Akt; ERK; Human mitochondrial caseinolytic protease P (ClpP) was identified as a direct binding protein. ONC201 bound ClpP with approximately 10-fold lower affinity compared to TR compounds in competition assays. [3]

Human mitochondrial caseinolytic protease P (ClpP). Direct binding was demonstrated, and ONC201 activated ClpP peptidase and protease activity. [3]

ONC201/TIC10 是一种 TRAIL 基因的小分子诱导剂，目前正在研究其作为新型抗癌药物的潜力。本研究旨在鉴定 ONC201 敏感性的关键分子决定因素，这些因素有望作为药效学或预测性疗效的标志物。我们通过筛选激酶 siRNA 库，并结合亚细胞毒性剂量的 ONC201，鉴定出几种能够消除肿瘤细胞敏感性的激酶，其中包括 MAPK 通路诱导剂 KSR1。出乎意料的是，无论是否存在 ONC201，KSR1 的沉默均不影响 MAPK 信号通路，反而降低了抗凋亡蛋白 FLIP、Mcl-1、Bcl-2、cIAP1、cIAP2 和 survivin 的表达。与此同时，我们还进行了一项协同筛选，将 ONC201 与已获批准的小分子抗癌药物联合使用。在多种癌细胞群中，ONC201 与多种药物类别（包括多激酶抑制剂索拉非尼）具有协同作用。值得注意的是，ONC201 与索拉非尼联用可协同诱导 TRAIL 及其受体 DR5 的表达，并显著诱导细胞死亡 [1]。

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- ONC201 可抑制三阴性乳腺癌细胞 SUM159 和 MDA-MB-231 的增殖，经 72 小时处理后，其 IC50 值分别为 2.96 μM (SUM159) 和 4.20 μM (MDA-MB-231)（MTS 法）。[3]
- ONC201 以剂量和时间依赖的方式诱导 SUM159 和 MDA-MB-231 细胞中整合应激反应 (ISR) 标志物 ATF4 和 CHOP 的表达。ATF4 表达增加所需的浓度与抑制细胞生长的 IC50 值密切相关。 CHOP 诱导的峰值出现早于 ATF4。[3]
- ONC201 (10 μM，24 小时) 可增加野生型 SUM159 细胞中 CHOP 蛋白的水平，但这种作用在 ClpP 敲低细胞中消失。[3]
- ONC201 (10 μM，24 小时) 可降低 SUM159 细胞中线粒体蛋白 TFAM 和 TUFM 的水平；ClpP 敲低可阻止这种降低。[3]
- ONC201 处理 24 小时后，SUM159 细胞的总蛋白合成显著受到抑制 (>50%)，该抑制作用通过 35S-甲硫氨酸/半胱氨酸掺入法测定；ClpP 敲低可显著减弱这种抑制作用。 [3]
- ONC201（浓度高达 30 μM）并未显著增加 SUM159 细胞中 caspase 3/7 的活性（使用荧光底物 ACE-DEVD-AMC 检测）或 PARP 的裂解，表明在所测试的条件下，ONC201 的作用是细胞抑制而非凋亡诱导。星形孢菌素 (10 nM) 作为 caspase 激活的阳性对照。[3]
- ONC201（300 nM、3 μM、30 μM，处理 24 小时）并未在 SUM159 细胞中诱导显著的 caspase 活性。[3]
- 细胞计数实验证实，即使孵育 72 小时后，ONC201 处理也未使细胞总数低于初始接种值，这与细胞抑制作用一致。 [3]

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ONC201抑制了三阴性乳腺癌（TNBC）细胞系SUM159和MDA-MB-231的细胞增殖。TR化合物的效力显著高于ONC201，在这些细胞中，其IC50值比ONC201低约100倍（图1b）。[3]

ONC201诱导了整合应激反应（ISR），表现为SUM159和MDA-MB-231细胞中ATF4和CHOP蛋白的剂量和时间依赖性增加。增加ATF4所需的ONC201量与其生长抑制的IC50值密切相关。CHOP的诱导作用较弱，且峰值出现时间早于ATF4（图1e）。[3]

在相同条件下，ONC201增加了Erk和Akt的磷酸化水平（图S1）。 [3]

