Tubulin polymerization; Microtubule (Ki = 85 nM)

体外活性：长春新碱抑制稳态微管组装末端微管蛋白二聚体的净添加，Ki 为 85 NM。在低浓度下，长春新碱可稳定纺锤体，导致染色体无法分离，从而导致中期停滞和有丝分裂抑制。在较高浓度下，长春新碱可能会破坏并诱导微管完全解聚。 Vincristine 诱导肿瘤细胞凋亡并抑制 SH-SY5Y 细胞增殖，IC50 为 0.1 μM。长春新碱诱导有丝分裂停滞，促进 caspase-3 和 -9 以及细胞周期蛋白 B 的表达，同时降低细胞周期蛋白 D 的表达。长春新碱诱导的神经毒性是由于干扰微管功能而引起的，导致轴突运输受阻，从而导致轴突变性。细胞测定：将细胞以约 5 × 104 个细胞/mL 的浓度铺在 35 mm 板中的 2 mL 培养基中，并在 5% CO2 和 95% 空气的气氛中于 37 ℃ 生长 24 小时。然后用不含或含有4nM药物的新鲜培养基替换培养基并继续增殖3天。每天用胰蛋白酶和 EDTA 分离细胞后，在库尔特计数器中进行细胞计数。 长春新碱的 Ki 值为 85 nM，可抑制稳态微管组装末端微管蛋白二聚体的净添加[1]。在低剂量下，长春新碱可抑制有丝分裂，并通过稳定纺锤体引起中期停滞，从而防止染色体分离。当使用较高浓度时，长春新碱有可能导致微管完全解聚[2]。长春新碱的 IC50 为 0.1 μM，可抑制 SH-SY5Y 细胞的增殖并导致肿瘤细胞凋亡。 Vincristine 降低细胞周期蛋白 D 的表达，同时诱导有丝分裂停滞并促进 caspase-3、-9 和细胞周期蛋白 B 的产生[3]。长春新碱诱导的神经毒性是由微管活性破坏引起的，它阻碍轴突运输并最终导致轴突变性[4]。

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对Vincristine/长春花碱（一种新的长春新碱衍生物）和三种临床使用的长春花碱衍生物（长春花碱、长春新素和长春地辛）在稳态下抑制牛脑微管组装端的网状微管蛋白的能力进行了检测。尽管这四种衍生物的效力大致相似，但它们抑制微管蛋白的相对能力是可以区分的。Vinepidine和长春新碱是最有效的衍生物（Ki，分别为0.079+/-0.018（SD）微M和0.085+/-0.013微M），其次是长春地辛（Ki）（0.110+/-0.007微M）和长春碱（Ki为0.178+/-0.025微M）。与它们在体外抑制微管组装的相对能力相反，长春花碱及其衍生物长春地辛在抑制培养细胞增殖方面通常比长春新碱和长春皮定更有效。在B16黑色素瘤细胞中，长春碱的效力是最弱的衍生物长春皮定的九倍。在L细胞中，长春花碱在40 nM时完全抑制了生长，而长春新碱和长春地辛引起了约25%的抑制，而长春皮定没有活性。当B16黑色素瘤细胞在注射到小鼠体内之前用药物治疗时，长春地辛是四种体外衍生物中较弱的一种，可以最好地抑制肿瘤生长。结果表明，长春花衍生物之间的化学差异在较小程度上影响了衍生物在体外抑制微管组装的能力，导致药物抑制细胞生长的能力在数量级和幅度上存在显著差异。[1]

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在猫迷走神经中，以0.01、0.05和0.1 mM的浓度，在体外研究了三种长春花生物碱（Vincristine/长春新碱、长春碱和去乙酰长春碱酰胺）诱导的轴突超微结构变化。在0.1 mM的浓度下，所有三种药物都诱导了微管的破坏、副晶体结构的出现和神经丝的增加。每种药物还观察到一种新型的副晶体，每个亚基都有一个电子致密的中心核。尽管这三种化合物都会影响无髓纤维（长春碱比其他两种更严重），但只有长春碱会显著损伤有髓纤维。长春新碱在引起这些体外超微结构变化方面更有效，这与长春新素是最具神经毒性的临床体内情况形成鲜明对比。这表明，除了长春花生物碱与微管或微管蛋白的直接相互作用外，临床神经毒性还与其他因素有关。[3]

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单独或联合使用Vincristine/长春新碱和SAHA对人白血病MOLT-4细胞的细胞毒性作用[7]
采用3-[4,5-二甲基噻唑-2-基]-2,5-二苯基溴化四唑（MTT）法研究微管失稳剂长春新碱和HDACi-vorinostat（SAHA）对人ALL MOLT-4细胞的细胞毒性。我们首先测试了SAHA和长春新碱单独和联合使用的细胞毒性作用。如图1a所示，在高达500 nM的SAHA浓度下，没有明显的细胞毒性。然而，当浓度达到最高水平（1000 nM）时，SAHA在48小时内的IC50为840 nM。此外，长春新碱对人白血病MOLT-4细胞表现出细胞毒性，在48小时时IC50为3.3 nM（图1b）。为了确定SAHA和长春新碱之间是否发生相互作用，测量了联合检测的细胞毒性。与单独使用每种治疗相比，用500 nM SAHA和不同浓度长春新碱（0.3至3 nM）处理的细胞显著抑制了细胞存活（图1c）。

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长春新碱/Vincristine联合蛛网膜下腔出血对人T细胞白血病细胞存活的影响[7]
为了进一步探索协同细胞毒性作用，我们确定了对细胞周期分布的影响。与SAHA相比，长春新碱治疗诱导细胞周期G2/M期增加。特别是，长春新碱加SAHA的组合在短期治疗（24小时）后导致细胞几乎完全停滞在G2/M期，并在长期治疗（48小时）后诱导细胞进入亚G1期（图2a）。图2b显示了统计结果。接下来，使用组合指数（CI）方法评估协同组合[25]。CI值>1.0、1.0和<1.0分别表示药物之间存在拮抗、相加或协同作用。在G2/M期，长春新碱（0.3、1和3 nM）联合500 nM SAHA的CI值分别为1.63、0.72和0.32，亚G1期的CI值则分别为0.97、0.77和0.28（图2c）。在其他T细胞白血病细胞系CCRF-CEM中也观察到了这种协同组合效应（图2d），而不是在急性髓系白血病细胞中（附加文件1：图S2）。此外，长春新碱（1或3 nM）与不同浓度的SAHA联合使用也显示出协同作用（附加文件2：图S1）。这些数据表明，长春新碱和SAHA协同诱导细胞停滞在G2/M期，随后进入亚G1期。

