于治疗复发/难治性转移性乳腺癌和晚期子宫内膜癌）。
多达维普隆是一种水溶性、口服生物利用度高的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 Akt（蛋白激酶 B）和细胞外信号调节激酶 (ERK) 抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。给药后，多达维普隆与 Akt 和 ERK 结合并抑制其活性，这可能导致磷脂酰肌醇 3-激酶 (PI3K)/Akt 信号转导通路以及丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK)/ERK 介导通路的抑制。这可能导致在AKT/ERK过表达的肿瘤细胞中，通过肿瘤坏死因子（TNF）相关凋亡诱导配体（TRAIL）/TRAIL死亡受体5型（DR5）信号通路诱导肿瘤细胞凋亡。PI3K/Akt信号通路和MAPK/ERK通路在多种肿瘤细胞类型中均上调，并通过抑制凋亡在肿瘤细胞增殖、分化和存活中发挥关键作用。此外，ONC201能够穿过血脑屏障。重组肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）是一种抗肿瘤蛋白，目前正处于临床试验阶段，有望成为一种潜在的抗癌疗法，但其药物特性存在一些限制疗效的缺陷，例如血清半衰期短、稳定性差、成本高以及生物分布不均，尤其是在脑组织中的分布。为了克服这些局限性，我们发现了TRAIL诱导化合物10 (TIC10)，这是一种高效、口服有效且稳定的小分子，能够以p53非依赖的方式转录诱导TRAIL，并能穿过血脑屏障。TIC10可诱导肿瘤细胞和正常细胞中TRAIL的持续上调，这可能是TIC10具有显著抗肿瘤活性的原因之一。TIC10可使激酶Akt和细胞外信号调节激酶(ERK)失活，从而导致Foxo3a易位至细胞核，并在细胞核内与TRAIL启动子结合，上调基因转录。TIC10是一种有效的抗肿瘤治疗药物，它作用于肿瘤细胞及其微环境，提高内源性肿瘤抑制因子TRAIL的浓度。[1]

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ONC201是一种首创的咪唑啉酮类分子，目前正在进行多种癌症的临床试验。尽管ONC201具有巨大的临床应用潜力，但其作用机制仍存在争议。为了研究ONC201的作用机制并筛选出效力更强的化合物，我们测试了一系列新型ONC201类似物（TR化合物）对乳腺癌和其他癌症模型中细胞活力和应激反应的影响。结果表明，TR化合物抑制细胞增殖和诱导整合应激反应蛋白ATF4的效力比ONC201高约50-100倍。利用固定化的TR化合物，我们通过质谱分析鉴定出人线粒体酪蛋白水解酶P（ClpP）是其特异性结合蛋白。亲和层析/药物竞争实验表明，TR化合物与ClpP的结合亲和力比ONC201高约10倍。重要的是，我们发现重组ClpP的肽酶活性可被ONC201和TR化合物以剂量和时间依赖的方式强烈激活，其中TR化合物的效力比ONC201高约10-100倍。此外，在SUM159细胞中，使用siRNA敲低ClpP可降低细胞对ONC201和TR化合物的反应，包括CHOP的诱导、线粒体蛋白（TFAM、TUFM）的丢失以及这些化合物的细胞抑制作用。因此，我们报道ClpP可直接结合ONC201及其相关TR化合物，并且是此类分子的重要生物靶点。此外，这些研究首次从生物化学角度解释了ONC201和TR化合物疗效差异的原因。 [2]

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药效学：多达韦普隆是一种具有抗肿瘤活性的药物：在基于细胞的试验和H3 K27M突变型弥漫性胶质瘤的体内模型中均显示出抗肿瘤活性。多达韦普隆可引起浓度依赖性的QTc间期延长。在最大推荐剂量的1.2倍时，估计的平均QTcF变化为11.8毫秒（90% CI：9.8，13.7）。多达韦普隆的暴露-反应关系和药效学反应的时间进程尚未完全阐明，因此其安全性和有效性尚不明确。

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作用机制：多达韦普隆是线粒体酪蛋白水解酶P（ClpP，一种线粒体丝氨酸蛋白酶）的蛋白酶激活剂。携带H3 K27M突变的弥漫性中线胶质瘤与H3 K27三甲基化的缺失有关。体外实验表明，多达韦普隆可诱导细胞凋亡并改变线粒体代谢，从而在H3 K27M突变型弥漫性胶质瘤模型中恢复组蛋白H3 K27三甲基化水平。多达韦普隆可激活ATF4并诱导内质网（ER）应激反应或整合应激反应（ISR）。此外，多达韦普隆还可抑制多巴胺D2受体，而多巴胺D2受体在包括胶质母细胞瘤在内的多种癌症中常过度表达。

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- ONC201（也称为TIC10）是一种首创的亚咪啶酮分子，最初从NCI化学库筛选中因其在HCT116人结肠癌细胞系中诱导TRAIL基因转录的能力而被发现。[2]
- ONC201在多种癌细胞系中显示出生长抑制作用，并在胶质母细胞瘤、结直肠癌、非霍奇金淋巴瘤和胰腺癌的动物模型中具有抗肿瘤活性（参见参考文献2的综述）。[2]
- 截至2019年，ONC201正在进行15项临床试验（ClinicalTrials.gov标识符：NCT02863991）。2018年，ONC201获得治疗成人复发性H3 K27M突变型高级别胶质瘤的快速通道认定。[2]
- 先前提出的作用机制（TRAIL诱导、Akt/ERK抑制、多巴胺受体靶向）存在争议；本研究确定线粒体ClpP是直接靶点。[2]
- 据报道，ONC201通过靶向线粒体和诱导整合应激反应（ISR）来杀伤乳腺癌细胞，表现为ATF4和CHOP的诱导，并且在Rho0细胞（线粒体功能受损的细胞）中无效。[2]

C24H26N4O

386.49

386.21

C, 74.58; H, 6.78; N, 14.50; O, 4.14

1616632-77-9

41276-02-2 (isomer);1616632-77-9;1638178-82-1 (HCl);1777785-71-3 (HBr);2007141-57-1 (2HBr);

73777259

White to off-white solid powder

1.2±0.1 g/cm3

559.7±60.0 °C at 760 mmHg

292.3±32.9 °C

0.0±1.5 mmHg at 25°C

1.672

3.14

39.2 Ų

0

3

4

29

693

0

O=C1C2C([H])([H])N(C([H])([H])C3C([H])=C([H])C([H])=C([H])C=3[H])C([H])([H])C([H])([H])C=2N2C([H])([H])C([H])([H])N=C2N1C([H])([H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H]

RSAQARAFWMUYLL-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C24H26N4O/c1-18-7-5-6-10-20(18)16-28-22-11-13-26(15-19-8-3-2-4-9-19)17-21(22)23(29)27-14-12-25-24(27)28/h2-10H,11-17H2,1H3

7-benzyl-4-(2-methylbenzyl)-1,2,6,7,8,9-hexahydroimidazo[1,2-a]pyrido[3,4-e]pyrimidin-5(4H)-one

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。