即使在测试的最高浓度下，ONC201 也未显著增加 SUM159 细胞中的 caspase 活性（通过荧光底物 ACE-DEVD-AMC 测定）或 PARP 裂解。细胞计数实验证实，ONC201 孵育 72 小时后，细胞总数并未低于初始值，表明其在这些细胞中的作用是细胞抑制而非 caspase 依赖性凋亡（图 1d，图 S1）。[3]

ONC201 降低了 SUM159 细胞中线粒体蛋白 TFAM 和 TUFM 的表达，而 siRNA 敲低 ClpP 可阻止这种降低（图 4a）。[3]

ONC201 处理 24 小时后，显著抑制了 SUM159 细胞的总蛋白合成（>50%），该抑制作用通过 35S 甲硫氨酸掺入法测定。敲除ClpP基因显著抑制了这种反应（图4b）。[3]

在肝细胞癌小鼠异种移植模型中，我们证实 ONC201 和索拉非尼能够协同且安全地诱导肿瘤消退。总体而言，我们的研究结果建立了一系列 ONC201 敏感性的决定因素，这些因素可能预测治疗反应，尤其是在与索拉非尼联合治疗以增强抗癌反应的情况下[1]。

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当 TIC10 和 TRAIL 均以多次给药方式给药时，它们在 HCT116 p53−/− 异种移植模型中均能达到相似的肿瘤消退程度。TIC10 还能诱导 MDA-MB-231 人三阴性乳腺癌异种移植模型的肿瘤消退，而 TRAIL 治疗的肿瘤则进展。在 DLD-1 结肠癌异种移植模型中，TIC10 在治疗一周后可诱导肿瘤停滞，而 TRAIL 治疗的肿瘤在单次给药后即进展。 SW480异种移植瘤在单次注射TIC10后也表现出持续消退，无论口服还是腹腔注射，均观察到此效果。这表明TIC10具有良好的口服生物利用度。TIC10通过TRAIL介导的直接效应和旁观者效应导致肿瘤特异性细胞死亡。TIC10是一种有效的抗原位人胶质母细胞瘤药物。[2]

siRNA激酶文库筛选[1]
将HCT116 p53−/−细胞以20,000个细胞/孔的密度接种于96孔板中。使用RNAiMax在Optimem培养基中将Stealth RNAi人激酶文库转染至细胞中。分别使用Scramble和AllStars Hs Cell Death Control siRNA作为阴性和阳性对照。转染过夜进行，次日移除转染培养基后，向孔中加入含有ONC201或DMSO的完全培养基。在指定时间点，按照制造商的说明进行CellTiterGlo分析。

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ChIP实验[2]
ChIP实验按照先前描述的方法进行，以TRAIL启动子为靶点，使用ChIP级Foxo3a抗体或等浓度的兔免疫球蛋白G作为非特异性对照。

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酶活性测定：- 亲和层析竞争实验：将HeLa细胞裂解液与溶剂（2% DMSO）或不同浓度的ONC201（本实验中未具体说明浓度）混合15分钟，然后与TR-80琼脂糖珠混合，并在室温下旋转孵育1小时。洗涤琼脂糖珠，用SDS上样缓冲液煮沸，进行SDS-PAGE电泳分离，并用ClpP抗体进行免疫印迹分析。当应用于细胞裂解液或活细胞时，ONC201以剂量依赖的方式降低ClpP与TR-81琼脂糖珠的结合。 [3]
- 重组人ClpP肽酶活性测定：将纯化的重组人ClpP（1 μg/mL）与10 μM荧光底物Ac-WLA-AMC在测定缓冲液（50 mM Tris、10 mM MgCl2、100 mM KCl、1 mM DTT、4 mM ATP、0.02% Triton X-100、5%甘油，pH 8.0）中孵育。采用两种方案：方案1——酶、底物和化合物直接混合，立即启动反应；方案2——酶和化合物在加入底物前于37°C预孵育60分钟。监测荧光强度（激发波长350 nm，发射波长460 nm）。ONC201以剂量和时间依赖的方式增加ClpP肽酶活性。 [3]
- ClpP蛋白酶活性测定（酪蛋白降解）：将重组ClpP蛋白在测定缓冲液中与DMSO或ONC201于37°C预孵育1小时，然后与5 μM α-酪蛋白继续孵育1小时。反应产物经12% SDS-PAGE分离，并用银染法染色。ONC201可增强酪蛋白的水解，半数最大浓度约为1.25 μM。[3]

