TM-5007

PAI-1/Plasminogen activator (IC50 = 29 μM)

体外评估[1]
我们购买或合成了28种通过虚拟筛选发现的候选化合物，并通过三种不同的检测方法在体外测试了它们的生物活性。通过肽底物的tPA依赖性水解来测量PAI-1活性的抑制。两种最有效的候选化合物，N，N′-双（3,3′-羧基-4,4′-苯基-2,2′-噻吩基）己二甲酰胺（TM5001）和N，N’-双[3,3′-羧-4,4’-。TM5001和TM5007与TM5001共享一个共同的绑定模式，如图1所示。这表明它们的活性具有类似的分子机制。TM5001和TM5007（高达250μmol/L）均未修饰其他丝氨酸蛋白酶/丝氨酸蛋白酶系统（即α1-抗胰蛋白酶/胰蛋白酶和α2-抗纤溶酶/纤溶酶）：因此，它们的PAI-1抑制活性表现出特异性（请参见补充图二）。
在SDS-PAGE上，PAI-1与tPA形成共价复合物，而当PAI-1与我们的化合物预孵育时，没有观察到PAI-1/tPA复合物的形成（如图2中的TM5007所示）。
最后，在纤维蛋白板上测试了纤维蛋白溶解的抑制作用（以TM5007为例）。PAI-1可减少tPA诱导的纤溶面积。PAI-1与我们的化合物预孵育可以防止这种影响（请参见补充图三）。

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用HeLa细胞评估TM5001和TM5007的细胞毒性，作为培养24小时后释放到培养基中的LDH活性。结果以所有细胞裂解诱导的LDH释放百分比表示。TM5001（100μmol/L）和TM5007（250μmol/L）没有显著提高未刺激对照组的最大LDH活性（分别为30.8±7.1和26.6±2.2%，而对照组为23.8±1.6%；P=0.077和0.137）[1]。

体内评估[1]
TM5007被选为进一步研究的对象，因为它被证明比TM5001更有效。通过称量大鼠房室分流模型中获得的血块来评估其体内抗凝效果（表）。给予300mg/kgTM5007的大鼠的血栓重量（54.8±0.8mg）明显低于赋形剂治疗的大鼠（74.3±3.2mg）（P<0.01）。当TM5007的血浆浓度为5.2±0.7μmol/L时，这种效果与华法林（1.2 mg/kg）和噻氯匹啶（500 mg/kg）相当，优于tPA（275000 IU/kg）。TM5007显著降低了PAI-1活性（在赋形剂处理的大鼠中为0.8±0.1和1.0±0.1 ng/mL），但其他药物没有降低，而APTT和PT没有改变（表）。

还评估了经FeCl3处理的小鼠睾丸动脉中TM5007的抗凝效果。血栓的生长，随后进行三维成像，导致载体治疗的小鼠在12.7±2.7分钟内完全动脉闭塞（n=29），而TM5007治疗的小鼠仅在56.3±8.9分钟内完全闭塞（n=15，与对照组相比P<0.01）。当TM5007血浆浓度为4.6±0.6μmol/L时，可以获得这种效果。替罗非班也有类似的效果（58±12.4分钟；n=5，与对照组相比P<0.01）。

在博莱霉素诱导的肺纤维化小鼠模型中测试了TM5007的体内抗纤维化作用。博莱霉素显著增加了肺羟脯氨酸含量，高于对照组小鼠（232.9±8.5对140.2±4.8μg/肺，P<0.001）。TM5007显著降低了博莱霉素诱导的肺羟脯氨酸含量（204.2±9.5μg/肺，P<0.05）。博莱霉素使血浆PAI-1活性高于对照组小鼠（1.7±0.2对0.8±0.1 ng/mL，P<0.001）。TM5007在9.2±0.2μmol/L的血浆浓度下显著降低了博莱霉素诱导的PAI-1升高（1.2±0.1 ng/mL，P<0.05）。TM5007显著改善了肺纤维化的组织学证据（图3A至3C）。Azan染色揭示了博莱霉素治疗的肺部胶原蛋白的积聚（图3D至3F）。博莱霉素使纤维化评分高于对照组（4.7±0.37对0.5±0.17，P<0.001），TM5007部分阻止了这一升高（2.9±0.38，P<0.01），与血浆PAI-1活性的结果一致。

