Natural product; secondary metabolite

破骨细胞是唯一可以吸收骨的细胞，它们是在M-CSF和RANKL存在下由单核细胞/巨噬细胞产生的，并在体内被免疫反应激活。松萝酸是地衣的次生代谢产物，具有独特的二苯并呋喃骨架。它已在化妆品、香水和传统药物中使用多年。它具有广泛的生物活性，包括抗炎、抗菌、抗癌、抗病毒等，但其抗破骨细胞的活性尚未见报道。在这项研究中，研究了松萝酸是否会影响RANKL介导的破骨细胞生成。Usnic酸通过降低破骨细胞生成的主要调节因子NFATc1的转录和翻译表达，显著抑制了RANKL介导的破骨细胞的形成和功能[1]。

松萝酸对LPS诱导的小鼠血清生化标志物的影响[1]
首次注射松萝酸8天后，通过ELISA从血清中测定骨吸收标志物TRAP-5b的浓度。LPS组血清TRAP-5b水平比对照组高约两倍，但LPS+松萝酸组血清TRAP-Pb水平比LPS组低约30%。

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松萝酸抑制LPS诱导的小鼠骨丢失[1]
用LPS诱导的小鼠骨侵蚀模型评估松萝酸的抗吸收活性。从小鼠身上采集股骨，并通过微型计算机断层扫描（μCT）系统进行分析。μCT显示，LPS治疗降低了股骨干骺端区域小梁骨的骨量，而松萝酸治疗显著防止了LPS介导的小梁骨丢失（图6A）。松萝酸可显著预防LPS介导的骨密度（BMD）、骨体积/总体积（BV/TV）、骨表面积/总容积（BS/TV）和骨小梁分离（Tb.Sp）的变化。

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松萝酸可预防脂多糖（LPS）诱导的小鼠骨侵蚀。综上所述，我们的研究结果表明，松萝酸可能是治疗骨质疏松症的潜在候选药物[1]。

酶联免疫吸附试验（ELISA）测定血清TRAP[1]
从眶后神经丛采集血液，用LPS处理的骨质疏松症模型小鼠在18000g下离心5分钟。血清被分离并储存在-20°C下。使用抗酒石酸酸性磷酸酶5b ELISA试剂盒测量血清TRAP-5b水平。根据制造商提供的方案进行分析。

细胞活力测定 使用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）方法测定了Usnic acid对BMM存活率的影响。简而言之，将骨髓基质细胞以1×104个细胞/孔的密度接种在96孔板中，并用指定浓度的Usnic acid（0、0.3、1和3µM）培养3天。根据制造商的方案，使用CCK-8试剂盒评估细胞存活率。

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骨坑形成试验 如前所述进行骨坑形成试验。BMM在骨测定板（24孔板）上以3×105个细胞/孔的密度分化，并在Usnic acid（0、1和3µM）存在下用10 ng/mL RANKL和30 ng/mL M-CSF刺激。4天后，用5%次氯酸钠去除细胞5分钟，然后在光学显微镜下观察再吸收面积（放大倍数，×50），之后用ImageJ软件测量。

脂多糖（LPS）诱导的骨侵蚀 所有涉及小鼠的实验操作均严格按照华南师范大学动物护理与使用委员会（SCNU IACUC）的实验动物饲养和使用指南进行（许可证号：SCNU IACUC-2016-08）。LPS诱导的骨侵蚀实验方法如前所述[28]。将5周龄雄性ICR小鼠随机分为3组，每组6只。在注射LPS（Sigma-Aldrich，美国密苏里州圣路易斯）前一天，以及随后每天（直至实验结束）腹腔注射地衣酸（1 μg/g体重）或10% Kolliphor ER（PBS溶液，对照组）。在第1天和第4天，腹腔注射LPS（5 μg/μL，溶于0.1% BSA PBS）。所有小鼠均采用颈椎脱臼法处死，并使用高分辨率微型CT（SKYSCAN 1272；Bruker，美国马萨诸塞州比勒里卡）扫描其股骨，成像软件为DataViewer（SKYSCAN）。使用SKYSCAN分析工具自带的CTAn软件，测量骨矿物质密度（BMD）、骨体积/总体积（BV/TV）、骨表面积/总体积（BS/TV）和骨小梁间距（Tb.Sp），以评估股骨的骨小梁微结构。