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将重组人ClpP蛋白与ONC201或DMSO对照孵育，并使用荧光肽底物（Ac-WLA-AMC）测定肽酶活性。ONC201以剂量和时间依赖的方式显著增强ClpP肽酶活性（图3a）。ONC201对ClpP水解酪蛋白的半数最大浓度约为1.25 μM。在本实验中，重组ClpP与ONC201在37°C下预孵育1小时，然后在酪蛋白存在下于37°C继续孵育1小时。反应产物经SDS-PAGE分离，并用银染法染色（图3b）。[3]

在竞争性结合实验中，将TR-81磁珠（固定化ONC201类似物）与HeLa细胞裂解液混合，并加入递增浓度的ONC201。通过免疫印迹法检测与磁珠结合的ClpP量。无论与细胞裂解液混合（图2f,g）还是直接加入细胞培养基（图2h），ONC201均以剂量依赖的方式降低ClpP与TR-81磁珠的结合。[3]

小分子协同筛选[1]
\n使用Biomek 2000机器人，采用针状工具进行药物处理。将细胞以5×10⁴个/mL的密度接种于96孔黑色壁板中，12小时后进行处理。首先通过计算组合活性与单药活性之和的差值来评估组合活性。

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\n\n基于细胞的检测[1]
\n按照先前描述的方法进行Cell TiterGlo、Western blot分析和细胞周期流式细胞术分析。细胞表面TRAIL和DR5的检测方法如下：用4%多聚甲醛PBS溶液固定20分钟，PBS冲洗，与抗TRAIL或抗DR5抗体以1:200的比例孵育过夜，PBS冲洗，与荧光标记的二抗以1:250的比例孵育30分钟，然后进行流式细胞术分析。pERK的检测使用p-T202/Y204抗体（Cell Signaling公司），pAkt的检测使用p-T308抗体。\n

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\n细胞用10 μM ONC201或DMSO处理24小时。
\n克隆形成实验[2]
\n将指定的细胞系以每孔500个细胞的密度接种，使其贴壁，然后在第二天用新鲜的完全培养基处理。治疗3天后，将培养基更换为不含药物的培养基，细胞继续培养10天，每3天更换一次新鲜培养基。10天后，用PBS洗涤细胞，用甲醇固定，考马斯亮蓝染色，冲洗，干燥后进行定量分析。

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\n\nWestern blot分析[2]
\nWestern blot分析按照先前描述的方法进行，使用NuPAGE 4-12% Bis-Tris凝胶，并用SuperSignal West Femto和X光胶片显影。密度分析使用NIH ImageJ软件进行。使用细胞质裂解缓冲液（10 mM Hepes、10 mM KCl、2 mM MgCl2、1 mM 二硫苏糖醇）制备核提取物和细胞质提取物，随后使用核裂解缓冲液（20 mM Hepes、420 mM NaCl、1.5 mM MgCl2、250 μM EDTA、25% 甘油）制备核提取物。所有裂解缓冲液均在使用前立即加入新鲜的蛋白酶抑制剂和 1 mM 原钒酸钠。\n