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SAHA联合Vincristine/长春新碱对人白血病MOLT-4细胞有丝分裂阻滞的影响[7]
为了进一步阐明细胞周期进程G2/M期的协同作用机制，我们研究了SAHA联合长春新碱对微管蛋白极化变化和有丝分裂相关蛋白的影响。如图3a所示，在无细胞条件下SAHA治疗后，微管蛋白极化没有明显变化。然而，与长春新碱联合使用时，观察到微管解聚的显著诱导（图3a）。附加文件3：图S3显示了更全面的结果，包括各种长春新碱和SAHA单独的体外微管蛋白聚合试验。为了了解微管动力学对药物治疗后有丝分裂的影响，通过β-微管蛋白染色检测了人白血病MOLT-4细胞中的微管排列。如图3b（b）所示，SAHA处理后微管分布和细胞形态没有显著变化。此外，在低长春新碱浓度下，细胞在有丝分裂中期积累，纺锤体异常（图3b（c））。在这项研究中，发现具有双极和多极组织的纺锤体分布不均，这些纺锤体具有异常的长星状微管和染色体。然而，在高长春新碱浓度下，观察到微管解聚（图3b（d））。在本研究中，长春新碱和SAHA联合使用对异常纺锤体和染色体的影响比单独使用长春新素更为明显（图3b和附加文件4：图S4）。这些结果表明，SAHA由于抑制微管动力学而增强了长春新碱的作用。

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SAHA联合Vincristine/长春新碱对人白血病MOLT-4细胞凋亡途径和HDAC活性的影响[7]
线粒体在内源性和外源性凋亡途径中都起着至关重要的作用。为了测试长春新碱/SAHA介导的凋亡途径是否与线粒体功能相关，评估了线粒体跨膜电位（Δψm）的变化。如图4a所示，单独使用SAHA或长春新碱治疗不足以影响线粒体膜电位；然而，与SAHA联合治疗会以时间依赖的方式增强这一现象。Bcl-2蛋白家族在控制线粒体凋亡途径中起着调节作用。数据显示，联合治疗比单独治疗更有效地下调了Bcl-2家族促生存成员的表达，如Bcl-2、Bcl-xl和Mcl-1（图4b）。

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HDAC6抑制参与了Vincristine/长春新碱诱导的细胞凋亡[7]
之前的研究结果表明，HDAC6诱导微管蛋白乙酰化会影响微管的动力学和功能[9-12]。如图5a所示，SAHA，一种泛HDACi，诱导微管蛋白乙酰化；然而，它与长春新碱的组合没有协同作用。Tubastatin A是一种特异性HDAC6抑制剂[26]，用于了解HDAC6在长春新碱/SAHA处理的细胞中的作用。为了评估长春新碱与图巴他汀A联合使用的潜在益处，我们测定了联合治疗的细胞毒性，并分析了联合治疗效果。然而，与单独使用图巴司汀A相比，长春新碱显著增强了图巴司坦A的细胞毒性（图5b）。此外，长春新碱（1和3 nM）与不同浓度的图巴他汀A联合诱导细胞在G2/M期积聚，随后进入亚G1期（图5c）。在G2/M期和亚G1期，长春新碱和图巴他汀联合用药的CI值<1（图5d）。长春新碱和图巴斯汀的联合治疗显示，MPM2和PARP的激活与蛋白质印迹分析的凋亡诱导一致（图5e）。通过观察长春新碱和ACY1215在CCRF-CEM细胞中的联合处理，长春新汀和HDAC6抑制剂的联合协同作用得到了进一步证实（图5f）。这些发现表明，SAHA治疗可能通过HDAC6抑制改变细胞中的微管动力学，即使这种作用不足以将细胞阻滞在G2/M期。然而，与长春新碱结合使用时，SAHA会引起极端的微管应激，从而导致细胞死亡，长春新汀也会对微管产生影响。

通过单次腹膜内注射长春新碱（3 mg/kg）给带有双侧皮下异种移植物 Rh12 或 Rh18 的小鼠，诱导平均生长延迟 >120 天和 >52 天，再填充分数分别为 0.06% 和 5%。长春新碱通过宿主细胞介导的血管效应以及直接微管蛋白介导的细胞毒性作用于小鼠皮下结肠 38 肿瘤。长春新碱（5 mg/kg）使肿瘤的肿瘤血流量减少近75%。 分别给予接受双侧皮下异种移植 Rh12 或 Rh18 的小鼠长春新碱（3 mg/kg，腹腔注射）会导致平均生长延迟超过 120 天和超过 52 天，并且重新填充分数为 0.06% 和 5%[5]。

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长春新碱/Vincristine与SAHA联合治疗体内抗肿瘤活性[7]
为了评估长春新碱与SAHA的协同作用是否具有临床相关性，研究了这种联合治疗在携带已建立的MOLT-4肿瘤异种移植物的严重联合免疫缺陷小鼠中的抗肿瘤活性。一旦肿瘤可触及（约100mm3），将小鼠随机分为载体对照组和治疗组（每组n=6）。允许所有小鼠肿瘤达到2000mm3的终点体积，体内抗肿瘤疗效表示为肿瘤生长延迟（TGD；图6a）。单独用长春新碱（0.1mg/kg，每周一次）或SAHA（50mg/kg，每天一次）治疗的小鼠TGD没有改善。然而，时序分析显示，在MOLT-4异种移植物模型中，联合治疗显示出显著的抗肿瘤活性（P = 0.0389). 此外，Kaplan-Meier曲线显示了联合治疗组的抗肿瘤活性（长春新碱，0.025 mg/kg，每周一次；蛛网膜下腔出血，200 mg/kg，每日一次）（图6b）。值得注意的是，小鼠耐受了所有治疗，没有明显的毒性迹象；未观察到明显的体重差异或其他不良副作用（图6d和附加文件5:图S5）。为了将体内抗肿瘤作用与体外鉴定的机制相关联，通过蛋白质印迹分析评估了肿瘤内的生物标志物。与体外结果一致，联合治疗显著诱导了肿瘤中胱天蛋白酶3的激活和PARP的切割，表明细胞凋亡增加（图6e）。综上所述，这些发现表明，长春新碱和SAHA在体外和体内的联合使用显著增强了长春新素诱导的细胞死亡。

