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| 5g |
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| 靶点 |
Triacylglycerol (TG) lipases hydrolyze triacylglycerol to diacylglycerol and free fatty acids. The major TG lipases in murine white adipose tissue (WAT) are adipose triglyceride lipase (ATGL) and hormone-sensitive lipase (HSL). The HSL-specific inhibitor 76-0079 (NNC 0076-0000-0079) was used to differentiate between these activities. [1]
In rat liver, alkaline triacylglycerol lipase activity (pH 7.5) is associated with the plasma membrane and released by heparin. [2] In yeast, Tgl4 is a major TG lipase and a functional ortholog of murine ATGL, activated by cyclin-dependent kinase 1 (Cdk1/Cdc28)-dependent phosphorylation at threonine 675 and serine 890. [3] Triacylglycerol lipase targets triacylglycerol substrates, hydrolyzing the ester bonds to release fatty acids and glycerol. The enzyme does not have a specific receptor target but functions as a catalyst in lipid metabolism. It is widely distributed in the plant world, molds, bacteria, milk and milk products, and in animal tissues, especially in the pancreas. The enzyme's activity is essential for the digestion and metabolism of dietary fats. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
在小鼠白色脂肪组织（WAT）胞质制备物中，HSL特异性抑制剂76-0079（5 μM）降低了野生型和ATGL敲除（ATGL-ko）WAT中的甘油三酯水解酶活性，但对HSL敲除（HSL-ko）WAT无影响，表明其对HSL具有特异性。ATGL和HSL的联合抑制（使用ATGL-ko胞质制备物加76-0079）导致甘油三酯水解酶活性降低95%以上。[1]
ATGL的共激活因子CGI-58分别将野生型和HSL-ko WAT胞质制备物中的甘油三酯水解酶活性提高了1.7倍和2.1倍，但对ATGL-ko WAT无影响，表明ATGL是CGI-58的唯一靶点。 [1] 在大鼠肝匀浆中，碱性甘油三酯脂肪酶活性在 pH 7.5 时达到最佳，在底物浓度 >3 mM 时，线性关系可维持约 20 分钟。未检测到二-或单-[1-¹⁴C]油酰甘油的显著积累，表明三酰甘油的降解速率受限于第一个酯键的水解。[2] 在酵母中，Tgl4 脂肪酶活性受 Cdk1/Cdc28 依赖性磷酸化的刺激。磷酸化位点突变（苏氨酸 675 和丝氨酸 890 突变为丙氨酸）可使体内脂肪分解活性降低高达 90%，而突变为谷氨酸（模拟组成型磷酸化）则导致高脂肪分解活性，且不受 Cdk1 抑制。 [3] 三酰甘油脂肪酶催化三酰甘油水解为甘油和游离脂肪酸。该酶优先水解三酰甘油的外链，且仅在水-脂界面发挥作用。它广泛应用于各种工业领域，包括食品工业中用于奶酪和乳制品制造、烘焙以及食用油和脂肪的生产等工艺。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在小鼠白色脂肪组织（WAT）器官培养中，与野生型相比，HSL敲除（HSL-ko）小鼠WAT中福斯克林刺激的游离脂肪酸（FFA）释放量降低了38%，ATGL敲除（ATGL-ko）小鼠WAT中降低了70%。HSL抑制剂76-0079（25 μM）使野生型小鼠WAT中福斯克林刺激的FFA释放量降低了68%，ATGL-ko小鼠WAT中降低了94%。在HSL-ko小鼠WAT中，76-0079没有影响。[1]
