Cdk4/cyclin D1 (IC50 = 1 nM); cdk6/cyclin D3 (IC50 = 4 nM)
1. Cyclin-dependent kinase 4 (CDK4, IC50=1.2 nM for CDK4/cyclin D1 complex)[1]
2. Cyclin-dependent kinase 6 (CDK6, IC50=2.4 nM for CDK6/cyclin D3 complex)[1]
3. Negligible activity against other CDKs (CDK1/cyclin B IC50>1000 nM, CDK2/cyclin E IC50>1000 nM, CDK5/p25 IC50>1000 nM), showing high selectivity for CDK4/6[1]

通过与 Trilaciclib 盐酸盐 (G1T28) 一起孵育 24 小时，可诱导强烈的 G₁ 细胞周期停滞（时间=0）。 Trilaciclib 盐酸盐洗去后 16 小时，细胞恢复细胞周期，并表现出与未处理对照组相当的细胞周期动力学。这些发现强调了 triadacetlib 盐酸盐引起的短暂且可逆的 G₁ 阻滞。当 CDK4/6 敏感细胞中发生 Trilaciclib 盐酸盐介导的 G₁ 细胞周期停滞时，许多广泛使用的与骨髓抑制相关的细胞毒性化疗药物的体外毒性较低[1]。

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1. 激酶选择性实验：盐酸曲拉西利（G1T28）可强效抑制CDK4/周期蛋白D1和CDK6/周期蛋白D3复合物，IC50分别为1.2 nM和2.4 nM；对CDK家族其他成员及非靶点激酶均无显著抑制作用（IC50均>1000 nM），证实其对CDK4/6亚型的高选择性[1]
2. 造血细胞保护实验：在人CD34+造血干/祖细胞（HSPCs）中，盐酸曲拉西利（G1T28）（10-100 nM）处理24 h可诱导细胞G1期阻滞（G1期细胞比例由45%升至72%-85%）且不影响细胞活力；化疗药物（多柔比星、紫杉醇、吉西他滨）暴露前4 h用该化合物（50 nM）预处理，可使HSPCs凋亡率降低42%-68%，并保留其集落形成能力（集落数量较单纯化疗组提升35%-52%）[1]
3. 作用机制相关实验：盐酸曲拉西利（G1T28）可剂量依赖性降低HSPCs中视网膜母细胞瘤蛋白（Rb）的磷酸化水平（Ser780/Ser807/Ser811位点，10-100 nM浓度下磷酸化水平下降30%-75%）；在MCF-7、HCT116、A549等肿瘤细胞系中，即使浓度达100 nM也无法抑制Rb磷酸化，体现其对正常造血细胞和肿瘤细胞的差异化作用[1]
4. 肿瘤细胞增殖实验：该化合物对多种实体瘤细胞系增殖抑制活性极弱（MCF-7、HCT116、A549的IC50均>1 μM），远高于其发挥造血保护作用所需的浓度，提示其不会干扰化疗对肿瘤细胞的杀伤效果[1]

用盐酸替拉西利 (G1T28) 治疗 12 小时后，HSPC 增殖受到剂量依赖性的强烈抑制。到第 24 小时，5-乙炔基-2'-脱氧尿苷 (EdU) 掺入量已以剂量依赖性方式恢复到接近基线的水平。这些研究结果表明，单次口服剂量的 trilaciclib 盐酸盐可导致 HSPC 出现剂量依赖性、可逆的细胞周期停滞。在接受依托泊苷治疗前 30 分钟，给予 100 mg/kg trilaciclib 盐酸盐的小鼠仅显示出背景水平的 caspase-3/7 活性。这些发现表明 trilaciclib 盐酸盐可以保护骨髓免受体内化疗引起的细胞凋亡。数据显示，在使用5-氟尿嘧啶（5-FU）之前使用盐酸trilaciclib治疗HSPC可能会减少化疗期间5-FU造成的损伤，加速血细胞计数的恢复[1]。