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指尖和脚趾失去触觉是接受抗癌药物（如长春新碱）化疗的患者最早的感觉功能障碍之一。然而，这种化疗诱导的感觉功能障碍的机制尚不完全清楚。胡须毛囊是非灵长类哺乳动物的触觉器官，其功能与人类指尖相当。在这里，我们使用小鼠胡须毛囊作为模型系统，并应用压力夹紧单纤维记录技术来探索长春新碱治疗如何影响胡须毛囊中的机械感受器。我们发现，用长春新碱对小鼠进行体内治疗会损害胡须的触觉行为反应。胡须毛囊传入神经的压力夹紧单纤维记录显示，机械刺激诱发了三种类型的机械反应，即快速适应反应（RA）、缓慢适应1型反应（SA1）和缓慢适应2型反应（SA2）。长春新碱治疗显著降低了SA1反应，但对RA和SA2反应没有显著影响。我们的研究结果表明，长春新碱选择性地损害了SA1机械感受器，导致体内胡须触觉行为反应受损。[8]

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测定了人横纹肌肉瘤（RMS）异种移植物、体内选择的RMS亚系对VCR抗性、体外选择的KB系（KB-ChR8-5）对秋水仙素抗性和结肠腺癌（GC3）对长春新碱（VCR）/Vincristine的肿瘤反应性。对VCR的敏感性与单次腹腔注射后肿瘤对VCR的长期保留有关，而在具有获得性或内在VCR耐药性的肿瘤中，药物的消除速度更快。在VCR给药后72小时内，药物滞留时间延长的敏感肿瘤也显示有丝分裂积聚水平升高。VCR敏感性、VCR滞留与VCR细胞毒性有丝分裂阻滞的拟议机制之间存在良好的相关性。已经开发了一个与所获得的数据一致的模型，可以解释一系列人类肿瘤异种移植物对VCR的反应性，而不管其来源组织如何[4]。

体外微管蛋白聚合试验[7]
为了在无细胞条件下测定指定药物的微管聚合，进行了CytoDYNAMIX Screen 03试剂盒。通用微管蛋白缓冲液、GTP储备（100 mM）和微管蛋白（10 mg/ml）均按照方案很好地制备。在检测前，将96孔板放入分光光度计中，在37°C下预热30分钟。然后制备冰微管蛋白聚合（TP）缓冲液，所有上述过程都需要在冰上进行。接下来，将药物（2μl）加入到每个含有85μl TP缓冲液的Eppendorf中。药物必须包括DMSO（对照组）、紫杉醇（10μΜ）和长春新碱/Vincristine（10μ。紫杉醇和长春新碱作为阳性对照。紫杉醇会诱导微管聚合；相比之下，长春新碱会使微管解聚。最后，将30μl微管蛋白加入Eppendorf中，并转移到预热的96孔板上。用分光光度计测量吸光度，并在340 nm和37°C下每1分钟记录一次，持续30分钟。

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VCR/长春新碱/Vincristine的体外释放曲线CS-ALG@TPGS-PL-GA-VCR采用经典透析袋法对NP进行研究。简要地，CS-ALG@TPGS-PLGA-VCR将NP（4mg）重新悬浮在PBS（2mL，0.1%w/v Tween 80，pH 5.8或pH 7.4）中，以模拟癌症细胞质环境（pH 5.8）和生理环境（pH 7.4）。随后，将再悬浮液转移到透析袋中（截留分子量为3kDa；Millipore，Billerica，MA，USA），将其浸入PBS（20mL）中，并在37°C恒温水浴中以100rpm振荡培养。在指定的时间间隔内，取出5mL释放溶液，使用紫外分光光度计在298nm处检测VCR的浓度。同时，将等比例的新鲜PBS加入到释放介质中[6]。

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线粒体膜电位[7]
罗丹明123用于评估线粒体膜电位。罗丹明123是一种阳离子荧光染料，定位于线粒体。线粒体膜电位的丧失与罗丹明123保留不足和荧光强度降低有关。细胞用Vincristine/长春新碱、SAHA或其组合处理指定时间。加入罗丹明123（终浓度10μM），在37°C的黑暗中孵育30分钟。然后，收获细胞并用PBS冲洗。通过FACScan流式细胞仪和CellQuest测量荧光强度。

细胞活力测定[7]
MTT法验证细胞活力。首先，将细胞以4×105个细胞/孔的密度接种在1 ml培养基中的24孔板中，然后用不同浓度的Vincristine/长春新碱或单独的SAHA或两者的组合处理24和48小时。用药物处理后，将每孔100μl MTT溶液（0.5 mg/ml的磷酸盐缓冲盐水（PBS））在黑暗中加入24孔板，并在37°C下孵育。活细胞的线粒体脱氢酶将MTT（黄色）还原为不溶性甲偶氮染料（紫色）。一小时后，将结晶甲赞染料溶解在提取缓冲液（0.1 M醋酸钠缓冲液，100μl/孔）中。通过ELISA阅读器在550nm处分光光度分析吸光度。

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流式细胞术分析[7]
通过流式细胞术分析细胞周期直方图的演变，以检测DNA含量的变化。将细胞（1×106）接种在2ml新鲜培养基中的6孔板中，并在指定时间内用不同浓度的Vincristine/长春新碱、SAHA或其组合处理。然后，收集细胞，用PBS洗涤，在-20°C下用70%（v/v）冰冷乙醇固定30分钟。离心固定的细胞以去除乙醇，用PBS冲洗，重新悬浮在0.1 ml DNA提取缓冲液（0.2 M Na2HPO4-0.1 M柠檬酸缓冲液，pH 7.8）中20分钟，随后在室温下在黑暗中用500μl PI溶液（80μg/ml碘化丙啶、100μg/ml RNase A和1%Triton X-100的PBS溶液）染色20分钟。数据通过FACScan流式细胞仪和CellQuest软件（Becton Dickinson）进行分析。

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免疫荧光分析[7]
通过免疫荧光技术检测微管的分布和形态。将盖玻片放置在24孔板中，并用聚-d-赖氨酸涂覆至少1天，以增强附着在盖玻片上的悬浮细胞。将细胞接种到24孔板中（8×105个细胞/孔），用Vincristine/长春新碱、SAHA或两种药物处理24小时。以下实验在室温下进行。用PBS中的8%多聚甲醛固定细胞15分钟。用PBS洗涤几次后，用PBS中0.1%Triton X-100透化细胞10分钟。然后，用PBS冲洗细胞10分钟三次。为了阻断，使用了PBS中3%的BSA。1小时后，用PBS洗涤细胞，用原代β-微管蛋白抗体（1:200）孵育2小时，用FITC偶联的抗小鼠IgG抗体（1:20）孵育两小时。将含有DAPI染色的载玻片滴在载玻片上，并将盖玻片回收到载玻片上。使用蔡司LSM 510 META共聚焦显微镜检测和捕获图像。

