| 规格 | 价格 | 库存 | 数量 |
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| 1mg |
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| 5mg |
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| 10mg |
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| 50mg |
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| 100mg |
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| 靶点 |
Cdc7 3.4 nM (IC50) PIM1 42 nM (IC50) CK2 215 nM (IC50)
XL413 hydrochloride targets cell division cycle 7 homolog (CDC7) kinase. CDC7 is a serine/threonine protein kinase that plays a critical role in the initiation of DNA replication. The compound binds to and inhibits the activity of CDC7. It also inhibits CK2 and PIM1 with IC50 values of 215 and 42 nM, respectively. |
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| 体外研究 (In Vitro) |
在 Colo-205 细胞中，XL413 (BMS-863233) 盐酸盐可激活 caspase 3/7（EC50=2288 nM），降低细胞活力（IC50=2142 nM），并抑制细胞生长（IC50=2685 nM）。它还能显著抑制 Colo-205 细胞在软琼脂中的非锚定依赖性生长（IC50=715 nM）[1]。Colo-205 细胞暴露于 HCl 时会发生凋亡，而 HCC1954 细胞则不会。205 单位 [2]。
XL413 盐酸盐可抑制 Colo-205 细胞的增殖（IC50 = 2685 nM），降低细胞活力（IC50 = 2142 nM），并激活 caspase 3/7（EC50 = 2288 nM）。它对 CK2 的 IC50 为 215 nM，对 PIM1 的 IC50 为 42 nM，对 pMCM 的 EC50 为 118 nM，表现出强效作用。 |
| 体内研究 (In Vivo) |
在小鼠中，XL413（BMS-863233；100 mg/kg，口服）盐酸盐表现出良好的血浆暴露量和药代动力学特征，且未观察到明显的体重下降[1]。
XL413（BMS-863233；100 mg/kg，口服）盐酸盐在小鼠中表现出良好的药代动力学特征和优异的血浆暴露量。在所有剂量下，XL413（10、30 或 100 mg/kg，口服）盐酸盐均具有良好的耐受性，且不会引起明显的体重下降[1]。 在 Colo-205 异种移植瘤模型中进行的多剂量研究表明，化合物 14（XL413）具有显著的抗肿瘤疗效。将荷瘤小鼠以10、30或100 mg/kg的剂量，每日一次（qd）口服化合物14，连续14天（图5）。本研究还考察了两种替代给药方案：每日两次（bid）给予30 mg/kg的剂量，以及隔日一次（q2d）给予100 mg/kg的剂量。化合物14（XL413）在所有考察的剂量和给药方案下均具有良好的耐受性，未观察到明显的体重下降。10 mg/kg qd剂量组的肿瘤生长抑制率仅为36%，而30 mg/kg qd剂量组的肿瘤生长抑制率显著（83%）。更令人印象深刻的是，30 mg/kg qd剂量组每日两次给药可观察到显著的肿瘤消退（32%）。 XL413盐酸盐的ED50估计为13 mg/kg。 目前关于XL413盐酸盐的体内活性数据有限。作为一种具有潜在抗肿瘤活性的CDC7抑制剂，预计其在异种移植模型中具有抗肿瘤作用。需要进一步的体内研究来全面评估其疗效和安全性。 |
| 酶活实验 |