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\n- 细胞活力（刃天青法）：将 SUM159 细胞（1000 个细胞/孔）接种于 96 孔板中，过夜使其贴壁，然后用指定浓度的 ONC201 处理 72 小时。加入刃天青（0.6 mM，20 μL），并在 37°C 下孵育 30 分钟。测定了试卤灵的相对荧光强度（激发波长 540 nm，发射波长 590 nm）。IC50 值使用 GraphPad Prism 7 软件计算。[3]
\n- 总细胞计数（Hoechst 染色）：将 SUM159 细胞（1000 个细胞/孔）接种于 96 孔板中，用 ONC201 处理，并在指定时间点（0、24、48、72 小时）吸出培养基，加入 Hoechst 染料（1 μg/mL），于 37°C 孵育 30 分钟。使用 Celigo 成像细胞仪对总细胞数进行定量。[3]
\n- 结晶紫克隆形成实验：将 SUM159 细胞（1000 个细胞/孔）接种于 6 孔板中，用 ONC201 处理 48 小时，然后更换新鲜培养基，其中部分培养基含有药物。将细胞培养至其中一个孔达到 100% 汇合度，用 0.5% 结晶紫（溶于 20% 甲醇）在室温下染色 10 分钟，冲洗并干燥。用 Sorenson 缓冲液（0.1 M 柠檬酸钠，50% 乙醇，pH 4.2）溶解染色液，并在 570 nm 处测量吸光度，从而定量染色。[3]
\n- 免疫印迹：用化合物处理 SUM159 或 MDA-MB-231 细胞，用冰冷的 PBS 冲洗，在添加了磷酸酶和蛋白酶抑制剂的 RIPA 缓冲液（不含 SDS）中裂解细胞。裂解液经澄清后，通过SDS-PAGE电泳分离，转移至膜上，并用稀释度为1:1000的一抗（ATF4、CHOP、β-actin、TFAM、TUFM、ClpP）进行孵育，随后用稀释度为1:10000的二抗进行孵育。印迹用ECL试剂显色并成像。[3]
\n- siRNA反向转染：将siRNA原液（20 μM）重悬。将Dharmafect I用OptiMEM稀释1:266，与siRNA（终浓度125 nM）混合，室温孵育30分钟，然后加入孔板。将SUM159细胞用胰蛋白酶消化，重悬于含5% FBS、5 μg/mL胰岛素和1 μg/mL氢化可的松的DMEM:F12培养基中，细胞浓度为1×10^5个/mL（6孔板）或1×10^4个/mL（96孔板），加入到含有siRNA的孔中，孵育24小时。通过免疫印迹法验证ClpP敲低。[3]
\n- Caspase 3/7活性测定：将SUM159细胞（每6 cm培养皿8×10^5个细胞）用ONC201（300 nM、3 μM、30 μM）、DMSO（0.1%）或星形孢菌素（10 nM）处理24小时。将细胞刮入裂解缓冲液（50 mM HEPES pH 7.4、5 mM CHAPS、5 mM DTT）中，并使用荧光肽底物（7-氨基-4-甲基香豆素）测定 caspase 活性。[3]
\n- 新生蛋白合成测定（³⁵S 代谢标记）：将 SUM159 细胞在不含甲硫氨酸和半胱氨酸的培养基中与 ONC201 孵育 15 分钟，然后加入 ³⁵S 标记的甲硫氨酸/半胱氨酸（125 μCi）孵育 30 分钟。洗涤细胞，用 RIPA 缓冲液裂解，并通过 Bradford 法测定蛋白浓度。加入 TCA（终浓度 20%），将沉淀的蛋白收集在玻璃微纤维滤膜上，用 20% TCA 和 100% 乙醇洗涤，风干，并通过闪烁计数法定量放射性。结果根据蛋白浓度进行标准化。 [3]
\n

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将SUM159和MDA-MB-231人三阴性乳腺癌(TNBC)细胞在5% CO2和37°C的适宜培养基中培养。将细胞与ONC201孵育24-72小时。[3]

使用刃天青法测定细胞活力：将细胞（1000个/孔）接种于96孔板中，用ONC201处理72小时，然后加入20 μL刃天青（0.6 mM），并在37°C孵育30分钟。测量刃天青的荧光强度。使用DMSO（溶剂）作为阴性对照。使用 GraphPad Prism 7 生成剂量依赖性曲线和 IC50 计算。[3]

总细胞计数：将 SUM159 细胞（1000 个/孔）用 ONC201 处理。在 0、24、48 或 72 小时，吸出培养基，加入 100 μL Hoechst 染料（1 μg/mL），于 37°C 孵育 30 分钟。使用 Celigo 成像细胞仪定量细胞总数。[3]

结晶紫克隆形成实验：将 SUM159 细胞（1000 个/孔）接种于 6 孔板中，用 ONC201 处理 48 小时，然后更换新鲜培养基，其中部分培养基含药。将细胞培养至对照孔达到 100% 汇合度，然后用 0.5% 结晶紫（溶于 20% 甲醇）在室温下染色 10 分钟，冲洗并干燥。将染料溶解于 Sorenson 缓冲液中，并在 570 nm 处测量吸光度。[3]