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载药纳米颗粒的体外细胞毒性[6]
使用标准WST-1测定法评估游离药物、载药NP对A549细胞和A549/紫杉醇细胞的细胞毒性。简而言之，将A549细胞和A549/紫杉醇细胞以每孔5.0×104个细胞的密度接种到96孔板上，并在37°C、5%CO2气氛下用100μL DMEM培养基或RPMI 1640培养基培养过夜24小时。然后，去除原始培养基，将测试细胞分别与含有游离DOX、游离VCR/长春新碱/Vincristine、游离（DOX加VCR）的新鲜培养基一起孵育，CS-ALG@TPGS-PLGA-VCRNP，CS-ALG-DOX@TPGS-PLGANP，以及CS-ALG-DOX@TPGS-PLGA-VCR不同浓度的NP。孵育12小时和24小时后，向每个孔中加入10μL WST-1溶液并再培养4小时。然后，通过使用酶标仪测量450nm处的吸光度来确定细胞存活率。

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微管和微丝成像分析[6]
将A549细胞或A549/紫杉醇细胞接种在6孔板（1×105个细胞/孔）的盖玻片上，并在37°C的5%CO2培养箱中孵育过夜以进行附着。然后，分别用TPGS-PLGA（0.2 mg/mL）NP、游离VCR/长春新碱（5μg/mL）和TPGS-PLGA-VCR NP（5μg/mL VCR负载NP）在37°C下洗涤细胞并培养给定时间。未经处理的细胞用作对照组。用PBS洗涤测试细胞，用Hoechst 33342（10mg/mL）处理20分钟。随后，在室温下用4%多聚甲醛固定细胞10分钟，用含0.1%吐温-20（PBST）的磷酸缓冲盐水中的1%BSA渗透1小时。 然后将细胞在4°C的暗室中暴露于微管蛋白跟踪器红色（1:250，稀释于含有1%BSA的PBST中，用于微管）或肌动蛋白跟踪器绿色（8单位/mL，稀释于含1%BSA的PBT中，用于微丝）20分钟。然后，去除含有微管蛋白跟踪器红色或肌动蛋白跟踪器绿色的原始培养基，用冰冷的PBS洗涤细胞。最后，在CLSM下观察细胞的微管或微丝。

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细胞周期分析[6]
用细胞周期和凋亡分析试剂盒评估空NP、游离VCR/Vincristine/长春新碱和载药NP在A549/紫杉醇细胞上诱导的细胞周期。在37°C下，将细胞以每孔5×105个细胞的密度接种在6孔板上24小时，然后分别用含有TPGS-PLGA NP（0.2 mg/mL）、游离VCR（5μg/mL）和TPGS-PLGA-VCR NP（VCR剂量5μg/mL）的新鲜培养基处理。未经处理的细胞用作对照。孵育24小时后，通过胰蛋白酶消化和离心收集细胞。随后，将获得的细胞用70%冷乙醇固定，并在4°C下储存24小时。最终，再次离心细胞，用冷PBS洗涤两次，并在黑暗中用0.5mL 37°C的染色溶液染色30分钟。使用流式细胞仪系统 分析染色的细胞。每个实验进行三次。

\n\n\n\n肿瘤异种移植模型[7]
\n采用肿瘤异种移植模型评估长春新碱和SAHA在体内的联合作用。将MOLT-4细胞（107个细胞/ml）植入重症联合免疫缺陷（SCID）小鼠体内。当平均肿瘤体积达到100 mm3时，小鼠接受指定剂量的长春新碱、SAHA或二者联合治疗。直至平均肿瘤体积大于2500 mm3，处死小鼠。然后，切除肿瘤并冷冻保存，用于蛋白质印迹分析，以评估长春新碱/SAHA联合用药在体内的效果。\n

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\n\n体内长春新碱治疗和触觉行为评估[8]
\n将载体（无菌磷酸盐缓冲液）或溶于载体的长春新碱连续5天每日腹腔注射，然后停药2天，再连续5天每日注射。每次注射长春新碱的剂量为0.3 mg/kg。除非另有说明，否则每2或3天进行一次触须触觉行为测试，最多持续21天。触须触觉测试采用盲法进行，即一名实验人员进行长春新碱注射和动物分组，另一名不知晓分组情况的实验人员进行体内触须触觉行为测试。实验开始时，将小鼠放入笼中，适应10分钟。在适应期和随后的实验中，测试室内只开着红灯，使动物无法看到实验人员和触觉刺激丝。适应期结束后，用触觉刺激丝从尾侧到头侧拨动动物右侧的胡须。胡须触觉测试重复20次，每次间隔1分钟。当测试动物对触觉刺激表现出回避反应时，则认为胡须触觉行为反应为阳性。\n

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\n\n胡须毛囊传入纤维记录[8]
\n在注射载体或长春新碱后17-31天，从动物身上采集胡须毛囊。随后制备胡须毛囊标本，并采用我们之前描述的方法进行胡须传入神经记录。简而言之，小鼠用异氟烷麻醉后断头处死。解剖出带有传入神经纤维束的胡须毛囊，并将其固定在记录室中。将胡须毛囊浸入含氧的克氏液中灌注，该克氏液成分为（单位：mM）：117 NaCl、3.5 KCl、2.5 CaCl₂、1.2 MgCl₂、1.2 NaH₂PO₄、25 NaHCO₃ 和 11 葡萄糖，并通入 95% O₂ 和 5% CO₂ 混合气体，pH 值调节至 7.3，渗透压调节至 325 mOsm，温度维持在 24 °C。切开每个毛囊囊的末端，以促进溶液扩散到毛囊内。在一组实验中，我们使用吸力电极记录了机械刺激诱发的、由胡须传入纤维传导的复合动作电位。在大多数实验中，我们使用近期开发的压力钳制单纤维记录技术记录了机械刺激诱发的、由单根胡须传入纤维传导的动作电位。简而言之，在40倍物镜下，通过记录电极施加约+10 mmHg的正压，使胡须传入神经束末端的单根纤维分离。然后，通过约-10 mmHg的负压，将单根神经纤维的末端吸入记录电极。当神经末端在记录电极内达到约10 μm的长度时，将记录电极内的压力重新调整至-5至-1 mmHg，并在整个实验过程中保持该压力。在另一组实验中，我们从未经体内长春新碱处理的正常动物身上获取了单个胡须毛囊。随后将毛囊在体外用 2 μM 长春新碱（长春新碱处理组）或溶剂（对照组）孵育 2 小时，并对胡须传入纤维进行压力钳制单纤维记录。所有电生理记录均使用 Multiclamp 700A 放大器记录神经冲动，信号采样率为 20 kHz，低通滤波器设置为 1 kHz。所有记录实验均在 24 °C 下进行。\n

