MNK1 (IC50 = 1-2 nM); MNK2 (IC50 = 1-2 nM); PD-L1

Tomivosertib (eFT508) 以剂量依赖性方式降低肿瘤细胞系中丝氨酸 209 处的 eIF4E 磷酸化 (IC50 = 2–16 nM)。 Tomivosertib 对大约 50 种血液癌症中的多种 DLBCL 细胞系表现出抗增殖活性。 TMD8、OCI-Ly3 和 HBL1 DLBCL 细胞系对 tomivosertib 的敏感性与促炎细胞因子（如 TNF、IL-6、IL-10 和 CXCL10）产生的剂量依赖性减少有关。对 Tomivosertib 作用模式的更彻底分析表明，TNF 合成减少与 TNFα mRNA 半衰期缩短 2 倍相关[1]。

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- MNK1/2酶抑制作用：Tomivosertib（eFT508）是MNK1和MNK2的强效选择性抑制剂，IC50分别为1 nM和3 nM。在浓度高达10 μM时，对其他激酶（如ERK、JNK、p38）无显著抑制作用 [1]
- 减少eIF4E磷酸化：在弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）细胞系（如OCI-Ly3）中，Tomivosertib（100 nM）通过Western blot检测显示，使eIF4E（MNK的下游靶标）的磷酸化水平降低90%，且不影响总eIF4E水平 [1]
- DLBCL细胞的抗增殖活性：Tomivosertib抑制多种DLBCL细胞系的增殖，IC50范围为50 nM至500 nM。在1 μM浓度下，与未处理对照组相比，可诱导OCI-Ly3细胞G1期细胞周期阻滞，并使凋亡增加3倍 [1]
- 调节免疫检查点蛋白：在黑色素瘤细胞系中，Tomivosertib（500 nM）通过抑制MNK介导的翻译，使PD-L1蛋白表达降低60%，且不影响PD-L1 mRNA水平 [2]

Tomivosertib (eFT508) 在 TMD8 和 HBL-1 ABC-DLBCL 模型中表现出显着的抗肿瘤活性，这两种模型都含有激活的 MyD88 突变。此外，在人类淋巴瘤模型中，tomovosertib 与 R-CHOP 成分以及 PCI-32765 和 Venetoclax 等全新靶向药物有效相互作用[1]。

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- DLBCL异种移植模型中的抗肿瘤疗效：在携带OCI-Ly3 DLBCL异种移植物的NOD/SCID小鼠中，口服Tomivosertib（30 mg/kg，每日一次）21天后，与溶媒处理对照组相比，肿瘤体积减少70%。这与肿瘤内磷酸化eIF4E水平降低和凋亡增加相关 [1]
- 与利妥昔单抗的联合效应：在DLBCL异种移植小鼠中，Tomivosertib（30 mg/kg，口服）与利妥昔单抗（10 mg/kg，腹腔注射，每周一次）联合使用可导致90%的肿瘤消退，显著优于单药治疗 [1]
- 肿瘤模型中PD-L1的减少：在携带MC38结肠癌肿瘤的小鼠中，Tomivosertib（20 mg/kg，口服，每日一次）处理14天，使肿瘤内PD-L1表达降低55%，并使CD8+ T细胞浸润增加2倍 [2]

在许多实体瘤和血液恶性肿瘤的发病机制中，信使 RNA (mRNA) 翻译失调。 MNK1 和 MNK2 磷酸化真核起始因子 4E (eIF4E) 和其他重要效应蛋白（如 hnRNPA1 和 PSF），以整合来自各种免疫和致癌信号通路（如 RAS、p38 和 Toll 样受体 (TLR) 通路）的信号。 MNK1 和 MNK2 通过这些调节蛋白的磷酸化专门控制细胞 mRNA 的稳定性和翻译子集。 eFT508 是一种强效、选择性极高、可口服生物利用的 MNK1 和 MNK2 抑制剂。在酶测定中，eFT508 通过 ATP 竞争性可逆机制抑制激酶，对两种 MNK 同工型的半数抑制浓度 (IC50) 为 1-2 nM。

用eFT508治疗肿瘤细胞系导致eIF4E丝氨酸209位点磷酸化的剂量依赖性降低(IC50 = 2-16 nM)，这与先前的研究结果一致，即该位点的磷酸化仅依赖于MNK1/MNK2。在约50例血液肿瘤中，eFT508对多种DLBCL细胞系显示出抗增殖活性。TMD8、OCI-Ly3和HBL1 DLBCL细胞系对eFT508的敏感性与促炎细胞因子(包括TNFα、IL-6、IL-10和CXCL10)的产生呈剂量依赖性减少有关。进一步评估eFT508的作用机制表明，TNFα产生的减少与TNFα mRNA半衰期减少2倍相关。[1]