将 20 ng 纯化的 DDK 与浓度递增的 DDK 抑制剂预孵育 5 分钟。随后，在含有 50 mM Tris-HCl (pH 7.5)、10 mM MgCl₂ 和 1 mM DTT 的缓冲液中加入 10 µCi (γ)-³²P ATP 和 1.5 µM 冷 ATP，并将混合物在 30°C 下孵育 30 分钟。将蛋白质在 HyBlot CL 胶片上进行放射自显影，并在 100°C 下用 1X Laemmli 缓冲液变性后进行 SDS-PAGE 电泳。DDK 的自磷酸化是其激酶活性的指标。使用 ImageJ 软件对 ³²P 标记的条带进行定量，并使用 GraphPad 软件计算 IC₅₀ 值。体外酶活性测定使用重组 CDC7 激酶来测量 CDC7 抑制情况。 IC50 值是通过评估不同浓度 XL413 盐酸盐存在下激酶的活性来确定的。选择性通过针对一系列激酶的分析来验证。
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| 细胞实验 |
细胞活力分析[2]
将2500个细胞接种于用于检测的96孔板的每个孔中。24小时后，用小分子抑制剂处理细胞，然后在37°C下孵育72小时。之后，裂解细胞，并使用CellTiter-Glo试剂盒定量ATP含量，ATP含量可作为代谢活性细胞的标志物。利用GraphPad软件确定IC50值。将100,000个细胞接种于用于检测的六孔板的每个孔中。一天后，用小分子抑制剂处理细胞，然后培养不同时间。将胰蛋白酶消化的细胞悬浮于5毫升磷酸盐缓冲液中。将30微升该悬浮液与30微升CellTiter-Glo试剂混合，并在室温下孵育10分钟。使用 EnVision 2104 多功能酶标仪和 BioTek Synergy Neo 微孔板读数仪测量发光值。 Caspase 3/7 活性分析 [2] 将 5,000 个细胞接种于 96 孔板中。24 小时后，用小分子抑制剂处理细胞，并在 37°C 下孵育 24 小时。然后分别使用 Caspase-Glo 3/7 检测试剂盒和 CellTiter-Glo 检测试剂盒测量 Caspase 3/7 活性和活细胞数。“每个细胞的 Caspase 活性”通过将总 Caspase 活性除以细胞数得到。 免疫印迹分析[2] 将细胞沉淀重悬于RIPA缓冲液（150 mM NaCl、1% NP-40、0.5%脱氧胆酸钠、0.1% SDS、50 mM Tris-HCl，pH 8）中，制备全细胞提取物。该缓冲液中含有蛋白酶抑制剂（100 µM PMSF、1 mM苯甲酰胺、2.5 µg/ml胃蛋白酶抑制剂A、10 µg/ml亮抑蛋白酶肽和10 µg/ml抑蛋白酶）和磷酸酶抑制剂（1 mM NaF、Na3VO4和Na4P2O7各1 mM）。使用BCA蛋白测定试剂盒，按照制造商的说明书测定蛋白浓度。取等量蛋白进行SDS-PAGE电泳，并将蛋白转移至硝酸纤维素膜上。用丽春红S染色确认转移效率和上样量均一性。经一抗和二抗处理后，使用 SuperSignal West Pico 溶液对蛋白质进行显色。 热稳定性变化分析 (TSA) [2] 所有反应均在 10 µl 终体积中进行，并在 96 孔板中进行检测，使用 20× SYPRO Orange（Invitrogen）和 200 µg/ml 纯化的 DDK。反应在冰上与抑制剂化合物孵育 30 分钟。从四个激酶抑制剂库中筛选化合物，浓度为 20 µM，DMSO 总浓度为 2% 或更低，以检测 Tm 的增加。使用 StepOnePlus 实时荧光定量 PCR 系统熔解曲线程序进行热熔解实验，升温速率为 1°C，温度范围为 15°C 至 85°C。对获得的 12 个阳性化合物进行后续 TSA 实验，步骤与上述相同，但每个化合物重复三次，并使用 200 倍的抑制剂浓度范围。数据分析方法如前所述。使用 GraphPad Prism 软件，通过 Boltzmann 方程拟合 S 形熔解曲线计算熔解温度 (Tm)，R² 值均大于 0.99。含化合物和不含化合物的反应的 Tm 值之差为 ΔTm。 基于细胞的检测采用 Colo-205 细胞来测量细胞增殖抑制、细胞活力降低以及 caspase 3/7 激活。IC50 和 EC50 值通过用递增浓度的 XL413 盐酸盐处理细胞来确定。 |
| 动物实验 |
3, 100 mg/kg
Colo-205 异种移植模型 在 CDC7 依赖性癌症的异种移植模型中评估体内疗效。评估该化合物通过抑制 CDC7 来抑制肿瘤生长的能力。需要进一步研究以全面表征其体内抗肿瘤活性和药代动力学特性。 |
| 药代性质 (ADME/PK) |
XL413盐酸盐是一种ATP竞争性CDC7抑制剂。它是一种高效且选择性的CDC7抑制剂，IC50值为3.4 nM。该化合物对CK2、Pim-1和pMCM2具有选择性。需要进一步的药代动力学研究来全面表征其ADME性质。
