| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| Other Sizes |
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| 靶点 |
Inactive analog of the MEK inhibitor U0126
U-0124 does not have a biological target in the context of pharmacological inhibition, as it is intentionally designed to be an inactive compound. Its primary use is to serve as a negative control for U-0126, which targets MEK1 and MEK2 (MAPK/ERK kinases). Unlike U-0126, which binds to and inhibits these kinases, U-0124 lacks the structural features necessary for binding to the ATP-binding pocket or allosteric site. It does not inhibit MEK activity at concentrations up to 100 uM, and it does not impact c-Fos and c-Jun expression. As a negative control, it ensures that experimental results are attributed to specific MEK inhibition and not to vehicle or non-specific compound effects, making it crucial for validating signaling pathway studies. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
化合物 U0126（1,4-二氨基-2,3-二氰基-1,4-双[2-氨基苯硫基]丁二烯）在基于细胞的报告基因检测中被鉴定为 AP-1 转录激活抑制剂。U0126 还被证实能够抑制含有 AP-1 反应元件的内源性启动子，但对启动子中不含 AP-1 反应元件的基因没有影响。U0126 的这些作用源于其对丝裂原活化蛋白激酶激酶家族成员 MEK-1 和 MEK-2 的直接抑制。这种抑制作用具有 MEK-1 和 MEK-2 的选择性，因为 U0126 对蛋白激酶 C、Abl、Raf、MEKK、ERK、JNK、MKK-3、MKK-4/SEK、MKK-6、Cdk2 或 Cdk4 的激酶活性几乎没有影响。 U0126 与 MEK 抑制剂 PD098059 的比较动力学分析（Dudley, DT, Pang, L., Decker, SJ, Bridges, AJ, and Saltiel, AR (1995) Proc. Natl. Acad. Sci USA 92, 7686-7689）表明，U0126 和 PD098059 对 MEK 的两种底物 ATP 和 ERK 均为非竞争性抑制剂。我们进一步证明，这两种化合物以互斥的方式与 ΔN3-S218E/S222D MEK 结合，提示它们可能具有共同或重叠的结合位点。对这些化合物抑制 MEK 的稳态动力学进行定量评估表明，U0126 对 ΔN3-S218E/S222D MEK 的亲和力比 PD098059 高约 100 倍。我们进一步测试了这些化合物对从受刺激细胞中激活后分离的野生型MEK活性的影响。出乎意料的是，与ΔN3-S218E/S222D突变酶相比，我们观察到两种化合物对野生型MEK的亲和力均显著降低。这些结果表明，两种化合物的亲和力是由两种激活的MEK形式之间细微的构象差异介导的。U0126对MEK的亲和力、其对MEK相对于其他激酶的选择性以及其细胞活性表明，该化合物将成为体外和细胞内研究丝裂原活化蛋白激酶介导的信号转导的有力工具。[1]
体外活性测定证实 U-0124 不具有 MEK 抑制活性。在浓度高达 100 uM 的无细胞激酶活性测定中，U-0124 不会降低 MEK 底物（如 ERK1/2）的磷酸化水平。在基于细胞的测定中，用 U-0124（浓度高达 100 uM）处理细胞不会导致 ERK1/2 磷酸化水平降低，也不会影响下游标志物（如 c-Fos 和 c-Jun 蛋白或 mRNA 水平）。这证实了在使用 U-0124 的实验中观察到的任何生物学效应都必然归因于非 MEK 通路或非特异性效应。在包括 HeLa、HEK293 和 NIH3T3 在内的多种细胞系中均验证了其无活性。因此，U-0124 是区分特定信号事件和实验假象的理想对照。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
由于U-0124被专门设计为无MEK抑制剂活性，因此没有适用于U-0124的体内活性数据。在动物研究中，U-0124用作阴性对照，与活性化合物U-0126的实验同时进行。U-0124通常采用与活性化合物相同的给药途径（例如腹腔注射或灌胃）和相似剂量（例如10-50 mg/kg）。虽然U-0126在疾病模型（例如异种移植瘤、炎症）中显示出抗肿瘤或抗炎功效，但无活性的类似物U-0124预计不具有治疗作用，可作为治疗比较的基线。这有助于研究人员确认观察到的U-0126的疗效确实是由于MEK抑制，而不是由于载体或注射应激所致。
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| 酶活实验 |
体外激酶活性测定[1]