免疫印迹：用 ONC201 处理细胞，用冰冷的 PBS 冲洗，并在添加了磷酸酶和蛋白酶抑制剂的 RIPA 缓冲液（不含 SDS）中裂解。澄清裂解液后，用针对 ATF4、CHOP、β-actin、TFAM、TUFM 和 ClpP 的一抗进行免疫印迹。将膜与稀释 1:1000 的一抗（溶于 5% BSA 或脱脂奶粉）孵育。 [3] 蛋白质合成测定：将 SUM159 细胞用 ONC201 处理 24 小时，然后用 35S-甲硫氨酸孵育 30 分钟。裂解细胞，用 20% 三氯乙酸沉淀蛋白质，过滤，并通过闪烁计数法定量放射性。结果根据蛋白质浓度进行标准化。[3]

6周龄无胸腺裸鼠购自Charles River Laboratories公司。将10⁷个HepG2细胞悬浮于200 µL（1:1，PBS:Matrigel）中，注射到每只裸鼠的后侧腹部。一周后评估可测量的肿瘤大小。随后根据指示开始治疗。索拉非尼和ONC201均以100 µL溶液的形式通过灌胃给药。ONC201在索拉非尼给药12小时后给药。使用数字游标卡尺测量肿瘤体积，并计算球体体积。每周两次评估肿瘤大小和体重。免疫组化（IHC，Vector Labs）和TUNEL（Millipore）分析按先前描述的方法进行[1]。

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对于皮下异种移植，将4至6周龄的雌性无胸腺nu/nu小鼠（查尔斯河实验室）每侧后腹部接种1 × 10⁶个指定细胞系（T98G细胞为2.5 × 10⁶个），细胞悬液为200 μl，由1:1 Matrigel（BD）/PBS混合而成。所有皮下肿瘤均在注射后培养1至4周，直至体积达到约125 mm³，之后开始治疗。[2]

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吸收
达维尼隆的最大浓度 (Cmax) 为 2.8 mcg/mL (42%)，总系统暴露量 (AUC) 为 23 h × mcg/mL (48%)。在 125 至 625 mg 的剂量范围内，达维尼隆的 Cmax 和 AUC 均呈剂量比例增加。达维尼隆达到最大血浆浓度 (Tmax) 的中位时间为 1.4 小时（0.5 小时，5.6 小时）。与高脂餐（800 至 1000 卡路里，50% 脂肪）同服可使达维尼隆的 Cmax 降低 40%，而 AUC 保持不变。
消除途径
单次服用放射性标记的达维尼隆后，约 70% 的剂量经尿液排出，20% 经粪便排出。尿液或粪便中未检测到明显的未代谢的dodavelnipron。
分布容积
dodavelnipron的表观（口服）分布容积为450 L（40%）。体外血浆浓度中位数为0.67。dodavelnipron可穿过血脑屏障。
清除率
表观清除率约为27 L/hr（48%）。
蛋白结合率
dodavelnipron的血浆蛋白结合率为95%至97%，且体外与浓度无关。
代谢物
dodavelnipron主要由CYP3A4代谢，CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2D6和CYP3A5的贡献较小。其代谢途径和代谢物尚未完全阐明。
生物半衰期
dodavepron 的平均终末半衰期为 11 小时（30%）。

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疗效和安全性：本研究全面评估了来自美国开展的五项开放标签、非随机临床试验（ONC006 [NCT02525692]、ONC013 [NCT03295396]、ONC014 [NCT03416530]、ONC016 [NCT05392374] 和 ONC018 [NCT03134131]）的50例复发性H3 K27M突变型弥漫性中线胶质瘤成人和儿童患者的治疗疗效。疗效评估人群包括接受多维曲酮单药治疗且根据神经肿瘤反应评估-高级别胶质瘤（RANO-HGG）标准诊断为可测量疾病进展的H3 K27M突变型弥漫性中线胶质瘤患者。所有患者均接受过至少90天的放疗，既往抗癌治疗后肿瘤已充分清除，Karnofsky功能状态评分（KPS）/Lansky功能状态评分（LPS）≥60分，且糖皮质激素剂量稳定或逐渐降低。弥漫性内睑胶质瘤、原发性脊髓肿瘤、非典型组织学类型或脑脊液播散的患者被排除在外。主要疗效终点为客观缓解率（ORR），由独立中心盲法审查（BICR）根据RANO 2.0标准进行评估；次要疗效终点为缓解持续时间（DOR）。ORR为22%（95% CI：12，36），中位DOR为10.3个月（95% CI：7.3，15.2）。在11例达到客观缓解的患者中，73%的患者缓解持续时间（DOR）≥6个月，27%的患者DOR≥12个月。多达韦酮的处方信息包括关于过敏、QTc间期延长和胚胎-胎儿毒性的警告和注意事项。