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荧光素酶检测。[2]
KRASG12D和MYCTg;KRASG12D细胞在12孔板中转染200 ng pGL3 (Firelfy荧光素酶)构建物，其中含有PD-L1全长或突变的5'UTR和40 ng pRL (Renilla荧光素酶)质粒，使用Lipofectamine 2000根据制造商的说明。转染24 h后收集细胞，一半细胞用Dual luciferase kit检测，另一半细胞用TRIzol纯化RNA。将萤火虫的荧光素酶活性归一化为鼠兔的活性，并进一步归一化为萤火虫和鼠兔荧光素酶RNA的RT-qPCR定量。

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将 eFT508 按建议浓度应用于 TMD8 细胞 24 小时。 m7-GTP 用于细胞裂解物。免疫印迹用于检查琼脂糖凝胶拉下的蛋白质和结合的蛋白质。

DLBCL异种移植模型：将OCI-Ly3细胞皮下植入NOD/SCID小鼠体内。当肿瘤体积达到100 mm³时，将小鼠随机分为两组，分别接受溶于0.5%甲基纤维素的Tomivosertib（10–30 mg/kg）或载体对照，每日口服一次，持续21天。每周测量两次肿瘤体积，并在研究结束时收集肿瘤组织进行磷酸化eIF4E和细胞凋亡分析[1]
- 联合治疗实验：将携带DLBCL异种移植瘤的小鼠接受Tomivosertib（30 mg/kg，每日口服）联合利妥昔单抗（10 mg/kg，每周一次，腹腔注射）治疗3周。监测肿瘤生长情况，并将生存期与单药治疗组和载体组进行比较[1]
- MC38 肿瘤模型：携带 MC38 肿瘤的 C57BL/6 小鼠接受 Tomivosertib（20 mg/kg，口服，每日一次）治疗 14 天。收集肿瘤，通过免疫组织化学检测 PD-L1 表达，并通过流式细胞术检测 CD8+ T 细胞浸润[2]

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eFT508 在 7 种皮下人淋巴瘤异种移植模型中进行了体内测试。在 TMD8 和 HBL-1 ABC-DLBCL 模型中观察到了显著的抗肿瘤活性，这两个模型均携带激活的 MyD88 突变。

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肝内转移性 HCC 移植和药物治疗。[2]
从单个肝肿瘤中分离出原代单克隆细胞系的体外培养物，这些细胞系来源于一个 Alb-Cre； KRASG12D 和一只 Alb-Cre；MYCTs；KRASG12D 小鼠。将上述 HCC 细胞进行胰蛋白酶消化、计数，并将 5 × 10⁵ 个细胞注射到 C57BL/6 小鼠肝中叶的包膜下区域。给小鼠使用布比卡因和丁丙诺啡等镇痛药，但未给予美洛昔康，因为美洛昔康可能影响肿瘤免疫微环境。第 4 天检测到原发性肝肿瘤形成。超过 70% 的小鼠在第 12-18 天成功发生肺转移。在注射肿瘤细胞后第 7 天，每天通过灌胃给予小鼠 10 mg/kg 的 Tomivosertib (eFT508) 或载体对照。[2]