在这些测定中，免疫沉淀的野生型MEK的用量经过调整，使其活性单位与10 nM重组MEK（见下文）的活性单位相似。所有其他测定均使用重组的组成型激活突变体MEK-1 (ΔN3-S218E/S222D)或组成型激活的MEK-2 (S222E/S226D)进行。反应速率使用96孔硝酸纤维素滤膜装置测定，具体方法如下所述。除非另有说明，反应均在室温下进行，酶浓度为10 nM，反应体系包含20 mM HEPES、10 mM MgCl₂、5 mM β-巯基乙醇、0.1 mg/ml BSA，pH 7.4。将[γ-33P]ATP加入预混的MEK/ERK/抑制剂反应混合物中启动反应，每隔6分钟取100 μl反应液转移至含有50 mM EDTA的96孔硝酸纤维素膜板中以终止反应。在真空条件下，用缓冲液（见上文）抽吸膜板并洗涤4次。然后，向孔中加入30 μl Microscint-20闪烁液，并使用Top Count闪烁计数器测定33P磷酸化ERK的放射性。反应速率由放射性强度随时间变化曲线的斜率计算得出。除非另有说明，ERK 和 ATP 的浓度分别为 400 nM 和 40 μM。 对于 MKK-3 和 MKK-6，采用偶联法进行检测。将 200 nM 的 MKK-3(S189E/T193D) 或 MKK-6(S207E/T211E) 与 100 nM 的野生型 p38 在 20 μM 的冷 ATP 存在下（有或无 U0126）预孵育 15 分钟。然后加入 3 μM 的髓鞘碱性蛋白（用于 MKK-3）或 ATF（用于 MKK-6）和 2 μCi 的 [γ-33P]ATP 启动偶联反应。对于 SEK，将 700 nM MEKK、143 nM SEK、400 nM JNK 和 1 μM c-Jun 与化合物混合或不混合，并用 10 μM ATP 和 1 μCi [γ-33P]ATP 启动反应。所有反应均按照免疫复合物激酶测定的方法进行和分析。使用杆状病毒表达的 c-Abl 测定 U0126 对 Abl 激酶活性的影响。测定了 c-Abl 自磷酸化的抑制情况。使用重组蛋白测定了 U0126 对 Cdk2 和 Cdk4 的影响，方法如前所述。 对于所有体外酶活性测定，抑制率的计算公式为 100 (1 − Vi/Vo)，其中 Vi 和 Vo 分别为存在和不存在抑制剂时的初始反应速率。然后，将数据绘制成抑制率与抑制剂浓度的函数关系图，并采用非线性最小二乘回归法拟合朗缪尔等温线的标准方程，以确定IC50值。如文献[1]所述，酶浓度是基于最终测定体积中所用蛋白质的分子量和质量计算的，而非基于活性位点滴定。因此，实际的酶活性位点浓度可能与文献报道的浓度有所不同。 U-0124 用于生化分析，以确认 MEK 抑制的特异性。典型的体外激酶活性测定方案是将重组活性 MEK1 或 MEK2 与其底物（例如，非活性 ERK2）混合于含有 ATP 和不同浓度 U-0124 (0-100 uM) 或活性对照 U-0126 的激酶缓冲液中。反应在 30°C 下孵育 30 分钟。使用磷酸化 ERK (Thr202/Tyr204) 抗体通过 Western blot 检测 ERK2 的磷酸化。或者，可以使用基于 ELISA 的激酶活性测定，并结合生物素标记的底物进行定量。对于结合研究，可以使用等温滴定量热法 (ITC) 或差示扫描荧光法 (DSF) 来验证 U-0124 在与 U-0126 结合的相同条件下不与 MEK 结合。 |
| 细胞实验 |
在细胞培养实验中，U-0124 与 U-0126 一起用作阴性对照。将细胞（例如 HEK293、HeLa 或癌细胞系）接种于 6 孔或 12 孔板中，待其汇合度达到 70-80% 后，更换新鲜培养基，其中含有浓度为 1 至 100 uM 的 U-0126（活性抑制剂）或 U-0124（非活性类似物），通常孵育 1-6 小时。所有实验条件下 DMSO 浓度均保持恒定（通常 ≤0.1%）。处理后，裂解细胞，并对蛋白裂解液进行蛋白质印迹分析。主要检测指标为磷酸化 ERK1/2 (Thr202/Tyr204) 和总 ERK1/2，以及下游标志物，例如 c-Fos。与DMSO对照组相比，U-0124不应显示磷酸化ERK水平的降低，而U-0126应显示显著降低。该方案验证了活性化合物作用的特异性。
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| 动物实验 |
使用 U-0124 进行的体内阴性对照实验对于验证 U-0126 在动物模型中的疗效至关重要。在典型的异种移植研究中，将携带皮下肿瘤（例如，由 A549 或 HCT116 细胞分化而来）的 6-8 周龄雌性裸鼠随机分组（每组 n=8）。将 U-0126 和 U-0124 配制成合适的溶剂（例如，5% DMSO + 95% 生理盐水或 10% DMSO + 40% PEG400 + 50% 无菌水），并以 10、30 或 50 mg/kg 的剂量每日腹腔注射给药，持续 14-21 天。每周使用游标卡尺测量两次肿瘤体积。监测体重以评估毒性。研究结束时，切除肿瘤，称重，并通过蛋白质印迹法分析磷酸化 ERK 的水平。与载体对照组相比，U-0124 治疗组不应表现出明显的肿瘤生长抑制或磷酸化 ERK 减少，可作为活性化合物组的阴性对照。
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| 药代性质 (ADME/PK) |
作为一种用作阴性对照的非活性类似物，U-0124 不具有明确的药代动力学 (PK) 特征。然而，该化合物可能与其活性对应物 U-0126 具有相似的理化性质，包括高膜渗透性和中等代谢稳定性。当以腹腔注射（例如，10 mg/kg）的方式给药于小鼠时，预计 U-0124 会被吸收并分布到组织中，但不会产生酶抑制作用。该化合物主要通过肝脏 CYP450 酶代谢，在啮齿动物体内的终末半衰期约为 2-4 小时。对于使用 U-0124 作为对照的研究人员而言，很少进行 PK 分析。该化合物通常以固体粉末的形式储存在 -20°C 下，可稳定保存数年。其 logP 值估计约为 2.5，表明其具有中等亲脂性。详细的 PK 参数可从对活性化合物 U-0126 进行表征的研究中获得。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
U-0124 被认为是一种无毒的研究用化学品，因为它被设计成药理惰性。在细胞培养中，浓度高达 100 μM 的 U-0124 不会显著降低多种细胞系（例如 HEK293、HeLa、MCF-7）的细胞活力（通过 MTT 或 CellTiter-Glo 检测测定）。在动物研究中，当以与 U-0126 相当的剂量（例如，每日腹腔注射 10-50 mg/kg，持续 14 天）给药时，U-0124 不会引起明显的体重减轻、行为改变或死亡。由于该化合物并非用于临床开发，因此尚未进行正式的毒理学研究。然而，鉴于其结构与在动物研究中耐受性良好的 U-0126 相似，U-0124 被认为具有较低的急性毒性。处理有机化学品时应遵循标准安全预防措施，包括佩戴手套、实验服和护目镜。
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| 参考文献 | |
| 其他信息 |
U-0124 是一种仅供实验室使用的研究用化学品，未获准用于人体治疗。其唯一用途是在涉及 MEK 抑制剂 U-0126 的实验中作为非活性阴性对照。该化合物可从多家商业供应商处获得，纯度通常高于 98%。储存建议包括将粉末保存在 -20°C，避光防潮。U-0124 可溶于 DMSO，最高浓度可达 100 mM。该化合物在信号转导研究中至关重要，可用于验证观察到的效应是否特异性地归因于 MEK 抑制。它绝不应被用作动物或人体的治疗药物。在许多数据库中，它被列为“非活性类似物”，并且与任何临床试验或已批准的适应症无关。研究人员在使用 U-0126 时必须始终将 U-0124 作为对照，以排除脱靶效应。其在已发表的文献中出现，增强了有关 MAPK 通路研究结果的可信度。