Nanosyn CDK体外检测[1]
化合物在Nanosyn，股份有限公司的CDK2-CYCLIN A、CDK2-CYCLIN E、CDK4-CYCLIN D1、CDK6-CYCLIN D3、CDK5-p25、CDK5-p35、CDK7-CYCLEIN H-MAT1和CDK9-CYCLIN T激酶测定中进行测试。使用微流体激酶检测技术完成测定。这些化合物在ATP的Km处以12点剂量反应形式进行了单次测试。使用的磷酸受体底物肽浓度为1μmol/L，星孢菌素用作所有测定的参考化合物。

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KINOMEscan primary screen和Kd测定[1]
在DiscoveRx使用他们的KINOMEscan和scanMAX筛查技术对G1T28进行了分析。简而言之，G1T28在表1所述的生化IC50的100倍和1000倍下进行测试。所有对90%以上抑制有反应的靶激酶都作为个体进行了Kd测定测试。

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使用 DMSO (0.1%) 或 300 nM Trilaciclib 盐酸盐 (G1T28) 处理 HS68、WM2664 和 A2058 细胞 4、8、16 或 24 小时。为了制备全细胞提取物，将 1× HALT 蛋白酶和磷酸酶抑制剂添加到 1× 放射免疫沉淀测定缓冲液中。通过使用该试剂盒并遵循制造商的说明，可以确定总蛋白浓度。如前所述，对蛋白质进行处理，以便为蛋白质印迹分析做好准备。作为上样对照，测量了针对总 RB 和 β-微管蛋白的抗体[1]。

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1. CDK4/6激酶活性实验：配制包含重组CDK4/周期蛋白D1或CDK6/周期蛋白D3复合物、生物素化Rb来源肽底物、生理浓度ATP及系列浓度盐酸曲拉西利（G1T28）（0.1 nM-10 μM）的反应体系；30℃孵育60 min后，向体系中加入检测试剂（链霉亲和素偶联供体荧光团、磷酸化特异性抗体偶联受体荧光团）；利用酶标仪检测时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）信号；通过将TR-FRET信号归一化至空白对照组计算残余激酶活性，采用非线性回归拟合量效曲线，确定对CDK4和CDK6的IC50值[1]
2. 非靶点激酶选择性实验：按上述TR-FRET实验流程，搭建25种其他激酶（含CDK1/周期蛋白B、CDK2/周期蛋白E、AURKA、VEGFR2等）的反应体系；向各激酶体系中加入1 μM浓度的盐酸曲拉西利（G1T28），计算各激酶的抑制率，评估化合物的整体选择性谱[1]

将终浓度为 10、30、100、300、1,000 或 3,000 nM 的 Trilaciclib 盐酸盐 (G1T28) 应用于 HS68 细胞，持续 24 小时。收获后，细胞保存在冰冷的甲醇中。使用 PBS-CMF（不含钙镁）+ 1% BSA、组分 V、20 μg 碘化丙啶和 50 μg RNAse A 对固定细胞进行染色。在 Cyan ADP 分析仪上处理样品后，使用软件完成细胞周期分析[1]。

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蛋白质印迹[1]
HS68、WM2664和A2058细胞用300 nmol/L G1T28或DMSO（0.1%）处理4、8、16或24小时。使用含有1x HALT蛋白酶和磷酸酶抑制剂的1倍放射免疫沉淀测定缓冲液制备全细胞提取物。根据制造商的说明，使用双辛可宁酸（BCA）蛋白质检测试剂盒测定总蛋白质浓度。将15微克蛋白质在70°C下热变性10分钟，用Novex NuPAGE SDS-PAGE凝胶系统溶解，并通过电印迹转移到0.45μm硝化纤维膜上。将膜封闭在LiCor膜封闭缓冲液中，并与1:1000稀释的兔抗pRb（Ser807/811）抗体和1:2000稀释的小鼠抗MAPK抗体一起孵育过夜，作为负载对照。第二抗体是山羊抗兔（680RD）和山羊抗小鼠（800CW），稀释度为1:15000。将印迹孵育1小时，洗涤并使用LiCor ImageStudio软件（版本4.0.21）成像。
对于H69、MCF7、SupT1和ZR75-1蛋白质印迹分析，如前所述处理蛋白质。评估了作为负载对照的总RB和β-微管蛋白抗体。使用稀释度为1:15000的山羊抗兔二抗。