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\n\n荷瘤小鼠模型及给药方案 [6]
\n对数生长期的 A549 细胞经离心收集，并重悬于 PBS 中，制成细胞悬液（5×10⁷ 个细胞/mL）。将100 μL A549细胞（5×10⁶个细胞/mL）悬液注射到受试裸鼠大腿根部。\n\n肿瘤模型的制备周期约为7-10天。根据肿瘤大小和生理状态，将荷瘤小鼠随机分为三组（n=5）：阴性对照组（生理盐水）、阳性对照组（游离阿霉素+长春新碱；阿霉素2 mg/kg + 长春新碱2 mg/kg）和试验组（CS-ALG-DOX@TPGS-PLGA-VCR纳米颗粒，剂量为阿霉素2 mg/kg + 长春新碱2 mg/kg）。\n\n给药当天定义为第0天（D0）。 18天后，通过尾静脉注射，每隔3天注射一次生理盐水或药物制剂，共注射7次。\n

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\n\n药物的体内生物分布[6]
\n我们还通过定量检测肿瘤组织和一些重要器官中DiR的荧光强度，评估了共递送纳米颗粒在荷瘤小鼠体内的组织分布。本研究中，近红外（IR）染料DiR被封装到TPGS-PLGA纳米颗粒中，制备了TPGS-PLGA-DiR纳米颗粒。DiR负载纳米颗粒的制备方法与VCR负载纳米颗粒的制备方法相同，只是将VCR/长春新碱替换为1 mg DiR。\n\n根据肿瘤大小和生理状态，将荷瘤小鼠随机分为DiR组和TPGS-PLGA-DiR纳米颗粒组（n=3）。小鼠经尾静脉注射给药后，于24小时处死，收集肿瘤组织和器官（肝脏、肾脏、脾脏、心脏和肿瘤），用于后续的体外荧光密度分析，分析采用体内成像系统进行。

溶于水；3 mg/kg； ip注射

人横纹肌肉瘤异种移植瘤 Rh12

溶于水；3 mg/kg； ip注射

人横纹肌肉瘤异种移植瘤 Rh12

吸收、分布和排泄
肝脏是人和动物的主要排泄器官。注射的硫酸长春新碱剂量中，80%经粪便排出，10-20%经尿液排出。
注射后15至30分钟内，超过90%的药物从血液分布到组织中，并与组织紧密结合，但并非不可逆结合。
接受长春新碱治疗且处于血液学缓解期的患者出现中枢神经系统白血病，这被解释为长春新碱难以穿透血脑屏障的证据。长春新碱可以以比静脉注射剂量高数倍的剂量输注到肿瘤的动脉供血区，且毒性相当；因此，局部吸收或破坏都非常迅速。长春花生物碱似乎主要经肝脏排泄到胆汁中。注射后最初几小时内，犬和猴的尿液排泄量较低。在犬和猴中，药物分布于大多数组织，但肺、肾、脾、胰腺和肝脏中的药物浓度最高。在猴中，长春新碱及其代谢物迅速从血浆进入脑脊液，形成低浓度的药物，并持续数天。硫酸长春新碱在胃肠道的吸收不可预测。在肾功能和肝功能正常的患者中，快速静脉注射2毫克长春新碱后，血清药物浓度立即达到峰值，约为0.19-0.89微摩尔/升，随后药物迅速从血清中清除。与快速静脉注射相比，持续静脉输注长春新碱可增加血清长春新碱浓度-时间曲线下面积（AUC），前提是给药剂量相当。长春新碱及其代谢物（和/或分解产物）在人体组织和体液中的分布尚未完全明确，但静脉给药后，该药物分布迅速且范围广泛。分布到组织中的药物与组织紧密结合，但这种结合是可逆的。长春新碱及其代谢物（和/或分解产物）可迅速且广泛地分布到胆汁中，快速静脉注射后2-4小时内即可达到胆汁浓度峰值。长春新碱及其代谢物（和/或分解产物）在快速静脉注射后难以穿过血脑屏障，通常不会在脑脊液中达到细胞毒性浓度。
有关长春新碱（共6种）的更多吸收、分布和排泄（完整）数据，请访问HSDB记录页面。

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代谢/代谢物
肝脏代谢。CYP3A亚家族的细胞色素P450同工酶促进长春新碱的代谢。
静脉注射³H标记的长春新碱后，72小时内，69%的放射性物质在粪便中回收，12%在尿液中回收。约一半以代谢物的形式存在，其紫外光谱表明长春新碱二聚体保持完整。胆瘘患者表现出大量完整药物（46.5%）及其代谢物（53.5%）经胆汁排泄。观察结果表明，胆汁-粪便途径是主要的排泄途径。
长春新碱的代谢途径尚未完全确定；该药物似乎被广泛代谢，可能在肝脏中代谢，但由于该药物在体内也可能发生分解，因此代谢程度尚不清楚。
肝脏。CYP3A亚家族的细胞色素P450同工酶促进长春新碱的代谢。
消除途径：肝脏是人和动物的主要排泄器官。注射的硫酸长春新碱剂量中，80%经粪便排泄，10-20%经尿液排泄。
半衰期：静脉注射到癌症患者体内时，观察到血清半衰期呈三相变化。初始半衰期、中间半衰期和终末半衰期分别为 5 分钟、2.3 小时和 85 小时。人体终末半衰期的范围为 19 至 155 小时。

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生物半衰期
当静脉注射到癌症患者体内时，观察到血清浓度呈三相衰减模式。初始半衰期、中间半衰期和终末半衰期分别为 5 分钟、2.3 小时和 85 小时。人体终末半衰期的范围为 19 至 155 小时。
静脉注射长春新碱后，观察到三相衰减，半衰期分别为 0.85 分钟、7.4 分钟和 164 分钟。
快速静脉注射长春新碱后，药物的血清浓度似乎以三相方式下降。长春新碱的末端消除半衰期为 19-155 小时。