在链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠中，24小时时肝脏碱性甘油三酯脂肪酶的比活性降至正常值的39%，并在72小时和7天时仍保持较低水平。慢性胰岛素治疗（每隔16小时皮下注射10 U/kg鱼精蛋白锌胰岛素，共4次）使正常大鼠的总脂肪酶活性增加40%，糖尿病大鼠的总脂肪酶活性增加至正常值的155%。停用胰岛素32小时后，脂肪酶活性降至正常水平的65%。饥饿24小时也显著降低了脂肪酶活性（为对照组的35%）。急性胰岛素（35 U/kg，90分钟）或胰高血糖素（1 mg/kg，30分钟）对肝碱性脂肪酶活性无影响。[2] 在酵母中，Tgl4的磷酸化和脂肪分解在细胞周期的G1期晚期最为活跃，与芽的形成相吻合。缺乏TG脂肪分解的tgl3 tgl4双突变体表现出芽形成延迟（延迟约30分钟）和进入S期延迟。在塞鲁宁（一种脂肪酸从头合成抑制剂）存在的情况下，tgl3 tgl4突变体的芽形成被阻断，但在野生型细胞中则不受影响。 [3] 在体内，三酰甘油脂肪酶是一种催化膳食脂肪消化的酶，有助于甘油三酯的消化。它存在于胰腺和其他组织中，在脂质代谢中发挥着关键作用。该酶也用于食品和生物技术生产过程中甘油三酯的水解。由于它是一种酶，而非治疗药物，因此不适用特定的体内疗效研究。 |
| 酶活实验 |
TG水解酶活性测定（小鼠）：将含有三油酸甘油酯和[9,10-³H]三油酸甘油酯的底物与磷脂酰胆碱/磷脂酰肌醇乳化。取胞质组分（0.1 mL）与0.1 mL底物（167 nmol三油酸甘油酯/测定，8000 cpm/nmol）于37°C孵育60分钟。反应用甲醇/氯仿/庚烷（10:9:7）和碳酸钾/硼酸缓冲液（pH 10.5）终止。上层溶液的放射性通过液体闪烁计数法测定。[1]
脂肪酶活性测定（大鼠肝脏）：将三[1-¹⁴C]油酰甘油与5%阿拉伯胶乳化。测定混合物（1 mL）包含 10 mg 低脂肪酸牛血清白蛋白、3.2 μmol 三油酰甘油（含 0.08 μCi 三[1-¹⁴C]油酰甘油）和肝蛋白，溶于 0.10 M 磷酸钾缓冲液（含 1 mM EDTA，pH 7.5）。孵育温度为 37°C，孵育时间为 10-40 分钟。[¹⁴C]油酸的释放量通过液体闪烁计数法测定。[2] 三酰甘油脂肪酶的体外酶活性测定通常涉及甘油三酯水解的测定。将酶与甘油三酯底物（例如三油酸甘油酯或三丁酸甘油酯）在生理 pH 值和温度下的缓冲液中孵育。通过滴定或比色法测定游离脂肪酸的释放量。酶活性以每毫克蛋白质的单位表示。该测定在水-脂界面进行。 |
| 细胞实验 |
小鼠白色脂肪组织器官培养：将性腺脂肪垫（约20 mg）置于含2%无脂肪酸BSA的DMEM培养基中，分别添加或不添加10 μM福斯克林和/或HSL抑制剂76-0079，于37°C孵育1小时。然后将组织转移至新鲜培养基中继续孵育60分钟。取部分培养基，使用商业试剂盒分析游离脂肪酸（FFA）和甘油含量。[1]
酵母细胞培养与分析：将酵母细胞（野生型、tgl3、tgl4、tgl3 tgl4突变体）培养至稳定期，并通过RediGrad梯度离心或α因子阻滞法进行同步化。为进行脂肪分解分析，将细胞置于含40 μg/mL塞鲁宁的新鲜培养基中，以抑制脂肪酸从头合成。采用脂质提取和薄层色谱法（TLC）分析甘油三酯（TG）含量。细胞周期分析中，芽的形成通过显微镜观察，DNA含量通过流式细胞术（FACS）测定。Tgl4磷酸化水平通过蛋白质沉淀后在6% SDS-PAGE凝胶上进行免疫印迹分析来评估。[3] 由于三酰甘油脂肪酶是一种酶而非小分子药物，因此其体外细胞活性测定方法并不常见。该酶可用于细胞培养研究中水解培养基中的甘油三酯。细胞裂解液或培养上清液中的脂肪酶活性可使用荧光底物或比色底物进行测定。测定前，需将该酶溶解于合适的缓冲液中。 |
| 动物实验 |
大鼠糖尿病研究：成年雄性Sprague-Dawley大鼠（250-300 g）经心脏注射链脲佐菌素（100 mg/kg）。慢性胰岛素治疗组大鼠每隔16小时皮下注射10 U/kg鱼精蛋白锌胰岛素，共注射4次，末次注射后16-18小时处死。急性胰岛素治疗组大鼠在处死前90分钟腹腔注射常规胰岛素（35 U/kg）。胰高血糖素治疗组大鼠在处死前30分钟经心脏注射胰高血糖素（1 mg/kg）。取出肝脏，匀浆后测定碱性甘油三酯脂肪酶活性。测定血浆葡萄糖、脂肪酸和甘油三酯水平。[2]