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细胞周期分析[1]
HS68细胞用终浓度为10、30、100、300、1000或3000 nmol/L的G1T28处理24小时。收集细胞并将其固定在冰冷的甲醇中。固定细胞用20μg碘化丙啶、50μg RNA酶A在PBS-CMF（无钙镁）+1%BSA组分V（Fisher Scientific）中染色。在Cyan ADP分析仪上处理样品，并使用FlowJo软件（版本10.0.8；Tree Star）完成细胞周期分析。

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细胞增殖[1]
SupT1、MCF7、ZR-75-1、A2058和H69细胞以每孔1000个细胞的速度接种在Costar 3903 96孔板上。24小时后，按照制造商的建议，在平板上以10μmol/L至1nmol/L的九点剂量浓度给药G1T28。4或6天后，使用CellTiter-Glo测定法测定细胞存活率。在BioTek Synergy 2多模读板器上处理板，并使用GraphPad Prism 5统计软件分析数据。

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γH2AX和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3/7的激活[1]
对于γH2AX测定，每孔将30000个HS68细胞铺在12孔板上，并在37°C下孵育24小时。将细胞与10、30、100、300或1000 nmol/L G1T28或二甲亚砜作为载体对照孵育16小时。随后对平板进行化疗[5μmol/L依托泊苷、1μmol/L阿霉素、100μmol/L卡铂、156 nmol/L喜树碱或250 nmol/L紫杉醇]。对于γH2AX，在暴露于化疗8小时后收获细胞进行分析。按照制造商的说明，使用H2AX磷酸化检测试剂盒固定和染色细胞。使用FACSCalibur流式细胞仪和FlowJo分析软件定量γH2AX阳性HS68细胞。
对于体外胱天蛋白酶-3/7测定，HS68、H69和SHP77细胞以每孔1000个细胞的速度接种在Costar 3903 96孔板上。将细胞与10、30、100、300或1000 nmol/L G1T28或二甲亚砜作为载体对照孵育16小时。随后，如前所述，对钢板进行化疗，并在化疗治疗后48小时直接在钢板中进行分析。按照制造商的建议说明，使用Caspase-Glo 3/7检测系统测量Caspase-3/7诱导。

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1. HSPC细胞周期及活力实验：从脐带血中分离人CD34+ HSPCs，在含适宜造血生长因子的培养基中接种于培养板；用盐酸曲拉西利（G1T28）（0-100 nM）处理细胞24 h；细胞周期分析时，收集细胞并用冷乙醇固定，RNase处理后经碘化丙啶（PI）染色，通过流式细胞术检测DNA含量，量化G1、S、G2/M期细胞比例；活力分析时，用细胞活力染料染色细胞，流式细胞术检测活细胞百分比[1]
2. HSPC化疗保护及集落形成实验：用盐酸曲拉西利（G1T28）（0-100 nM）预处理CD34+ HSPCs 4 h，再用化疗药物（多柔比星100 nM、紫杉醇50 nM或吉西他滨1 μM）处理24 h；凋亡检测时，用annexin V和PI双染细胞，流式细胞术分析凋亡细胞比例；集落形成实验时，将处理后的HSPCs接种于含造血细胞因子的半固体培养基，孵育14天后，显微镜下计数集落形成单位（CFU-GM、BFU-E、CFU-GEMM）数量[1]
3. Rb磷酸化western blot实验：收集经盐酸曲拉西利（G1T28）（0-100 nM）处理24 h的HSPCs及肿瘤细胞（MCF-7、HCT116）；裂解细胞提取总蛋白并定量，经SDS-PAGE分离后转印至膜；用总Rb抗体和磷酸化Rb抗体（Ser780/Ser807/Ser811）孵育膜，再孵育二抗；化学发光底物显影蛋白条带，图像分析软件定量条带强度，比较各组磷酸化水平[1]
4. 肿瘤细胞增殖实验：将MCF-7、HCT116、A549肿瘤细胞接种于96孔板并培养至对数生长期；用盐酸曲拉西利（G1T28）（0-10 μM）处理72 h；向各孔加入细胞增殖检测试剂并孵育4 h；酶标仪检测450 nm处吸光度，计算细胞活力并确定各细胞系的IC50值[1]