妊娠期和哺乳期影响
◉ 哺乳期用药概述
大多数资料认为，母亲接受抗肿瘤药物治疗期间不宜哺乳。由于长春新碱半衰期较长，治疗结束后恢复哺乳可能不太现实。化疗可能会对母乳的正常微生物群和化学成分产生不利影响。
◉ 对母乳喂养婴儿的影响
一名4个月大的婴儿出现中性粒细胞减少症，可能是由于其母亲在接受环磷酰胺治疗9天后所致。该母亲此前每周接受一次800毫克环磷酰胺静脉注射，共6周；同时接受一次2毫克长春新碱静脉注射；并每日口服30毫克泼尼松龙。中性粒细胞减少症持续至少12天，并伴有短暂的腹泻。长春新碱对中性粒细胞减少症的影响尚无法确定。
一名妇女在妊娠27周时被诊断出患有B细胞淋巴瘤。妊娠34周零4天时引产，并开始接受利妥昔单抗、环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松的标准方案治疗，剂量未明确，疗程为21天，从产后第2天开始。在每个疗程的前10天，她将乳汁挤出并丢弃，用捐赠母乳喂养婴儿，然后在下一个疗程开始前的10天继续母乳喂养。这10天的母乳喂养暂停期是根据长春新碱的半衰期计算的，大约相当于3个半衰期。完成4个疗程的化疗后，据报道她的婴儿健康状况良好，发育正常，未出现任何并发症。
◉ 对哺乳和母乳的影响
截至修订日期，未找到相关的已发表信息。

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蛋白质结合
~75%

[1]. Comparison of the effects of vinblastine, vincristine, vindesine, and vinepidine on microtubule dynamics and cell proliferation in vitro. Cancer Res, 1985. 45(6): p. 2741-7.

[2]. Gidding, C.E., et al, Vincristine revisited. Crit Rev Oncol Hematol, 1999. 29(3): p. 267-87.

[3]. Donoso, J.A., et al, Action of the vinca alkaloids vincristine, vinblastine, and desacetyl vinblastine amide on axonal fibrillar organelles in vitro. Cancer Res, 1977. 37(5): p. 1401-7.

[4]. Relationships between tumor responsiveness, vincristine pharmacokinetics and arrest of mitosis in human tumor xenografts. Biochem Pharmacol, 1988. 37(20): p. 3995-4000.

[5]. Baguley, B.C., et al, Inhibition of growth of colon 38 adenocarcinoma by vinblastine and colchicine: evidence for a vascular mechanism. Eur J Cancer, 1991. 27(4): p. 482-7.

[6]. Co-delivery nanoparticles with characteristics of intracellular precision release drugs for overcoming multidrug resistance. Int J Nanomedicine. 2017 Mar 16;12:2081-2108.

[7]. The synergic effect of vincristine and vorinostat in leukemia in vitro and in vivo. J Hematol Oncol. 2015 Jul 10;8:82.

[8]. Selective impairment of slowly adapting type 1 mechanoreceptors in mice following vincristine treatment. Neurosci Lett. 2020 Nov 1:738:135355.

长春新碱为白色结晶固体，熔点218℃，用作抗肿瘤药物。
长春新碱是一种长春花生物碱，分子式为C46H56N4O10，存在于长春花（Catharanthus roseus）中。它（通常以相应的硫酸盐形式）用作化疗药物，用于治疗白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、乳腺癌和头颈癌。它具有多种功能，包括微管蛋白调节、微管去稳定、植物代谢、抗肿瘤和药物作用。它是一种甲基酯、乙酸酯、叔醇、甲酰胺类化合物、有机杂五环化合物、有机杂四环化合物、叔胺化合物和长春花生物碱。它是长春新碱(2+)的共轭碱。它来源于长春白细胞碱的氢化物。
长春新碱是一种抗肿瘤长春花生物碱，从长春花（Vinca rosea）中分离得到。它以多种商品名销售，其中许多商品名有不同的剂型，例如Marqibo（脂质体注射剂）和Vincasar。长春新碱适用于治疗急性白血病、恶性淋巴瘤、霍奇金病、急性红细胞增多症和急性全髓细胞增多症。由于（在推荐剂量下）缺乏明显的骨髓抑制作用以及独特的临床毒性（神经病变），硫酸长春新碱常被选作联合化疗方案的一部分。
据报道，长春新碱存在于红豆杉（Taxus cuspidata）、蛇形草（Ophioparma ventosa）和其他有相关数据的生物体中。
长春新碱是一种从长春花（Vinca rosea Linn.）中分离得到的天然生物碱。长春新碱在细胞周期的S期与微管和纺锤体蛋白不可逆结合，干扰有丝分裂纺锤体的形成，从而使肿瘤细胞停滞在有丝分裂中期。该药物还能使微管解聚，并可能干扰氨基酸、环磷酸腺苷（cAMP）和谷胱甘肽的代谢；钙调蛋白依赖性Ca++转运ATP酶的活性；细胞呼吸；以及核酸和脂质的生物合成。(NCI04)
长春新碱仅存在于使用或服用过该药物的个体中。它是一种从长春花（Vinca Rosea）中分离得到的抗肿瘤生物碱。(默克公司，第11版) 长春新碱的抗肿瘤活性被认为主要归因于其与微管蛋白相互作用，从而抑制有丝分裂中期。与其他长春花生物碱一样，长春新碱也可能干扰：1）氨基酸、环磷酸腺苷和谷胱甘肽代谢；2）钙调蛋白依赖性Ca²⁺-ATP酶活性；3）细胞呼吸；以及4）核酸和脂质生物合成。长春新碱适用于治疗急性白血病、恶性淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、急性红细胞增多症和急性全髓细胞增多症。由于硫酸长春新碱（在推荐剂量下）不会引起明显的骨髓抑制，且具有独特的临床毒性（神经病变），因此常被选作联合化疗方案的一部分。
长春新碱是一种从红景天中分离得到的抗肿瘤生物碱。
（默克公司，第11版）
另见：硫酸长春新碱（有盐形式）。

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药物适应症
用于治疗急性淋巴细胞白血病（ALL）、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、肾母细胞瘤、神经母细胞瘤、横纹肌肉瘤。脂质体长春新碱适用于治疗复发性费城染色体阴性（Ph-）急性淋巴细胞白血病（ALL）。
FDA标签