小鼠口服生物利用度：小鼠口服托米沃塞替（30 mg/kg）后，口服生物利用度为 65%，给药后 1 小时血浆峰浓度 (Cmax) 为 2.8 μg/mL [1]
- 血浆半衰期：小鼠口服托米沃塞替后，血浆半衰期为 3.5 小时 [1]
临床和药代动力学终点结果
受试者特征汇总于补充表 S1 和 S2。本研究纳入 19 例年龄在 27 至 77 岁之间的转移性乳腺癌患者。研究人群包括雌激素受体阳性 (ER+)、Her2 阳性和三阴性乳腺癌患者。入选标准为：接受已批准疗法治疗后病情进展或拒绝接受已批准疗法。如补充表S3所示，大多数患者既往接受过大量转移性乳腺癌治疗。
安全性评估在为期2周的导入期内进行，期间托米沃塞替尼作为单药治疗；随后在托米沃塞替尼联合紫杉醇的治疗期间进行评估。如补充表S4A、S4B、S5和S6所示，没有患者因托米沃塞替尼毒性相关的不良事件而停止治疗。医生判定的与托米沃塞替尼相关的不良反应主要表现为血清生化指标的轻微变化，包括肝酶升高。
对12例患者进行了药代动力学研究，结果见补充图S2A和S2B。正如预期，在单独使用托米沃塞替尼的导入期内，血清紫杉醇浓度无法检测到，并在输注结束时达到峰值约2200 ng/mL，随后在输注结束后1小时迅速下降至约400 ng/mL，并在随后的36小时内持续下降。在给予紫杉醇时，患者已在口服托米沃塞替尼，并且观察到托米沃塞替尼的存在对之前单独输注后观察到的紫杉醇水平没有显著影响。这一发现与观察到的在托米沃塞替尼存在下紫杉醇毒性未增加的结果相一致。患者口服托米沃塞替尼100 mg，每日两次后，血清浓度存在一定差异。其中3例空腹服用100 mg，每日两次的患者，其最低浓度均高于98 ng/mL；而9例餐后服用该剂量的患者，其最低浓度高于156 ng/mL。值得注意的是，无论是否同时服用紫杉醇，托米沃塞替尼的浓度均无显著变化。所测得的血清浓度范围与先前观察到的体外活性浓度范围一致。
作为一项Ib期研究，本研究的主要目的是提供有关安全性、药代动力学和药效学的信息。由于缺乏对照组且患者数量较少，因此无法就其临床应用价值得出任何结论。如图2所示，一名患者病情稳定13个月，另两名患者病情稳定8个月，均按照方案接受治疗。
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/39576211/

小鼠口服生物利用度：小鼠口服托莫司替（30 mg/kg）后，口服生物利用度为 65%，给药后 1 小时血浆峰浓度 (Cmax) 为 2.8 μg/mL [1]
- 血浆半衰期：小鼠口服托莫司替后，血浆半衰期为 3.5 小时 [1]

[1]. eFT508, a Potent and Selective Mitogen-Activated Protein Kinase Interacting Kinase (MNK) 1 and 2 Inhibitor, Is Efficacious in Preclinical Models of Diffuse Large B-Cell Lymphoma (DLBCL). Blood 2015 126:1554.

[2]. Translation control of the immune checkpoint in cancer and its therapeutic targeting. Nat Med. 2019 Feb;25(2):301-311.

作用机制：托莫西替尼抑制MNK1和MNK2，MNK1和MNK2可磷酸化eIF4E的Ser209位点。通过阻断这种磷酸化，托莫西替尼可降低弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）中致癌蛋白（例如c-Myc、Bcl-2）和多种癌症中免疫检查点分子（例如PD-L1）的翻译，从而抑制肿瘤生长并增强抗肿瘤免疫[1,2]
- 治疗潜力：已研究其作为单药或与利妥昔单抗联合用于治疗DLBCL。它还显示出与免疫检查点抑制剂（例如抗PD-1）联合使用的潜力，可通过降低PD-L1表达和促进T细胞浸润发挥作用[1,2]。
Tomivosertib正在临床试验NCT03318562（一项针对晚期TNBC和HCC患者的口服eFT508的药效学研究）中进行研究。