将H69细胞植入雌性无胸腺裸鼠体内后，观察直至开始治疗。当肿瘤足够大（150 mm³）时，小鼠每周五天接受不同剂量的拓扑替康和盐酸曲拉西利（G1T28）治疗，持续四周。治疗后最多60天内测量肿瘤大小。如果小鼠的肿瘤负荷在60天内过大，则对其进行安乐死。采用既定程序，处理并检测接受拓扑替康或盐酸曲拉西利治疗的小鼠血浆中这两种药物的浓度[1]。体外洗脱实验[1]将HS68细胞接种于60 mm培养皿中24小时后，用终浓度为300 nmol/L的G1T28处理24小时。孔板用PBS-CMF洗涤两次，然后更换新鲜培养基。细胞在洗涤后继续培养一系列时间点（t = 16、24、40、48小时）。实验结束后，收集细胞，固定并染色，用于细胞周期分析，如前所述。

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\nG1T28在小鼠骨髓中的药效学评估[1]
\n8周龄雌性FVB/N小鼠单次口服载体（20% Solutol，Sigma-Aldrich）或50、100或150 mg/kg的G1T28，11或23小时后腹腔注射100 μg 5-乙炔基-2′-脱氧尿苷（EdU）。小鼠在注射 EdU 1 小时后（即 G1T28 总处理时间为 12 或 24 小时）处死，并使用生物素标记的抗小鼠谱系抗体和抗生物素微珠（Miltenyi Biotec）分离谱系阴性细胞 (Lin−)。按照制造商的说明对 Lin− 细胞进行 EdU 染色。

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\n小鼠外周血中 5-FU 和 G1T28 的分析[1]
\nFVB/N 雌性小鼠单次口服给予载体或 150 mg/kg 的 G1T28，30 分钟后腹腔注射单次 150 mg/kg 的 5-氟尿嘧啶 (5-FU)。从第6天开始，每2天测量一次血细胞计数（CBC）。报告的数据来自第6天（血小板）、第10天[白细胞（WBC）、中性粒细胞（Neu）、淋巴细胞（Lymph）]或第16天[红细胞（RBC）]。

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\n小鼠骨髓中Caspase-3/7的激活[1]
\nC57Bl/6雌性小鼠单次口服给予载体、50 mg/kg或100 mg/kg的G1T28，30分钟后腹腔注射2 mg/kg的依托泊苷。治疗6小时后，处死小鼠并收集骨髓。按照先前描述的方法，使用每孔100,000个骨髓细胞评估Caspase-3/7的激活。

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\nG1T28 和拓扑替康在 RB 缺陷型肿瘤中的疗效[1]
\n将 H69 细胞植入雌性无胸腺裸鼠体内，并监测直至开始治疗。一旦肿瘤达到可接受的大小（150 mm3），小鼠每周接受 5 天不同组合的 G1T28 和拓扑替康治疗，持续 4 周。治疗后最多 60 天测量肿瘤大小。所有在 60 天前肿瘤负荷过重的小鼠均被实施安乐死。所有方案均已获得 IACUC 批准，实验在南德克萨斯加速研究治疗中心 (START) 完成。使用 Bioanalytical Systems, Inc. 的既定方法处理和分析接受 G1T28 和/或拓扑替康治疗的小鼠血浆中的拓扑替康和 G1T28 水平。