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作用机制
长春新碱的抗肿瘤活性主要归因于其与微管蛋白相互作用，抑制有丝分裂中期。与其他长春花生物碱一样，长春新碱也可能干扰：1）氨基酸、环磷酸腺苷和谷胱甘肽的代谢；2）钙调蛋白依赖性Ca²⁺转运ATP酶的活性；3）细胞呼吸；以及4）核酸和脂质的生物合成。
长春花生物碱是细胞周期特异性药物……它们阻断有丝分裂并导致中期停滞。这些药物的生物活性可解释为它们能够特异性地结合微管蛋白，并阻断该蛋白聚合成微管的能力……通过破坏有丝分裂装置的微管，细胞分裂停滞在中期。在缺乏完整的纺锤体的情况下，染色体可能分散在整个细胞质中……或者可能以异常的聚集形式出现……有丝分裂过程中染色体无法正确分离可能导致细胞死亡。长春花生物碱
虽然其作用机制尚未完全明确，但长春新碱似乎能与有丝分裂纺锤体的关键微管蛋白结合或使其结晶，从而阻止其正常聚合并导致中期阻滞。在高浓度下，该药物还会对核酸和蛋白质合成产生复杂的影响。长春新碱具有一定的免疫抑制活性。

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根据州或联邦政府的标签要求，硫酸长春新碱可能具有发育毒性。
硫酸长春新碱是一种抗癌药物。白色至微黄色无定形或结晶性粉末。对光敏感。无味。pH值（0.1%溶液）3.5-4.5。（NTP，1992）
硫酸长春新碱是从长春花（Catharanthus roseus，学名Vinca rosea L.）中分离得到的天然生物碱的硫酸盐，具有抗有丝分裂和抗肿瘤活性。长春新碱在细胞周期的S期与微管和纺锤体蛋白不可逆结合，干扰有丝分裂纺锤体的形成，从而使肿瘤细胞停滞在有丝分裂中期。该药物还能使微管解聚，并可能干扰氨基酸、环磷酸腺苷（cAMP）和谷胱甘肽的代谢；钙调蛋白依赖性Ca²⁺激活的ATP酶活性；细胞呼吸；以及核酸和脂质的生物合成。
硫酸长春新碱脂质体是一种鞘磷脂/胆固醇脂质体形式的硫酸长春新碱制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。长春新碱是从长春花（Vinca rosea）中分离得到的一种长春花生物碱，它能不可逆地结合并稳定微管蛋白，从而干扰微管的组装/解聚动态，进而阻止有丝分裂纺锤体的形成，导致细胞周期停滞在有丝分裂中期。脂质体包裹可延长长春新碱的生物利用度，增加其向肿瘤组织的递送，并降低其毒性。与标准脂质体递送相比，鞘氨醇包封给药可进一步延长血清药物的循环时间，并增强药物在肿瘤部位的蓄积，从而进一步提高疗效。
长春新碱是一种从长春花（VINCA ROSEA）中分离得到的抗肿瘤生物碱。（默克公司，第11版）
另见：长春新碱（具有活性成分）。

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腹腔注射长春碱或秋水仙碱可显著延缓患有晚期皮下结肠癌的B6D2F1小鼠的肿瘤生长，并在治疗后8小时内出现进行性出血性坏死。两种对长春碱和长春新碱耐药的多药耐药性P388白血病亚系，在腹腔内培养时对长春碱和长春新碱均无反应，但在皮下肿瘤培养时对坏死诱导敏感。两种荧光标记物的血管标记显示，长春新碱治疗后4小时内可显著降低肿瘤血流量。长春碱、长春新碱和秋水仙碱的作用与肿瘤坏死因子α相似，具体表现为：(a) 诱导类似的肿瘤坏死和血流量变化；(b) 联合使用5-羟色胺拮抗剂赛庚啶可抑制肿瘤坏死；(c) 血浆硝酸盐水平升高，表明L-精氨酸氧化为一氧化氮的过程受到刺激。研究结果表明，长春花生物碱和秋水仙碱通过宿主细胞介导的血管效应以及直接的微管蛋白介导的细胞毒性作用于实体瘤。[5]

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联合化疗在临床实践中已被普遍接受为克服多药耐药性（MDR）的可行策略。在此，我们设计并成功制备了一种名为S-D1@L-D2 NPs的共递送系统，其中，一些携带药物阿霉素（DOX）的较小纳米颗粒（NPs）通过水包油包水双乳液溶剂扩散-蒸发法负载到含有另一种药物（长春新碱[VCR]）的较大纳米颗粒中。直径约为20 nm的携带阿霉素的壳聚糖-海藻酸钠纳米颗粒（CS-ALG-DOX NPs）形成S-D1 NPs；维生素E D-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯修饰的聚乳酸-羟基乙酸共聚物纳米颗粒（TPGS-PLGA-VCR NPs）负载长春新碱（VCR），其直径约为200 nm，构成L-D2 NPs。部分壳聚糖-藻酸盐-阿霉素（CS-ALG-DOX）NPs负载于TPGS-PLGA-VCR NPs中，形成CS-ALG-DOX@TPGS-PLGA-VCR NPs。在耐药细胞胞质溶胶、内体或溶酶体的酸性环境下，CS-ALG-DOX@TPGS-PLGA-VCR NPs释放VCR和CS-ALG-DOX NPs。VCR可通过抑制胞质中微管聚合，使细胞周期停滞于中期。 CS-ALG-DOX NPs 从内体逃逸后，通过核孔进入细胞核，并在核内碱性环境中释放 DOX，DOX 与 DNA 相互作用，从而抑制 MDR 细胞的复制。这些结果表明，S-D1@L-D2 NPs 是一种具有 pH 敏感特性的细胞内精准释放药物共递送系统。S-D1@L-D2 NPs 能够显著增强共递送药物的体外细胞毒性和体内抗癌疗效，同时降低其不良反应。总而言之，S-D1@L-D2 NPs 可被视为一种用于临床联合化疗治疗 MDR 肿瘤的创新型药物共递送平台。[6]