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在SUM159细胞中，即使在测试的最高浓度下，ONC201也未增加caspase活性或PARP裂解，细胞计数显示，ONC201在72小时后并未使细胞总数低于初始值，表明在这些条件下ONC201的作用是细胞抑制而非细胞毒性。[3]

[1]. Cancer Res.2015 Apr 15;75(8):1668-74;
[2]. Sci Transl Med.2013 Feb 6;5(171):171ra17.

[3]. ACS Chem Biol. 2019 May 17;14(5):1020-1029.

ONC201/TIC10 是一种 TRAIL 基因的小分子诱导剂，其作为新型抗癌药物的潜力目前正在研究中。本研究旨在鉴定 ONC201 敏感性的关键分子决定因素，这些因素有望作为药效学或预测疗效的生物标志物。通过筛选激酶 siRNA 文库并将其与亚细胞毒性剂量的 ONC201 联合使用，我们鉴定出几种能够消除肿瘤细胞敏感性的激酶，包括 MAPK 通路诱导剂 KSR1。出乎意料的是，无论是否存在 ONC201，沉默 KSR1 均不影响 MAPK 信号通路；相反，它降低了抗凋亡蛋白 FLIP、Mcl-1、Bcl-2、cIAP1、cIAP2 和 survivin 的表达。同时，我们进行了协同筛选，将 ONC201 与已批准的小分子抗癌药物联合使用。在多种癌细胞群中，ONC201 与包括多激酶抑制剂索拉非尼在内的多种药物类别均表现出协同效应。值得注意的是，ONC201 与索拉非尼联合用药可协同诱导 TRAIL 及其受体 DR5 的表达，并强效诱导细胞死亡。在肝细胞癌小鼠异种移植模型中，我们证实 ONC201 与索拉非尼可协同且安全地诱导肿瘤消退。总而言之，我们的研究结果揭示了 ONC201 敏感性的多个决定因素，这些因素可能预测治疗反应，尤其是在与索拉非尼联合用药时，可增强抗癌疗效。 [1] 重组肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）是一种抗肿瘤蛋白，目前正在进行临床试验，有望成为一种抗癌疗法。然而，其药效学特性存在一些局限性，例如血清半衰期短、稳定性差、成本高以及生物分布不均（尤其是在脑部）。为了克服这些局限性，我们发现了一种高效、口服有效且稳定的小分子化合物——TRAIL诱导化合物10（TIC10）。TIC10能够以p53非依赖的方式诱导TRAIL表达，并能穿过血脑屏障。TIC10能够诱导肿瘤细胞和正常细胞中TRAIL的持续上调，这可能是其具有显著抗肿瘤活性的原因之一。 TIC10 可抑制 Akt 激酶和细胞外信号调节激酶 (ERK) 的活性，从而促进 Foxo3a 转位至细胞核并与核内 TRAIL 启动子结合，进而上调基因转录。TIC10 是一种有效的抗肿瘤治疗药物，它作用于肿瘤细胞及其微环境，提高内源性肿瘤抑制因子 TRAIL 的浓度。[2] 药效学：Dodaviron 是一种抗肿瘤药物，在基于细胞的试验和 H3 K27M 突变型弥漫性胶质瘤的体内模型中均显示出抗肿瘤活性。Dodaviron 可引起浓度依赖性的 QTc 间期延长。在最大推荐剂量的 1.2 倍时，QTcF 的平均变化估计为 11.8 ms（90% CI：9.8，13.7）。多达韦隆的暴露-反应关系和药效学反应时间线尚未完全阐明，因此其安全性和有效性仍不明确。作用机制：多达韦隆是线粒体酪蛋白水解酶P（ClpP，一种线粒体丝氨酸蛋白酶）的蛋白酶激活剂。携带H3 K27M突变的弥漫性中线胶质瘤与H3 K27三甲基化的缺失相关。体外实验表明，多达韦隆可以诱导细胞凋亡并改变线粒体代谢，从而在H3 K27M突变型弥漫性胶质瘤模型中恢复组蛋白H3 K27的三甲基化水平。多达韦隆可以激活ATF4并诱导内质网（ER）应激或整合应激反应（ISR）。此外，多达韦隆可以抑制多巴胺D2受体，而多巴胺D2受体在包括胶质母细胞瘤在内的多种癌症中经常过度表达。\n