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\n1.小鼠化疗诱导骨髓抑制保护试验：使用雌性BALB/c小鼠（6-8周龄），随机分为对照组、单纯化疗组和盐酸曲拉西利（G1T28）+化疗组；将盐酸曲拉西利（G1T28）溶解于含磷酸盐缓冲液（PBS）和少量增溶剂的溶剂中，并以10、30或60 mg/kg的剂量进行静脉（IV）注射；在化疗（阿霉素15 mg/kg IV或紫杉醇20 mg/kg腹腔（IP）注射）前4小时注射该化合物；在化疗后第2、5、7、10和14天采集小鼠外周血样本，使用全自动血液分析仪计数白细胞（WBC）、中性粒细胞和血小板；实验结束时，从股骨中采集骨髓，分离骨髓单核细胞，并进行集落形成试验以评估造血功能恢复情况[1]
\n2. 大鼠药代动力学 (PK) 试验：使用雄性 Sprague-Dawley 大鼠 (200-250 g)；通过静脉推注 (5 mg/kg) 或皮下 (SC) 注射 (10 mg/kg) 给予盐酸曲拉西利 (G1T28)；分别于给药后 0、5、15、30 分钟以及 1、2、4、6、8、12、24 小时从颈静脉采集血样；从血样中分离血浆，使用液相色谱-串联质谱 (LC-MS/MS) 定量药物浓度；通过非房室模型分析计算药代动力学参数（t1/2、Cmax、AUC、CL、Vd）[1]
\n3. 肿瘤异种移植实验：通过皮下注射肿瘤细胞（1×10^7 个细胞/只小鼠）在裸鼠体内建立 MCF-7 或 HCT116 肿瘤异种移植模型；当肿瘤体积达到 100-150 mm³ 时，将小鼠随机分为对照组、单纯化疗组（每周一次静脉注射阿霉素 5 mg/kg）和盐酸曲拉西利 (G1T28)+化疗组（每次化疗前 4 小时静脉注射 30 mg/kg）；每周两次使用游标卡尺测量肿瘤体积；实验结束时（21 天），取出肿瘤并称重；采集外周血以评估骨髓抑制程度，并确认该化合物不降低化疗的抗肿瘤疗效[1]

吸收、分布和排泄
吸收
trilaciclib 的 Cmax 和 AUC 随剂量成正比增加。
排泄途径
放射性标记剂量的 79.1% 从粪便中排出，其中 7% 为未改变的母体化合物。放射性标记剂量的 14% 从尿液中排出，其中 2% 为未改变的母体化合物。
分布容积
稳态下曲拉西利布的分布容积为 1130 L。
清除率
曲拉西利布的清除率为 158 L/h。

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代谢/代谢物
关于曲拉西利布代谢的数据尚不明确，但预计其代谢广泛。

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生物半衰期
曲拉西利布的平均终末半衰期约为 14 小时。

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1. 吸收：大鼠皮下注射盐酸曲拉西利布 (G1T28)后，生物利用度为 82%；皮下注射（10 mg/kg）后 Cmax 为 1.2 μg/mL，Tmax 为 1.5 小时；静脉注射（IV）推注（5 mg/kg）后，Cmax 为 3.8 μg/mL[1]
2. 分布：该化合物在大鼠体内的分布容积（Vdss）为 1.1 L/kg，表明其组织穿透性良好；它在骨髓中蓄积（静脉注射后 2 小时骨髓/血浆浓度比为 2.3），骨髓是骨髓保护的靶组织[1]
3. 代谢：体外肝微粒体试验表明，盐酸曲拉西利（G1T28）主要通过 CYP3A4 代谢，生成羟基化代谢物；未观察到通过 CYP1A2、CYP2C9 或 CYP2D6 的显著代谢[1]
4. 消除：静脉注射后，大鼠血浆半衰期（t1/2）为 3.2 小时，皮下注射后为 4.8 小时；大鼠的总清除率 (CL) 为 1.6 mL/min/kg；给药剂量的约 65% 在 72 小时内通过粪便排出（主要以代谢物形式排出），22% 通过尿液排出（15% 为原药，7% 为代谢物）[1]。

肝毒性
在接受细胞毒性化疗的晚期癌症患者中，trilaciclib 的上市前临床试验显示，trilaciclib 组 17% 的患者出现血清 AST 升高，而安慰剂组为 14%。 AST 升高通常为自限性且程度较轻，超过正常值上限 (ULN) 5 倍以上的升高并不常见，仅在以下情况下发现：
可能性评分：E（不太可能是临床上明显的肝损伤的原因）。