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| 毒性/毒理 (Toxicokinetics/TK) |
XL413盐酸盐的临床前毒性数据有限。作为一种CDC7抑制剂，它可能具有与DNA复制抑制相关的靶向毒性。应遵循标准的实验室安全预防措施。需要进行进一步的毒理学研究以进行全面的安全性评估。
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| 参考文献 |
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| 其他信息 |
XL413 是一种苯并呋喃并嘧啶化合物，其结构为 3,4-二氢[1]苯并呋喃并[3,2-d]嘧啶，在 2、4 和 8 位分别被 (2S)-吡咯烷-2-基、氧代基和氯取代。它是 Cdc7 激酶 ATP 的强效竞争性抑制剂 (IC50 = 3.4 nM)，并具有抗癌特性。它可用作 EC 2.7.11.1（非特异性丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶）抑制剂和抗肿瘤药物。它是一种苯并呋喃并嘧啶化合物，属于有机氯化合物和吡咯烷化合物。
BMS-863233 已被研究用于治疗难治性血液系统恶性肿瘤。 CDC7激酶抑制剂BMS-863233是一种口服生物利用度高的细胞周期蛋白7同源物（CDC7）激酶抑制剂，具有潜在的抗肿瘤活性。CDC7激酶抑制剂BMS-863233可与CDC7结合并抑制其活性，从而抑制DNA复制和有丝分裂，诱导肿瘤细胞凋亡，并抑制CDC7过表达肿瘤细胞的增殖。CDC7是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，在多种肿瘤细胞类型中过表达，并通过激活复制起点在DNA复制的起始过程中发挥关键作用。CDC7已被证实对DNA复制的起始和维持至关重要。在多种肿瘤细胞系中均检测到CDC7的上调，而抑制CDC7可导致细胞周期阻滞。本文报道了一种高效且选择性极高的CDC7抑制剂XL413 (14)的发现，该抑制剂已进入I期临床试验。基于上述先导化合物3，我们优化了其对CDC7的效力和选择性，以证明其能够在体外诱导CDC7依赖性细胞周期阻滞，并在Colo-205异种移植瘤模型中抑制体内肿瘤生长。[1] Cdc7-Dbf4激酶，或称DDK（Dbf4依赖性激酶），通过磷酸化并激活复制性Mcm2-7 DNA解旋酶来启动DNA复制。DDK在许多肿瘤细胞中过表达，并且由于DDK抑制剂可以在不影响正常细胞的情况下诱导多种癌细胞凋亡，因此已成为一种新兴的化疗靶点。PHA-767491和XL413是众多高效DDK抑制剂中的两种，它们对纯化激酶的IC50值均达到纳摩尔级。尽管 XL413 对 DDK 具有高度选择性，但其在细胞系中的活性尚未得到充分表征。我们测定了 XL413 对多种肿瘤细胞系的抗增殖和促凋亡作用，并将其与活性已得到充分表征的 PHA-767491 进行了比较。这两种化合物都是有效的 DDK 生化抑制剂，但令人惊讶的是，它们在不同细胞系中的活性差异很大。与 PHA-767491 不同，XL413 仅在所测试的十种细胞系中的一种中显示出显著的抗增殖活性。由于 XL413 未能有效抑制多种细胞系中的 DDK，因此该化合物的生物利用度可能有限。为了寻找其他潜在的 DDK 抑制剂，我们还利用 DDK 热稳定性变异分析 (TSA) 测试了约 400 种已知激酶抑制剂与 DDK 的交叉反应性。我们鉴定了 11 种能够显著稳定 DDK 的化合物。这些化合物中有些对DDK的抑制效力与PHA-767491相当，包括Chk1和PKR激酶抑制剂，但它们的化学骨架与已知的DDK抑制剂截然不同。综上所述，这些数据表明几种已知的激酶抑制剂与DDK存在交叉反应，同时也凸显了设计其他具有特异性和生物活性的DDK抑制剂作为化疗药物的潜力。[2] XL413盐酸盐是一种高效且选择性的ATP竞争性CDC7激酶抑制剂，IC50值为3.4 nM。它对CK2、Pim-1和pMCM2具有显著的选择性。该化合物具有潜在的抗肿瘤活性，是研究CDC7生物学和DNA复制的重要研究工具。 |
| 分子式 |
C14H13CL2N3O2
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|---|---|
| 分子量 |
326.18
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| 精确质量 |
325.038