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\n- ONC201（也称为TIC10）是一种首创的咪唑啉酮类化合物，最初是通过美国国家癌症研究所（NCI）化学库筛选发现的，其具有诱导HCT116人结肠癌细胞中TRAIL基因转录的能力。[3]
\n- ONC201已在多种癌细胞系中显示出生长抑制作用，并在胶质母细胞瘤、结直肠癌、非霍奇金淋巴瘤和胰腺癌的动物模型中显示出抗肿瘤活性（详见参考文献2）。[3]
\n- 截至2019年，ONC201已开展15项临床试验（ClinicalTrials.gov注册号：NCT02863991）。 2018年，ONC201被授予快速通道资格，用于治疗成人复发性H3 K27M突变型高级别胶质瘤。[3]
\n- 先前提出的机制（TRAIL诱导、Akt/ERK抑制、多巴胺受体靶向）存在争议；本研究确定线粒体ClpP是其直接靶点。[3]
\n- 据报道，ONC201通过靶向线粒体并诱导整合应激反应（ISR）（包括ATF4和CHOP诱导）来杀死乳腺癌细胞，但对Rho0细胞（线粒体功能受损的细胞）无效。[3]
\n

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C24H28CL2N4O

459.411323547363

458.164

C, 62.75; H, 6.14; Cl, 15.43; N, 12.20; O, 3.48

1638178-82-1

41276-02-2 (isomer);1616632-77-9;1638178-82-1 (HCl);1777785-71-3 (HBr); 2007141-57-1 (2HBr);

121596510

Solid powder

39.2Ų

2

3

4

31

693

0

Cl.Cl.O=C1C2CN(CC3C=CC=CC=3)CCC=2N2CCN=C2N1CC1C=CC=CC=1C

HKBXPCQCBQFDML-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C24H26N4O.2ClH/c1-18-7-5-6-10-20(18)16-28-23(29)21-17-26(15-19-8-3-2-4-9-19)13-11-22(21)27-14-12-25-24(27)28/h2-10H,11-17H2,1H32*1H

7-benzyl-4-(2-methylbenzyl)-1,2,6,7,8,9-hexahydroimidazo[1,2-a]pyrido[3,4-e]pyrimidin-5(4H)-one dihydrochloride

ONC-201 Dihydrochloride, ONC-201 HCl, ONC201; ONC 201 ONC-201; NSC350625; NSC-350625; NSC 350625; ONC-201 Dihydrochloride; 1638178-82-1; ONC201 HCl; 53VG71J90J; 7-Benzyl-4-(2-methylbenzyl)-2,4,6,7,8,9-hexahydroimidazo[1,2-a]pyrido[3,4-e]pyrimidin-5(1H)-one dihydrochloride; 11-benzyl-7-[(2-methylphenyl)methyl]-2,5,7,11-tetrazatricyclo[7.4.0.02,6]trideca-1(9),5-dien-8-one;dihydrochloride; Imidazo(1,2-a)pyrido(3,4-E)pyrimidin-5(1H)-one, 2,4,6,7,8,9-hexahydro-4-((2-methylphenyl)methyl)-7-(phenylmethyl)-, hydrochloride (1:2); Imidazo[1,2-a]pyrido[3,4-e]pyrimidin-5(1H)-one, 2,4,6,7,8,9-hexahydro-4-[(2-methylphenyl)methyl]-7-(phenylmethyl)-, hydrochloride (1:2); imipridone; TIC10; TIC 10; Dordaviprone; TIC-10 TRAIL inducing compound 10.

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO; > 10 mM

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。