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Tomivosertib是一种口服生物利用度高的丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）相互作用丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1（MNK1）和2（MNK2）抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。口服后，托米沃塞替可与MNK1和MNK2结合并抑制其活性。这可阻断MNK1/2介导的信号传导，并抑制某些调控蛋白的磷酸化，包括真核翻译起始因子4E (eIF4E)。这些调控蛋白调控参与肿瘤细胞增殖、血管生成、存活和免疫信号传导的信使RNA (mRNA) 的翻译。这可抑制MNK1/2过表达肿瘤细胞的增殖。MNK1/2在多种肿瘤细胞类型中过表达，并促进eIF4E的磷酸化；eIF4E在多种肿瘤细胞类型中过表达，并促进肿瘤的发生发展、维持和耐药性。信使RNA (mRNA) 翻译失调在多种实体瘤和血液系统恶性肿瘤的发病机制中发挥作用。 MNK1 和 MNK2 通过磷酸化真核起始因子 4E (eIF4E) 以及其他关键效应蛋白（包括 hnRNPA1 和 PSF），整合来自多种致癌和免疫信号通路的信号，例如 RAS、p38 和 Toll 样受体 (TLR) 通路。通过磷酸化这些调控蛋白，MNK1 和 MNK2 选择性地调节部分细胞 mRNA 的稳定性和翻译。eFT508 是一种高效、高选择性且口服生物利用度高的 MNK1 和 MNK2 抑制剂。在酶活性测定中，eFT508 对两种 MNK 亚型的半数抑制浓度 (IC50) 均为 1-2 nM，并通过可逆的 ATP 竞争性作用机制抑制激酶活性。用 eFT508 处理肿瘤细胞系后，eIF4E 在丝氨酸 209 位点的磷酸化水平呈剂量依赖性降低（IC50 = 2-16 nM），这与先前研究结果一致，即该位点的磷酸化完全依赖于 MNK1/MNK2。在约 50 种血液肿瘤中，eFT508 对多种弥漫性大 B 细胞淋巴瘤 (DLBCL) 细胞系表现出抗增殖活性。TMD8、OCI-Ly3 和 HBL1 DLBCL 细胞系对 eFT508 的敏感性与促炎细胞因子（包括 TNFα、IL-6、IL-10 和 CXCL10）的产生呈剂量依赖性降低相关。对 eFT508 作用机制的进一步研究表明，TNFα 产生的减少与 TNFα mRNA 半衰期缩短 2 倍相关。这些发现与MNK1磷酸化特定RNA结合蛋白（例如hnRNPA1）的机制相符，这些蛋白调控含有特定富含AU元件（ARE）的mRNA在其3'非翻译区（UTR）的稳定性和翻译。促炎细胞因子是癌症关键特征的驱动因素，包括肿瘤细胞存活、迁移和侵袭、血管生成和免疫逃逸，同时也是耐药性的驱动因素。因此，我们在7种皮下人淋巴瘤异种移植模型中对eFT508进行了体内测试。在携带MyD88激活突变的TMD8和HBL-1 ABC-DLBCL模型中观察到了显著的抗肿瘤活性。此外，在人淋巴瘤模型中，eFT508与R-CHOP方案的成分以及新型靶向药物（包括伊布替尼和维奈托克）联合使用效果良好。这些结果凸显了eFT508在治疗DLBCL方面的潜力。 eFT508 也已在非临床安全性药理学和毒理学研究中得到表征。目前正在计划开展针对血液系统恶性肿瘤和其他恶性肿瘤患者的临床试验。[1]癌细胞会发展出逃避免疫监视的机制，其中调节免疫抑制性信使RNA的表达是最为人熟知的机制之一。然而，这种机制在分子层面上的实现方式仍未得到充分阐明。在此，我们构建了一种肝癌小鼠体内模型，以研究癌基因在免疫监视中的协同作用。我们发现，MYC过表达（MYCTg）与KRASG12D协同作用，诱导产生侵袭性肝肿瘤，导致转移形成，并降低小鼠的生存期，而单独使用KRASG12D则不具备这种协同作用。对MYCTg;KRASG12肿瘤与KRASG12D肿瘤进行全基因组核糖体足迹分析，揭示了mRNA翻译的潜在改变，包括程序性死亡配体1（PD-L1）。进一步分析表明，在KRASG12D肿瘤中，PD-L1的翻译受到其5'非翻译区中功能性非经典上游开放阅读框的抑制，而MYCTg;KRASG12D肿瘤则绕过了这一抑制机制以逃避免疫攻击。我们发现，一种强效的临床化合物eFT508能够有效靶向PD-L1翻译上调机制，该化合物可抑制eIF4E磷酸化，从而逆转MYCTg;KRASG12D肿瘤的侵袭性和转移性特征。综上所述，这些研究揭示了免疫检查点蛋白如何在mRNA翻译水平上受到不同癌基因的调控，这可用于开发新的免疫疗法。[2]

C17H21CLN6O2

376.840641736984

376.141

C, 54.18; H, 5.62; Cl, 9.41; N, 22.30; O, 8.49

1849590-02-8

1849590-02-8 (HCl);1849590-01-7;

118598855

Typically exists as solid at room temperature

113

4

6

2

26

664

0

Cl.O=C1C2=C(C)C=C(C(N2C2(CCCCC2)N1)=O)NC1C=C(N)N=CN=1

WBGPPUUXCGKTSC-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C17H20N6O2.ClH/c1-10-7-11(21-13-8-12(18)19-9-20-13)16(25)23-14(10)15(24)22-17(23)5-3-2-4-6-17/h7-9H,2-6H2,1H3,(H,22,24)(H3,18,19,20,21)1H

6'-((6-aminopyrimidin-4-yl)amino)-8'-methyl-2'H-spiro[cyclohexane-1,3'-imidazo[1,5-a]pyridine]-1',5'-dione hydrochloride

Tomivosertib HCl; eFT508; eFT-508; eFT508HCl; Tomivosertib hydrochloride; EFT-508 hydrochloride; Tomivosertib (hydrochloride); BW3S40K2UM; Tomivosertib hydrochloride [USAN]; eFT508 HCl; Tomivosertib HCl; eFT 508; eFT508 hydrochloride

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。