PAI-1活性测定[1]
PAI-1活性通过两种不同的方法进行评估。为了筛选我们的化学文库中的PAI-1抑制活性，我们使用了一种利用t-PA合成底物的生物测定法。简而言之，在96孔聚苯乙烯板中，在有或没有测试化合物的情况下，将人PAI-1在含有100 mM Tris-HCl、pH 8、0.1%吐温80的反应缓冲液中在37°C下孵育15分钟。随后将混合物与人tPA一起孵育15分钟，并最终用发色底物S-2288 强化。最终混合物含有100 mM Tris-HCl、pH 8、30 mM NaCl、1%DMSO、0.1%吐温80、67 nM PAI-1、9.8 nM tPA、1 mM S-2288，以及不同浓度（20、35、50和100μM）的受试化合物。用分光光度计在405nm下监测肽切割过程中对硝基苯胺释放的动力学。PAI-1的残余抑制活性以初始活性的百分比表示。通过合成底物的显色分析，还评估了受试化合物在其他丝氨酸蛋白酶/丝氨酸蛋白酶系统（即α1-抗胰蛋白酶/胰蛋白酶和α2-抗纤溶酶/纤溶酶）中的抑制活性。
通过ELISA试剂盒测定大鼠和小鼠柠檬酸盐血液样本中的PAI-1活性：血浆中存在的功能活性PAI-1分子与涂有微量滴定板并干燥的tPA（大鼠）或uPA（小鼠）反应。在这些ELISA中，非活性PAI-1分子，如潜在的或复合的PAI-1，不会与板结合，因此不会被检测到。PAI-1活性表示为活性物质的质量。

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纤溶活性测定[1]
根据Matsuo等人的方法评估了受试化合物对纤溶的影响。简而言之，将溶解在0.2ml生理盐水中的凝血酶（10NIH U/ml）与9ml含有25mM巴比妥钠、50mM NaCl和25mM CaCl2的纤维蛋白原（1.5mg/ml）溶液在9cm平板中混合。将平板在室温下保持2小时，用于纤溶测定。将含有100 mM Tris-HCl、pH 8、30 mM NaCl、1%DMSO、0.1%吐温80、87 nM PAI-1、18 nM tPA和受试化合物（4、16.5、65和260μM）的溶液轻轻点在平板上。在室温下反应18小时后，测量纤维蛋白溶解面积。

细胞毒性试验[1]
在受试化合物（50-250μM）存在下，HeLa细胞在Dulbecco's MEM中培养24小时。细胞毒性通过使用试剂盒（Promega，Madison，WI）测量乳酸脱氢酶（LDH）的释放来确定，并表示为所有培养细胞冻融溶解后释放的总LDH的百分比。

动静脉分流模型[1]
采用先前描述的方法²³在雄性CD大鼠中建立动静脉（AV）分流血栓形成模型。研究前，分别灌胃给予TM5007（300 mg/kg）、华法林（1.2 mg/kg）或噻氯匹定（500 mg/kg），均悬浮于0.5%羧甲基纤维素钠（CMC）溶液中，或静脉推注tPA（275000 IU/kg）（每组n=7）。对照组大鼠仅给予0.5% CMC溶液（n=7）。血液在分流管内循环30分钟。最后测量覆盖丝线的血栓湿重。