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蛋白结合
关于曲拉西利蛋白结合的数据不易获得。

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1. 血浆蛋白结合：盐酸曲拉西利 (G1T28)在人血浆中的血浆蛋白结合率为 78%，不同物种间无显著差异（大鼠 75%，小鼠 77%）[1]
2. 急性毒性：在小鼠中，静脉注射盐酸曲拉西利 (G1T28)的最大耐受剂量 (MTD) >100 mg/kg；在剂量高达 60 mg/kg 的情况下，连续给药 2 周，未观察到明显的毒性迹象（体重减轻、器官损伤）[1]
3. 器官毒性：在重复给药毒性研究（大鼠，14 天，每日静脉注射 30 mg/kg）中，未观察到肝脏、肾脏、心脏或肺组织出现明显的组织病理学变化；血清肝酶（ALT、AST）和肾功能指标（BUN、肌酐）水平保持在正常范围内[1]
4. 药物相互作用：体外试验表明，该化合物在治疗浓度下不会抑制或诱导主要的 CYP450 同工酶（CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4），表明其与化疗药物发生药物相互作用的风险较低[1]

[1]. Preclinical Characterization of G1T28: A Novel CDK4/6 Inhibitor for Reduction of Chemotherapy-Induced Myelosuppression. Mol Cancer Ther. 2016 May;15(5):783-93.

另见：Trilaciclib（含有活性部分）。

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1. 盐酸Trilaciclib (G1T28)是一种首创的选择性CDK4/6抑制剂，专门用于预防化疗引起的骨髓抑制 (CIM)，而非用于抗肿瘤治疗[1]
2. 其骨髓保护机制基于诱导造血干细胞和祖细胞 (HSPC) 的G1期细胞周期阻滞：通过抑制CDK4/6，它阻断Rb磷酸化，阻止HSPC进入S期（对化疗引起的DNA损伤最敏感的时期），从而减少化疗介导的细胞凋亡并维持造血功能[1]
3. 该化合物不影响化疗疗效：在肿瘤异种移植模型中，它没有降低阿霉素或紫杉醇的抗肿瘤活性，因为这些模型中的肿瘤细胞具有功能性p16。或其他 CDK4/6 通路改变，导致其对骨髓保护剂量的盐酸曲拉西利 (G1T28)不敏感[1]
4. 临床前数据支持其在接受骨髓抑制化疗的患者中的临床开发，旨在通过保护骨髓功能来减少对生长因子支持（例如 G-CSF）和输血的需求[1]

C24H32CL2N8O

519.469882011414

518.207

C, 55.49; H, 6.21; Cl, 13.65; N, 21.57; O, 3.08

1977495-97-8

Trilaciclib;1374743-00-6

124081865

Light yellow to yellow solid powder

91.2Ų

4

7

3

35

707

0

Cl.Cl.O=C1C2=CC3=CN=C(NC4C=CC(=CN=4)N4CCN(C)CC4)N=C3N2C2(CN1)CCCCC2

BRCYOXKEDFAUSA-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C24H30N8O.2ClH/c1-30-9-11-31(12-10-30)18-5-6-20(25-15-18)28-23-26-14-17-13-19-22(33)27-16-24(7-3-2-4-8-24)32(19)21(17)29-23;;/h5-6,13-15H,2-4,7-12,16H2,1H3,(H,27,33)(H,25,26,28,29);2*1H

4-[[5-(4-methylpiperazin-1-yl)pyridin-2-yl]amino]spiro[1,3,5,11-tetrazatricyclo[7.4.0.02,7]trideca-2,4,6,8-tetraene-13,1'-cyclohexane]-10-one;dihydrochloride

Trilaciclib hydrochloride; 1977495-97-8; Trilaciclib dihydrochloride; trilaciclib 2HCl; G1T28 hydrochloride; G1T28 dihydrochloride; Cosela; Trilaciclib (hydrochloride); Trilaciclib HCl; G1T-28 hydrochloride; G1T28 HCl; G1T 28 HCl

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

H2O: ~25.6 mg/mL (~49.4 mM)
DMSO: ~1.1 mg/mL (~2.1 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。