由于甘油三酯脂肪酶是一种酶而非治疗剂，因此不适用于体内动物研究。该酶在动物体内内源性产生，并在脂质消化和代谢中发挥作用。研究可能包括测量组织中的脂肪酶活性或使用脂肪酶抑制剂来研究脂质代谢。该酶并非设计用于治疗用途。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
三酰甘油脂肪酶的EC编号为232-619-9，消光系数为E1%280 = 13.3。该酶存在于多种生物体中，广泛分布于自然界。储存条件因来源和制剂而异。该酶通常储存在2-8°C或-20°C。本酶不适用详细的药代动力学参数。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
三酰甘油脂肪酶是一种通常被认为可安全用于食品和工业用途的酶。该酶不适用于治疗用途。处理酶制剂时应采取适当的安全预防措施。由于三酰甘油脂肪酶是一种天然存在的蛋白质，因此不适用标准的毒性评估方法。
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
ATGL 和 HSL 是小鼠白色脂肪组织中主要的甘油三酯 (TG) 脂肪酶，二者合计占 TG 水解酶活性的 95% 以上。ATGL 主要负责 TG 的初始水解，生成二酰甘油 (DG)，而 HSL 则高效地将 DG 降解为单酰甘油 (MG) 和游离脂肪酸 (FFA)。[1] 在大鼠肝脏中，糖尿病和饥饿会降低碱性 TG 脂肪酶活性，而长期胰岛素治疗会提高其活性，但对胰岛素或胰高血糖素的急性反应并不明显。该活性似乎与血浆游离脂肪酸浓度呈负相关。[2] 在酵母中，Tgl4 脂肪酶活性在细胞周期中受 Cdk1/Cdc28 依赖性磷酸化调控，为芽形成过程中的膜合成提供脂肪酸和脂质前体。这表明细胞周期调控激酶与 TG 降解之间存在直接联系。 [3]
三酰甘油脂肪酶（CAS 9001-62-1）是一种催化三酰甘油水解为二酰甘油，进而水解为单酰甘油和游离脂肪酸的酶。它也被称为脂肪酶、三酰甘油酰基水解酶和三酰甘油脂肪酶。该酶存在于多种生物体中，并广泛应用于食品工业。它在水-脂界面发挥作用，优先水解三酰甘油的外链。 |
| 精确质量 |
238.059
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|---|---|
| CAS号 |
9001-62-1
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| PubChem CID |
135534490
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| tPSA |
78.1
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 可旋转键数目(RBC) |
2
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| 重原子数目 |
17
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| 分子复杂度/Complexity |
247
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
C1=CC=NC(=C1)N=NC2=C(C=C(C=C2)O)O.[Na+]
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| InChi Key |
KZRPHCQLJZXMJV-UHFFFAOYSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C11H9N3O2.Na/c15-8-4-5-9(10(16)7-8)13-14-11-3-1-2-6-12-11;/h1-7,15-16H;/q;+1
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| 化学名 |
sodium 4-(pyridin-2-yldiazenyl)benzene-1,3-diol
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
H2O : ~3.33 mg/mL
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| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
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