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氯化铁诱导血栓模型及血栓可视化[1]
雄性小鼠腹腔注射12 mL/kg氯胺酮-赛拉嗪麻醉。静脉注射罗丹明6G（0.1 mL，0.1%）。小心暴露睾丸动脉（直径100～150 μm）进行氯化铁（FeCl3）处理。将浸有0.25 mol/L FeCl3溶液的棉线（直径0.2 mm）敷于睾丸动脉外膜表面。5分钟后，用生理盐水替换伤口处的棉线。随后，使用配备压电马达控制单元的超快激光共聚焦显微镜，通过三维成像监测睾丸动脉中的血栓形成，如前所述²⁴。测量了从 FeCl₃ 造成内皮损伤到大血栓阻塞睾丸动脉的时间。小鼠预先接受灌胃治疗，灌胃给予 TM5007（200 mg/kg），每日两次，连续 4 天。抗血小板糖蛋白 (GP) IIb/IIIa 药物替罗非班（0.13 mg/kg，Wako）在损伤前单次静脉注射给药。

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博来霉素诱导的肺纤维化[1]
体重 19 至 21 g 的雄性 C57BL/6J（CLEA Japan Inc.）小鼠用腹腔注射戊巴比妥麻醉，并通过颈部切口暴露气管。十只动物作为对照组。十只动物接受气管内滴注博来霉素（溶于生理盐水，1.5 U/kg），另十只动物在此基础上，灌胃给予TM5007（200 mg/kg，溶于0.5%羧甲基纤维素钠溶液），每日两次，持续14天。取肺组织进行组织学分析和羟脯氨酸含量测定。采用Kivirikko等人的方法²⁵测定组织水解物中的羟脯氨酸含量。组织切片经苏木精-伊红染色后，采用先前描述的方法²⁶对肺纤维化程度进行0至8分评分。同时采用阿藏染色法检测胶原蛋白。

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啮齿动物毒性[1]
为评估急性毒性，将TM5001和TM5007（500、1000、1500和2000 mg/kg）单次灌胃给予ICR小鼠。两周后，对每只小鼠进行解剖，并评估各器官。为评估亚急性毒性，将两种不同剂量的TM5007（300 mg/kg/天，持续1周；或2000 mg/kg/天，持续2周）每日灌胃给予雄性Wistar大鼠。研究结束时，评估了出血试验、活化部分凝血酶原时间 (APTT)、凝血酶原时间 (PT) 和凝血试验 (TT)，以及血糖、总胆固醇、甘油三酯、AST、ALT、肌酐、尿素氮、总蛋白、白蛋白、血红蛋白、红细胞和血细胞比容水平。同时测量了血压和体重，并进行了尿液分析。药代动力学[1]
将TM5001和TM5007（50 mg/kg）灌胃给予雄性Wistar大鼠。分别于给药前（0 h）和给药后1、2、6、18、24 h和7天从静脉采集肝素化血样。采用反相高效液相色谱法测定血浆药物浓度。计算了最大药物浓度时间（Tmax）、最大药物浓度（Cmax）和药物半衰期（T1/2）。

对大鼠分别口服 50 mg/kg 的两种化合物，计算其血浆 Tmax、Cmax 和 T1/2。TM5001 的 Tmax、Cmax 和 T1/2 分别为 18 小时、32 μmol/L 和 54 小时，TM5007 的 Tmax、Cmax 和 T1/2 分别为 18 小时、8.8 μmol/L 和 124 小时。[1]

在小鼠体内评估了TM5001和TM5007的急性毒性。两种化合物单次给药剂量高达2000 mg/kg，两周内均未引起任何症状。在大鼠体内评估了TM5007的亚急性毒性，每日给予两种不同剂量（300 mg/kg/d，持续1周；或2000 mg/kg/d，持续2周）。血压和体重均未发生改变。血浆和尿液生化指标，包括出血时间、APTT、PT、TT和红细胞计数，均未见异常（详见补充表格）。[1]

[1]. Inhibition of plasminogen activator inhibitor-1: its mechanism and effectiveness on coagulation and fibrosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2008 Apr;28(4):672-7.