不良反应
皮肤致敏剂 - 可诱发皮肤过敏反应的物质。

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小鼠皮下注射LD50：75 mg/kg，《CRC抗生素化合物手册》，第1卷-，Berdy, J.，佛罗里达州博卡拉顿，CRC出版社，1980年，9(89)，1982年。
小鼠静脉注射LD50：25 mg/kg，《抗生素》，1(611)，1967年。
兔口服LD50 >500 mg/kg，《药物研究》，5(510)，1955年[PMID:13276269]。

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解毒剂和紧急治疗
/SRP:/基本治疗：保持呼吸道通畅。必要时进行吸痰。注意呼吸功能不全的迹象，必要时辅助通气。使用无创呼吸面罩以 10 至 15 升/分钟的流量给予氧气。监测肺水肿，必要时进行治疗……。监测休克，必要时进行治疗……。预判癫痫发作，必要时进行治疗……。如眼睛受到污染，立即用水冲洗眼睛。在转运过程中，持续用生理盐水冲洗每只眼睛……。不要使用催吐剂。如误服，漱口后，如果患者能够吞咽、有强烈的咽反射且不流口水，则给予 5 毫升/公斤体重至 200 毫升的水进行稀释……。皮肤烧伤经去污后，用干燥的无菌敷料覆盖……。/A 类和 B 类中毒/
/SRP:/ 高级治疗：对于意识不清、严重肺水肿或呼吸骤停的患者，考虑进行口咽或鼻咽气管插管以控制气道。使用球囊面罩进行正压通气可能有效。监测心律，必要时治疗心律失常……。建立静脉通路，使用5%葡萄糖溶液/SRP：“保持通路畅通”，最小流速。如有低血容量征象，使用乳酸林格氏液。注意液体负荷过重的征象。考虑药物治疗肺水肿……。对于伴有低血容量征象的低血压，谨慎输液。注意液体负荷过重的征象……。使用地西泮（安定）治疗癫痫发作……。使用盐酸丙美卡因辅助眼部冲洗……。 /毒物A和B/

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非人类毒性值
犬静脉注射LD50 40 mg/kg PMID:12453567
兔静脉注射LD50 30 mg/kg PMID:12453567
大鼠静脉注射LD50 30 mg/kg PMID:12453567
兔口服LD50 500 mg/kg

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非人类毒性值
犬静脉注射LD50 40 mg/kg
兔静脉注射LD50 30 mg/kg
大鼠静脉注射LD50 30 mg/kg
兔口服LD50 500 mg/kg
有关USNIC酸（共6种）的更多非人类毒性值（完整）数据，请访问HSDB记录页面。

[1]. Effect of Usnic Acid on Osteoclastogenic Activity. J Clin Med. 2018 Oct 12;7(10). pii: E345.

7-羟基-(S)-乌斯尼酸属于苯并呋喃类化合物。
据报道，乌斯尼酸存在于地衣属植物Dimelaena oreina、Flavoparmelia haysomii以及其他有相关数据的生物体中。
另见：(-)-乌斯尼酸（注释已移至此处）。

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作用机制
本研究探讨了乌斯尼酸对两种培养的地衣藻类Trebouxia的生理效应。将Trebouxia暴露于乌斯尼酸钠盐后，导致其生长和光合作用受到抑制，细胞膜通透性增加，游动孢子固定化。/乌斯尼酸钠盐/
乌斯尼酸的作用机制尚不明确。 (+)-松萝酸已被证实能在小鼠肝线粒体中以 1 μM 的浓度解偶联氧化磷酸化。
抑制光合作用可刺激松萝酸的积累，提示葡萄糖可能在调节酚类合成酶中发挥作用。
实验表明，松萝酸是一种化感物质，能抑制苔藓孢子萌发，且其抑制效果与 pH 值相关。
体外实验表明，松萝酸对牛多形核白细胞中白三烯的生物合成具有轻微的抑制作用，其机制是通过与特定酶相互作用，而非作为抗氧化剂对抗过氧化过程、清除自由基，甚至并非作为自由基的来源。