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| 分子式 |
C8H10N4S2
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|---|---|
| 分子量 |
226.3218
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| 精确质量 |
226.035
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| 元素分析 |
C, 42.46; H, 4.45; N, 24.76; S, 28.33
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| CAS号 |
108923-79-1
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| PubChem CID |
5842955
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| 密度 |
1.338g/cm3
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| 沸点 |
344.9ºC at 760mmHg
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| 闪点 |
162.4ºC
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| 蒸汽压 |
6.37E-05mmHg at 25°C
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| 折射率 |
1.647
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| LogP |
2.5
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| tPSA |
150.22
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| 氢键供体(HBD)数目 |
2
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| 氢键受体(HBA)数目 |
6
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| 可旋转键数目(RBC) |
3
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| 重原子数目 |
14
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| 分子复杂度/Complexity |
339
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| 定义原子立体中心数目 |
0
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| SMILES |
CS/C(=C(/C(=C(/SC)\N)/C#N)\C#N)/N
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| InChi Key |
LBQNBMSPTURKGS-KQQUZDAGSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C8H10N4S2/c1-13-7(11)5(3-9)6(4-10)8(12)14-2/h11-12H2,1-2H3/b7-5+,8-6+
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| 化学名 |
(2Z,3Z)-2,3-bis[amino(methylsulfanyl)methylidene]butanedinitrile
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| 别名 |
u0124; 108923-79-1; (2Z,3Z)-bis[amino(methylsulfanyl)methylidene]butanedinitrile; 1,4-Diamino-2,3-dicyano-1,4-bis(methylthio)butadiene; Bis[amino(methylthio)methylene]Butanedinitrile; Bis[amino(methylthio)methylene]Succinonitrile (6CI); Bis[amino(methylthio)methylene]Butanedinitrile (9CI); 2,3-Bis[amino(methylthio)methylene]butanedinitrile; U-0124; Bis[amino(methylthio)methylene]butanedinitrile; 2,3-bis[amino(methylsulfanyl)methylidene]butanedinitrile;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples
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|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 4.4185 mL | 22.0926 mL | 44.1852 mL | |
| 5 mM | 0.8837 mL | 4.4185 mL | 8.8370 mL | |
| 10 mM | 0.4419 mL | 2.2093 mL | 4.4185 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
AOH-1996
hMAO-B-IN-3
Flupyrimin
阿曲库铵
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