目的：丝氨酸蛋白酶抑制剂（丝氨酸蛋白酶抑制剂，serpin）在凝血、纤溶、恶性肿瘤和炎症等多种病理过程中发挥着核心作用。抑制丝氨酸蛋白酶抑制剂可能具有治疗潜力。然而，迄今为止，已报道的小分子丝氨酸蛋白酶抑制剂非常少。我们首次应用虚拟筛选的新方法，发现新型口服活性小分子丝氨酸蛋白酶抑制剂，并报道其疗效。
方法和结果：我们重点研究了一种具有重要临床意义的丝氨酸蛋白酶抑制剂——纤溶酶原激活物抑制剂-1 (PAI-1)，其晶体结构已被解析。我们筛选出一些新型口服活性分子，这些分子能够作为模拟化合物进入PAI-1 Aβ折叠的第4链位置（s4A）。体外实验表明，这些分子能够特异性抑制PAI-1活性并增强纤溶活性。在体内，最有效的分子（TM5007）在两种模型中均能抑制凝血：大鼠动静脉（AV）分流模型和氯化铁诱导的小鼠睾丸动脉血栓模型。它还能阻止博来霉素在小鼠肺部引发的纤维化过程。
结论：本研究证实了新型PAI-1抑制剂在体外和体内的有益作用。我们的方法被证明是获得有效丝氨酸蛋白酶抑制剂的有效工具。[1]

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基于虚拟筛选和PAI-1与其抑制肽复合物的三维结构，我们鉴定了两种新型的、口服生物利用度高的小分子PAI-1抑制剂TM5001和TM5007。体外实验表明，这两种抑制剂均稳定、无毒且无细胞毒性，因为它们不能提高培养的HeLa细胞培养基中的LDH水平。在小鼠体内单次给予高达 2000 mg/kg 的剂量，或在大鼠体内分别给予 300 mg/kg 剂量连续 1 周或 2000 mg/kg 剂量连续 2 周，均证实无急性或亚急性毒性。TM5007 在急性血管血栓形成或慢性肺纤维化动物模型中均显示出体内有效性，且未对血压或出血产生有害影响，这与先前在 PAI-1 缺陷小鼠和人体中的研究结果高度一致。
通过使用合成底物的显色测定法，进一步证实了 TM5007 对 PAI-I 作用的特异性在其他丝氨酸蛋白酶抑制剂/丝氨酸蛋白酶系统（例如，α1-抗胰蛋白酶/胰蛋白酶和 α2-抗纤溶酶/纤溶酶）中也得到了验证。在浓度为 250 μmol/L 时，TM5007 对任何密切相关的丝氨酸蛋白酶抑制剂或丝氨酸蛋白酶均无抑制活性。该浓度约为体外研究中 TM5007 对 PAI-1 的 IC50 值 (29 μmol/L) 的 10 倍，约为小鼠和大鼠体内该化合物血浆峰浓度 (5 至 10 μmol/L) 的 25 至 50 倍。因此，TM5007 的活性似乎对 PAI-I 具有特异性。
所有已知的 PAI-I 抑制剂均已证实具有抑制血栓形成的作用，无论是在体外还是在急性血栓模型中。相比之下，仅在血管紧张素II诱导的高血压小鼠模型中，替普拉西汀才显示出对后续组织重塑的延迟效应。¹¹ 我们证实，TM5007 是一种强效抗血栓药物，不会延长出血时间、凝血酶原时间 (PT) 和活化部分凝血酶时间 (APTT)。其在 300 mg/kg 剂量下的疗效与华法林 (1.2 mg/kg) 和噻氯匹定 (500 mg/kg) 相当，且优于 tPA (275000 IU/kg)。
在 FeCl₃ 诱导的睾丸动脉血栓小鼠模型中，也证实了 TM5007 的抗血栓作用。口服TM5007（200 mg/kg，每日两次，连续4天）的预处理与单次静脉注射抗血小板药物替罗非班（0.13 mg/kg）的疗效相当。
值得注意的是，体外计算的TM5007对PAI-1的IC50值（29.2 μmol/L）高于小鼠和大鼠体内观察到的该化合物的血浆峰浓度（5至10 μmol/L）。这种差异可能反映了实验系统的差异。在体外，PAI-1抑制作用是直接测量的。相比之下，在体内，其对血栓形成的影响较为复杂，因为它涉及除PAI-1/tPA以外的多种因素。
在本研究中，我们首次证明PAI-I抑制可以阻止博来霉素在肺部引发的纤维化过程。 Eitzman等人研究了PAI-1基因过表达或缺失的小鼠，证实了PAI-1表达与肺组织胶原蛋白积累之间存在很强的相关性。⁹ TM5007对肺纤维化的抑制作用表明，PAI-1并非纤维化的替代标志物，而是其主要病因。这一发现具有潜在的重要意义。纤维化改变确实与包括心脏、血管、肝脏和肾脏在内的多个器官功能衰竭相关。预防纤维化改变可能改变多种疾病的预后，例如心血管疾病、肝硬化、肾脏疾病和放射损伤。
一些小分子PAI-I抑制剂是通过对化合物库进行效率较低的高通量筛选（HTS）发现的。^3-5 Gerlatova等人证实，tiplaxtinin的结合表位与先前鉴定的玻连蛋白相互作用位点相邻，从而提示该药物的抗丝氨酸蛋白酶抑制剂活性是由PAI-I与玻连蛋白之间的相互作用介导的。相比之下，我们重点研究了s4A位点作为PAI-I抑制的靶位点。我们的分子对接模拟表明，TM5001和TM5007优先结合该位点，提示我们的化合物通过阻断s4A位点发挥抑制活性。SDS-PAGE电泳结果显示，当PAI-1与我们的化合物预孵育后，确实未观察到PAI-1/tPA复合物的形成（图2）。因此，结果表明，我们化合物的抑制机制与tiplaxtinin的抑制机制并不相同。有趣的是，尽管tiplaxtinin和ZK4044的化学结构完全不同，但在我们的分子对接模拟中，它们都可能与s4A位点结合，这与Gerlatova等人³⁰之前的假设（tiplaxtinin通过多种机制抑制PAI-1）非常吻合。总而言之，这些发现证实了s4A位点作为PAI-1抑制靶位点的关键作用。
利用PAI-1的三维结构，不仅有助于理解导致PAI-1抑制的分子事件，还有助于对用于临床的新型抑制剂进行虚拟筛选。它们的潜在应用包括血栓性疾病（动脉和静脉）、纤维化疾病、淀粉样变性、肥胖症和2型糖尿病。特异性抑制剂的出现也将为研究PAI-1在这些过程中的作用提供一种潜在的重要药理学工具。
最后，阐明其他丝氨酸蛋白酶抑制剂的三维结构并结合虚拟筛选，将有助于发现其他小分子丝氨酸蛋白酶抑制剂，从而减轻其有害作用。[1]