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背景
联合治疗是降低耐药性的关键策略，而耐药性是癌症治疗中常见的难题。微管解聚剂长春新碱广泛用于治疗急性白血病。为了降低长春新碱的毒性和耐药性，本研究将探讨长春新碱联合伏立诺他（辛酰苯胺异羟肟酸 (SAHA)，一种泛组蛋白去乙酰化酶抑制剂）对人急性T细胞淋巴母细胞白血病细胞的影响。方法：采用MTT法检测细胞活力，并通过流式细胞术分析细胞周期分布和线粒体膜电位。采用体外微管蛋白聚合实验检测微管蛋白组装，并通过免疫荧光分析检测微管分布和形态。采用MOLT-4异种移植瘤模型评估该联合用药的体内疗效。采用 Bonferroni t 检验进行统计分析。结果
细胞活力检测显示，长春新碱与 SAHA 联合用药的细胞毒性更强，IC50 值为 0.88 nM，而单独使用长春新碱或 SAHA 的 IC50 值分别为 3.3 nM 和 840 nM。该联合用药协同诱导 G2/M 期阻滞，随后亚 G1 期细胞数量增加并激活 caspase。此外，长春新碱与 HDAC6 抑制剂（tubastatin A，一种乙酰化 α-微管蛋白的抑制剂）联合用药的结果与长春新碱/SAHA 联合用药的效果一致，提示 SAHA 可能通过抑制 HDAC6 来改变微管动力学。结论
这些发现表明，长春新碱与 SAHA 联合用药可改变 T 细胞白血病细胞的微管动力学，导致 M 期阻滞，进而诱导细胞凋亡。这些数据表明，长春新碱/SAHA的联合作用可能为未来的临床试验提供重要的临床前基础。[7]

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在我们的研究中，体外将分离的胡须毛囊急性暴露于长春新碱后，SA1机械感受器功能受损。另一方面，体内长春新碱治疗方案实施数天后，胡须触觉行为反应也受到损害。感觉行为反应的延迟损害可能是由于体内长春新碱治疗期间胡须毛囊中长春新碱的缓慢积累所致。此外，SA1机械感受器或默克尔盘位于毛囊深处，并被一层玻璃状膜保护，这可能不利于体内长春新碱治疗期间长春新碱扩散到默克尔盘区域。或者，当体内长春新碱治疗早期对SA1机械感受器的损伤并不严重时，RA和SA2可能代偿胡须触觉反应。尽管本研究中使用的体内长春新碱治疗方案并未损伤RA和SA2机械感受器，但研究长期体内长春新碱治疗是否最终也会损伤这两种机械感受器将很有意义。此外，研究长春新碱治疗结束后，长春新碱引起的机械感受器损伤能否恢复以及恢复多长时间也很有意义。[8]

C46H56N4O10

824.9577

824.399

C, 66.97; H, 6.84; N, 6.79; O, 19.39

57-22-7

57-22-7;2068-78-2 (sulfate);

5978

Blades from methanol

1.4±0.1 g/cm3

211-216ºC

1.677

2.82

171.17

3

12

10

60

1750

9

CC[C@@]1(C[C@@H]2C[C@@](C3=C(CCN(C2)C1)C4=CC=CC=C4N3)(C5=C(C=C6C(=C5)[C@]78CCN9[C@H]7[C@@](C=CC9)([C@H]([C@@]([C@@H]8N6C=O)(C(=O)OC)O)OC(=O)C)CC)OC)C(=O)OC)O

OGWKCGZFUXNPDA-XQKSVPLYSA-N

InChI=1S/C46H56N4O10/c1-7-42(55)22-28-23-45(40(53)58-5,36-30(14-18-48(24-28)25-42)29-12-9-10-13-33(29)47-36)32-20-31-34(21-35(32)57-4)50(26-51)38-44(31)16-19-49-17-11-15-43(8-2,37(44)49)39(60-27(3)52)46(38,56)41(54)59-6/h9-13,15,20-21,26,28,37-39,47,55-56H,7-8,14,16-19,22-25H2,1-6H3/t28-,37+,38-,39-,42+,43-,44-,45+,46+/m1/s1

methyl (1R,9R,10S,11R,12R,19R)-11-acetyloxy-12-ethyl-4-[(13S,15S,17S)-17-ethyl-17-hydroxy-13-methoxycarbonyl-1,11-diazatetracyclo[13.3.1.04,12.05,10]nonadeca-4(12),5,7,9-tetraen-13-yl]-8-formyl-10-hydroxy-5-methoxy-8,16-diazapentacyclo[10.6.1.01,9.02,7.016,19]nonadeca-2,4,6,13-tetraene-10-carboxylate

vincristine; 22-Oxovincaleukoblastine; Leurocristine; Vinkristin; Vincrystine; 57-22-7; Vincristina; leucristine;

2934.99.9001

Powder      -20°C    3 years

                     4°C     2 years

In solvent   -80°C    6 months

                  -20°C    1 month

Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)

May dissolve in DMSO (in most cases), if not, try other solvents such as H2O, Ethanol, or DMF with a minute amount of products to avoid loss of samples

注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。

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注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)
*生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。
注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)
注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil)
示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。

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注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)]
*20% SBE-β-CD in Saline的制备（4°C，储存1周）：将2g SBE-β-CD (磺丁基-β-环糊精) 溶解于10mL生理盐水中，得到澄清溶液。
注射用配方 5: 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin : Saline = 50 : 50 (如： 500 μL 2-Hydroxypropyl-β-cyclodextrin (羟丙基环胡精)→ 500 μL Saline)
注射用配方 6: DMSO : PEG300 : Castor oil : Saline = 5 : 10 : 20 : 65 (如： 50 μL DMSO → 100 μL PEG300 → 200 μL Castor oil → 650 μL Saline)
注射用配方 7: Ethanol : Cremophor : Saline = 10： 10 : 80 (如： 100 μL Ethanol → 100 μL Cremophor → 800 μL Saline)
注射用配方 8: 溶解于Cremophor/Ethanol (50 : 50), 然后用生理盐水稀释。
注射用配方 9: EtOH : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL EtOH → 900 μL Corn oil)
注射用配方 10: EtOH : PEG300：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL EtOH → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline)

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口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠)
口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。

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口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400)
口服配方 4: 悬浮于0.2% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 5: 溶解于0.25% Tween 80 and 0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素)
口服配方 6: 做成粉末与食物混合

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注意: 以上为较为常见方法，仅供参考， InvivoChem并未独立验证这些配方的准确性。具体溶剂的选择首先应参照文献已报道溶解方法、配方或剂型，对于某些尚未有文献报道溶解方法的化合物，需通过前期实验来确定（建议先取少量样品进行尝试），包括产品的溶解情况、梯度设置、动物的耐受性等。

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请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案：
1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液));
2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方):
10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline);
假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL；
3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例;
4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶;
5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！
6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们;
7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。