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| CAS号 |
2062200-97-7
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| 相关CAS号 |
XL413;1169558-38-6;XL413 hydrochloride;1169562-71-3
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| PubChem CID |
135564631
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| 外观&性状 |
White to off-white solid powder
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| tPSA |
66.6Ų
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| InChi Key |
UNDKJUKLBNARIZ-FVGYRXGTSA-N
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| InChi Code |
InChI=1S/C14H12ClN3O2.ClH/c15-7-3-4-10-8(6-7)11-12(20-10)14(19)18-13(17-11)9-2-1-5-16-9;/h3-4,6,9,16H,1-2,5H2,(H,17,18,19);1H/t9-;/m0./s1
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| 化学名 |
8-chloro-2-[(2S)-pyrrolidin-2-yl]-3H-[1]benzofuro[3,2-d]pyrimidin-4-one;hydrochloride
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| 别名 |
1169562-71-3; XL413 hydrochloride; XL413 (hydrochloride); BMS-863233 hydrochloride; (S)-8-chloro-2-(pyrrolidin-2-yl)benzofuro[3,2-d]pyrimidin-4(3H)-one hydrochloride;
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| HS Tariff Code |
2934.99.9001
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| 存储方式 |
Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 6 months -20°C 1 month 注意： 请将本产品存放在密封且受保护的环境中，避免吸湿/受潮。 |
| 运输条件 |
Room temperature (This product is stable at ambient temperature for a few days during ordinary shipping and time spent in Customs)
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| 溶解度 (体外实验) |
H2O : 10 mg/mL (30.66 mM)
DMSO : 3.4 mg/mL (10.42 mM ) |
|---|---|
| 溶解度 (体内实验) |
注意: 如下所列的是一些常用的体内动物实验溶解配方，主要用于溶解难溶或不溶于水的产品（水溶度<1 mg/mL）。 建议您先取少量样品进行尝试，如该配方可行，再根据实验需求增加样品量。
注射用配方