C24H20N2O6S4

560.68540096283

560.02

C, 51.41; H, 3.60; N, 5.00; O, 17.12; S, 22.87

342595-05-5

4199057

Typically exists as solid at room temperature

1.5±0.1 g/cm3

800.4±65.0 °C at 760 mmHg

437.8±34.3 °C

0.0±3.0 mmHg at 25°C

1.730

4.96

246

4

10

11

36

766

0

C(NC1SC=C(C2SC=CC=2)C=1C(O)=O)(=O)CCCCC(NC1SC=C(C2SC=CC=2)C=1C(O)=O)=O

USLUSWIVVBUXLU-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C24H20N2O6S4/c27-17(25-21-19(23(29)30)13(11-35-21)15-5-3-9-33-15)7-1-2-8-18(28)26-22-20(24(31)32)14(12-36-22)16-6-4-10-34-16/h3-6,9-12H,1-2,7-8H2,(H,25,27)(H,26,28)(H,29,30)(H,31,32)

2-[[6-[(3-carboxy-4-thiophen-2-ylthiophen-2-yl)amino]-6-oxohexanoyl]amino]-4-thiophen-2-ylthiophene-3-carboxylic acid

TM5007; 342595-05-5; 2-[[6-[(3-carboxy-4-thiophen-2-ylthiophen-2-yl)amino]-6-oxohexanoyl]amino]-4-thiophen-2-ylthiophene-3-carboxylic acid; SCHEMBL1798341; EX-A4825; SNA59505; STK400044;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。