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破骨细胞是唯一能够吸收骨骼的细胞，它们在 M-CSF 和 RANKL 的存在下由单核细胞/巨噬细胞产生，并在体内被免疫系统激活。反应。地衣酸是地衣的次生代谢产物，具有独特的二苯并呋喃骨架。多年来，它一直被用于化妆品、香料和传统药物中。地衣酸具有广泛的生物活性，包括抗炎、抗菌、抗癌、抗病毒等。然而，地衣酸的抗破骨细胞生成活性尚未见报道。本研究探讨了地衣酸是否会影响RANKL介导的破骨细胞生成。结果表明，地衣酸通过降低破骨细胞生成关键调控因子NFATc1的转录和翻译表达，显著抑制了RANKL介导的破骨细胞形成和功能。此外，地衣酸还能预防脂多糖（LPS）诱导的小鼠骨侵蚀。综上所述，我们的研究结果表明，地衣酸可能是一种潜在的骨质疏松症治疗候选药物。[1]

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治疗用途
近期研究采用大鼠足爪水肿试验（急性效应）和棉球试验（慢性效应）比较了(+)-地衣酸和布洛芬的抗炎活性，结果表明，口服100 mg/kg剂量的(+)-地衣酸在两种试验中均显示出显著疗效，且与相同剂量的布洛芬疗效相当。PMID:12453567
/EXPL THER:/ 研究表明，将市售的(+)-地衣酸涂抹在滤纸片上，然后将滤纸片置于病毒感染的非洲绿猴肾细胞(BS-C-1)上，可抑制单纯疱疹病毒1型和脊髓灰质炎病毒1型的细胞病变效应。PMID:12453567
/EXPL THER:/ 口服地衣酸30 和 100 mg/kg 的剂量在醋酸诱导的扭体试验和尾压试验中均显示出显著的镇痛效果。口服 100 和 300 mg/kg 剂量的松萝酸在脂多糖诱导的高热模型中表现出显著的解热活性。PMID:12453567
松萝酸抑制耐药金黄色葡萄球菌、肠球菌和分枝杆菌的生长。PMID:12061397

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松萝酸通过下调 RANKL 介导的 ERK 激活来抑制 NFATc1 的表达，从而发挥抗破骨细胞生成作用，并能显著预防体内 LPS 诱导的骨丢失。因此，地衣酸可能被用作治疗骨质疏松症等骨骼疾病的新型结构支架。[1]

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治疗用途
近期研究采用大鼠足爪水肿试验（急性效应）和棉球试验（慢性效应）比较了(+)-地衣酸和布洛芬的抗炎活性，结果表明，口服100 mg/kg剂量的(+)-地衣酸在两种试验中均显示出显著疗效，且与相同剂量的布洛芬疗效相当。
/EXPL THER:/ 研究表明，将市售的(+)-地衣酸涂覆在滤纸片上，再置于病毒感染的非洲绿猴肾细胞(BS-C-1)上，可抑制单纯疱疹病毒1型和脊髓灰质炎病毒1型的细胞病变效应。
/EXPL THER:/ 口服30和100 mg/kg剂量的地衣酸可显著降低细胞病变效应。通过醋酸诱导扭体试验和尾压试验测定镇痛效果。口服100和300 mg/kg剂量的乌斯尼酸，通过脂多糖诱导的高热试验评估，显示出显著的解热活性。
乌斯尼酸抑制多重耐药金黄色葡萄球菌、肠球菌和分枝杆菌的生长。
有关乌斯尼酸（共8种）的更多治疗用途（完整）数据，请访问HSDB记录页面。

C18H16O7

344.31

344.089

C, 62.79; H, 4.68; O, 32.53

125-46-2

(+)-Usnic acid;7562-61-0

5646

White to yellow solid powder

1.5±0.1 g/cm3

594.8±50.0 °C at 760 mmHg

204 °C

219.1±23.6 °C

0.0±1.7 mmHg at 25°C

1.643

1.4

118

2

7

2

25

708

0

O=C(C1(C)C(OC2=C(C(C)=O)C(O)=C(C)C(O)=C12)=C3)C(C(C)=O)C3=O

CUCUKLJLRRAKFN-UHFFFAOYSA-N

InChI=1S/C18H16O7/c1-6-14(22)12(8(3)20)16-13(15(6)23)18(4)10(25-16)5-9(21)11(7(2)19)17(18)24/h5,11,22-23H,1-4H3

2,6-diacetyl-7,9-dihydroxy-8,9b-dimethyldibenzofuran-1,3-dione

NSC-8517; 125-46-2; Usno; 1,3(2H,9bH)-Dibenzofurandione, 2,6-diacetyl-7,9-dihydroxy-8,9b-dimethyl-; usnic-acid; L-Usnic acid; NSC 8517; NSC5890; NSC 8517; Usnic acid

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

DMSO : ~3.33 mg/mL (~9.67 mM)

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。