注射用配方1: DMSO : Tween 80： Saline = 10 : 5 : 85 (如： 100 μL DMSO → 50 μL Tween 80 → 850 μL Saline)(IP/IV/IM/SC等) *生理盐水/Saline的制备：将0.9g氯化钠/NaCl溶解在100 mL ddH ₂ O中，得到澄清溶液。 注射用配方 2: DMSO : PEG300 ：Tween 80 : Saline = 10 : 40 : 5 : 45 (如： 100 μL DMSO → 400 μL PEG300 → 50 μL Tween 80 → 450 μL Saline) 注射用配方 3: DMSO : Corn oil = 10 : 90 (如： 100 μL DMSO → 900 μL Corn oil) 示例: 以注射用配方 3 (DMSO : Corn oil = 10 : 90) 为例说明, 如果要配制 1 mL 2.5 mg/mL的工作液, 您可以取 100 μL 25 mg/mL 澄清的 DMSO 储备液，加到 900 μL Corn oil/玉米油中, 混合均匀。 View More
注射用配方 4: DMSO : 20% SBE-β-CD in Saline = 10 : 90 [如：100 μL DMSO → 900 μL (20% SBE-β-CD in Saline)] 口服配方
口服配方 1: 悬浮于0.5% CMC Na (羧甲基纤维素钠) 口服配方 2: 悬浮于0.5% Carboxymethyl cellulose (羧甲基纤维素) 示例: 以口服配方 1 (悬浮于 0.5% CMC Na)为例说明, 如果要配制 100 mL 2.5 mg/mL 的工作液, 您可以先取0.5g CMC Na并将其溶解于100mL ddH2O中，得到0.5%CMC-Na澄清溶液；然后将250 mg待测化合物加到100 mL前述 0.5%CMC Na溶液中，得到悬浮液。 View More
口服配方 3: 溶解于 PEG400 (聚乙二醇400) 请根据您的实验动物和给药方式选择适当的溶解配方/方案： 1、请先配制澄清的储备液(如：用DMSO配置50 或 100 mg/mL母液(储备液)); 2、取适量母液，按从左到右的顺序依次添加助溶剂，澄清后再加入下一助溶剂。以 下列配方为例说明 (注意此配方只用于说明，并不一定代表此产品 的实际溶解配方): 10% DMSO → 40% PEG300 → 5% Tween-80 → 45% ddH2O (或 saline); 假设最终工作液的体积为 1 mL, 浓度为5 mg/mL: 取 100 μL 50 mg/mL 的澄清 DMSO 储备液加到 400 μL PEG300 中，混合均匀/澄清；向上述体系中加入50 μL Tween-80，混合均匀/澄清；然后继续加入450 μL ddH2O (或 saline)定容至 1 mL； 3、溶剂前显示的百分比是指该溶剂在最终溶液/工作液中的体积所占比例; 4、 如产品在配制过程中出现沉淀/析出，可通过加热(≤50℃)或超声的方式助溶; 5、为保证最佳实验结果，工作液请现配现用！ 6、如不确定怎么将母液配置成体内动物实验的工作液，请查看说明书或联系我们; 7、 以上所有助溶剂都可在 Invivochem.cn网站购买。 |
| 制备储备液 | 1 mg | 5 mg | 10 mg | |
| 1 mM | 3.0658 mL | 15.3290 mL | 30.6579 mL | |
| 5 mM | 0.6132 mL | 3.0658 mL | 6.1316 mL | |
| 10 mM | 0.3066 mL | 1.5329 mL | 3.0658 mL |
1、根据实验需要选择合适的溶剂配制储备液 (母液)：对于大多数产品，InvivoChem推荐用DMSO配置母液 (比如：5、10、20mM或者10、20、50 mg/mL浓度），个别水溶性高的产品可直接溶于水。产品在DMSO 、水或其他溶剂中的具体溶解度详见上”溶解度 (体外)”部分;
2、如果您找不到您想要的溶解度信息，或者很难将产品溶解在溶液中，请联系我们;
3、建议使用下列计算器进行相关计算（摩尔浓度计算器、稀释计算器、分子量计算器、重组计算器等）;
4、母液配好之后，将其分装到常规用量，并储存在-20°C或-80°C，尽量减少反复冻融循环。
计算结果:
工作液浓度： mg/mL；
DMSO母液配制方法： mg 药物溶于 μL DMSO溶液（母液浓度 mg/mL)。如该浓度超过该批次药物DMSO溶解度，请首先与我们联系。
体内配方配制方法：取 μL DMSO母液，加入 μL PEG300，混匀澄清后加入μL Tween 80，混匀澄清后加入 μL ddH2O，混匀澄清。
(1) 请确保溶液澄清之后，再加入下一种溶剂 (助溶剂) 。可利用涡旋、超声或水浴加热等方法助溶；
(2) 一定要按顺序加入溶剂 (助溶剂) 。
InvivoChem的所有产品仅用于作科学研究，不面向患者销售
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